本發(fā)明涉及酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)，具體涉及一種用于檢測(cè)替米考星的酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

替米考星(Tilmicosin)屬大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素，其主要作用機(jī)理是干擾菌體蛋白質(zhì)的合成，主要用于防治家畜肺炎(由胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌、支原體等感染引起)、禽支原體病及泌乳動(dòng)物的乳腺炎，低劑量時(shí)亦可作豬的飼料添加劑以促進(jìn)增重和提高飼料轉(zhuǎn)換率。雖然該藥物具有良好的藥理作用，但在體內(nèi)蓄積達(dá)到一定濃度，可引起過(guò)敏反應(yīng)、耳蝸神經(jīng)損害、聽(tīng)力減退，嚴(yán)重者造成肝腎的嚴(yán)重?fù)p害，同時(shí)導(dǎo)致攜帶耐藥因子的菌株擴(kuò)散。

農(nóng)業(yè)部第235號(hào)文件中規(guī)定，替米考星在肌肉、脂肪中的最高殘留限量為75～100μg/kg；在肝臟、腎臟中的最高殘留限量為250～1000μg/kg；在奶中的最高殘留限量為50μg/L。

目前替米考星的檢測(cè)方法主要是儀器檢測(cè)方法和免疫分析檢測(cè)方法。高效液相色譜法，也是我國(guó)測(cè)定食品中替米考星的標(biāo)準(zhǔn)方法，但是由于儀器設(shè)備昂貴，技術(shù)水平要求較高，樣品還需要進(jìn)行純化處理，不利于現(xiàn)場(chǎng)篩查。文獻(xiàn)報(bào)道替米考星殘留檢測(cè)的免疫學(xué)方法相對(duì)較少，且主要集中在奶制品的檢測(cè)。本發(fā)明應(yīng)用酶聯(lián)免疫法，測(cè)定動(dòng)物組織、蜂蜜、雞蛋、牛奶和水質(zhì)中替米考星藥物的殘留量，具有檢測(cè)限低、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)速度快、檢測(cè)成本低，非常容易推廣等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種替米考星酶聯(lián)免疫試劑盒及其應(yīng)用。

一種替米考星酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其包括包被有包被原的酶標(biāo)板、替米考星特異性抗體、酶標(biāo)記物、替米考星標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、樣本稀釋液，所述包被原為替米考星藥物抗原，所述酶標(biāo)記物為酶標(biāo)記抗抗體。

本發(fā)明所提供的替米考星酶聯(lián)免疫試劑盒，所述替米考星藥物抗原為替米考星半抗原與載體蛋白的偶聯(lián)物，所述載體蛋白為牛血清白蛋白、鼠血清蛋白、兔血清蛋白、甲狀腺蛋白、卵清蛋白、血藍(lán)蛋白或人血清白蛋白。

所述替米考星特異性抗體為替米考星單克隆抗體，是用替米考星免疫原免疫動(dòng)物得到的。所述替米考星單克隆抗體可為鼠源、馬源、羊源、兔源或豚鼠源抗體，所述替米考星單克隆抗體優(yōu)選為替米考星鼠單克隆抗體。

所述酶標(biāo)記物的標(biāo)記酶為辣根過(guò)氧化物酶，酶標(biāo)記抗抗體是采用過(guò)碘酸鈉法將標(biāo)記酶與羊抗鼠抗抗體偶聯(lián)得到。

為了更方便的進(jìn)行大量樣本篩查和現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)控，所述試劑盒還包括：替米考星標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、樣本稀釋液。

所述標(biāo)準(zhǔn)品溶液為系列替米考星標(biāo)準(zhǔn)品溶液，1mL/瓶，濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L、40.5μg/L。所述底物液A液為過(guò)氧化脲溶液，底物液B液為四甲基聯(lián)苯胺溶液，所述的終止液為1～2mol/L的硫酸溶液，所述濃縮洗滌液為含1％吐溫-20的0.15～0.2mol/L pH 7.4磷酸鹽緩沖液，所述的樣本稀釋液為pH為7.4的0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液中吐溫-20的含量為0.5％混合溶液配制而成的稀釋液進(jìn)行稀釋。

其中所述酶標(biāo)板在制備過(guò)程中所用到的包被緩沖液為pH 9.6的0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液，封閉緩沖液為10％的小牛血清溶液。

發(fā)明酶標(biāo)板的制備主要為：用包被緩沖液將包被原稀釋成0.2～0.3μg/ml，每孔加入100μl，37℃環(huán)境中避光孵育2h或4℃過(guò)夜，傾去孔中液體，洗滌液洗滌1～2次，拍干，每孔中加入150μl封閉液，37℃避光孵育2h，傾去孔中液體拍干，用鋁膜真空密閉保存。

