專利名稱：一種荒漠化、沙漠化治理專用金銀花的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種金銀花新品種的培育方法。特別涉及一種可用于荒漠化、沙漠化治理的專用金銀花新品種的培育方法。屬于植物育種領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
荒漠化、特別是沙漠化，與氣候變化、生物多樣性減少并稱為全球三大生態(tài)環(huán)境問(wèn)題。目前全球荒漠化面積已占陸地總面積的1/4，嚴(yán)重影響人類生存和可持續(xù)發(fā)展。我國(guó)是世界上荒漠化面積大、分布廣、類型復(fù)雜、受害嚴(yán)重的國(guó)家之一，荒漠化面積占到國(guó)土面積的1/3，全國(guó)有4億人口常年受到風(fēng)沙危害?；哪怯刹缓侠淼娜祟惢顒?dòng)與脆弱的生態(tài)環(huán)境相互作用所造成的，表現(xiàn)為土地 生產(chǎn)力下降，土地資源喪失、地表呈現(xiàn)類似沙漠景觀的土地退化。中國(guó)沙漠化土地從東北經(jīng)華北到西北形成一條不連續(xù)的弧形分布帶，土地沙漠化速率不斷加快。據(jù)監(jiān)測(cè)，截至2009年底，全國(guó)荒漠化土地262. 37萬(wàn)平方公里，沙化土地173. 11萬(wàn)平方公里，分別占國(guó)土總面積的27. 33%和18. 03%。此外，全國(guó)還有約31萬(wàn)平方公里的土地呈現(xiàn)明顯沙化趨勢(shì)沙化危害突出，而且呈擴(kuò)展態(tài)勢(shì)。由于受超載放牧、濫采濫挖等人為因素及頻發(fā)的極端自然災(zāi)害等共同影響，川西北高原、塔里木河下游等局部區(qū)域沙化土地處于擴(kuò)展?fàn)顟B(tài)。包括甘肅民勤縣在內(nèi)的河西地區(qū)和內(nèi)蒙古阿拉善盟已成為北方強(qiáng)度最大的沙塵暴策源地，民勤縣生態(tài)的惡化，導(dǎo)致巴丹吉林沙漠和騰格里沙漠即將合攏。在北方地區(qū)尤其是內(nèi)蒙古自治區(qū)八十八個(gè)旗縣中，有六十七個(gè)旗縣已經(jīng)沙化?；哪貐^(qū)草原植被趨于退化，生物資源銳減，草地生產(chǎn)力平均下降了 60%—70%。風(fēng)沙侵蝕與水土流失加劇，耕地肥力消耗殆盡，湖泊干涸，灘川地鹽堿化，固定與半固定沙地嚴(yán)重沙化，沙塵天氣與沙塵暴頻發(fā)，直接威脅著國(guó)土生態(tài)安全和群眾生活，成為我國(guó)經(jīng)濟(jì)社會(huì)可持續(xù)發(fā)展的重要制約因素。長(zhǎng)期以來(lái)，雖然黨中央、國(guó)務(wù)院高度重視荒漠化防治，高度關(guān)注沙區(qū)經(jīng)濟(jì)社會(huì)發(fā)展，防沙治沙事業(yè)取得了顯著成績(jī)。但不容樂(lè)觀的是，政府在荒漠化防治上投入巨大，如三北防護(hù)林工程(1978— 2050年)總投資578. 60億元，京津風(fēng)沙源治理工程(2001— 2010年)總投資558. 65億元。由于資金投入大，工程效益低，使所投入的資金無(wú)法維持持續(xù)循環(huán)發(fā)展，單純依靠國(guó)家對(duì)工程的直接投資來(lái)維系建設(shè)，致使國(guó)家及地方財(cái)政壓力較大。目前雖然植被總體上處于初步恢復(fù)階段，但自我調(diào)節(jié)能力弱，穩(wěn)定性差，短期內(nèi)難以形成穩(wěn)定的生態(tài)系統(tǒng)，防治難度很大。土地荒漠化、沙化的嚴(yán)峻形勢(shì)仍未得到根本改變，形勢(shì)依然十分嚴(yán)峻。如離北京僅三百公里的渾善達(dá)克沙漠已嚴(yán)重威脅北京的整體生態(tài)，成為當(dāng)前最為嚴(yán)重的生態(tài)問(wèn)題。堅(jiān)持“防沙、治沙、用沙”相結(jié)合的原則，培育和選擇適宜的種苗，充分開(kāi)發(fā)沙漠潛能，利用沙地價(jià)值，努力把那些“不毛之地”發(fā)展成為名符其實(shí)的綠洲、綠色能源開(kāi)發(fā)的基地、風(fēng)光壯美的自然旅游景區(qū)。因此，如何獲得多倍體植物已成為農(nóng)業(yè)技術(shù)中的焦點(diǎn)，同時(shí)也是難點(diǎn)。金銀花，為忍冬科忍冬屬植物，多年生落葉或半長(zhǎng)綠藤本植物，首載于《名醫(yī)別錄》，名忍冬，因其凌冬不凋故名。宋代《履饞饞巖本草》始稱金銀花。別名有雙花、二花、銀花、忍冬。