一種復(fù)合益菌肽及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種復(fù)合益菌肽及其制備方法和應(yīng)用，它由菌酶復(fù)配發(fā)酵劑添加到豆粕中發(fā)酵而成，所述菌酶復(fù)配發(fā)酵劑由四種益生菌、四種蛋白酶和碳源復(fù)合而成，四種益生菌分別為丁酸梭菌、短小芽孢桿菌S3、植物乳桿菌和布拉酵母菌；四種蛋白酶分別為酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶和多肽蛋白酶。并提供了復(fù)合益菌肽的具體制備方法和在用于制備乳仔豬飼料添加劑中的應(yīng)用。所述復(fù)合益菌肽產(chǎn)品，富含多種益生菌，可有效降解抗原蛋白產(chǎn)生多肽、氨基酸等小分子物質(zhì)，并在發(fā)酵過程中產(chǎn)生了多種益生性有機(jī)酸、生物素等風(fēng)味性、拮抗性物質(zhì)，不僅增加了適口性、安全性，且顯著提高了豆粕利用率和飼料營養(yǎng)價(jià)值，還可顯著降低乳仔豬腹瀉率。
CGMCC No. 9161
2014.05.13
【專利說明】一種復(fù)合益菌肽及其制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物酶解與發(fā)酵領(lǐng)域，涉及肽的制備方法，具體涉及一種復(fù)合益菌肽 及其制備方法和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 豆柏作為一種重要的植物蛋白源，有著重要的應(yīng)用和研究價(jià)值。但大豆中的蛋白 酶抑制劑、植物凝集素、大豆抗原蛋白、脲酶、植酸、大豆低聚糖等抗?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)的存在，不但 極大地阻礙動物對營養(yǎng)成分的消化、吸收和利用，而且嚴(yán)重地危害動物的健康和生長發(fā)育。 大豆抗原蛋白是大豆加工制品中殘留量最高，抗?fàn)I養(yǎng)作用最強(qiáng)的一種大豆抗?fàn)I養(yǎng)因子，可 引起嬰幼兒以及小鼠、仔豬、犢牛等動物發(fā)生腸道及其它器官的過敏反應(yīng)，并導(dǎo)致腸黏膜損 傷，小腸形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生損傷性變化，進(jìn)而引起腹瀉、生產(chǎn)性能下降甚至死亡，是世界公認(rèn)的 八大食物過敏原之一。大豆抗原蛋白主要包括Iis大豆球蛋白和7S0-大豆伴球蛋白，兩 者占大?蛋白含量的70 %左右。
[0003] 目前的豆柏的生物處理方法中，微生物發(fā)酵法與酶處理法已經(jīng)較為普遍，本發(fā)明 將四種菌、四種酶與碳源結(jié)合起來，將豆柏作為一種培養(yǎng)微生物的基質(zhì)，促進(jìn)四種益生菌大 量繁殖，并在生物處理過程中，有效降解并利用豆柏大分子抗原蛋白，幾乎將其完全降解為 多肽、氨基酸等小分子物質(zhì)，易于動物吸收，并產(chǎn)生了多種益生性有機(jī)酸等風(fēng)味性物質(zhì)，生 物素、酪酸梭菌素等拮抗性物質(zhì)，在增加了適口性、安全性的同時(shí)，還顯著提高了豆柏的蛋 白利用率和營養(yǎng)價(jià)值，并可降低乳仔豬腹瀉率，具備了一定的功能性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種復(fù)合益菌肽及其制備方法和應(yīng)用，所述復(fù)合益菌肽可以滿足乳 仔豬對豆柏原料的特殊營養(yǎng)需求。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
