一種從木瓜中提取蛋白酶的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明公開一種從木瓜中提取蛋白酶的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]木瓜又稱番木瓜或萬壽果，原產(chǎn)于熱帶美洲及非洲，是一種熱帶水果，后來引種到我國。木瓜果實呈肉色橙黃或紅橙色，可食率高，含有豐富的的木瓜酶、維生素C、鈣、胡蘿卜素和蛋白質(zhì)及礦物質(zhì)等，營養(yǎng)介值很高。其中的木瓜酶的用途可用于食品加工業(yè)、醫(yī)藥保健品、飼料添加劑、皮革工業(yè)和紡織工業(yè)等，用途非常廣泛。由此，越來越多的廠家開始從事從木瓜中提取生物蛋白酶的產(chǎn)業(yè)，但目前從木瓜中提取的生物蛋白酶的純度不是特別高，究其原因是相關(guān)提取的工藝相對落后，現(xiàn)有的木瓜蛋白酶提取的方法通常為:原料驗收木瓜乳汁一膠體磨一酶分離一冷藏一微濾一超濾一冷凍干燥一粉碎一包裝，這個方法存在著的問題有(1)在酶分離過程中，采用碟片分離機對木瓜乳汁進行酶與水、雜質(zhì)和纖維的分離，在經(jīng)碟片分離機前的木瓜漿酶活力u/g ^ 12萬，而木瓜乳汁經(jīng)過碟片分離機后的木瓜漿酶活力u/g彡8萬，即木瓜蛋白酶的存活率降低了許多；(2)在微濾過程中一直采用0.2 μπι中空纖維管的中空纖維組合微濾機過濾木瓜乳汁，在實踐中發(fā)現(xiàn)，0.2 μπι的中空纖維濾管容易堵塞、造成過濾慢，而且濾出的清液經(jīng)過檢測，微生物總數(shù)多2000個，超過了國家標準；
(3)在超濾過程中用6000分子量的中空纖維組合的中空纖維組合超濾機對木瓜乳汁進行超濾，木瓜蛋白酶跑漏5%。影響到木瓜蛋白酶的生產(chǎn)質(zhì)量和產(chǎn)量。近年來，由于木瓜生物蛋白酶在工業(yè)和醫(yī)學上的應用日趨廣泛，對其純度要求要更高。因此，有必要對提取純化工藝作進一步研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]發(fā)明目的:本發(fā)明為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種從木瓜中提取蛋白酶的方法，以改善現(xiàn)有從木瓜中提取蛋白酶的純度問題。
[0004]本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的:
[0005]—種從木瓜中提取蛋白酶的方法，具體包括以下步驟:
[0006](1)挑選新鮮青木瓜，將之洗凈，用刀片將其切成小塊，然后用榨汁設(shè)備將新鮮木瓜塊壓榨，得到木瓜榨汁后加入保護劑；
[0007](2)將采集的木瓜榨汁用過濾設(shè)備過濾；
[0008](3)將過濾之后的濾液去雜質(zhì)，并放入干燥設(shè)備內(nèi)進行干燥處理而得木瓜蛋白酶粗品;
[0009](4)將木瓜蛋白酶粗粉碎與半胱氨酸溶液混合后放入研磨機進行研磨；
[0010](5)將研磨后所得混合液的ΡΗ調(diào)后進行過濾；
[0011 ] (6)將所得濾液放入硫酸銨和氯化鈉進行二次鹽析；
[0012](7)將鹽析無放入低溫半胱氨酸溶液中進行結(jié)晶；
[0013](8)將結(jié)晶體溶于蒸餾水中進行重結(jié)晶，而得木瓜蛋白酶。
[0014]進一步地，所述的新鮮木瓜漿液為去纖維后的新鮮木瓜渣。
[0015]進一步地，所述步驟(2)的過濾為采用80-180目濾網(wǎng)的過濾。
