專利名稱：一種養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定方法，具體是對(duì)牛、羊、豬、雞、魚(yú)或蝦的養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境的土壤和水體中甲砜霉素和氟苯尼考藥物殘留量的測(cè)定。
背景技術(shù)：
目前，甲砜霉素和氟苯尼考這兩類抗生素因在家畜、水產(chǎn)，特別是牛、羊、豬、雞、魚(yú)或蝦養(yǎng)殖過(guò)程中不規(guī)范使用甚至大量濫用，不可避免地在相應(yīng)的養(yǎng)殖環(huán)境和屠宰環(huán)境的土壤或水體中存在藥物殘留。甲砜霉素和氟苯尼考在環(huán)境中的殘留首先會(huì)破壞生態(tài)環(huán)境，其次在環(huán)境中殘留后，經(jīng)與微生物作用后，環(huán)境中易產(chǎn)生耐藥菌株，從而加速了動(dòng)物自身對(duì)甲砜霉素和氟苯尼考的耐藥性，進(jìn)而又影響了甲砜霉素和氟苯尼考的用量，形成惡性循環(huán)。為確保環(huán)境水和土壤的安全性，需針對(duì)水體和土壤的藥物殘留進(jìn)行檢測(cè)，但目前甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩魴z測(cè)法主要都是針對(duì)動(dòng)物源性食品本身，如肌肉組織等，尚沒(méi)有適合水或土壤中藥物殘留的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種可有效地檢測(cè)牛、羊、豬、雞、魚(yú)和蝦養(yǎng)殖和屠宰環(huán)境中甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康姆治鰴z測(cè)方法，本方法對(duì)樣品的前處理過(guò)程快速簡(jiǎn)便，檢測(cè)結(jié)果可靠靈敏。本發(fā)明方法包括以下步驟(1)樣本水直接加到平衡好的免疫親和柱(IAC)柱，或土壤樣本加甲醇混勻，離心，上清液加PBS混合后加入IAC柱，自然流出，依次用PBS液、水洗滌柱子，最后用甲醇洗脫，收集洗脫液，用氮?dú)獯蹈上疵撘?，再用甲醇?fù)溶，過(guò)0. 22 μ m有機(jī)微孔濾膜；(2)用液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜進(jìn)行分析測(cè)試，測(cè)得樣品的色譜峰；(3)將測(cè)得的色譜峰與各已知藥物的標(biāo)準(zhǔn)色譜峰對(duì)照，準(zhǔn)定所檢出藥物的具體品種。本發(fā)明用免疫親和柱對(duì)水或土壤樣品進(jìn)行前處理，再以高效液相色譜與質(zhì)譜的聯(lián)用的方法測(cè)定養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅?。樣品前處理過(guò)程快速簡(jiǎn)便， 處理后的樣品檢測(cè)結(jié)果可靠靈敏。
具體實(shí)施例方式(1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制甲砜霉素和氟苯尼考標(biāo)準(zhǔn)品用體積濃度為30%的甲醇溶液配制成濃度為lmg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，4°C保存；再用甲醇溶液逐級(jí)稀釋成濃度梯度為Iy g/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。
(2)樣品前處理A. 土壤樣本前處理取土壤樣本2士O.Olg，加甲醇6mL混勻，離心取上清液，與25mL PBS混合，加至免疫親和柱(IAC柱)，自然流出，依次用IOmL PBS液、30mL水洗滌柱子，最后用3mL甲醇洗脫， 收集洗脫液，將洗脫液用氮?dú)獯蹈?。用ImL的甲醇復(fù)溶，過(guò)0.22 μ m有機(jī)微孔濾膜。B.水樣本前處理取20mL樣本水，直接加到平衡好的IAC柱上，自然流出，依次用IOmL PBS緩沖液和 20mL超純水洗滌柱子，最后用3mL甲醇洗脫，收集洗脫液，并用氮?dú)獯蹈?，加體積濃度20% 的甲醇溶液定容至1. OmL,過(guò)0. 22 μ m有機(jī)微孔濾膜。進(jìn)HPLC-MS/MS儀測(cè)定。(3)液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定前處理后的樣品，進(jìn)液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀(HPLC-MS/MS)測(cè)定。HPLC-MS/MS儀器參數(shù)與測(cè)定條件如下A.梯度洗脫程序如表1:表 權(quán)利要求
1. 一種養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定方法，包括以下步驟(1)樣本水直接加到平衡好的免疫親和柱(IAC)柱，或土壤樣本加甲醇混勻，離心，上清液加PBS混合后加入IAC柱，自然流出，依次用PBS液、水洗滌柱子，最后用甲醇洗脫，收集洗脫液，用氮?dú)獯蹈上疵撘海儆眉状紡?fù)溶，過(guò)0. 22 μ m有機(jī)微孔濾膜；(2)用液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜進(jìn)行分析測(cè)試，測(cè)得樣品的色譜峰；(3)將測(cè)得的色譜峰與各已知藥物的標(biāo)準(zhǔn)色譜峰對(duì)照，準(zhǔn)定所檢出藥物的具體品種。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境中甲砜霉素和氟苯尼考?xì)埩袅康臏y(cè)定方法。從牛、羊、豬、雞、魚(yú)或蝦的養(yǎng)殖或屠宰環(huán)境采取水體或土壤樣本，通過(guò)免疫親和柱處理，過(guò)0.22μm有機(jī)微孔濾膜，用液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜進(jìn)行分析測(cè)試，測(cè)得樣品的色譜峰；將測(cè)得的色譜峰與各已知藥物的標(biāo)準(zhǔn)色譜峰對(duì)照，準(zhǔn)定所檢出藥物的具體品種。樣品前處理過(guò)程快速簡(jiǎn)便，處理后的樣品檢測(cè)結(jié)果可靠靈敏。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102520078SQ20111036377
公開(kāi)日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2011年11月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月15日
發(fā)明者丁濤, 張睿, 蔣原, 薛峰 申請(qǐng)人:江蘇中測(cè)檢測(cè)服務(wù)有限公司, 江蘇出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心