專利名稱：用于檢測血管緊張素ii的磁微?；瘜W發(fā)光試劑盒的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用診斷試劑領域，尤其是涉及一種利用化學發(fā)光技術結合磁微粒偶聯和分離技術檢測血管緊張素II含量的試劑盒。
背景技術：
血管緊張素是一種能夠收縮血管升高血壓的多肽，它是腎素-血管緊張素-醛固酮系統的一部分。許多降血壓藥物以血管緊張素為靶分子。血管緊張素也能夠刺激腎上腺皮質分泌醛固酮。醛固酮促進遠端腎單位的鈉潴留，同時也能夠升高血壓。血管緊張素II是腎素-血管緊張素-醛固酮系統調節(jié)血壓的一個直接作用物質。 同時，血管緊張素II也能夠作為促生長因子直接促進血管內皮細胞的增生。最近的研究發(fā)現，血管緊張素II直接和血管內皮細胞增生，血管狹窄和動脈血管阻力增加有直接關系。 因此，血管緊張素II用于高血壓的診斷和治療效果的檢測被越來越重視。攝取ACEI后，活性腎素和ANGl的水平會立即升高，同時伴有血漿血管緊張素II 水平的降低。因此，短期內血漿血管緊張素II的水平體現了 RAS系統對ACEI的一個調整和適應過程。長期ACEI的治療通常會伴有血漿血管緊張素II水平的反彈。這可能主要是由于血管緊張素II的其他合成途徑的代償升高。血管緊張素II的水平反彈提示，在高血壓的長期治療過程中，要對血管緊張素II的水平進行連續(xù)和不間斷的監(jiān)測。血管緊張素II的檢測是一個非常有幫助的工具，能夠監(jiān)測藥物的作用和效果，評價療效。同時對于充血性心力衰竭和高血壓的治療可以起到很好的評價和指導作用。目前檢測血管緊張素II的方法以放射免疫技術為主，采用放射免疫技術測定血管緊張素II，其靈敏度和抗干擾能力嚴重不足，由于在測定血管緊張素II方面操作方法的復雜性，操作過程不易控制，造成測定結果的重復性差、變異大，另外放射免疫方法存在檢測時間長、穩(wěn)定性差的缺陷，同時還存在放射源污染的問題。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種快速準確且污染小的用于檢測血管緊張素II的磁微?；瘜W發(fā)光試劑盒。為實現上述目的，本發(fā)明可采取下述技術方案
本發(fā)明所述的用于檢測血管緊張素II的磁微?；瘜W發(fā)光試劑盒，包括偶聯有兔抗血管緊張素II抗體的磁微粒混懸液，校準品，生物素偶聯的血管緊張素II抗原，辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素，化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B以及洗液。所述偶聯有兔抗血管緊張素II抗體的磁微粒先包被羊抗兔IgG，再間接包被兔抗血管緊張素II抗體。所述校準品以0. 05M的TriS-NaCl和21的酪蛋白組成pH7. 4的緩沖液為基質，力口入血管緊張素II純品配制而成。所述生物素偶聯的血管緊張素II抗原以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質，工作濃度為1:10000。所述辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質， 工作濃度為1:6000。所述化學發(fā)光底物A由Luminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59 mM、沒食子酸0. 35 mM、 Tris-HCl緩沖液0. 2M組成，最后調pH7. 4 ；化學發(fā)光底物B由0. 2M乙酸-乙酸鹽緩沖液、 維生素C 0. 12 mM、氨基酸氧化酶0.85 mM組成，最后調pH7. 4。本發(fā)明的優(yōu)點在于可實現操作的簡便性、自動化性，檢測結果具有更好的重復性和準確性，檢測時間短，穩(wěn)定性可達12個月，不存在放射污染。


圖1是本發(fā)明試劑盒檢測血管緊張素II的校準曲線圖。
具體實施例方式本發(fā)明所述的用于檢測血管緊張素II的磁微?；瘜W發(fā)光試劑盒，包括偶聯有兔抗血管緊張素II抗體的磁微?；鞈乙?，校準品，生物素偶聯的血管緊張素II抗原，辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素，化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B以及洗液。偶聯有兔抗血管緊張素II抗體的磁微粒上先偶聯羊抗兔IgG，再間接免疫偶聯兔抗血管緊張素II抗體，采用氨基戊二醛法；校準品以ο. 05M的TriS-NaCl和21的酪蛋白組成pH7. 4的緩沖液為基質加入血管緊張素II純品配制而成；生物素偶聯的血管緊張素 II抗原以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質稀釋到1 10000的工作濃度；辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素以0. OlM的PBS和2%BSA為緩沖液基質稀釋至1:6000的工作濃度；
