本申請涉及微流控，尤其涉及高通量猴痘病毒微流控檢測芯片及其應用。

背景技術：

1、猴痘病毒是一種人畜共患病毒，與天花、牛痘病毒同屬正痘病毒屬，通常沒有天花那么嚴重。成熟的猴痘病毒呈橢圓形，可在非洲綠猴腎細胞中培養(yǎng)生長，導致細胞病變。猴痘發(fā)生于猴類，也可感染其他動物，偶可使人類受感染。表現(xiàn)類似天花，但病情較輕。猴痘病毒可以通過直接密切接觸由動物傳染給人，也可以在人與人之間傳播。傳染途徑主要包括血液和體液。但是，猴痘的傳染性遠遜于天花病毒。痘病毒存在兩種形式：成熟病毒粒子、脂質(zhì)膜。

2、猴痘抗原檢測蛋白有如下幾種：a29l：細胞內(nèi)成熟病毒表面包膜蛋白。a35r：細胞內(nèi)包膜病毒粒子(iev)和細胞外包膜病毒粒子(eev)的包膜成分。b6r：位于細胞外包膜病毒粒子(eev)的膜上，與牛痘病毒補體控制蛋白b5同源。m1r：牛痘病毒l1蛋白同源，是一種在成熟imv顆粒表面發(fā)現(xiàn)的跨膜蛋白。e8l：病毒入侵宿主細胞重要蛋白，在病毒入侵宿主完成復制的過程中作為mv的細胞表面結(jié)合蛋白與細胞表面的硫酸軟骨素結(jié)合，以提供病毒粒子附著在靶細胞上。h3l：種324個aa長的糖基轉(zhuǎn)移酶，位于病毒包膜上，在與宿主細胞的附著和隨后的痘病毒進入中起關鍵作用。病毒的復制周期如圖1所示，圖1是病毒的復制周期示意圖。

3、目前對于猴痘病毒的檢測方法主要為qpcr檢測、膠體金法等，操作復雜，檢測用時長，且靈敏度不足。

技術實現(xiàn)思路

1、本申請實施例的目的在于提出一種高通量猴痘病毒微流控檢測芯片及其應用，本申請?zhí)岣邔锒徊《緳z測的靈敏性。

2、為了解決上述技術問題，本申請實施例提供一種高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，采用了如下所述的技術方案：

3、一種高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，包括：

4、依次連接的可控氣壓泵、清洗倉、加樣口、第一點樣墊、第二點樣墊和廢液倉；

5、其中，所述可控氣壓泵、清洗倉、加樣口、第一點樣墊、第二點樣墊和廢液倉設置于所述高通量猴痘病毒微流控檢測芯片的殼體內(nèi)；

6、所述第一點樣墊固定有熒光微球標記的猴痘抗體；

7、所述第二點樣墊上設置有磁珠包被的猴痘抗體。

8、進一步的，所述熒光微球標記的猴痘抗體包括熒光微球標記的第一a35r抗體、熒光微球標記的第一a29l抗體、熒光微球標記的第一mir抗體和熒光微球標記的第一b6r抗體；

9、所述磁珠包被的猴痘抗體包括磁珠包被的第二a35r抗體、磁珠包被的第二a29l抗體、磁珠包被的第二mir抗體和磁珠包被的第二b6r抗體。

10、進一步的，所述熒光微球包括eu3+鑭系元素熒光微球；和/或

11、所述熒光微球的直徑為100nm～350nm。

12、進一步的，所述磁珠包括dynabeadstm磁珠；和/或

13、所述磁珠的直徑為1μm-3μm。

14、進一步的，所述清洗倉封裝有清洗液；

15、按質(zhì)量分數(shù)計，所述清洗液包括10mm的pbs緩沖液和0.05％的tween20。

16、進一步的，所述第一點樣墊通過下述步驟制得：

17、分別通過熒光微球?qū)γ糠N猴痘抗體進行標記，得到多種熒光微球標記的猴痘抗體，其中，所述猴痘抗體包括第一a35r抗體、第一a29l抗體、第一mir抗體和第一b6r抗體；