金銀花為忍冬科忍冬屬植物，全世界有金銀花200多種，我國(guó)有98種，全國(guó)種植的金銀花正品與地方性非正品品種多達(dá)45 50種之多。近年來(lái)，國(guó)家衛(wèi)生部對(duì)金銀花收藏的植物來(lái)源有較大改變，《中國(guó)藥典》1963年收錄只有I種，1977年版增加到3種，2005年版將金銀花分為忍冬(Lonicera japonica Thunb)和山銀花，S卩“正品”和“非正品”，和1963年一樣，只收錄了 I種，即忍冬(Lonicera japonica Thunb)也稱作大毛花,作為正品金銀花的原植物。本發(fā)明一種荒漠化、沙漠化治理專用金銀花新品種的培育方法。用該方法所培育出來(lái)的染色體加倍后的多倍體金銀花，與其親本大毛花(Lonicera japonica Thunb)相比具有明顯的改變，得到了親本大毛花所沒(méi)有的優(yōu)良經(jīng)濟(jì)性狀。如根系發(fā)達(dá)，抗逆性強(qiáng)，持續(xù) 時(shí)間長(zhǎng)，抗干旱、耐貧瘠、抗鹽堿、抗嚴(yán)寒，抗病蟲(chóng)害能力強(qiáng)；對(duì)地帶性的生態(tài)條件適應(yīng)性強(qiáng)，具有較強(qiáng)的繁殖能力和更新能力，可自行無(wú)限繁殖等生物學(xué)、生態(tài)學(xué)特性。在北緯40°以北地區(qū)種植，2年內(nèi)根盤(pán)占地面積可達(dá)5平方米。一株可覆蓋10 IIf以上沙灘或荒山。根盤(pán)覆蓋土地鎖含水份達(dá)200公斤左右。利用這一方法培育新苗種，可綠化沙漠、荒山，保持水土，防止山區(qū)石漠化和防風(fēng)沙、抗塵瀑。讓荒漠了的“不毛之地”產(chǎn)生自我造血功能，從根本上解決沙漠治理資金投入大、效益低、無(wú)法維持持循環(huán)發(fā)展的難題。該品種藥食同源，枝節(jié)短、花蕾大、花壁厚、結(jié)花多、花期長(zhǎng)、產(chǎn)量高，有效藥物含量高，根、莖、葉、花、藤皆可用于藥品、飲品、保健品。其經(jīng)濟(jì)價(jià)值極為可觀。用該方法所培育出來(lái)的金銀花干花與親本外植體干花，經(jīng)中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)院藥用植物研究所用[2000]版藥典“高效液相色譜法”對(duì)比檢驗(yàn)，有效藥物含量吸收峰明顯高于親本大毛花，如圖I所示，主要藥物成分氯原酸含量為4. 17%，親本正品大毛花為1.90%。紅外光譜法對(duì)本發(fā)明方法所培育出來(lái)的染色體加倍后的四倍體金銀花質(zhì)量的整體評(píng)價(jià)為本發(fā)明培育得到的金銀花品系較親本大毛花的品質(zhì)高，是一種產(chǎn)量、品質(zhì)都有明顯優(yōu)勢(shì)的金銀花新品種。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種荒漠化、沙漠化治理專用金銀花新品種的培育方法。本發(fā)明基本技術(shù)方案是采用外植體選擇、脫毒、培養(yǎng)基制備、誘導(dǎo)及生根培養(yǎng)、假植、定植、鑒定等工序組培而成。其具體步驟如下本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。(I)選種選擇傳統(tǒng)大毛花植株的幼嫩芽、葉片、腋芽或花蕾作為外植體，放入消毒瓶中待用；(2)脫毒將消毒瓶中的外植體用自來(lái)水沖洗后，用酒精溶液浸泡，再用氯化汞溶液消毒，最后用無(wú)菌水沖洗；(3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基的制備所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是按照以下方法制備得到的按配制IL計(jì)算，稱取45_55ml大量元素母液，4-6ml微量元素母液，4-6mlpH值為5. 5 5. 8的鐵鹽母液以及4_6ml有機(jī)元素母液，25-35g蔗糖，加入蒸餾水中，攪拌混勻后加入適量的培養(yǎng)基凝固劑，調(diào)節(jié)pH值為5. 5 5. 8，定容至1L，滅菌待用；所述的繼代培養(yǎng)基是按照以下方法制備得到的按配制IL計(jì)算，用量筒或移液管從未加入培養(yǎng)基凝固劑的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中吸取130mL溶液放入燒杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢杌靹?