[0006] -種復(fù)合益菌肽，它由菌酶復(fù)配發(fā)酵劑添加到豆柏中發(fā)酵而成，所述菌酶復(fù)配發(fā) 酵劑由四種益生菌、四種蛋白酶和碳源復(fù)合而成，所述四種益生菌分別為丁酸梭菌、短小 芽孢桿菌S3、植物乳桿菌和布拉酵母菌；所述四種蛋白酶分別為酸性蛋白酶、中性蛋白酶、 堿性蛋白酶和多肽蛋白酶；所述短小芽孢桿菌S3的分類命名為短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus)，其保藏編號為：CGMCC No. 9161。
[0007] 對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)：所述四種益生菌在菌酶復(fù)配發(fā)酵劑中的含菌量分 別是：丁酸梭菌：不低于IX l〇6CFU/g ;短小芽孢桿菌S3 :不低于IX 106CFU/g ;植物乳桿菌： 不低于IX l〇6CFU/g ;布拉酵母菌：不低于IX 105CFU/g。
[0008] 對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)：所述四種蛋白酶在菌酶復(fù)配發(fā)酵劑中的含量分別 是：酸性蛋白酶：不低于500U/g ;中性蛋白酶：不低于1000U/g ;堿性蛋白酶：不低于4000U/ g ;多肽蛋白酶：不低于4500U/g。
[0009] 對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)：所述碳源為占菌酶復(fù)配發(fā)酵劑質(zhì)量9% -10%的 葡萄糖。
[0010] 本發(fā)明還提供了所述的復(fù)合益菌肽的制備方法，它包括如下步驟：
[0011] (1)在豆柏中添加占豆柏質(zhì)量50-60%的水形成發(fā)酵底料，接種占豆柏質(zhì)量10% 的所述菌酶復(fù)配發(fā)酵劑，混合均勻形成發(fā)酵物料；
[0012] (2)將所述發(fā)酵物料儲存于錫箔密封袋內(nèi)，于200°C封口，置于37°C恒溫培養(yǎng)箱 內(nèi)，發(fā)酵72h ;
[0013] (3)發(fā)酵完成后，低溫烘干，粉碎過篩，形成所述復(fù)合益菌肽。
[0014] 對上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)：所述步驟（3)中發(fā)酵物料于40°C低溫烘干，粉碎 過60目篩。
[0015] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述的復(fù)合益菌肽在制備用于飼喂乳仔豬的飼料添加劑中 的應(yīng)用。
[0016] 所述復(fù)合益菌肽以占飼料質(zhì)量比為5-15%的比例添加到飼料中，所述復(fù)合益菌肽 拮抗豬糞大腸菌群。
[0017] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明方法的優(yōu)點(diǎn)和技術(shù)效果是：
[0018] 1、本發(fā)明所用的菌酶復(fù)配發(fā)酵劑，是在生物酶解發(fā)酵理論基礎(chǔ)上，結(jié)合多年實(shí)踐 經(jīng)驗(yàn)，針對生產(chǎn)常用豆柏原料特點(diǎn)，自行配制的專一性發(fā)酵劑；采用所述的專一性菌酶復(fù)配 發(fā)酵劑，生物處理豆柏來制備復(fù)合益菌肽產(chǎn)品。
[0019] 2、本發(fā)明所制備的復(fù)合益菌肽產(chǎn)品，富含多種益生菌，包括丁酸梭菌，短小芽孢桿 菌S3,植物乳桿菌，布拉酵母菌。在其酶解發(fā)酵過程中，可有效降解豆柏中抗原蛋白產(chǎn)生多 肽、氨基酸等小分子物質(zhì)，并產(chǎn)生多種益生性有機(jī)酸、生物素等風(fēng)味性、拮抗性物質(zhì)，不僅增 加了適口性、安全性，且芽孢類益生菌具有很好的保存穩(wěn)定性。