18、等體積比例混合所述多種熒光微球標記的猴痘抗體，得到混合標記抗體，用點樣儀將所述混合標記抗體固定在預先準備的樣墊上，得到所述第一點樣墊。

19、進一步的，所述分別通過熒光微球?qū)γ糠N猴痘抗體進行標記，得到多種熒光微球標記的猴痘抗體的步驟包括：

20、取固含量為1％的熒光微球加入至標記緩沖液中；

21、加入任一種猴痘抗體，混勻后加入10mg/ml的edc；

22、旋轉(zhuǎn)反應，離心，去掉上清液，保留沉淀；

23、加入tbst緩沖液，離心，保留沉淀，得到所述熒光微球標記的猴痘抗體。

24、進一步的，所述第二點樣墊通過下述步驟制得：

25、分別通過磁珠對每種猴痘抗體進行包被，得到多種磁珠包被的猴痘抗體，其中，所述猴痘抗體包括第二a35r抗體、第二a29l抗體、第二mir抗體和第二b6r抗體；

26、使用點樣儀將所述多種磁珠包被的猴痘抗體分別點樣在預先準備的樣墊上的指定位置，得到所述第二點樣墊。

27、進一步的，所述分別通過磁珠對每種猴痘抗體進行包被，得到多種磁珠包被的猴痘抗體的步驟包括：

28、取固含量為1％的磁珠于標記緩沖液中，旋渦混勻；

29、加入任一種猴痘抗體，混勻后加入10mg/ml?edc；

30、旋轉(zhuǎn)反應，置于磁力架上進行磁分離操作，保留沉淀；

31、加入tbst緩沖液，混勻，在磁力架上進行磁分離操作，保留沉淀，得到所述磁珠包被的猴痘抗體。

32、為了解決上述技術問題，本申請實施例還提供一種高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，在非診斷目的檢測猴痘病毒的應用，采用了如下所述的技術方案：

33、高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，在非診斷目的檢測猴痘病毒的應用，包括下述步驟：

34、通過所述加樣口向所述芯片中加入待測樣本，并刺破清洗倉的封口膜；

35、開啟所述可控氣壓泵的1檔，通過所述可控氣壓泵驅(qū)動所述待測樣本多次流過所述第一點樣墊；

36、通過所述可控氣壓泵驅(qū)動所述待測樣本多次流過所述第二點樣墊；

37、開啟上述可控氣壓泵的2檔，通過所述可控氣壓泵驅(qū)動所述清洗倉的清洗液沖洗所述第二點樣墊，其中，所述2檔的氣壓高于所述1檔的氣壓；

38、讀取實驗結(jié)果。

39、與現(xiàn)有技術相比，本申請實施例主要有以下有益效果：

40、本申請?zhí)峁┮环N高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，該通量猴痘病毒微流控檢測芯片采用微流控技術與熒光標記技術結(jié)合的方法來檢測樣本中猴痘病毒，猴痘病毒濃度與相對發(fā)光強度成正相關。同時檢測了猴痘病毒的四種蛋白，有效減少漏檢的風險；并且檢測方式簡單快速，有效提高對猴痘病毒檢測的靈敏性。

技術特征：

1.一種高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，其特征在于，包括：

2.根據(jù)權利要求1所述的高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，其特征在于，

3.根據(jù)權利要求1所述的高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，其特征在于，所述熒光微球包括eu3+鑭系元素熒光微球；和/或

4.根據(jù)權利要求1所述的高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，其特征在于，所述磁珠包括dynabeadstm磁珠；和/或

5.根據(jù)權利要求1所述的高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，其特征在于，

6.根據(jù)權利要求1所述的高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，其特征在于，所述第一點樣墊通過下述步驟制得：

7.根據(jù)權利要求6所述的高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，其特征在于，所述分別通過熒光微球?qū)γ糠N猴痘抗體進行標記，得到多種熒光微球標記的猴痘抗體的步驟包括：

8.根據(jù)權利要求1所述的高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，其特征在于，所述第二點樣墊通過下述步驟制得：

9.根據(jù)權利要求8所述的高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，其特征在于，所述分別通過磁珠對每種猴痘抗體進行包被，得到多種磁珠包被的猴痘抗體的步驟包括：

10.如權利要求1至9任意一項所述的高通量猴痘病毒微流控檢測芯片，在非診斷目的檢測猴痘病毒的應用，其特征在于，包括下述步驟：

技術總結(jié)
本申請實施例屬于微流控技術領域，涉及一種高通量猴痘病毒微流控檢測芯片及其應用，包括依次連接的可控氣壓泵、清洗倉、加樣口、第一點樣墊、第二點樣墊和廢液倉；其中，所述可控氣壓泵、清洗倉、加樣口、第一點樣墊、第二點樣墊和廢液倉設置于所述高通量猴痘病毒微流控檢測芯片的殼體內(nèi)；所述第一點樣墊固定有熒光微球標記的猴痘抗體；所述第二點樣墊上設置有磁珠包被的猴痘抗體。本申請本申請?zhí)岣邔锒徊《緳z測的靈敏性。

技術研發(fā)人員：蔣析文,齊文闖,王梅方,畢明月,陸梓晴
受保護的技術使用者：廣州達安基因股份有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/19