，然后再加?. 4— D (二氯苯氧乙酸)以及NAA (萘已酸)，加入適量的培養(yǎng)基凝固劑，使2. 4—D (二氯苯氧乙酸)以及NAA (萘已酸)終濃度分別達(dá)到O. 5mg/L和O. lmg/L,調(diào)節(jié)pH值為5. 5 5. 8，定容為IOOOmL,滅菌待用；所述的生根培養(yǎng)基是按照以下方法制備得到的按配制IL計(jì)算，用量筒或移液管從未加入培養(yǎng)基凝固劑的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中吸取65mL溶液放入燒杯中，加入IBA(吲哚丁酸)，加入適量的培養(yǎng)基凝固劑和蒸餾水，使IBA(噴哚丁酸)終濃度為100mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5. 5 5. 8，定容為IOOOmL滅菌待用；優(yōu)選的，分別向各所述的培養(yǎng)基溶液中加入活性炭，活性炭的加入量為培養(yǎng)基總 重量的 O. 5% -I. 5% ；其中所述的大量元素母液中含有以下成分
NH4NO33 300 mg/L
K2NO438 000 mg/L
CaCl2. 2H208 800 mg/L
MgSO4OH2O7 400 mg/L
KH2PO43 400 mg/L其中所述的微量元素母液中含有以下成分
KI166 mg/L
H3BO3I 240 mg/L
MnSO4*4H204 460 mg/L
ZnSO4·5H2OI 720 mg/L
Na2MoO4*2H2050 mg/L
CuSO4*5H2O5 mg/L
CoCl2* 6H2O5 mg/L其中所述的鐵鹽母液中含有以下成分Na2EDTA · 2H207460mg/LFeSO4 · 7H205560mg/L其中所述的有機(jī)元素母液中含有以下成分肌醇20 000 mg/L
煙酸1_ mg/L
鹽酸吡哆醇1_ mg/L
鹽酸破胺素2 Q mg/L
甘氨酸4_ mg/L(4)誘導(dǎo)及生根培養(yǎng)①初代培養(yǎng)在無(wú)菌條件下，將滅菌后的外植體種入裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)30-35d ；
②繼代培養(yǎng)
初代培養(yǎng)30-35d后，將誘導(dǎo)分化形成的帶叢生芽的愈傷組織分割成小塊，轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)25 30d ；③壯苗生根培養(yǎng)將繼代培養(yǎng)25 30d后的小苗插入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)；優(yōu)選的，在將小苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基前，將小苗的根部在O. lmg/L的6BA (6—芐基腺嘌呤)溶液中浸泡O. 5-lmin，再插入生根培養(yǎng)基中，以促進(jìn)小苗生根；(5)移苗、馴化、假植及定植。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，上述步驟(I)中所述的外植體為選自I年齡生發(fā)育成熟，品種純、花色好、無(wú)病蟲(chóng)害的健康大毛花植株上部的淡綠色幼嫩芽頂，將葉柄兩側(cè)葉片用消毒剪刀剪去,并將其葉柄剪成1-0. 5 cm的段，即得。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，上述步驟(2)中脫毒所用的酒精溶液為75%酒精溶液，浸泡的時(shí)間為30s ;所用的氯化汞溶液O. 1% L氯化汞消毒液，消毒的時(shí)間為12min，所用的水均為無(wú)菌水，沖洗的次數(shù)為4 5遍。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，上述步驟(3)中所述的培養(yǎng)基凝固劑包括瓊脂、明膠及無(wú)機(jī)硅膠等。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，上述步驟(4)中初代培養(yǎng)是在無(wú)菌條件下，將滅菌后的外植體，種入裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于溫度為20°C 25°C，濕度為70% 80%，光照強(qiáng)度為2000 30001x，光照時(shí)間為14 16h/d的條件下培養(yǎng)。