本發(fā)明中包被原和免疫原的合成過(guò)程為：

1.半抗原合成(合成路線如圖1)

(1)取1.0g替米考星，加DMF溶解，加氫化鈉0.138g，加2-(4-溴丁基)-1,3-二氧戊環(huán)0.72g，60℃攪拌5h。停止反應(yīng)，冷卻到室溫，加水稀釋?zhuān)舆m量稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值到7，1,2-二氯乙烷萃取，分去水相，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，正己烷/乙醚(5/1，v/v)重結(jié)晶，得到中間產(chǎn)物縮醛替米考星0.95g，收率83.33％。

(2)取0.95g中間產(chǎn)物縮醛替米考星加20ml乙醇溶解，加1mol/L稀鹽酸10ml，50℃攪拌反應(yīng)4h。停止反應(yīng)，加碳酸氫鈉水溶液，調(diào)節(jié)PH值到7，加乙酸乙酯萃取，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干，上硅膠柱，二氯甲烷/甲醇(5/1，v/v)，洗脫分離，得到戊醛替米考星半抗原產(chǎn)物0.8g，收率88.9％。

2.免疫原的合成

(1)取戊醛-替米考星半抗原36mg，加乙醇0.4ml溶解，得到A液

(2)取牛血清白蛋白(BSA)50mg，加6ml PH 9.6碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液溶解，將A液緩慢滴加到蛋白溶液中，室溫下，避光攪拌6h。

(3)將得到抗原溶液用0.02M PBS透析3天，每天換液3次，封裝，得到免疫原。

3.包被原的合成

(1)取16mg戊醛-替米考星半抗原，溶解于0.3mL乙醇，得到A液。

(2)稱(chēng)取OVA50mg，使之充分溶解在5mLCB(PH 9.5)中，將A液逐滴緩慢滴加到蛋白溶液中，并于室溫下攪拌4h；

(3)用0.02mol/l PBS4℃透析3d，每天換3次透析液，得到包被抗原。

4.單克隆抗體的制備

動(dòng)物免疫：替米考星半抗原與載體蛋白偶聯(lián)物免疫8-10周齡Balb/c小鼠。

細(xì)胞融合與克隆化：取免疫后的鼠脾細(xì)胞，與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞在融合劑聚乙二醇(PEG)4000的作用下融合，篩選獲得能穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇：將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成1×10⁹個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長(zhǎng)期保存。復(fù)蘇時(shí)取出凍存管，立即放入37℃水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)。

本發(fā)明還提供了一種用替米考星酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)樣本中替米考星殘留的方法，采用本方法對(duì)動(dòng)物組織、蜂蜜、雞蛋、牛奶和水質(zhì)樣本中的替米考星進(jìn)行定性或定量檢測(cè)，樣本前處理過(guò)程簡(jiǎn)單，能同時(shí)快速檢測(cè)大批量樣本，試劑盒具有很高的精確度和靈敏度，較低的操作技術(shù)要求和短暫的檢測(cè)時(shí)間，檢測(cè)樣本量大等特點(diǎn)，主要步驟包括：

1)將待測(cè)樣本進(jìn)行前處理，得到待測(cè)樣本溶液；

2)用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)待測(cè)樣本溶液；

3)分析檢測(cè)結(jié)果。

附圖說(shuō)明

圖1：替米考星半抗原合成圖

圖2：替米考星標(biāo)準(zhǔn)曲線

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體的實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明均為常規(guī)方法。

實(shí)施例一：抗原、抗體及酶標(biāo)記物的制備

1.替米考星半抗原的制備

(1)取1.0g替米考星，加DMF溶解，加氫化鈉0.138g，加2-(4-溴丁基)-1,3-二氧戊環(huán)0.72g，60℃攪拌5h。停止反應(yīng)，冷卻到室溫，加水稀釋?zhuān)舆m量稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值到7，1,2-二氯乙烷萃取，分去水相，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，正己烷/乙醚(5/1，v/v)重結(jié)晶，得到中間產(chǎn)物縮醛替米考星0.95g，收率83.33％。

(2)取0.95g中間產(chǎn)物縮醛替米考星加20ml乙醇溶解，加1mol/L稀鹽酸10ml，50℃攪拌反應(yīng)4h。停止反應(yīng)，加碳酸氫鈉水溶液，調(diào)節(jié)PH值到7，加乙酸乙酯萃取，水洗，無(wú)水硫酸鈉干燥，蒸干，上硅膠柱，二氯甲烷/甲醇(5/1，v/v)，洗脫分離，得到戊醛替米考星半抗原產(chǎn)物0.8g，收率88.9％。

