一種微生物菌劑及其生產(chǎn)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明提供一種微生物菌劑及其生產(chǎn)方法，屬于微生物發(fā)酵技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 微生物菌劑是指一類含有活微生物的特定制品。它是以微生物生命活動的過程和 產(chǎn)物來改善作物營養(yǎng)條件，發(fā)揮土壤潛在肥力，刺激作物生長發(fā)育，抵抗病菌危害，從而提 高作物產(chǎn)量和品質(zhì)。它不象一般的肥料那樣直接給植物提供養(yǎng)料物質(zhì)，但其作用不容忽視。
[0003] 微生物菌劑針對作物栽培和育苗移載面積擴大，連作重茬增多，進一步導(dǎo)致的土 壤問題日益嚴(yán)重，作物產(chǎn)出狀況越來越差，品質(zhì)難以保證，可很好的改善上述難題。微生物 菌劑產(chǎn)品按劑型可分為液體、粉劑、顆粒型;按內(nèi)含的微生物種類或功能特性可分為根瘤菌 菌劑、固氮菌菌劑、解磷類微生物菌劑、硅酸鹽微生物菌劑、光合細菌菌劑、有機物料腐熟 劑、促生菌劑、菌根菌劑、生物修復(fù)菌劑等。
[0004] 現(xiàn)有的微生物菌劑產(chǎn)品具有很多不足，特別是單一菌劑，無法充分發(fā)揮出微生物 菌劑的優(yōu)勢。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)具有以下缺陷： (1)微生物菌劑的菌含量較低；（2)微生物菌劑的有效活菌數(shù)較低；（3)微生物菌劑的雜 菌率高；（4)微生物菌劑的重金屬含量較高；（5)微生物菌劑的保質(zhì)期短。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種微生物菌劑的生產(chǎn)方法，以實現(xiàn)以 下發(fā)明目的： 1、 提高微生物菌劑的菌含量； 2、 提高微生物菌劑的有效活菌數(shù)； 3、 降低微生物菌劑的雜菌率； 4、 降低微生物菌劑的重金屬含量； 5、 延長微生物菌劑的保質(zhì)期。
[0007] 為解決上述技術(shù)問題，采用以下技術(shù)方案： 一種微生物菌劑，包括膠凍樣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、地衣芽胞桿菌。
[0008] 以下是對上述技術(shù)方案的進一步改進： 所述微生物菌劑中，膠凍樣芽孢桿菌活菌數(shù)為18~22億cfu/g，枯草芽孢桿菌活菌數(shù)為 17~19億cf u/g，地衣芽胞桿菌活菌數(shù)為12~13億cf u/g。
[0009] -種微生物菌劑的生產(chǎn)方法，包括菌種選擇、菌種活化與擴培、菌種發(fā)酵、制得成 品步驟。
[0010] 所述的菌種活化與擴培步驟中，膠凍樣芽孢桿菌的活化與擴培采用的擴培培養(yǎng)基 的配方為:紅薯粉15~18重量份、豆柏粉12~15重量份、海藻酸鈉0.6~0.8重量份、酵母膏4 ~4.5重量份、谷氨酸0.03~0.04重量份、牛膽鹽0.03~0.05重量份、甘露醇0.02~0.04重 量份、二氧化錳ο. 01~ο. 02重量份、磷酸氫二鉀0.02~0.03重量份、硫酸鎂0.05~0.07重量 份、去離子水1000重量份。
[0011] 所述的菌種活化與擴培步驟中，枯草芽孢桿菌的活化與擴培采用的擴培培養(yǎng)基的 配方為:土豆淀粉12~14重量份、海藻糖9~10重量份、山梨酸醇6~8重量份、牛肉膏4~6重 量份、天冬氨酸〇 . 06~0.08重量份、葡萄糖0.07~0.08重量份、檸檬酸鐵0.02~0.04重量 份、維生素 B1 0.01~0.02重量份、2，6-肌醇0.03~0.04重量份、二氧化錳0.01~0.02重量 份、磷酸氫二鉀0.03~0.05重量份、七水硫酸銅0.04~0.06重量份、去離子水1000重量份。