其中溫度，光照強(qiáng)度、光照時(shí)間均是對(duì)無(wú)菌室內(nèi)而言。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，上述步驟(4)中繼代培養(yǎng)是在初代培養(yǎng)后，將誘導(dǎo)分化形成的帶叢生芽的愈傷組織分割成小塊，轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中，置于溫度為20°C 25°C，濕度為70% 80%，光照強(qiáng)度為2000 30001x，光照時(shí)間為14 16h/d的條件下培養(yǎng)。其中溫度，光照強(qiáng)度、光照時(shí)間均是對(duì)無(wú)菌室內(nèi)而言。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，上述步驟(4)中生根培養(yǎng)是在繼代培養(yǎng)后，增殖體I 2 Cm高時(shí)，切取增殖體上部O. 5至I厘米，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，生根階段培養(yǎng)溫度應(yīng)降至20°C，光照改為室內(nèi)自然散射光。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，上述步驟(5)中馴化是在經(jīng)15-25d的生根培養(yǎng)后，平均每個(gè)試瓶植株長(zhǎng)出4 5條粗壯的側(cè)根，根長(zhǎng)I. 5 2 cm時(shí),將長(zhǎng)有健壯根系的小苗連瓶不開(kāi)蓋放在溫室栽植處，3至5天后，開(kāi)瓶放置3 4d進(jìn)行馴化煉苗。
在本發(fā)明中，優(yōu)選的，上述步驟(5)中假植是待瓶?jī)?nèi)苗馴化煉苗3_4d后，將幼苗移出，用自來(lái)水小心洗凈根部培養(yǎng)基，并用O. I %的多菌靈洗根，栽于小苗假植床里，密度為3cm X5 Cm，移栽完畢，再澆適量的水。更優(yōu)選的，假植后用微噴法澆透水，前10天濕度保持80%，溫度 18°C 22°C。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，上述步驟(5)中假植床設(shè)置為下層為粗沙、中層為篩細(xì)的腐殖土、上層為細(xì)沙，并用O. 2 %高錳酸鉀消毒。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，當(dāng)花苗長(zhǎng)出3 4片葉后，可按5 X 4 Cm將其移栽到土質(zhì)疏松肥沃的假植床內(nèi)。在本發(fā)明中，優(yōu)選的，其特征在于上述步驟(5)中定植是指待苗高10 Cm時(shí)，按30X20 cm株行距定植，并進(jìn)行正常管理。從組培到定植的時(shí)間，大約需7 8個(gè)月的時(shí)間。通過(guò)從親本外植體、本方法組培的四倍體金銀花植株上分別采集花粉觀察比較花粉粒的大小，鑒定染色體基數(shù)證明按照本發(fā)明的方法培養(yǎng)得到的金銀花品種為四倍體金銀花，且該方法具有可重復(fù)性，即只要本領(lǐng)域技術(shù)人員按照本發(fā)明所述的方法進(jìn)行大毛花的組織培養(yǎng)即可得到本發(fā)明所述的四倍體金銀花(4n)。具體而言，上述鑒定方法包括如下步驟a、從親本外植體、本方法組培的四倍體金銀花植株上分別采集花粉。b、將采集到的花粉分別浸入45%冰醋酸。d、用滴管分別各取一滴花粉粒懸浮液，移到載玻片上。e、滴上碘化鉀溶液，蓋上蓋玻片，制成花粉粒制片。f、鏡檢多倍體及親本外植體花粉粒大小。g、用測(cè)微尺測(cè)定并記載其大小。h、鑒定染色體基數(shù)，繪制出細(xì)胞染色體核型圖。用本發(fā)明方法組培的金銀花新苗種產(chǎn)出的干花與親本外植體干花，經(jīng)中國(guó)醫(yī)藥科學(xué)院藥用植物研究所用[2000]版藥典“高效液相色譜法”對(duì)比檢驗(yàn)，有效藥物含量吸收峰明顯高于傳統(tǒng)正品，主要藥物成分氯原酸含量為4. 17%，傳統(tǒng)親本大毛花為I. 90%。本發(fā)明還提供了上述所得金銀花的用途，本發(fā)明的金銀花品種一株可以覆蓋10Hf以上石山或沙灘，根盤(pán)覆蓋土地含水份達(dá)200公斤，利用這一特性，可綠化沙漠、荒山，保持水土，防止山區(qū)石漠化和防風(fēng)沙、抗塵瀑。讓荒漠了的“不毛之地”產(chǎn)生自我造血功能，從根本上解決沙漠治理資金投入大、工程效益低、無(wú)法維持持循環(huán)發(fā)展的難題。