2.免疫原的制備

(1)取戊醛-替米考星半抗原36mg，加乙醇0.4ml溶解，得到A液

(2)取牛血清白蛋白(BSA)50mg，加6ml PH 9.6碳酸鈉-碳酸氫鈉緩沖液溶解，將A液緩慢滴加到蛋白溶液中，室溫下，避光攪拌6h。

(3)將得到抗原溶液用0.02M PBS透析3天，每天換液3次，封裝，得到免疫原。

3.包被原的制備

(1)取16mg戊醛-替米考星半抗原，溶解于0.3mL乙醇，得到A液。

(2)稱(chēng)取OVA 50mg，使之充分溶解在5mL CB(PH 9.5)中，將A液逐滴緩慢滴加到蛋白溶液中，并于室溫下攪拌4h；

(3)用0.02mol/l PBS 4℃透析3d，每天換3次透析液，得到包被抗原。

4.酶標(biāo)板的制備

所述酶標(biāo)板在制備過(guò)程中所用到的包被緩沖液為pH9.6的0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液，封閉緩沖液為10％的小牛血清溶液。

本發(fā)明酶標(biāo)板的制備主要為：用包被緩沖液將包被原稀釋成0.2～0.3μg/ml，每孔加入100μl，37℃環(huán)境中避光孵育2h或4℃過(guò)夜，傾去孔中液體，洗滌液洗滌1～2次，拍干，每孔中加入150μl封閉液，37℃避光孵育2h，傾去孔中液體拍干，用鋁膜真空密閉保存。

5.羊抗鼠抗抗體的制備

以羊?yàn)槊庖邉?dòng)物，以鼠源抗體為免疫原免疫無(wú)病原體羊，得到羊抗鼠抗抗體。

6.酶標(biāo)記羊抗鼠抗抗體(酶標(biāo)記抗抗體)的制備

將辣根過(guò)氧化物酶與抗抗體采用改良后的過(guò)碘酸鈉法進(jìn)行偶聯(lián)，省去了氨基的封閉過(guò)程，因?yàn)槟墚a(chǎn)生自身氨基連接的氨基實(shí)際很少；辣根過(guò)氧化物酶∶抗抗體的摩爾濃度比率為2：1，改良后的方法比傳統(tǒng)的方法簡(jiǎn)便，對(duì)酶的活性的損失減少。

7.單克隆抗體的制備方法

動(dòng)物免疫：替米考星半抗原與載體蛋白偶聯(lián)物免疫8-10周齡Balb/c小鼠。

細(xì)胞融合與克隆化：取免疫后的鼠脾細(xì)胞，與SP2/0骨髓瘤細(xì)胞在融合劑聚乙二醇(PEG)4000的作用下融合，篩選獲得能穩(wěn)定分泌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。

經(jīng)篩選得到替米考星單克隆雜交瘤細(xì)胞株，該雜交瘤細(xì)胞株可以無(wú)限量的產(chǎn)生替米考星特異性抗體，該抗體特異性是針對(duì)替米考星的，靈敏度達(dá)到0.5μg/L。

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇：將雜交瘤細(xì)胞用凍存液制成1×10⁹個(gè)/ml的細(xì)胞懸液，在液氮中長(zhǎng)期保存。復(fù)蘇時(shí)取出凍存管，立即放入37℃水浴中速融，離心去除凍存液后，移入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)。

實(shí)施例二：替米考星酶聯(lián)免疫試劑盒各組分的組建

組建替米考星酶聯(lián)免疫試劑盒，包含下述各組分：

(1)包被有包被原的酶標(biāo)板。

(2)酶標(biāo)記抗抗體：辣根過(guò)氧化物酶-羊抗鼠抗抗體。

(3)替米考星單克隆抗體工作液。

(4)標(biāo)準(zhǔn)溶液：采用梯度稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)品溶液，得到系列標(biāo)準(zhǔn)品6瓶，濃度分別為0μg/L、0.5μg/L、1.5μg/L、4.5μg/L、13.5μg/L、40.5μg/L，以及高濃度標(biāo)準(zhǔn)品1mg/L，1mL/瓶。