[0012] 所述的菌種活化與擴培步驟中，地衣芽胞桿菌的活化與擴培采用的擴培培養(yǎng)基的 配方為:乳糖18~20重量份、魚蛋白胨7~9重量份、山梨酸醇4~5重量份、改性淀粉8~10重 量份、天門冬酰胺〇. 06~0.08重量份、橄欖油0.03~0.04重量份、檸檬酸鐵0.02~0.03重量 份、煙酸0.02~0.03重量份、磷酸氫鈣0.06~0.09重量份、硫酸鎂0.04~0.06重量份、硼酸 1~1.4重量份、去離子水1000重量份。
[0013] 所述的菌種發(fā)酵步驟中，膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵的溫度為34°C，接種量為發(fā)酵培養(yǎng) 基質(zhì)量的6%，發(fā)酵時間為30~32小時。
[0014] 所述的菌種發(fā)酵步驟中，枯草芽孢桿菌發(fā)酵的發(fā)酵溫度為36°C，接種量為發(fā)酵培 養(yǎng)基質(zhì)量的6%，發(fā)酵時間為36~40小時。
[0015] 所述的菌種發(fā)酵步驟中，地衣芽胞桿菌發(fā)酵的發(fā)酵溫度為35°C，接種量為發(fā)酵培 養(yǎng)基質(zhì)量的6%，發(fā)酵時間為22~24小時。
[0016] 所述的制得成品步驟中，載體的組分包括麥飯石、碳酸鈣、蛭石粉，其質(zhì)量比為麥 飯石:碳酸鈣:蛭石粉=5:2:1。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是： 1、 本發(fā)明微生物菌劑，菌含量高，總菌含量為85~88億cfu/g; 2、 本發(fā)明微生物菌劑，有效活菌數(shù)高，膠凍樣芽孢桿菌活菌數(shù)為18~22億cfu/g，枯草 芽孢桿菌活菌數(shù)為17~19億cfu/g，地衣芽胞桿菌活菌數(shù)為12~13億cfu/g; 3、 本發(fā)明微生物菌劑，雜菌率低，雜菌率為4.6~5.2%; 4、 本發(fā)明微生物菌劑，重金屬含量低，砷及其化合物含量為6~9 mg/kg，汞及其化合物 含量為0.7~0.8 mg/kg，鉛及其化合物含量9~11 mg/kg; 5、 本發(fā)明微生物菌劑，保質(zhì)期長，保質(zhì)期為20~24個月。
【具體實施方式】
[0018] 實施例1 一種微生物菌劑的生產(chǎn)方法 步驟1、菌種選擇 采用的菌種包括： 膠凍樣芽孢桿菌(Bacillus mucilaginosus)保藏號為ACCC10013; 枯草芽抱桿菌(Bacillus subtil is)保藏號為ACCC01175; 地衣芽胞桿菌(Bacillus licheniformis)保藏號為ACCC11091; 上述菌種均來自市售。
[0019]步驟2、菌種活化與擴培 (1)膠凍樣芽孢桿菌的活化與擴培 將膠凍樣芽孢桿菌菌種接種于平板培養(yǎng)基上，30°C培養(yǎng)24小時，得到活化菌種;所述平 板培養(yǎng)基為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基； 將膠凍樣芽孢桿菌的活化菌種接種于搖瓶內(nèi)的液體培養(yǎng)基中，接種量為培養(yǎng)基質(zhì)量的 5%，置于搖床培養(yǎng)箱中，轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分，通氣量為1:0.4，34°C培養(yǎng)20小時，得到擴培種子 液； 所述液體培養(yǎng)基的配方為:紅薯粉15g、豆柏粉12g、海藻酸鈉0.6g、酵母膏4g、谷氨酸 0.038、牛膽鹽0.038、甘露醇0.028、二氧化錳0.018、磷酸氫二鉀0.028、硫酸鎂0.058、去離 子水lkg;調(diào)pH為7。