本發(fā)明還提供了上述所得金銀花的藥用價(jià)值，本發(fā)明的金銀花品種藥食同源，其有效藥物含量吸收峰明顯高于傳統(tǒng)正品大毛花，根、莖、葉、花、藤皆可用于藥品、飲品、保健品O本發(fā)明方法所得染色體加倍后的四倍體金銀花(4n)的特征I、生根力強(qiáng)在根的生長(zhǎng)習(xí)性方面，新品種金銀花與親本大毛花相比，具有明顯的不同，表現(xiàn)為根系發(fā)達(dá)，主根深，細(xì)根多，生根力強(qiáng)。3年生主根系分布在15 30厘米深的表土層生長(zhǎng)，須根在10 30厘米深的表土層生長(zhǎng)，本發(fā)明方法培育的新品種金銀花與親本大毛花根系生長(zhǎng)情況如實(shí)施例中表7所示。2、花莖生長(zhǎng)旺盛分枝多莖的生長(zhǎng)習(xí)性方面，新品種金銀花在與親本大毛花相比，具有明顯的不同，表現(xiàn)在自然狀態(tài)下，栽植三年齡可生長(zhǎng)到3 5米的長(zhǎng)度。葉枝色較親本大毛花濃綠，中空，木質(zhì)化枝條淡紅竭色，枝條木質(zhì)化程度高后，中空消失?；ü谥鞲芍l與親本大毛花不同，親本大毛主干直立性較強(qiáng)，而新品種金銀花分枝多，角度較開(kāi)放，呈匍撲狀直線貼地生長(zhǎng)，落地生根，具有較強(qiáng)的繁殖能力和更新能力，可自行無(wú)限繁殖。本發(fā)明方法培育的新品種金銀花與親本大毛花不同分枝數(shù)和分枝長(zhǎng)度如實(shí)施例中表10、11所示。3、抗逆性強(qiáng)，適宜不同土壤；在抗逆性方面，新品種金銀花與親本大毛花相比，具有明顯的改變，表現(xiàn)為抗干旱、耐貧瘠、抗鹽堿、抗嚴(yán)寒，抗病蟲(chóng)害的能力強(qiáng)；對(duì)地帶性的生態(tài)條件適應(yīng)性強(qiáng)，更易適應(yīng)生存條件的變化。特別適宜在北緯40°以北地區(qū)種植。即使在石灰?guī)r地區(qū)的黑色石灰土混雜的土壤環(huán)境狀況下，植株生長(zhǎng)發(fā)育旺盛、健壯、花產(chǎn)量高、花的品質(zhì)好。4、根盤(pán)覆蓋土地面積大，鎖含水份多在保持水土流失方面，新品種金銀花與親本大毛花相比，具有更強(qiáng)的生物學(xué)、生態(tài)學(xué)特性。表現(xiàn)在北緯40°以北地區(qū)種植，3年內(nèi)根盤(pán)占地面積可達(dá)5平方米。一株可覆蓋10 IIf以上沙灘或荒山。根盤(pán)覆蓋土地鎖含水份達(dá)200公斤左右。利用這一方法培育新苗種，可綠化沙漠、荒山，保持水土，防止山區(qū)石漠化和防風(fēng) 沙、抗塵瀑。黃河沙灘種植兩種金銀花根盤(pán)土壤鎖水量對(duì)比如實(shí)施例中表13所示。5 :葉片大，光合作用好在葉的生長(zhǎng)習(xí)性方面，新品種金銀花與親本大毛花相比，具有明顯的改變。表現(xiàn)在葉片較大，光合作用好。其葉片長(zhǎng)7. 4cm，寬5. 9cm，比親本大毛花葉片長(zhǎng)5. 09cm，寬322cm，分別提高45. 38%,83. 3%;葉片厚度172臟，比親本大毛花088mm提高955%，葉片厚度增加近一倍。新品種金銀花的上述葉部形態(tài)特性有利于形成較大的光合作用面積，增加光合產(chǎn)物與干物質(zhì)的積累，這是新品種金銀花的高產(chǎn)形態(tài)生理基礎(chǔ)。新品種金銀花的葉柄長(zhǎng)O. 75cm，比大毛花葉柄長(zhǎng)05cm，增加50%。這一特征有利于其葉片疏散分布，增加對(duì)光能的吸收利用。本發(fā)明方法培育的新品種金銀花與親本大毛花葉莖特征對(duì)比如實(shí)施例表8所示。6、花的分化期短，花期集中在花的生長(zhǎng)習(xí)性方面，新品種金銀花與親本大毛花相t匕，具有明顯的改變。表現(xiàn)在花的分化期短，花期集中在四期。一級(jí)分枝，以長(zhǎng)、中枝的比例大，坐花的節(jié)位多，一般長(zhǎng)枝為10節(jié)，中枝5 9節(jié)，花蕾的數(shù)量高于后三期花。7、產(chǎn)量高，經(jīng)濟(jì)性狀好在經(jīng)濟(jì)性狀方面，新品種金銀花與親本大毛花相比具有明顯的改變。表現(xiàn)為具有較大的營(yíng)養(yǎng)器官和生殖器官，葉大、莖粗、枝節(jié)短、結(jié)花枝多、徒長(zhǎng)枝少、單株花蕾數(shù)多、蕾花大、花壁厚、花針長(zhǎng)，二白花期測(cè)量，花針長(zhǎng)5. 60cm，本發(fā)明新品種金銀花與其親本大毛花的花蕾比較如圖3所示。