專利名稱：一種乳腺癌個(gè)體化用藥檢測(cè)試劑盒及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及核酸檢測(cè)方法技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及檢測(cè)乳腺癌個(gè)體化用藥檢測(cè)試劑盒及其使用方法。
背景技術(shù)：
乳腺癌是女性最常見、也最具生命威脅的惡性腫瘤之一，我國(guó)每年新增乳腺癌患者18萬人以上。在所有乳腺癌患者中，約有20-30%的患者會(huì)出現(xiàn)HER2(人類表皮生長(zhǎng)因子受體2)陽(yáng)性現(xiàn)象。它的狀態(tài)預(yù)示了患者存活時(shí)間較短、患者更容易復(fù)發(fā)以及治療效果差等。如不治療，HER2陽(yáng)性乳腺癌患者存活時(shí)間是1-3年，而HER2陰性的患者至少能存活4_6 年。對(duì)HER2陽(yáng)性病人采用赫賽汀單抗藥物進(jìn)行治療是治療這類癌癥患者的主要手段之一。 然而，2008年一項(xiàng)針對(duì)5480名腫瘤患者的全國(guó)性調(diào)查報(bào)告顯示，中國(guó)只有57%的患者進(jìn)行了 HER2的檢測(cè)，也就是說100個(gè)乳腺癌患者中有43人未進(jìn)行HER2檢測(cè)，這些患者將喪失最佳治療時(shí)機(jī)。由于HER2陽(yáng)性乳腺癌惡化速度更快，更易復(fù)發(fā)，為了抓住最佳治療時(shí)機(jī)，乳腺癌的患者都應(yīng)該進(jìn)行J1ER2檢測(cè)；在歐美國(guó)家，所有乳腺癌患者確診都會(huì)做HER2檢測(cè)，以排查惡化速度更快的癌癥，這也是國(guó)外乳腺癌患者治療更合理、生存質(zhì)量更高的重要原因。但是，HER2陽(yáng)性病人對(duì)主要治療藥物赫賽汀(Herceptin，又名曲妥單抗)的耐藥性是導(dǎo)致治療失敗的主要原因，給病患帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失和生命代價(jià)。在美國(guó)，曲妥單抗療法一個(gè)療程的費(fèi)用為70，000美元，澳大利亞一個(gè)療程的費(fèi)用為50，000澳元，在中國(guó)一個(gè)療程的花費(fèi)也多于250，000人民幣。最新的臨床研究表明，高達(dá)74%的HER2陽(yáng)性患者對(duì)赫賽汀存在不同程度的耐藥性。由于PTEN基因表達(dá)丟失導(dǎo)致的Src激活是耐藥性產(chǎn)生的最主要原因。因此，盲目使用赫賽汀不僅有可能給患者帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，甚至有可能延誤治療時(shí)機(jī)，造成生命的損失。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的問題在于提供一種乳腺癌個(gè)體化用藥檢測(cè)試劑盒及其使用方法，本發(fā)明的試劑盒能夠同時(shí)檢測(cè)J1ER2和PTEN表達(dá)，為乳腺癌患者提供個(gè)性化治療的用藥原則，極大改善病人的治療效果。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案為一種乳腺癌個(gè)體化用藥檢測(cè)試劑盒，包括組分(i)HER2即用型抗體，(ii)PTEN即用型抗體，(iii)酶標(biāo)抗體及與酶相應(yīng)的顯色液。優(yōu)選地，所述HER2即用型抗體，為小鼠抗人HER2抗體或者兔抗人HER2抗體。優(yōu)選地，所述PTEN即用型抗體，為小鼠抗人PTEN抗體或者兔抗人PTEN抗體。優(yōu)選地，所述酶標(biāo)抗體為辣根過氧化物酶或者堿性磷酸酶標(biāo)記抗小鼠或者抗兔 IgG0
