檢測原料膠中大腸菌群含量的方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品領域。具體地，本發(fā)明涉及檢測原料膠中大腸菌群含量的方法。
【背景技術】
[0002] 原料膠主要是指能夠作為乳化劑用于食品生產(chǎn)的一類膠體物質。由于其本身可攜 帶大腸桿菌，為防止其攜帶的大腸桿菌進入食品中，引起不良后果，需要對原料膠中大腸桿 菌含量進行測定，滿足要求的才可應用于食品生產(chǎn)中。
[0003] 然而，目前測定原料膠中大腸桿菌含量的方法仍有待改進。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術中存在的技術問題之一。為此，本發(fā)明的一個目的 在于提出檢測原料膠中大腸菌群含量的方法。該方法能夠有效提高原料膠中大腸菌群含量 的檢出率，檢測結果的準確性強。
[0005] 在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出檢測原料膠中大腸菌群含量的方法。根據(jù)本發(fā) 明的實施例，所述方法包括：（1)將所述原料膠置于裝有生理鹽水的無菌均質袋中，進行第 一均質處理，得到第一均質處理產(chǎn)物；（2)將所述第一均質處理產(chǎn)物置于無菌均質袋中，再 向無菌均質袋中加入結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基，并進行第二均質處理，得到第二均質 處理產(chǎn)物；（3)將裝有所述第二均質處理產(chǎn)物的均質袋進行平整化處理；（4)將經(jīng)過所述平 整化處理的裝有所述第二均質處理產(chǎn)物的均質袋進行靜置培養(yǎng)，得到可疑大腸菌群菌落； 以及（5)將所述可疑大腸菌群菌落接種于裝有煌綠乳糖膽鹽肉湯培養(yǎng)基的試管中進行培 養(yǎng)，以便確定大腸菌群菌落數(shù)，進而確定對所述原料膠中大腸菌群含量。根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選 實施例，基于1克所述原料膠，所述生理鹽水的體積為9毫升。
[0006] 發(fā)明人意外地發(fā)現(xiàn)，通過根據(jù)本發(fā)明實施例的方法，能夠準確地檢測原料膠中的 大腸桿菌含量，有效地避免了現(xiàn)有技術例如目前GB4789.3-2010《食品安全國家標準-食品 微生物學檢驗-大腸菌群的測定》應用于原料膠檢測時的缺陷。具體地，利用國標方法，將稀 釋的樣液加入至平皿，再向平皿中傾注培養(yǎng)基，混勻后進行培養(yǎng)。但是，由于原料膠經(jīng)10倍 稀釋后，與培養(yǎng)基混合后容易聚集成團，導致成塊的原料膠中的大腸桿菌無法接觸培養(yǎng)基， 進而無法生長，影響檢測的準確性及可信度。
[0007] 需要說明的是，本發(fā)明的技術方案是發(fā)明人通過大量的篩選試驗而獲得的，發(fā)明 人曾經(jīng)嘗試過其他的檢測方案，并未獲得有效的檢測結果。例如，發(fā)明人采用過下列檢測步 驟：（1)將原料膠用生理鹽水梯度稀釋1〇〇倍，得到稀釋液；（2)取稀釋液與培養(yǎng)基在均質袋 中混合，并靜置培養(yǎng)，通過計數(shù)菌落數(shù)以確定原料膠中大腸桿菌含量。將原料膠稀釋100倍 得到的稀釋液與培養(yǎng)基混合靜置時，由于原料膠中大腸桿菌含量較少，容易導致每次吸取 的稀釋液中菌數(shù)不同，造成誤差。另外，還將使檢測限升高。
[0008] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，上述檢測原料膠中大腸菌群含量的方法還可以具有下列附 加技術特征：
[0009]根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述第一均質處理是在轉速為8000~10000r/min的條件下 進行1~2min;所述第二均質處理是在轉速為8000~10000r/min的條件下進行l(wèi)min，基于1 克所述第一均質處理產(chǎn)物，所述培養(yǎng)基的體積為2~4毫升。由此，能夠有效提高原料膠中大 腸菌群含量的檢出率，檢測結果的準確性強。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，所述平整化處理所得到的培養(yǎng)基的厚度為0.1~0.5毫米， 優(yōu)選為0.3~0.4毫米。由此，能夠有效提高原料膠中大腸菌群含量的檢出率，檢測結果的準 確性強。