本發(fā)明方法培育的新品種金銀花與親本大毛花花蕾特征與產(chǎn)量對(duì)比如實(shí)施例中表6、表9所示。8、抵御病蟲(chóng)害能力強(qiáng)在抵御病蟲(chóng)害能力方面，新品種金銀花與親本大毛花相比具有明顯的提高。表現(xiàn)為幼莖及葉片絨毛濃密，粗硬而長(zhǎng)，表現(xiàn)在抵御蟲(chóng)害入侵蚜蟲(chóng)和螨蟲(chóng)的能力強(qiáng)?？纱蟠鬁p少生長(zhǎng)過(guò)程中農(nóng)藥的使用量，有利于按照GAP的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行金銀花的綠色無(wú)公害栽培，少施或不施農(nóng)藥，增加金銀花產(chǎn)品的藥用安全性。9、有效藥物含量高新品種金銀花較親本大毛花相比，在有效藥物含量指標(biāo)上較親本大毛花相比，具有明顯的提高。表現(xiàn)為用“高效液相色譜法”對(duì)比檢驗(yàn)，有效藥物成分氯原酸、皂苷含量吸收峰明顯高于傳統(tǒng)正品大毛花，如圖2所示。


圖I為本發(fā)明品系金銀花TLC指紋圖譜鑒定圖及染色體核型分析圖；圖A為本發(fā)明品系金銀花TLC指紋圖譜鑒定圖，圖B為染色體核型分析2為本發(fā)明品系金銀花與親本大毛花的紅外光譜圖(A)及疊加后的紅外光譜圖(B)；a為本發(fā)明金銀花品種；b為未本大毛花圖3為本發(fā)明品系金銀花與親本大毛花的花蕾比較圖。A為本發(fā)明金銀花品種；B為未本大毛花
具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例I材料I、外植體金銀花。2003年3月4日，從平邑縣精誠(chéng)苗木有限公司主栽I年齡傳統(tǒng)正品大毛花優(yōu)良單株。2、培養(yǎng)基藥品等購(gòu)自山東臨沂化工市場(chǎng)。3、工具⑴解剖鏡⑵顯微鏡⑶培養(yǎng)器皿⑷托架天平(5)電子分析天平(6)移液管(7)移液槍⑶容量瓶量筒燒杯⑶光照培養(yǎng)箱(10)冰箱(11)晾瓶架(1 酸度儀(1 刀、剪、鑷(M)測(cè)微尺(15)染色體分析系統(tǒng)儀(16)無(wú)菌工作臺(tái)肋高壓滅菌鍋4.方法I)外植體選擇及消毒處理，選擇I年齡生發(fā)育成熟，品種純、花色好、無(wú)病蟲(chóng)害的健康植株,沿主軸剪取株體上部淡綠色幼嫩芽頂。將葉柄兩側(cè)葉片用消毒剪刀剪去，并將其葉柄剪成O. 5 cm的段，也可用葉片、莖或花蕾作外植體,用自來(lái)水沖洗干凈,用70%乙醇溶液殺菌I. Omin,用無(wú)菌水沖洗2遍后,放入O. 1% L氯化萊溶液中消毒4min,用無(wú)菌水沖洗4 5遍后，放入消過(guò)毒的三角瓶中待用。2)培養(yǎng)基的 制備(I)NDT培養(yǎng)基母液的配制本發(fā)明提供了一種荒漠化、沙漠化治理專用金銀花新品種的培育方法所使用的一種培養(yǎng)基，命名為NDT培養(yǎng)基，NDT培養(yǎng)基母液的配制包括以下步驟a、l號(hào)母液(大量元素)的配制步驟為，按表I中原量分別稱取量，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合配成培養(yǎng)基母液，定容為1000mL。b、2號(hào)母液(微量元素)的配制步驟為，按表2中原量分別稱取量，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合配成培養(yǎng)基母液，定容為1000mL。c、3號(hào)母液(鐵鹽元素)的配制步驟為，按表3中原量分別稱取量，將Na2EDTA ·2Η20和FeSO4 · 7Η20放置右裝有45mL蒸餾水的溶量瓶中，適當(dāng)加熱并不停攪拌，待全部溶解后，再將兩種溶液合在一起，調(diào)整PH值，最后加蒸餾水定容到1000mL。3號(hào)母液的PH值5. 5 5. 8 ；d、4號(hào)母液(有機(jī)元素)的配制步驟為，按表4中原量分別稱取量，用蒸餾水將藥品分別溶解，然后依次混合配成培養(yǎng)基母液，定容為1000mL。表I. I號(hào)母液(大量元素)的配制
權(quán)利要求