優(yōu)選地，所述酶標(biāo)抗體為多聚體辣根過氧化物酶或者多聚體堿性磷酸酶抗小鼠或者抗兔IgG。優(yōu)選地，所述的顯色液為適用于辣根過氧化物酶的DAB或者AEC顯色液；或者為適用于堿性磷酸酶的BCIP/NBT顯色液。優(yōu)選地，所述的試劑盒中還包括IHC陽(yáng)性對(duì)照片，所述IHC陽(yáng)性對(duì)照片為經(jīng)過驗(yàn)證的HER2+/PTEN+乳腺癌病理石蠟切片。本發(fā)明所要解決的又一技術(shù)問題在于提供一種乳腺癌個(gè)體化用藥檢測(cè)試劑盒的使用方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案為一種乳腺癌個(gè)體化用藥檢測(cè)試劑盒的使用方法，包括三個(gè)主要步驟(I)石蠟切片的脫蠟和水化；(2)抗原修復(fù)；(3)免疫組織化學(xué)染色；(4) IHC 評(píng)估。優(yōu)選地，所述的抗原修復(fù)，具體是將切片置于EDTA抗原修復(fù)緩沖液中，水煮加熱修復(fù)，水沸后95°C _100°C保溫20分鐘，冷卻至室溫以下，用PBS沖洗切片。優(yōu)選地，所述的免疫組織化學(xué)染色步驟為，將步驟(2)中所得的切片滴加I : 50 稀釋的HER2即用型抗體，或者滴加I : 50稀釋的PTEN即用型抗體，IOOul/片，4°C孵育過夜，滴加酶標(biāo)抗體，孵育后染色，最后脫水透明處理。優(yōu)選地，所述的免疫組織化學(xué)染色步驟，具體為將步驟⑵中所得的切片以H2O2 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶處理，用PBS沖洗后，滴加I : 50稀釋的HER2即用型抗體，或者 I 50稀釋的PTEN即用型抗體，4°C孵育過夜；PBS沖洗后滴加酶標(biāo)抗體，室溫下孵育后用 PBS沖洗甩干，滴加顯色液，最后蒸餾水沖洗，蘇木精復(fù)染，最后脫水透明處理。優(yōu)選地，所述的脫水透明處理，具體步驟為I.切片置于80%乙醇后快速抽提5-10下，2. 95%乙醇中快速抽提5-10下，3.無水乙醇中快速抽提5-10下，更換無水乙醇后快速抽提5-10下，4. 二甲苯中快速抽提10-20下，更換二甲苯后抽提10-20下。5.最后，切片干燥后用中性樹膠、蓋玻片封固。優(yōu)選地，所述步驟(4)的IHC評(píng)估，即HER2和PTEN的表達(dá)水平是基于染色強(qiáng)度
(SI)和陽(yáng)性細(xì)胞(PP)的百分比來判斷，通過半定量的免疫反應(yīng)性分?jǐn)?shù)(IRS)來確定計(jì)算公式為IRS = SIXPP，其中SI =0為陰性、SI = I為弱陽(yáng)性、SI = 2為中等陽(yáng)性、SI = 3為強(qiáng)陽(yáng)性冊(cè)=0代表1%陽(yáng)性細(xì)胞1 = I代表I %-10%陽(yáng)性細(xì)胞、PP = 2代表11%-50% 陽(yáng)性細(xì)胞、PP = 3代表51% -80%陽(yáng)性細(xì)胞、PP = 4代表80%以上陽(yáng)性細(xì)胞，當(dāng)IRS小于或者等于3代表PTEN丟失；IRS大于或者等于3代表HER2陽(yáng)性。在本文中，術(shù)語(yǔ)“檢測(cè)”具有本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的含義，包括鑒定目標(biāo)產(chǎn)物的存在性和定量目標(biāo)產(chǎn)物的數(shù)量。本發(fā)明的試劑盒的使用方法所得到的最終結(jié)果是對(duì)來自臨床的乳腺癌切片進(jìn)行J1ER2抗體檢測(cè)的染色，以及檢測(cè)PTEN抗體的染色。由于在所有乳腺癌患者中，約有20-30%的患者會(huì)出現(xiàn)HER2(人類表皮生長(zhǎng)因子受體2)陽(yáng)性現(xiàn)象。由于本發(fā)明的實(shí)施者不一定是臨床醫(yī)師，因此并不清楚病人在被取“樣品”之前是否經(jīng)過治療以及治療的程度。