[0016]進一步地，所述步驟(4)中所述的研磨是將木瓜蛋白酶粗粉碎與0.01-0.05M半胱氨酸溶液混合。
[0017]進一步地，所述步驟(5)的混合液PH值調(diào)到7.0-10.0。
[0018]進一步地，所述步驟(7)中所述的結(jié)晶是在2_4°C的溫度下進行結(jié)晶。
[0019]本發(fā)明的有益效果為:
[0020]1.本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明操作流程簡單，提取到的木瓜蛋白酶的純度高、活性大且產(chǎn)量高。
[0021]2.木瓜蛋白酶在醫(yī)學上有抗癌、腫瘤、消炎、止痛等功效；在食品業(yè)可利用酶促反應有效轉(zhuǎn)化蛋白質(zhì)，大大提高食品營養(yǎng)價值，降低成本，有利于人體的消化和吸收，還涉及其他產(chǎn)業(yè)，用途廣泛，本發(fā)明提供的方法提取的木瓜蛋白酶能夠充分發(fā)揮挖掘木瓜的潛在的經(jīng)濟價值，為農(nóng)民增收提供了一種新的途徑。
【具體實施方式】
[0022]下面通過具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細描述。
[0023]實施例1:
[0024]—種從木瓜中提取蛋白酶的方法，具體包括以下步驟:
[0025](1)挑選新鮮青木瓜，將之洗凈，用刀片將其切成小塊，然后用榨汁設(shè)備將新鮮木瓜塊壓榨，得到木瓜榨汁后加入保護劑；
[0026](2)用80目過濾網(wǎng)過濾木瓜榨汁，去除雜質(zhì)，得到濾液；
[0027](3)將濾液放入干燥設(shè)備內(nèi)進行干燥處理而得木瓜蛋白酶粗品；
[0028](4)將木瓜蛋白酶粗粉碎與0.02M半胱氨酸溶液混合后放入研磨機進行研磨；
[0029](5)將研磨后所得混合液的PH調(diào)到7.0后進行過濾；
[0030](6)將所得濾液放入硫酸銨和氯化鈉進行二次鹽析；
[0031](7)將鹽析無放入2°C半胱氨酸溶液中進行結(jié)晶；
[0032](8)將結(jié)晶體溶于蒸餾水中進行重結(jié)晶，而得木瓜蛋白酶。
[0033]實施例2:
[0034]—種從木瓜中提取蛋白酶的方法，具體包括以下步驟:
[0035](1)挑選新鮮青木瓜，將之洗凈，用刀片將其切成小塊，然后用榨汁設(shè)備將新鮮木瓜塊壓榨，得到木瓜榨汁后加入保護劑；
[0036](2)用160目過濾網(wǎng)過濾木瓜榨汁，去除雜質(zhì)，得到濾液；
[0037](3)將濾液放入干燥設(shè)備內(nèi)進行干燥處理而得木瓜蛋白酶粗品；
[0038](4)將木瓜蛋白酶粗粉碎與0.03M半胱氨酸溶液混合后放入研磨機進行研磨；
[0039](5)將研磨后所得混合液的PH調(diào)到9.0后進行過濾；
[0040](6)將所得濾液放入硫酸銨和氯化鈉進行二次鹽析；
[0041](7)將鹽析無放入3 °C半胱氨酸溶液中進行結(jié)晶；
[0042](8)將結(jié)晶體溶于蒸餾水中進行重結(jié)晶，而得木瓜蛋白酶。
[0043]實施例3:
[0044]一種從木瓜中提取蛋白酶的方法，具體包括以下步驟:
[0045](1)挑選新鮮青木瓜，將之洗凈，用刀片將其切成小塊，然后用榨汁設(shè)備將新鮮木瓜塊壓榨，得到木瓜榨汁后加入保護劑；
[0046](2)用180目過濾網(wǎng)過濾木瓜榨汁，去除雜質(zhì)，得到濾液；
[0047](3)將濾液放入干燥設(shè)備內(nèi)進行干燥處理而得木瓜蛋白酶粗品；
[0048](4)將木瓜蛋白酶粗粉碎與0.04M半胱氨酸溶液混合后放入研磨機進行研磨；