[0020] 3、本發(fā)明所制備的復(fù)合益菌肽產(chǎn)品，可顯著提高豆柏利用率和飼料營養(yǎng)價(jià)值，具 有豬糞大腸菌群抗性，還可顯著降低仔豬腹瀉率。
[0021] 4、本發(fā)明所涉及菌、酶等，都屬于飼料添加劑范疇，來源廣泛，安全易得，成本低 廉。
[0022] 5、本發(fā)明所述方法步驟簡單合理，操作快捷，具有良好的工業(yè)化實(shí)施前景。
[0023] 結(jié)合附圖閱讀本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】后，本發(fā)明的其他優(yōu)點(diǎn)將變得更加清楚。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0024] 圖1表明1號豆柏經(jīng)生物處理后制備的復(fù)合益菌肽-益生菌菌量組成與半年穩(wěn)定 性。
[0025] 圖2表明2號豆柏經(jīng)生物處理后制備的復(fù)合益菌肽-益生菌菌量組成與半年穩(wěn)定 性。
[0026] 圖3表明豆柏原料經(jīng)生物處理后制備為復(fù)合益菌肽的抗原蛋白SDS-PAGE電泳圖。
[0027] 圖4表明豆柏原料經(jīng)生物處理后制備為復(fù)合益菌肽富含益生性有機(jī)酸。
[0028] 圖5表明豆柏原料經(jīng)生物處理后制備為復(fù)合益菌肽可拮抗豬糞大腸菌群。
[0029] 圖6表明豆柏原料經(jīng)生物處理后制備為復(fù)合益菌肽可顯著降低乳仔豬腹瀉率。 圖7為短小芽孢桿菌S3的生產(chǎn)工藝流程圖。

【具體實(shí)施方式】
[0030] 為更好地了解該復(fù)合益菌肽產(chǎn)品的功能，下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明的 產(chǎn)品引用特點(diǎn)做進(jìn)一步詳細(xì)的說明。
[0031] 實(shí)施例1
[0032] 一、短小芽孢桿菌S3的分離篩選
[0033] 2013年5月至2013年9月，從膠州沿海多處采集蝦養(yǎng)殖區(qū)域的水樣、底泥、對蝦腸 道糞便。底泥、對蝦腸道糞便樣品分別于無菌生理鹽水中10倍稀釋，充分研磨，取上清為樣 品液；水樣直接作為樣品液；樣品液分別接種于2216E液體培養(yǎng)基中30°C富集培養(yǎng)48h后 稀釋，涂布于2216E平板中進(jìn)行菌株的分離、純化，共篩選出26株純菌。
[0034] 已純化單菌株采用平板點(diǎn)種法篩選頡頏菌。以副溶血弧菌為指示菌，將副溶血弧 菌接種于2216E液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)18h，稀釋制備成105-106CFU/mL的菌懸液，取0. ImL涂布 2216E平板，備用。用無菌牙簽挑取待篩選的菌株，點(diǎn)接于含菌平板中，25°C恒溫培養(yǎng)24h， 觀察點(diǎn)接菌落周圍是否出現(xiàn)明顯的抑菌圈或覆蓋區(qū)。
[0035] 對分離到的26株細(xì)菌采用點(diǎn)種法篩選到3株對副溶血弧菌具有頡頏作用的菌株， 其中S3對副溶血弧菌具有較強(qiáng)的頡頏作用，能明顯抑制病原菌的生長，在病原菌周圍產(chǎn)生 明顯清晰的抑菌圈。
[0036] 經(jīng)細(xì)菌生理生化方法初步鑒定，菌株S3為芽孢桿菌屬，其生物學(xué)特性：革蘭氏染 色陽性，在營養(yǎng)瓊脂平板上形成的菌落直徑約2mm，邊緣整齊光滑，中間褶皺，乳白色。菌體 形態(tài)呈桿狀，芽孢橢圓形，中生。
[0037] 二、短小芽孢桿菌的分子遺傳學(xué)分類鑒定