本發(fā)明的第一個(gè)方面的方法僅僅可以看作診斷過程中的一個(gè)中間步驟，得到的是“樣品”中的乳腺癌細(xì)胞表達(dá)結(jié)果而已，本身并不能直接得出是否患有乳腺腫瘤或者有乳腺腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移發(fā)生傾向等診斷結(jié)果。在本文中，術(shù)語(yǔ)“樣品”指的是人類乳腺組織，優(yōu)選是來自人的樣品。本發(fā)明的樣品優(yōu)選是臨床常規(guī)的石蠟包埋組織切片。相比于現(xiàn)有技術(shù)中的解決方案，本發(fā)明的有益效果是I、由于PTEN基因表達(dá)丟失導(dǎo)致的Src激活是耐藥性產(chǎn)生的最主要原因。因此，同時(shí)檢測(cè)HER2和PTEN表達(dá)的乳腺癌個(gè)性化治療檢測(cè)試劑盒，為乳腺癌個(gè)性化治療提供用藥原則，極大改善病人的治療效果，具有重大的臨床和社會(huì)意義。2、商品化容易，檢測(cè)成本低。由于試劑本身可以通過已經(jīng)商業(yè)化的方法來制備，而且檢測(cè)中所需的儀器也可以購(gòu)買得到，因此可以快速在大、中、小型醫(yī)院、甚至診所普及應(yīng)用。3、廣品質(zhì)量穩(wěn)定,儲(chǔ)存條件要求不聞，不易變性，容易長(zhǎng)時(shí)間保存，這造成廣品的有效期將大大延長(zhǎng)。4、操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)時(shí)間短。由于本發(fā)明的方法實(shí)際上只需要將試劑和帶檢測(cè)的樣品混合放置并檢測(cè)，無需復(fù)雜儀器及特別技巧，節(jié)省了試劑使用并加快了檢測(cè)進(jìn)程，可以推廣進(jìn)行實(shí)際的產(chǎn)業(yè)應(yīng)用。


下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述圖I顯示動(dòng)物模型中抑制SRC活性克服曲妥單抗耐藥性的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖2為本發(fā)明的試劑盒對(duì)HER2陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行的強(qiáng)胞膜著色。圖3為本發(fā)明的試劑盒對(duì)PTEN陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞進(jìn)行的細(xì)胞質(zhì)染色。
具體實(shí)施例方式為了便于理解，以下將通過具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地描述。需要特別指出的是，這些描述僅僅是示例性的描述，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。依據(jù)本說明書的論述，本發(fā)明的許多變化、改變對(duì)所屬領(lǐng)域技術(shù)人員來說都是顯而易見的。以下將以舉例形式進(jìn)行說明，如有未詳盡之處，可以參見常用的實(shí)驗(yàn)手冊(cè)，如《分子克隆實(shí)驗(yàn)手冊(cè)》以及所用試劑和儀器的廠商說明書。其中，所有化學(xué)試劑均采用分析級(jí)， 實(shí)驗(yàn)用水經(jīng)Milli-XQ過濾，各試劑均和材料可以商用渠道獲得,具體而言第一抗體HER2 即用型抗體，為小鼠抗人HER2抗體或者兔抗人HER2抗體，由博生吉醫(yī)藥科技(蘇州)有限公司提供，按I : 50稀釋。另一第一抗體PTEN即用型抗體，為小鼠抗人PTEN抗體或者兔抗人PTEN抗體，購(gòu)買自美國(guó)Cell Signaling Technology公司，按I : 50稀釋。IHC陽(yáng)性對(duì)照片來源于博生吉醫(yī)藥科技(蘇州)有限公司。其它試劑如酶及酶標(biāo)抗體由博生吉醫(yī)藥科技(蘇州)有限公司提供。實(shí)施例