[0020] (2)枯草芽孢桿菌的活化與擴培 將枯草芽孢桿菌菌種接種于平板培養(yǎng)基上，32°C培養(yǎng)36小時，得到活化菌種;所述平板 培養(yǎng)基為玉米淀粉培養(yǎng)基； 將枯草芽孢桿菌的活化菌種接種于搖瓶內(nèi)的液體培養(yǎng)基中，接種量為培養(yǎng)基質(zhì)量的 4%，置于搖床培養(yǎng)箱中，轉(zhuǎn)速為180轉(zhuǎn)/分，通氣量為1:0.6，33°C培養(yǎng)30小時，得到擴培種子 液； 所述液體培養(yǎng)基的配方為:土豆淀粉12g、海藻糖9g、山梨酸醇6g、牛肉膏4g、天冬氨酸 0.06g、葡萄糖0.07g、朽1檬酸鐵0.02g、維生素 B1 0.01g、2,6-肌醇0.03g、二氧化猛O.Olg、 磷酸氫二鉀〇. 〇3g、七水硫酸銅0.04g、去離子水lkg;調(diào)pH為7.2。
[0021] (3)地衣芽胞桿菌的活化與擴培 將地衣芽胞桿菌菌種接種于平板培養(yǎng)基上，35°C培養(yǎng)16小時，得到活化菌種;所述平板 培養(yǎng)基為牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基； 將地衣芽胞桿菌的活化菌種接種于搖瓶內(nèi)的液體培養(yǎng)基中，接種量為培養(yǎng)基質(zhì)量的 4%，置于搖床培養(yǎng)箱中，轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/分，通氣量為1:0.6，33°C培養(yǎng)22小時，得到擴培種子 液； 所述液體培養(yǎng)基的配方為:乳糖18g、魚蛋白胨7g、山梨酸醇4g、改性淀粉8g、天門冬酰 胺0.06g、橄欖油0.03g、檸檬酸鐵0.02g、煙酸0.02g、磷酸氫鈣0.06g、硫酸鎂0.04g、硼酸 lg、去離子水lkg;調(diào)pH為6.8。
[0022] 步驟3、菌種發(fā)酵 (1)膠凍樣芽孢桿菌發(fā)酵 發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌:將發(fā)酵培養(yǎng)基各組分稱量好，加入發(fā)酵罐內(nèi)，開動攪拌，120rpm攪拌 lOmin;加熱，增壓，發(fā)酵罐內(nèi)壓力達至Ij0.105MPa，溫度達到121°C，滅菌25~30min; 所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括以下重量份的組分： 麥麩粉20份、棉籽餅粉18份、麥芽糖4份、大豆粉4份、牛肉膏1份、牛膽鹽0.5份、木糖醇 0.2份、二氧化錳0.1份、磷酸氫二鉀0.06份、硫酸鎂0.1份、去離子水2000份;調(diào)pH為7。
[0023] 接種:發(fā)酵罐溫度降至30°C，無菌條件下，從接種口加入膠凍樣芽孢桿菌的擴培種 子液，接種量為發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)量的6%; 發(fā)酵:接種后，控制發(fā)酵罐溫度34°C，80rpm攪拌，持續(xù)通入無菌空氣，避免雜菌污染;發(fā) 酵30小時。
[0024] (2)枯草芽孢桿菌發(fā)酵 發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌:將發(fā)酵培養(yǎng)基各組分稱量好，加入發(fā)酵罐內(nèi)，開動攪拌，120rpm攪拌 lOmin;加熱，增壓，發(fā)酵罐內(nèi)壓力達至Ij0