所述化學發(fā)光底物A由Luminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59 mM、沒食子酸0.35 mM、 Tris-HCl緩沖液0. 2M組成，最后調pH7. 4 ；化學發(fā)光底物B由0. 2M乙酸-乙酸鹽緩沖液、 維生素C 0. 12 mM、氨基酸氧化酶0.85 mM組成，最后調pH7. 4。洗液由0. IM磷酸鹽緩沖液和l%TWeen20配制而成，使用時用蒸餾水20倍稀釋。使用本發(fā)明試劑盒檢測血管緊張素II的使用操作程序如下
1、在反應杯中依次加入100μ 1校準品、100 μ 1待測樣本、20 μ 1磁微?；鞈乙?、50 μ 1 生物抗原、50 μ 1酶標記物；
2、將反應杯中溶液混合均勻，37°C溫育30分鐘；
3、使用磁分離器洗滌設備，將反應杯中的磁微粒用洗液洗滌3次；
4、加入化學發(fā)光底物A和化學發(fā)光底物B各50μ 1，混勻后室溫避光反應5分鐘；
5、使用化學發(fā)光檢測儀檢測發(fā)光信號值并記錄；
6、采用四參數擬合方式，建立定標曲線，計算測定結果。檢測時采用一步法加樣，即將參與反應的磁微?；鞈乙骸⒋郎y樣本、生物素偶聯的血管緊張素II抗原、辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素在一個操作步驟中加入反應杯中，減少了操作步驟和反應時間，降低了操作過程引入的誤差。使用本發(fā)明試劑盒檢測血管緊張素II，所用時間較短，測定結果僅需40分鐘即可得出，方便快捷。使用本試劑盒檢測血管緊張素II時可達到如下指標
校準曲線范圍0pg/ml — 1000pg/ml ；校準曲線線性濃度值和檢測發(fā)光值以四參數擬和方式進行線性擬合，線性系數
R>0. 999，見圖1，圖1原始數據，用四參數擬合，X為濃度值，Y為發(fā)光值取log ；
權利要求
1.用于檢測血管緊張素II的磁微粒化學發(fā)光試劑盒，其特征在于包括偶聯有兔抗血管緊張素II抗體的磁微?；鞈乙?，校準品，生物素偶聯的血管緊張素II抗原，辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素，化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B以及洗液。
2.根據權利要求1所述的用于檢測血管緊張素II的磁微粒化學發(fā)光試劑盒，其特征在于所述偶聯有兔抗血管緊張素II抗體的磁微粒先包被羊抗兔IgG，再間接包被兔抗血管緊張素II抗體。
3.根據權利要求1所述的用于檢測血管緊張素II的磁微粒化學發(fā)光試劑盒，其特征在于所述校準品以0. 05M的TriS-NaCl和21的酪蛋白組成pH7. 4的緩沖液為基質，加入血管緊張素II純品配制而成。
4.根據權利要求1所述的用于檢測血管緊張素II的磁微?；瘜W發(fā)光試劑盒，其特征在于所述生物素偶聯的血管緊張素II抗原以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質，工作濃度為1:10000。
5.根據權利要求1所述的用于檢測血管緊張素II的磁微?；瘜W發(fā)光試劑盒，其特征在于所述辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素以0. OlM的PBS和2%BSA作為緩沖液基質，工作濃度為 1:6000。
6.根據權利要求1所述的用于檢測血管緊張素II的磁微粒化學發(fā)光試劑盒，其特征在于所述化學發(fā)光底物A由Luminol 0. 15mM、羥基香豆素0. 59 mM、沒食子酸0. 35 mM、 Tris-HCl緩沖液0. 2M組成，最后調pH7. 4 ；化學發(fā)光底物B由0. 2M乙酸-乙酸鹽緩沖液、 維生素C 0. 12 mM、氨基酸氧化酶0. 85 mM組成，最后調pH7. 4。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于檢測血管緊張素II的磁微?；瘜W發(fā)光試劑盒，包括偶聯有兔抗血管緊張素II抗體的磁微?；鞈乙?，校準品，生物素偶聯的血管緊張素II抗原，辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素，化學發(fā)光底物A、化學發(fā)光底物B以及洗液。本發(fā)明的優(yōu)點在于可實現操作的簡便性、自動化性，檢測結果具有更好的重復性和準確性，檢測時間短，穩(wěn)定性可達12個月，不存在放射污染。測試時采用一步法加樣，即將參與反應的磁微?；鞈乙?、待測樣本、生物素偶聯的血管緊張素II抗原、辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素在一個操作步驟中加入反應杯中，減少了操作步驟和反應時間，降低了操作過程引入的誤差。
文檔編號G01N21/76GK102539419SQ201210006880
公開日2012年7月4日 申請日期2012年1月11日 優(yōu)先權日2012年1月11日
發(fā)明者付光宇, 劉功成, 吳學煒, 李文娟, 渠海, 王敏, 秦東春, 趙鵬, 鄭立運, 陸瑩, 陳科, 馬建軍 申請人:鄭州安圖綠科生物工程有限公司