—、標(biāo)本取樣HER2陽(yáng)性的乳腺癌病理標(biāo)本50例由MD安德森癌癥研究中心提供。這些患者均接受了首次曲妥單抗治療、而且被免疫組織化學(xué)(IHC)鑒定為HER2陽(yáng)性。二、IHC 分析福爾馬林固定、石蠟包埋的4μπι組織切片被用于IHC分析。第一抗體小鼠抗人 HER2抗體由博生吉醫(yī)藥科技(蘇州)有限公司提供(產(chǎn)品目錄號(hào)ΜΜ0082)，按I : 50稀釋。另一第一抗體anti-PTEN購(gòu)買自美國(guó)Cell Signaling Technology公司(產(chǎn)品目錄號(hào) 138G6)，兔抗人單克隆抗體，按I : 50稀釋。2. I石蠟切片的脫蠟和水化優(yōu)選準(zhǔn)備來源同一病人相同部位的切片各兩張，將上述的兩張切片連同IHC陽(yáng)性對(duì)照片，一同進(jìn)行脫蠟和水化，2. 2抗原修復(fù)將經(jīng)過脫蠟和水化后的上述石蠟切片，置于lmmol/L EDTA(pH 8.0)溶液中，95°C 加熱20分鐘，自然冷卻至室溫以下，用PBS沖洗切片；2. 3免疫組織化學(xué)染色將經(jīng)過上述抗原修復(fù)的切片，以PBS稀釋的3% H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶10_15 分鐘，用PBS沖洗3次，每次3分鐘(3X3)，甩去PBS ;然后將組織切片用I %山羊血清于室溫下封閉I小時(shí)，然后與小鼠抗人HER2抗體或者小鼠抗人PTEN抗體，用抗體稀釋液按
I 50進(jìn)行稀釋(抗體稀釋液的配方1%牛血清白蛋白、0.1%明膠、O. 05%疊氮化鈉、 O. OlM pH7. 2磷酸緩沖液)，通常IOOul/片，在4°C下孵育18小時(shí)或過夜；之后用PBS沖洗 3次，每次5分鐘(3X5);甩去PBS后，接著每張切片滴加I滴辣根過氧化物酶或者堿性磷酸酶標(biāo)記抗小鼠IgG，室溫下孵育30min，再用PBS沖洗3次，每次3分鐘(3X3)，甩去PBS 液；最后，每張切片滴加2滴或IOOul DAB或者AEC，鏡檢顯色6分鐘；蒸餾水沖洗，蘇木精復(fù)染25秒，蒸餾水沖洗，PBS沖洗返藍(lán)；2. 3脫水透明處理，具體步驟為2. 3. I切片置于80%乙醇后快速抽提5-10下，2. 3. 295%乙醇中快速抽提5-10下，2. 3. 3無水乙醇中快速抽提5-10下，更換無水乙醇后快速抽提5_10下，2. 3. 4 二甲苯中快速抽提10-20下，更換二甲苯后抽提10-20下，2. 3. 5最后，切片干燥后用中性樹膠、蓋玻片封固，如圖2、圖3所示。三、IHC評(píng)估HER2和PTEN表達(dá)水平基于染色強(qiáng)度(SI)和陽(yáng)性細(xì)胞(PP)的百分比來判斷，通過半定量的免疫反應(yīng)性分?jǐn)?shù)(IRS)來確定計(jì)算公式為IRS = SIXPP，其中SI = O為陰性、 SI = I為弱陽(yáng)性、SI = 2為中等陽(yáng)性、SI = 3為強(qiáng)陽(yáng)性；PP = O代表I %陽(yáng)性細(xì)胞、PP = I代表1% -10%陽(yáng)性細(xì)胞、PP = 2代表11% -50%陽(yáng)性細(xì)胞、PP = 3代表51% -80%陽(yáng)性細(xì)胞、PP = 4代表80%以上陽(yáng)性細(xì)胞，當(dāng)IRS小于或者等于3代表PTEN丟失；IRS大于或者等于3代表HER2陽(yáng)性。其中的IHC陽(yáng)性對(duì)照片為經(jīng)過驗(yàn)證的HER2+/PTEN+乳腺癌病理石蠟切片，本試劑盒中增設(shè)IHC陽(yáng)性對(duì)照片的意義就在于驗(yàn)證試劑盒中的試劑是否有效或處理方法中是否出現(xiàn)失誤，在實(shí)際操作中，便于操作人員進(jìn)行試驗(yàn)的自我監(jiān)控。