1.一種荒漠化、沙漠化治理專用金銀花的培育方法，其特征在于包括以下步驟 (1)選種 選擇傳統(tǒng)大毛花植株的幼嫩芽、葉片、腋芽或花蕾作為外植體，放入消毒瓶中待用； (2)脫毒 將消毒瓶中的外植體用自來(lái)水沖洗后，用酒精溶液浸泡，再用氯化汞溶液消毒，最后用無(wú)菌水沖洗； (3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基以及生根培養(yǎng)基的制備 所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基是按照以下方法制備得到的按配制IL計(jì)算，稱取45-55ml大量元素母液，4-6ml微量元素母液，4-6m I pH值為5. 5 5. 8的鐵鹽母液以及4_6ml有機(jī)元素母液，25-35g蔗糖，加入蒸餾水中，攪拌混勻后加入適量的培養(yǎng)基凝固劑，調(diào)節(jié)pH值為5. 5 5. 8，定容至1L，滅菌待用； 所述的繼代培養(yǎng)基是按照以下方法制備得到的按配制IL計(jì)算，用量筒或移液管從未加入培養(yǎng)基凝固劑的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中吸取130mL溶液放入燒杯中，加入蒸餾水?dāng)嚢杌靹?，然后再加?. 4— D (二氯苯氧乙酸)以及NAA (萘已酸)，加入適量的培養(yǎng)基凝固劑，使2. 4—D (二氯苯氧乙酸)以及NAA (萘已酸)終濃度分別達(dá)到0. 5mg/L和0. lmg/L，調(diào)節(jié)pH值為5.5 5. 8，定容為IOOOmL,滅菌待用； 所述的生根培養(yǎng)基是按照以下方法制備得到的按配制IL計(jì)算，用量筒或移液管從未加入培養(yǎng)基凝固劑的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中吸取65mL溶液放入燒杯中，加入IBA (吲哚丁酸)，加入適量的培養(yǎng)基凝固劑和蒸餾水，使IBA (吲哚丁酸)終濃度為100mg/L，調(diào)節(jié)pH值為5. 5 5.8，定容為IOOOmL滅菌待用； 優(yōu)選的，分別向各所述的培養(yǎng)基溶液中加入活性炭，活性炭的加入量為培養(yǎng)基總重量的 0. 5% -I. 5% ； 其中所述的大量元素母液中含有以下成分NH4NO33 300 mg/LK2NO438 000 mg/LCaCl2* 2H208 800 mg/LMgSO4*7H20I 400 mg/LKH2PO43 400 mg/L 其中所述的微量元素母液中含有以下成分KI166 mg/LH3BO3I 240 mg/LMnSO4- 4H204 460 mg/LZnSO4 SH2OI 720 mg/LNa2MoO4*2Hj050 mg/L CuSO4- 5H2O5 mg/L CoCl2- 6H205 mg/L其中所述的鐵鹽母液中含有以下成分 Na2EDTA 2H207460mg/L FeSO4 7H205560mg/L 其中所述的有機(jī)元素母液中含有以下成分肌醇20 000 mg/L煙酸100 mg/L鹽酸吡哆醇100 mg/L 鹽酸疏胺素20 mg/L甘氨酸400 mg/L (4)誘導(dǎo)及生根培養(yǎng) ①初代培養(yǎng) 在無(wú)菌條件下，將滅菌后的外植體種入裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)30-35d ； ②繼代培養(yǎng) 初代培養(yǎng)30-35d后，將誘導(dǎo)分化形成的帶叢生芽的愈傷組織分割成小塊，轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)25 30d ； ③壯苗生根培養(yǎng) 將繼代培養(yǎng)25 30d后的小苗插入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)；優(yōu)選的，在將小苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基前，將小苗的根部在0. lmg/L的6BA (6—芐基腺嘌呤)溶液中浸泡 .0.5-lmin,再插入生根培養(yǎng)基中； (5)移苗、馴化、假植及定植。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(I)中所述的外植體為I年齡生發(fā)育成熟，品種純、花色好、無(wú)病蟲(chóng)害的健康大毛花植株上部的淡綠色幼嫩芽頂，將葉柄兩側(cè)葉片用消毒剪刀剪去，并將其葉柄剪成1-0. 5 cm的段，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(2)中脫毒所用的酒精溶液為75%酒精溶液，浸泡的時(shí)間為30s ;所用的氯化汞溶液0. 1% L氯化汞消毒液，消毒的時(shí)間為12min,無(wú)菌水洗的次數(shù)為4 5遍。