[0049](5)將研磨后所得混合液的PH調(diào)到10.0后進行過濾；
[0050](6)將所得濾液放入硫酸銨和氯化鈉進行二次鹽析；
[0051](7)將鹽析無放入4°C半胱氨酸溶液中進行結(jié)晶；
[0052](8)將結(jié)晶體溶于蒸餾水中進行重結(jié)晶，而得木瓜蛋白酶。
[0053]經(jīng)過上述三個實例所得到的木瓜蛋白酶的分別是134萬單位/克；145萬單位/克；152萬單位/克。
【主權(quán)項】
1.一種從木瓜中提取蛋白酶的方法，其特征在于，具體步驟如下: (1)挑選新鮮青木瓜，將之洗凈，用刀片將其切成小塊，然后用榨汁設(shè)備將新鮮木瓜塊壓榨，得到木瓜榨汁后加入保護劑； (2)將采集的木瓜榨汁用過濾設(shè)備過濾； (3)將過濾之后的濾液去雜質(zhì)，并放入干燥設(shè)備內(nèi)進行干燥處理而得木瓜蛋白酶粗品; (4)將木瓜蛋白酶粗粉碎與半胱氨酸溶液混合后放入研磨機進行研磨； (5)將研磨后所得混合液的PH調(diào)后進行過濾； (6)將所得濾液放入硫酸銨和氯化鈉進行二次鹽析； (7)將鹽析無放入低溫半胱氨酸溶液中進行結(jié)晶； (8)將結(jié)晶體溶于蒸餾水中進行重結(jié)晶，而得木瓜蛋白酶。2.根據(jù)要求1所述的從木瓜榨汁提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述的新鮮木瓜漿液為去纖維后的新鮮木瓜渣。3.根據(jù)要求1所述的從木瓜榨計提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(2)的過濾為采用80-180目濾網(wǎng)的過濾。4.根據(jù)要求1所述的從木瓜榨計提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(4)中所述的研磨是將木瓜蛋白酶粗粉碎與0.01-0.05M半胱氨酸溶液混合。5.根據(jù)要求1所述的從木瓜榨計提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(5)的混合液PH值調(diào)到7.0-10.0。6.根據(jù)要求1所述的從木瓜榨計提取蛋白酶的方法，其特征在于，所述步驟(7)中所述的結(jié)晶是在2-4°C的溫度下進行結(jié)晶。
【專利摘要】本發(fā)明公開一種從木瓜中提取蛋白酶的方法，包括下述步驟：(1)挑選新鮮青木瓜，將之洗凈，用刀片將其切成小塊，然后用榨汁設(shè)備將新鮮木瓜塊壓榨，得到木瓜榨汁后加入保護劑。(2)將采集的木瓜榨汁用過濾設(shè)備過濾。(3)將過濾之后的濾液去雜質(zhì)，并放入干燥設(shè)備內(nèi)進行干燥處理而得木瓜蛋白酶粗品。(4)將木瓜蛋白酶粗粉碎與半胱氨酸溶液混合后放入研磨機進行研磨。(5)將研磨后所得混合液的PH調(diào)后進行過濾。(6)將所得濾液放入硫酸銨和氯化鈉進行二次鹽析。(7)將鹽析無放入低溫半胱氨酸溶液中進行結(jié)晶(8)將結(jié)晶體溶于蒸餾水中進行重結(jié)晶，而得木瓜蛋白酶。本發(fā)明采用了研磨、鹽析、結(jié)晶等精細方法，使得木瓜蛋白酶的純度大大提高，能完全適用于食品、飼料、工業(yè)以及醫(yī)學領(lǐng)域，且木瓜蛋白酶的活性大，產(chǎn)量高,成本低。
【IPC分類】C12N9/50
【公開號】CN105349512
【申請?zhí)枴緾N201510793440
【發(fā)明人】孫銘岐
【申請人】孫銘岐
【公開日】2016年2月24日
【申請日】2015年11月17日