[0011] 在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出檢測原料膠中大腸菌群含量的方法。根據(jù)本發(fā) 明的實施例，所述方法包括：（1)稱取25g原料膠置于盛有225mL生理鹽水的無菌均質袋中， 10000r/min的轉速下進行第一均質處理2min，制成1:10的稀釋液；（2)稱取10g所述稀釋液 置于無菌均質袋中，加入20ml結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基，8000r/min的轉速下進行第二 均質處理lmin，然后刮涂均質袋，使得第二均質處理產(chǎn)物的厚度為0.39毫米；（3)將步驟(2) 所得到的裝有所述培養(yǎng)基的無菌均質袋置于36±1°C培養(yǎng)48h±2h;(4)計數(shù)均質袋上出現(xiàn) 的可疑大腸菌群菌落數(shù)，菌落數(shù)記作Μ;(5)從Μ個菌落中挑取10個菌落，分別接種于裝有煌 綠乳糖膽鹽肉湯培養(yǎng)基的試管內，36°C±1°C培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)氣情況，當煌綠乳糖膽鹽肉湯 培養(yǎng)基內產(chǎn)氣，可判定為大腸菌群陽性，判定為大腸菌群陽性的試管總數(shù)記作N; (6)按照Μ ΧΝΧ稀釋倍數(shù)/10的公式計算得到每克原料膠中大腸菌群數(shù)。由此，能夠有效提高原料膠 中大腸菌群含量的檢出率，檢測結果的準確性強。
[0012] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發(fā)明的實踐了解到。
【具體實施方式】
[0013]下面詳細描述本發(fā)明的實施例。下面描述的實施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā) 明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0014]需要說明的是，術語"第一"、"第二"僅用于描述目的，而不能理解為指示或暗示相 對重要性或者隱含指明所指示的技術特征的數(shù)量。由此，限定有"第一"、"第二"的特征可以 明示或者隱含地包括一個或者更多個該特征。進一步地，在本發(fā)明的描述中，除非另有說 明，"多個"的含義是兩個或兩個以上。
[0015]在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出檢測原料膠中大腸菌群含量的方法。根據(jù)本發(fā) 明的實施例，該方法包括：（1)將原料膠置于裝有生理鹽水的無菌均質袋中，進行第一均質 處理，得到第一均質處理產(chǎn)物；（2)將第一均質處理產(chǎn)物置于無菌均質袋中，再向無菌均質 袋中加入結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基，并進行第二均質處理，得到第二均質處理產(chǎn)物； (3)將裝有第二均質處理產(chǎn)物的均質袋進行平整化處理；（4)將經(jīng)過平整化處理的裝有第二 均質處理產(chǎn)物的均質袋進行靜置培養(yǎng)，得到可疑大腸菌群菌落；以及(5)將可疑大腸菌群菌 落接種于裝有煌綠乳糖膽鹽肉湯培養(yǎng)基的試管中進行培養(yǎng)，以便確定大腸菌群菌落數(shù)，進 而確定對原料膠中大腸菌群含量，根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選實施例，基于1克原料膠，生理鹽水的 體積為9_升。