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(3)中所述的培養(yǎng)基凝固劑包括瓊月旨、明膠及無(wú)機(jī)硅膠。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(4)中初代培養(yǎng)是在無(wú)菌條件下，將滅菌后的外植體，種入裝有誘導(dǎo)培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，置于溫度為20°C 25°C，濕度為70% 80%，光照強(qiáng)度為2000 30001x，光照時(shí)間為14 16h/d的條件下培養(yǎng)。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(4)中繼代培養(yǎng)是在初代培養(yǎng)后，將誘導(dǎo)分化形成的帶叢生芽的愈傷組織分割成小塊，轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中，置于溫度為20°C 25°C，濕度為70% 80%，光照強(qiáng)度為2000 30001 X，光照時(shí)間為14 16h/d的條件下培養(yǎng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(4)中生根培養(yǎng)是在繼代培養(yǎng)后，增殖體I 2 cm高時(shí)，切取增殖體上部0. 5至I厘米，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行壯苗生根培養(yǎng)，生根階段培養(yǎng)溫度降至20°C，光照改為室內(nèi)自然散射光，培養(yǎng)25 30d。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(5)中馴化是在經(jīng)15-25d的生根培養(yǎng)后，平均每個(gè)試瓶植株長(zhǎng)出4 5條粗壯的側(cè)根，根長(zhǎng)I. 5 2 cm時(shí),將長(zhǎng)有健壯根系的小苗連瓶不開(kāi)蓋放在溫室栽植處，3至5天后，開(kāi)瓶放置3 4d進(jìn)行馴化煉苗。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(5)中假植是待瓶?jī)?nèi)苗馴化煉苗3-4d后，將幼苗移出，用自來(lái)水小心洗凈根部培養(yǎng)基，并用0. I %的多菌靈洗根，栽于小苗假植床里，密度為3 cm X 5 Cm，移栽完畢，再澆適量的水；優(yōu)選的，假植床設(shè)置為下層為粗沙、中層為篩細(xì)的腐殖土、上層為細(xì)沙，并用0. 2%高錳酸鉀消毒。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于步驟(5)中定植是指待苗高10cm時(shí)，按30X20 cm株行距定植，并進(jìn)行正常管理。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種荒漠化、沙漠化治理專用金銀花的培育方法。其特點(diǎn)是以傳統(tǒng)正品為親本，運(yùn)用誘導(dǎo)組培方法，成功培育出染色體加倍后的4倍體新苗種。該苗種根系發(fā)達(dá)，抗逆性強(qiáng)，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，耐干旱、抗鹽堿、抗嚴(yán)寒，貼地生根，自行無(wú)限繁殖。在北緯40°以北地區(qū)種植，2年內(nèi)根盤(pán)占地面積可達(dá)5平方米。一株可覆蓋10m2以上的沙灘，根盤(pán)覆蓋土地鎖含水份達(dá)200公斤左右?；ɡ俅?，有效藥物含量吸收峰高于傳統(tǒng)正品，根、莖、葉、花、藤皆可用于藥品、飲品、保健品等的生產(chǎn)，經(jīng)濟(jì)價(jià)值極為可觀。利用這一方法育苗，可綠化沙漠、荒山，讓荒漠了的“不毛之地”產(chǎn)生自我造血功能，從根本上解決沙漠治理投入大、效益低、無(wú)法維持持循環(huán)發(fā)展的難題。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102754600SQ20121024732
公開(kāi)日2012年10月31日 申請(qǐng)日期2012年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月17日
發(fā)明者湯興然 申請(qǐng)人:湯興然