本發(fā)明屬于雜質的檢測方法領域，具體涉及一種甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法。

背景技術：

1、甲硫酸新斯的明注射液作為可逆性膽堿酯酶抑制劑，臨床上廣泛用于術后腹脹及重癥肌無力的治療?，F(xiàn)有技術cn118759085a公開甲硫酸新斯的明注射液中基因雜質的檢測方法，該方法檢測到的雜質不全面，多為基因毒性雜質，未對其中的聚合物雜質或其他工藝產(chǎn)生的有毒有害的雜質進行控制，且色譜峰對稱性、雜質峰分離度、靈敏度及色譜圖基線等方面有缺陷。

2、現(xiàn)有技術cn113651723a公開3-(3-羥基苯基)-1,1-二甲基脲（本申請中的p0z8）是甲硫酸新斯的明合成過程中產(chǎn)生的一種工藝雜質，在純化過程中可能會有殘留，該雜質對藥物質量的控制帶來了較大風險，而各國藥典均未收載甲硫酸新斯的明注射液雜質p0z8檢測方法。

3、cn110950780a中公開化合物i（本申請中的p0z12）、化合物ⅱ，因其與主產(chǎn)物結構類似，很容易殘留在甲硫酸新斯的明中，此兩種雜質均含有芳香胺特征基團，這類化合物是已知的潛在基因毒性雜質，必須進行必要的研究及控制。

4、cn118652197a中公開雜質d(本申請的p0z13）的前體化合物為明確的基因毒性雜質，具有致突變的作用，因此前體化合物及雜質d對藥物的安全性有明顯的影響，因此該雜質也是監(jiān)管的重點之一。

5、此外，本申請新確證的合成工藝中殘留的可能具有毒理學風險的聚合物雜質p0uz3、p0uz4未被現(xiàn)有檢測方法充分控制，存在潛在質量與安全性隱患。

6、因此，目前的液相色譜檢測甲硫酸新斯的明注射液雜質的方法有一定缺漏，對于甲硫酸新斯的明注射液質量控制產(chǎn)生誤導，不利于其質量控制，需要提供一種新的檢測方法對于雜質含量具有更全面的表征，對于其質量控制具有更好的指導意義。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法，本申請根據(jù)工藝路線及本品化學結構，采用源頭控制、過程中控及終點控制相結合的雜質控制策略，對甲硫酸新斯的明注射液進行了詳細的雜質譜分析，以解決上述背景技術中提出現(xiàn)有的甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法中檢測方法存在的缺陷，以及難以保障檢測出全部雜質的問題。

2、所述甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法包括如下色譜條件：

3、采用hplc方法，以磷酸二氫鈉緩沖溶液和乙腈按照體積比95:5配制成流動相a并調節(jié)ph；以磷酸二氫鈉緩沖溶液和乙腈按照體積比30:70配制成流動相b并調節(jié)ph；使用梯度洗脫的方式進行洗脫，色譜柱為c18柱；

4、其中，每1ml供試品溶液中含有0.5mg甲硫酸新斯的明注射液，每1ml對照品溶液中含有雜質p0z1、p0z2、p0z4、p0z5、p0z8、p0z9、p0z11、p0z12、p0z13、p0z14、p0uz3、p0uz4各1μg。

5、采用前述hplc檢測所述供試品溶液，可能檢測到如下雜質：

6、

7、優(yōu)選地，所述流動相的配置方式為：磷酸二氫鈉緩沖溶液中加入戊烷磺酸鈉，調節(jié)溶液ph為3.0，再與乙腈按照體積比為95:5配置成流動相a；磷酸二氫鈉緩沖溶液中加入戊烷磺酸鈉，調節(jié)溶液ph為3.0，再與乙腈按照體積比為30:70配置成流動相b。

8、更優(yōu)選地，所述流動相中戊烷磺酸鈉的濃度為0.8g/l~0.9g/l。

9、優(yōu)選地，所述流動相a中，磷酸二氫鈉緩沖溶液的配制方法為：稱取3.12g磷酸二氫鈉二水合物至1000ml水中，用磷酸調ph值為3.0；所述流動相b中，磷酸二氫鈉緩沖溶液的配制方法為：稱取3.12g磷酸二氫鈉二水合物至1000ml水中，用磷酸調ph值為3.0。

10、優(yōu)選地，所述色譜條件還包括：洗脫方式為梯度洗脫，洗脫條件如下表所示:

11、。

12、優(yōu)選地，所述色譜柱為agilent?sb-c18柱，4.6×250mm，5μm。

13、更優(yōu)選地，所述色譜條件還包括：流速為每分鐘1.0-1.5ml；柱溫為40℃；檢測波長為215nm；進樣體積20μl。

14、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果是：

15、（1）本發(fā)明提供的甲硫酸新斯的明注射液雜質檢測方法首次建立了對雜質p0z8、p0z12、p0z13、p0uz3和p0uz4的質量控制標準，顯著提升了雜質檢測的全面性和有效性。通過精細控制流動相a和流動相b中緩沖鹽的濃度和ph值，成功實現(xiàn)了雜質p0z5與p0z8、p0z9與p0uz3、p0z12與p0uz4等關鍵雜質峰的完全分離，這一效果是普通方法難以達到的；

16、（2）本方法的色譜性能優(yōu)越，基線平穩(wěn)，各雜質信噪比高，峰形對稱且無漂移。在雜質濃度限度范圍的10%~200%內(nèi)，相關系數(shù)r均大于0.999，y軸截距與100%響應值的比值控制在0.05%~3.94%之間，顯示出良好的線性關系。此外，通過9份加標供試品溶液的測試，回收率穩(wěn)定在92.74%至106.79%之間，驗證了方法的高準確性；

17、（3）本方法的耐用性和精密度經(jīng)過嚴格驗證。在不同實驗室、使用不同設備和由不同實驗人員進行的重現(xiàn)性考察中，均顯示出良好的精密度和耐用性。這些特性使得該方法不僅適用于實驗室研究，也非常適合工業(yè)化生產(chǎn)的質量控制，從而確保了甲硫酸新斯的明注射液的安全性和穩(wěn)定性，降低了患者使用的潛在風險。

技術特征：

1.一種甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法，其特征在于，包括如下色譜條件：

2.根據(jù)權利要求1所述的甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法，其特征在于，所述流動相配置方式為：磷酸二氫鈉緩沖溶液中加入戊烷磺酸鈉，調節(jié)溶液ph為3.0，再與乙腈按照體積比為95:5配置成流動相a；磷酸二氫鈉緩沖溶液中加入戊烷磺酸鈉，調節(jié)溶液ph為3.0，再與乙腈按照體積比為30:70配置成流動相b。

3.根據(jù)權利要求2所述的甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法，其特征在于，所述流動相中戊烷磺酸鈉的濃度為0.8g/l~0.9g/l。

4.根據(jù)權利要求1或2所述的甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法，其特征在于，所述流動相a中，磷酸二氫鈉緩沖溶液的配制方法為：稱取3.12g磷酸二氫鈉二水合物至1000ml水中，用磷酸調ph值為3.0；所述流動相b中，磷酸二氫鈉緩沖溶液的配制方法為：稱取3.12g磷酸二氫鈉二水合物至1000ml水中，用磷酸調ph值為3.0。

5.按照權利要求1所述的甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法，其特征在于，所述洗脫梯度的具體條件為：0-5min，100%流動相a；5-40min，100%-30%流動相a；40-50min，30%流動相a。

6.?根據(jù)權利要求1所述的甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法，其特征在于，所述色譜柱為agilent?sb-c18柱，4.6×250mm，5μm。

7.按照權利要求1所述的甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法，其特征在于，所述色譜條件還包括：流速為1.0-1.5ml/min；柱溫為40℃；檢測波長為215nm；進樣體積20μl。

技術總結
本發(fā)明屬于雜質的檢測方法領域，具體涉及一種甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法。本發(fā)明具體公開了一種甲硫酸新斯的明注射液的雜質檢測方法，其以Agilent?SB?C18為色譜柱，以磷酸二氫鈉緩沖溶液?乙腈（95:5）為流動相A、以磷酸二氫鈉緩沖溶液?乙腈（30:70）為流動相B進行梯度洗脫，檢測波長215nm，進樣體積20μl，流速1.0mL/min；柱溫40℃；該方法首次對雜質P0Z8、P0Z12、P0Z13、P0UZ3和P0UZ4建立了質量控制標準，顯著提升了雜質檢測的全面性和有效性，成功實現(xiàn)了雜質P0Z5與P0Z8、P0Z9與P0UZ3、P0Z12與P0UZ4等關鍵雜質峰的完全分離。該方法不僅適用于實驗室研究，也非常適合工業(yè)化生產(chǎn)的質量控制，從而確保了甲硫酸新斯的明注射液的安全性和穩(wěn)定性，降低了患者使用的潛在風險。

技術研發(fā)人員：韓志,彭非,馬育彪,袁明旭,王穎
受保護的技術使用者：成都苑東生物制藥股份有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/15