(5)底物顯色液A液為過(guò)氧化脲溶液，底物顯色液B液為四甲基聯(lián)苯胺溶液。

(6)終止液為1～2mol/L的硫酸溶液。

(7)濃縮洗滌液為含1％吐溫-20的0.15～0.2mol/LpH7.4磷酸鹽緩沖液。

(8)樣本稀釋液為pH為7.4的0.02mol/L的磷酸鹽緩沖液中吐溫-20的含量為0.5％混合溶液配制而成的稀釋液進(jìn)行稀釋。

實(shí)施例三：檢測(cè)樣本中殘留的替米考星

1.樣本的前處理

(1)組織(豬肉、雞肉、牛肉、羊肉、魚(yú)、蝦)前處理方法

稱(chēng)取2.0±0.05g均質(zhì)后的組織樣本至50ml聚苯乙烯離心管中，分別加入2ml 0.1M(PH＝10.6)CB(稱(chēng)取0.932g無(wú)水碳酸鈉和0.1g碳酸氫鈉加入100ml去離子水溶解混勻)和8ml乙酸乙酯，用渦動(dòng)儀渦動(dòng)3min，3000g室溫(20-25℃/68-77℉)離心5min；取4ml上層有機(jī)相至10ml潔凈干燥玻璃管中，于50-60℃(122-140℉)水浴氮?dú)饬飨麓蹈?；加?ml正已烷，用渦旋儀渦動(dòng)30s，再加入1ml樣本稀釋液，用渦旋儀渦動(dòng)30s，3000g室溫(20-25℃/68-77℉)離心5min；除去上層，取下層50μl用于分析。

(2)肝臟(雞肝、豬肝)的前處理方法

稱(chēng)取1.0±0.05g均質(zhì)后的樣本至50ml聚苯乙烯離心管中，分別加入2ml 0.5M(PH＝10.6)CB(稱(chēng)取4.66g無(wú)水碳酸鈉和0.5g碳酸氫鈉加入100ml去離子水溶解混勻)和8ml乙酸乙酯，用渦動(dòng)儀渦動(dòng)3min，3000g室溫(20-25℃/68-77℉)離心5min；取2ml上層有機(jī)相至10ml潔凈干燥玻璃管中，于50-60℃(122-140℉)水浴氮?dú)饬飨麓蹈?；加?ml正已烷，用渦旋儀渦動(dòng)30s，再加入1ml樣本稀釋液，用渦旋儀渦動(dòng)30s，3000g室溫(20-25℃/68-77℉)離心5min；除去上層，取100μl下層加400μl樣本稀釋液，用渦旋儀渦動(dòng)30s，混勻；取50μl用于分析。

(3)蜂蜜的前處理方法

稱(chēng)取2.0±0.05g蜂蜜樣本至50ml聚苯乙烯離心管中，分別加入2ml 0.1M(PH＝10.6)CB，和8ml乙酸乙酯，用渦動(dòng)儀渦動(dòng)3min，3000g室溫(20-25℃/68-77℉)離心5min；取2ml上層有機(jī)相至10ml潔凈干燥玻璃管中，于50-60℃(122-140℉)水浴氮?dú)饬飨麓蹈桑患尤?ml樣本稀釋液，用渦旋儀渦動(dòng)30s，混勻；取50μl用于分析。

(4)雞蛋的前處理方法

用均質(zhì)器低速均質(zhì)雞蛋樣本；取100μl均質(zhì)后的雞蛋樣本加900μl雞蛋稀釋液(取樣本稀釋液與甲醇按19:1體積比混合)，用渦旋儀渦動(dòng)30s，混勻；取50μl用于分析。

(5)牛奶的前處理方法

取100μl鮮牛奶樣本；加入900μl牛奶稀釋液(取樣本稀釋液與甲醇按19:1體積比混合)，用渦旋儀渦動(dòng)30s，混勻；取50μl用于分析。

(6)水質(zhì)的前處理方法

取100μl水質(zhì)樣本；加入900μl樣本稀釋液，混勻，取50μl用于分析。

2.檢測(cè)方法

(1)準(zhǔn)備：使用之前將所有試劑和需用板條從冷藏環(huán)境中取出，使溫度回升至室溫(20-25℃)，使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。

(2)加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl到對(duì)應(yīng)的微孔中。

(3)抗體工作液和酶標(biāo)記抗抗體濃縮液的混合：將抗體工作液和酶標(biāo)記抗抗體濃縮液按10：1體積比混合并混勻。(注：此混合液不能保存，混合均勻后立刻進(jìn)行加樣)

(4)加抗體工作液和酶標(biāo)記抗抗體濃縮液的混合液：加抗體工作液和酶標(biāo)記抗抗體濃縮液的混合液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。