四、曲妥單抗藥物的應(yīng)答與統(tǒng)計(jì)分析乳腺癌患者對(duì)曲妥單抗治療的應(yīng)答是基于如下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)估完全應(yīng)答(CR)= 放射顯影或者肉眼觀察下所有的腫瘤組織完全消失；部分應(yīng)答(PR)=可測(cè)量的轉(zhuǎn)移腫瘤出現(xiàn)最大腫瘤直徑大于或者等于30%的減少，并且在至少未來4周內(nèi)沒有新病灶出現(xiàn)；穩(wěn)定疾病(SD)定義為沒有超過20%腫瘤尺寸的減少，也沒有出現(xiàn)新的病灶；進(jìn)行性疾病(PD) 定義為出現(xiàn)新的病灶，或者現(xiàn)有病灶出現(xiàn)超過20%的尺寸增加?？偵媛?OS)定義為從啟動(dòng)曲妥單抗治療到病人死亡或者隨訪日止。HER2、PTEN的表達(dá)與曲妥單抗治療效果的相關(guān)性用Fisher’ s exact test和 X 2test。生存分析用 Kaplan-Meier 曲線及 log-rank tests 進(jìn)行。當(dāng) P value < O. 05 時(shí)被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的顯著意義。所有的統(tǒng)計(jì)分析均采用SPSS 16. O程序(SPSS，Chicago， IL)。六、曲妥單抗治療結(jié)果我們對(duì)50例HER2陽(yáng)性、首次接受曲妥單抗治療的乳腺癌患者進(jìn)行了 PTEN表達(dá)狀態(tài)與預(yù)后相關(guān)性的分析，結(jié)果顯示(表I)，對(duì)于首次接受曲妥單抗治療的乳腺癌患者，PTEN 表達(dá)的丟失與病人對(duì)治療的耐受性顯著相關(guān)(P < O. 028)，那就是與CR+PR+SD病人相比， PD病人中PTEN的表達(dá)出現(xiàn)顯著丟失，而且總生存率顯著下降(P < O. 008)。表I. PTEN表達(dá)狀態(tài)與曲妥單抗治療效果的相關(guān)性
權(quán)利要求
1.一種乳腺癌個(gè)體化用藥檢測(cè)試劑盒，包括組分(i)HER2即用型抗體，(ii)PTEN即用型抗體，(iii)酶標(biāo)抗體及與酶相應(yīng)的顯色液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的HER2即用型抗體，為小鼠抗人HER2抗體或者兔抗人HER2抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述PTEN即用型抗體，為小鼠抗人 PTEN抗體或者兔抗人PTEN抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)抗體為辣根過氧化物酶或者堿性磷酸酶標(biāo)記抗小鼠或者抗兔IgG。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)抗體為多聚體辣根過氧化物酶或者多聚體堿性磷酸酶抗小鼠或者抗兔IgG。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的顯色液為適用于辣根過氧化物酶的DAB或者AEC顯色液；或者為適用于堿性磷酸酶的BCIP/NBT顯色液。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中還包括IHC陽(yáng)性對(duì)照片，所述IHC陽(yáng)性對(duì)照片為經(jīng)過驗(yàn)證的HER2+/PTEN+乳腺癌病理石蠟切片。