[0038] 首先提取菌株S3的DNA，以該DNA為模板，16S rRNA通用引物為引物，對16SrRNA 片段進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增片段進(jìn)行序列測定。測序結(jié)果用Blast軟件與GenBank中相關(guān)屬種的 16S rRNA序列進(jìn)行比對，結(jié)果顯示該菌株16S rRNA序列與GenBank基因庫中芽孢桿菌屬 中的Bacillus pumilus的16s rRNA序列同源度最高，同源率達(dá)到99%。通過DNAMAN6.0 對Genbank中已有的芽孢桿菌屬的16S rRNA序列進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，結(jié)果顯示，菌株S316S rRNA與Bacillus pumilus同源性最高，判定該菌株為芽孢桿菌屬的短小芽孢桿菌。
[0039] 將篩選到的菌株S3進(jìn)行菌種保藏，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普 通微生物中心（CGMCC);地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究 所；保藏日期=2014年5月13日；短小芽孢桿菌Bacillus pumilus的保藏編號為CGMCC No. 9161。
[0040] 三、復(fù)合益菌肽的組成
[0041] 本發(fā)明所述復(fù)合益菌肽由菌酶復(fù)配發(fā)酵劑添加到豆柏中發(fā)酵而成，所述菌酶復(fù)配 發(fā)酵劑由四種益生菌、四種蛋白酶和碳源復(fù)合而成，所述四種益生菌分別為丁酸梭菌，短小 芽孢桿菌S3,植物乳桿菌，布拉酵母菌；所述四種蛋白酶分別為酸性蛋白酶，中性蛋白酶， 堿性蛋白酶，多肽蛋白酶；所述短小芽孢桿菌S3的分類命名為短小芽孢桿菌（Bacillus pumilus)，其保藏編號為：CGMCC No. 9161。所述碳源為占菌酶復(fù)配發(fā)酵劑質(zhì)量9%-10%的 葡萄糖，添加的葡萄糖作物載體與碳源，以滿足各種菌的生長需求，并促進(jìn)乳酸、乙酸、丁酸 等益生性有機(jī)酸的產(chǎn)生。
[0042] 所述四種益生菌在菌酶復(fù)配發(fā)酵劑中的含菌量分別是：丁酸梭菌：不低于 I X 106CFU/g ;短小芽孢桿菌S3 :不低于I X 106CFU/g ;植物乳桿菌：不低于I X 106CFU/g ;布 拉酵母菌：不低于lX105CFU/g。所述四種蛋白酶在菌酶復(fù)配發(fā)酵劑中的含量分別是：酸性 蛋白酶：不低于500U/g沖性蛋白酶：不低于1000U/g ;堿性蛋白酶：不低于4000U/g ;多肽 蛋白酶：不低于4500U/g。
[0043] 本發(fā)明所使用的丁酸梭菌、植物乳桿菌和布拉酵母菌均為市售商品化的菌粉，所 使用的酸性蛋白酶、中性蛋白酶、堿性蛋白酶和多肽蛋白酶均為市售商品化的酶制劑，而所 述短小芽孢桿菌S3是自行篩選并保存的，其生產(chǎn)工藝流程如圖7所示。
[0044] 四、本發(fā)明所述的復(fù)合益菌肽的制備方法包括如下步驟：
[0045]
[0046]
[0047] (1)在豆柏中添加占豆柏質(zhì)量50-60 %的水形成發(fā)酵底料，接種占豆柏質(zhì)量10% 的所述菌酶復(fù)配發(fā)酵劑，混合均勻形成發(fā)酵物料；
[0048] (2)將所述發(fā)酵物料儲存于錫箔密封袋內(nèi)，于200°C封口，置于37°C恒溫培養(yǎng)箱 內(nèi)，發(fā)酵72h。
[0049] 所述步驟（2)中發(fā)酵物料處于完全密封環(huán)境中，前24h內(nèi)，物料中仍殘存有氧氣， 好氧的短小芽孢桿菌S3與兼性好氧的布拉酵母菌迅速生長；24h-48h時(shí)，隨著氧氣的不斷 消耗與其他氣體的逐漸產(chǎn)生，兼性厭氧的植物乳桿菌逐漸占據(jù)優(yōu)勢，酵母菌菌也逐漸進(jìn)入 發(fā)酵模式，此間可產(chǎn)生乳酸、乙酸等多種益生性有機(jī)酸；48h-72h時(shí)，當(dāng)氧氣完全耗盡后，完 全厭氧菌丁酸梭菌逐漸占據(jù)優(yōu)勢，并分泌丁酸，有利于改善動物腸道。在完全密封的環(huán)境 下，72h內(nèi)實(shí)現(xiàn)了四種特性益生菌的接力生長，可產(chǎn)生多種益生性物質(zhì)。