(5)洗板：小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液(用去離子水將20×濃縮洗滌液按1：19體積比進(jìn)行稀釋)250μl/孔，充分洗滌4-5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過(guò)的槍頭戳破)。

(6)顯色：加入底物液A液50μl/孔，再加底物液B液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中顯色15min，加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻。

(7)測(cè)定：酶標(biāo)儀測(cè)定每孔的吸光度值，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù))。

3.檢測(cè)結(jié)果分析

標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值，再乘以100％，即得到百分吸光率。以替米考星標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以替米考星標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μg/L)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖(如圖2)。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中替米考星實(shí)際濃度。

實(shí)施例四：替米考星試劑盒靈敏度、特異性、精密度和準(zhǔn)確度、保存期實(shí)驗(yàn)

1.試劑盒靈敏度測(cè)定

按照常規(guī)方法測(cè)定試劑盒靈敏度試驗(yàn)，試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線最低點(diǎn)為0.5μg/L，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍為0.5μg/L～40.5μg/L，在組織(豬肉、雞肉、牛肉、羊肉、魚(yú)、蝦)中替米考星檢測(cè)限為0.5μg/kg，肝臟(雞肝、豬肝)中檢測(cè)限為10μg/kg，蜂蜜中檢測(cè)限為1μg/kg，雞蛋、牛奶、水質(zhì)中檢測(cè)限為5μg/L。

2.試劑盒準(zhǔn)確度和精密度

準(zhǔn)確度是指測(cè)定值與真值間的符合程度，試劑盒的準(zhǔn)確度常用回收率表示；精密度是反應(yīng)測(cè)定方法對(duì)某一特定樣本多次測(cè)定所得結(jié)果的重復(fù)程度，常用變異系數(shù)表示。分別向空白豬肉、雞肉、牛肉、羊肉、魚(yú)、蝦、雞肝、豬肝、蜂蜜、雞蛋、牛奶、水質(zhì)中添加替米考星至終濃度為2μg/kg，2μg/kg，2μg/kg，2μg/kg，2μg/kg，2μg/kg，20μg/kg，20μg/kg，2μg/kg，10μg/L，10μg/L，10μg/L，重復(fù)5次，分別取三個(gè)批次的試劑盒計(jì)算變異系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)下表。

表1試劑盒的準(zhǔn)確度和精密度測(cè)定

結(jié)果表明，向豬肉中添加至終濃度為2μg/kg，回收率范圍為76.5％～103.0％，向雞肉中添加至終濃度為2μg/kg，回收率范圍為78.0％～103.0％，向牛肉中添加至終濃度為2μg/kg，回收率范圍為78.0％～103.5％，向羊肉中添加至終濃度為2μg/kg，回收率范圍為72.5％～100.5％，向魚(yú)中添加至終濃度為2μg/kg，回收率范圍為77.0％～101.5％，向蝦中添加至終濃度為2μg/kg，回收率范圍為78.0％～102.0％，向雞肝中添加至終濃度為20μg/kg，回收率范圍為64.5％～84.0％，向豬肝中添加至終濃度為20μg/kg，回收率范圍為64.0％～84.0％，向蜂蜜中添加至終濃度為2μg/kg，回收率范圍為84.0％～106.0％，向雞蛋中添加至終濃度為10μg/L，回收率范圍為80.2％～108.0％，向牛奶中添加至終濃度為10μg/L，回收率范圍為78.9％～102.5％，向水質(zhì)中添加至終濃度為10μg/L，回收率范圍為80.2％～107.5％，批內(nèi)批間變異系數(shù)小于20％，符合《農(nóng)業(yè)部文件》農(nóng)醫(yī)發(fā)[2005]17號(hào)附件2試劑盒備案參考評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)中第四點(diǎn)精密度和準(zhǔn)確度的規(guī)定。

3.交叉反應(yīng)率試驗(yàn)

選擇如下所示的替米考星、泰樂(lè)菌素2種藥物按照常規(guī)方法分別測(cè)定交叉反應(yīng)率，結(jié)果如表2所示。

表2試劑盒的特異性

4.保存期實(shí)驗(yàn)

試劑盒保存條件為2-8℃，經(jīng)過(guò)12個(gè)月測(cè)定，試劑盒的最大吸光度值、IC50值、替米考星添加實(shí)際測(cè)定值均在正常范圍之內(nèi)。同時(shí)做加速老化和冷凍試驗(yàn)，將試劑盒放在37℃、-20℃中7天，測(cè)定結(jié)果也表明試劑盒的各項(xiàng)指標(biāo)正常。從以上結(jié)果得到替米考星試劑盒可以在2-8℃保存12個(gè)月。