8.—種權(quán)利要求I所述的乳腺癌個(gè)體化用藥檢測(cè)試劑盒的使用方法，包括三個(gè)主要步驟(1)石蠟切片的脫蠟和水化；(2)抗原修復(fù)；(3)免疫組織化學(xué)染色；(4)IHC 評(píng)估。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述的步驟(2)的抗原修復(fù)，具體是將切片置于EDTA抗原修復(fù)緩沖液中，水煮加熱修復(fù)，水沸后95°C _100°C保溫20分鐘，冷卻至室溫以下，用PBS沖洗切片。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述步驟(3)的免疫組織化學(xué)染色步驟為將步驟(2)中所得的切片滴加I : 50稀釋的HER2即用型抗體，或者滴加I : 50 稀釋的PTEN即用型抗體，IOOul/片，4°C孵育過夜，滴加酶標(biāo)抗體，孵育后染色，最后脫水透明處理。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的使用方法，其特征在于，所述的免疫組織化學(xué)染色步驟， 具體為將步驟⑵中所得的切片以H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶處理，用PBS沖洗后，滴加 I 50稀釋的HER2即用型抗體，或者I : 50稀釋的PTEN即用型抗體，4°C孵育過夜；PBS 沖洗后滴加酶標(biāo)抗體，室溫下孵育后用PBS沖洗甩干，滴加顯色液，最后蒸餾水沖洗，蘇木精復(fù)染，最后脫水透明處理。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的使用方法，其特征在于，所述的脫水透明處理，具體步驟為.1.切片置于80%乙醇后快速抽提5-10下，.2.95%乙醇中快速抽提5-10下，.3.無水乙醇中快速抽提5-10下，更換無水乙醇后快速抽提5-10下，.4.二甲苯中快速抽提10-20下，更換二甲苯后抽提10-20下，.5.最后，切片干燥后用中性樹膠、蓋玻片封固。
13.根據(jù)權(quán)利要求8所述的使用方法，其特征在于，所述步驟(4)的IHC評(píng)估，即HER2 和PTEN的表達(dá)水平是基于染色強(qiáng)度(SI)和陽(yáng)性細(xì)胞(PP)的百分比來判斷，通過半定量的免疫反應(yīng)性分?jǐn)?shù)(IRS)來確定計(jì)算公式為IRS = SIXPP，其中SI = O為陰性、SI = I 為弱陽(yáng)性、SI = 2為中等陽(yáng)性、SI = 3為強(qiáng)陽(yáng)性；PP = O代表1%陽(yáng)性細(xì)胞、PP = I代表 1% -10%陽(yáng)性細(xì)胞、PP = 2代表11% -50%陽(yáng)性細(xì)胞、PP = 3代表51% -80%陽(yáng)性細(xì)胞、 PP = 4代表80%以上陽(yáng)性細(xì)胞，當(dāng)IRS小于或者等于3代表PTEN丟失；IRS大于或者等于 3代表HER2陽(yáng)性。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種乳腺癌個(gè)體化用藥檢測(cè)試劑盒及其使用方法。所述的試劑盒，包括組分HER2即用型抗體，PTEN即用型抗體，酶標(biāo)抗體及與酶相應(yīng)的顯色液。由于PTEN基因表達(dá)丟失導(dǎo)致的Src激活是耐藥性產(chǎn)生的最主要原因。因此，同時(shí)檢測(cè)HER2和PTEN表達(dá)的乳腺癌個(gè)性化治療檢測(cè)試劑盒，為乳腺癌個(gè)性化治療提供用藥原則，極大改善病人的治療效果，具有重大的臨床和社會(huì)意義。
文檔編號(hào)G01N33/574GK102590512SQ201210036729
公開日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年2月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月17日
發(fā)明者楊林 申請(qǐng)人:博生吉醫(yī)藥科技(蘇州)有限公司