[0016]發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，將原料膠進行10倍稀釋，并將得到的稀釋液與培養(yǎng)基在均質機上進 行均質處理，以使原料膠與培養(yǎng)基充分混合，然后將含有均質產(chǎn)物的均質袋進行平整化處 理，以使培養(yǎng)基厚度一致，方便后續(xù)菌落計數(shù)。由此，能夠有效地確定原料膠中大腸桿菌總 數(shù)，檢出率較高，準確性高。
[0017]通過培養(yǎng)，在結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基中形成菌落，計數(shù)均質袋上出現(xiàn)的可 疑大腸菌群菌落數(shù)。可疑大腸菌群菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環(huán)，菌落直徑 為至少0.5mm。由于大腸菌群發(fā)酵產(chǎn)氣，可以通過觀察可疑大腸菌群在煌綠乳糖膽鹽肉湯培 養(yǎng)基中是否有氣泡，以確定是否為大腸菌群，進而可以測定原料膠中大腸菌群含量。
[0018]根據(jù)本發(fā)明的實施例，第一均質處理是在轉速為8000~10000r/min的條件下進行 1~2min。利用生理鹽水對原料膠進行溶解和稀釋，并進行均質處理，使原料膠均勻分散于 生理鹽水中。由此，能夠有效提高原料膠中大腸菌群含量的檢出率，檢測結果的準確性強。
[0019]根據(jù)本發(fā)明的實施例，第二均質處理是在轉速為8000~10000r/min的條件下進行 lmin，基于1克第一均質處理產(chǎn)物，培養(yǎng)基的體積為2~4毫升。發(fā)明人經(jīng)過大量實驗優(yōu)化得 到最優(yōu)第二均質處理條件。在此均質條件下，能夠有效地使原料膠均勻分散于培養(yǎng)基中。由 此，能夠有效提高原料膠中大腸菌群含量的檢出率，準確性強。
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的實施例，平整化處理所得到的第二均質處理產(chǎn)物的厚度為0.1~0.5 毫米，優(yōu)選為0.3~0.4毫米。發(fā)明人經(jīng)過大量實驗優(yōu)化得到最優(yōu)的培養(yǎng)基厚度。如培養(yǎng)基厚 度過高，菌落之間相互遮擋，影響計數(shù)。若培養(yǎng)基厚度較薄，大腸桿菌易重疊，影響計數(shù)。具 體地，可以通過對裝有培養(yǎng)基的均質袋進行刮涂處理，以達到平整化的效果。由此，能夠有 效提高原料膠中大腸桿菌含量的檢出率。
[0021] 在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出檢測原料膠中大腸菌群含量的方法。根據(jù)本發(fā) 明的實施例，該方法包括：（1)稱取25g原料膠置于盛有225mL生理鹽水的無菌均質袋中， 10000r/min的轉速下進行第一均質處理2min，制成1:10的稀釋液；（2)稱取10g所述稀釋液 置于無菌均質袋中，加入20ml結晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基，8000r/min的轉速下進行第二 均質處理lmin，然后刮涂均質袋，使得第二均質處理產(chǎn)物的厚度為0.39毫米；（3)將步驟(2) 所得到的裝有所述培養(yǎng)基的無菌均質袋置于36±1°C培養(yǎng)48h±2h;(4)計數(shù)均質袋上出現(xiàn) 的可疑大腸菌群菌落數(shù)，菌落數(shù)記作Μ;(5)從Μ個菌落中挑取10個菌落，分別接種于裝有煌 綠乳糖膽鹽肉湯培養(yǎng)基的試管內，36°C±1°C培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)氣情況，當煌綠乳糖膽鹽肉湯 培養(yǎng)基內產(chǎn)氣，可判定為大腸菌群陽性，判定為大腸菌群陽性的試管總數(shù)記作N; (6)按照Μ ΧΝΧ稀釋倍數(shù)/10的公式計算得到每克原料膠中大腸菌群數(shù)。由此，能夠有效提高原料膠 中大腸菌群含量的檢出率，準確性強。
[0022] 下面將結合實施例對本發(fā)明的方案進行解釋。本領域技術人員將會理解，下面的 實施例僅用于說明本發(fā)明，而不應視為限定本發(fā)明的范圍。實施例中未注明具體技術或條 件的，按照