[0050] 所述步驟（2)中發(fā)酵物料處于完全密封環(huán)境中，不同時(shí)間段內(nèi)不同的菌優(yōu)勢生 長，造成環(huán)境PH也是逐漸變化的，基本為降低的趨勢。前期pH高于5時(shí)，堿性蛋白酶與多 肽蛋白酶可發(fā)揮一定酶解作用，后期PH低于5后，主要由中性蛋白酶與酸性蛋白酶發(fā)揮生 物降解功能。四種酶的酶切位點(diǎn)各不相同，可有效降解抗原蛋白，大幅提高酸溶蛋白、堿解 蛋白比例，增加游離氨基酸含量，提高產(chǎn)品的體外蛋白消化率。
[0051] 所述步驟（2)中發(fā)酵物料處于完全密封環(huán)境中，pH逐漸降低，四種酶交替起作用， 且酶切位點(diǎn)各不相同，可有效降解抗原蛋白，大幅提高酸溶蛋白、堿解蛋白比例，增加游離 氨基酸含量，提高產(chǎn)品的體外蛋白消化率。
[0052] (3)發(fā)酵完成后，于40°C低溫烘干，粉碎過60目篩，形成復(fù)合益菌肽產(chǎn)品；
[0053] 所述步驟（3)中，低溫烘干處理前后，最終的復(fù)合益菌肽產(chǎn)品與發(fā)酵濕料相比，丁 酸梭菌、短小芽孢桿菌S3、植物乳桿菌、布拉酵母菌等都有一定比例的存活，芽孢菌存活率 高于89 %，且半年內(nèi)室溫條件下活菌存活率高于90 %。
[0054] 所述復(fù)合益菌肽產(chǎn)品富含益生菌、有機(jī)酸等，并具有雜菌抗性，用于乳仔豬飼料配 制，以5-15%比例添加，可顯著降低仔豬腹瀉率。
[0055] 所述復(fù)合益菌肽產(chǎn)品，具備一定的豬糞大腸菌群抗性。
[0056] 以本發(fā)明所述方法，對1號與2號兩種豆柏原料（均為市售的常見豆柏原料）進(jìn) 行生物處理，得到1號與2號兩種復(fù)合益菌肽。
[0057] 實(shí)施例2
[0058] 分別測定發(fā)酵72h時(shí)發(fā)酵終點(diǎn)濕料、低溫烘干后的所述復(fù)合益菌肽產(chǎn)品、室溫存 放6月后的復(fù)合益菌肽產(chǎn)品中四種菌的含量。利用胰胨-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸培養(yǎng)基，采 用夾層培養(yǎng)法，測定丁酸梭菌菌量；利用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，采用稀釋涂布法，測定短小芽孢 桿菌S3菌量；利用MRS培養(yǎng)基，采用傾注培養(yǎng)法，測定植物乳桿菌菌量；利用YH)培養(yǎng)基，采 用稀釋涂布法，測定布拉酵母菌菌量。鑒于四種菌菌量差異較大，以log CFU/g表示菌量。
[0059] 圖1展示了 1號豆柏經(jīng)生物處理后制備的復(fù)合益菌肽-益生菌菌量組成與半年 穩(wěn)定性，圖2展示了 2號豆柏經(jīng)生物處理后制備的復(fù)合益菌肽-益生菌菌量組成與半年 穩(wěn)定性。低溫烘干處理前后，最終的復(fù)合益菌肽產(chǎn)品與發(fā)酵濕料中各菌都有一定比例的存 活，其中芽孢菌烘干存活率高于89%，且室溫條件下存放半年后，活菌存活率高于90%。 1號復(fù)合益菌肽的發(fā)酵濕料中，丁酸梭菌菌量達(dá)I. 08X 106CFU/g，低溫烘干后，含丁酸梭 菌9. 7 X 105CFU/g，烘干存活率達(dá)89. 81 %，且半年后菌量仍保持8. 8 X 105CFU/g，存活率達(dá) 90. 72%，說明該產(chǎn)品中丁酸梭菌耐熱性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，這極大地提高了該菌在動物體內(nèi)發(fā) 揮作用的可能性；短小芽孢桿菌S3與丁酸梭菌類似，發(fā)酵濕料中菌量達(dá)4. 5X 107CFU/g， 低溫烘干后菌量達(dá)4. 2 X 107CFU/g，烘干后存活率達(dá)93. 34 %，室溫存放半年后菌量仍保持 4X 107CFU/g，活菌存活率達(dá)95. 24%，說明其孢子經(jīng)過烘干過程有所選擇，耐受性更強(qiáng)，具 有較好的穩(wěn)定性，可增強(qiáng)該產(chǎn)品的應(yīng)用潛力；1號復(fù)合益菌肽的發(fā)酵濕料中，植物乳桿菌菌 量達(dá)3. 3X 107CFU/g，在烘干過程中下降1個(gè)數(shù)量級，菌量為3. 83X 106CFU/g，室溫存放半 年后，仍保持I. 96X 106CFU/g，活菌菌量數(shù)量級未變，存活率達(dá)51. 17%，說明復(fù)合益菌肽 產(chǎn)品中含有較多植物乳桿菌，雖有損失但能耐受一定時(shí)間的存儲；1號復(fù)合益菌肽的發(fā)酵 濕料中，布拉酵母菌量可達(dá)7. 5X105CFU/g，但其耐受性較差，低溫烘干粉碎產(chǎn)品中菌量達(dá) 3. 5X 104CFU/g，室溫存放半年后酵母菌僅達(dá)4. I X 103CFU/g。2號復(fù)合益菌肽中各菌的含 量與比例、烘干前后存活率、室溫存放半年前后活菌存活率等指標(biāo)，與1號復(fù)合益菌肽中類 似，但其植物乳桿菌菌量略高，其他菌菌量略低。
[0060] 實(shí)施例3
[0061] 利用SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳）定性確定抗原蛋白的降解情況，利用 ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定法）試劑盒定量測定抗原蛋白的去除率。利用TCA(三氯乙酸浸 提法）測定酸溶蛋白（占粗蛋白，％ );參考GB/T19541-2004飼料用大豆柏，利用0.2% KOH測定KOH溶解度，參考國標(biāo)GBT-8314-2002游離氨基酸總量測定，測定游離氨基酸含量； 利用中國農(nóng)科院北京畜牧獸醫(yī)研究所研發(fā)的SDS- II單胃動物仿生消化系統(tǒng)，模擬測定體 外蛋白消化率。
[0062] 抗原蛋白的SDS-PAGE定性測定結(jié)果如圖3所示，ELISA定量測定結(jié)果如表1所示。 1號與2號豆柏原料不同蛋白亞基的條帶深淺略有差異，大豆球蛋白、β-大豆伴球蛋白、抗 原蛋白的具體測定值也略有不同，但豆柏原料與生物處理后的復(fù)合益菌肽產(chǎn)品之間的對比 趨勢是類似的：經(jīng)生物處理后，復(fù)合益菌肽的大分子抗原蛋白幾乎完全降解為小分子蛋白 (蛋白分子量低于HKDa)，從1號與2號豆柏原料到復(fù)合益菌肽產(chǎn)品，ELISA試劑盒測定的 抗原蛋白去除率也分別達(dá)到91. 98%與93. 21%。
[0063] 表2顯示了兩種豆柏經(jīng)處理制備為復(fù)合益菌肽產(chǎn)品后，酸溶蛋白（占粗蛋白，％ )、 KOH溶解度、游離氨基酸、單胃動物體外仿生消化率等指標(biāo)的變化。從1號與2號豆柏原料 到復(fù)合益菌肽產(chǎn)品，酸溶蛋白/cp的增幅分別為27. 64%與29. 15%，KOH溶解度的增幅分 別為14. 13%與16. 81%，游離氨基酸的增幅分別為9. 34%與9. 26%，體外蛋白消化率的增 幅分別為13. 82%與13. 51%。這些指標(biāo)的變化，主要得益于專一性菌酶復(fù)配發(fā)酵劑對豆柏 的生物酶解與發(fā)酵處理，也與之前的大分子蛋白幾乎完全降解為小分子蛋白試驗(yàn)結(jié)果相對 應(yīng)。該復(fù)合益菌肽產(chǎn)品用于乳仔豬料的制備，更加有利于蛋白類營養(yǎng)的吸收與消化，并可有 效避免大分子抗原蛋白引起的應(yīng)激性反應(yīng)。
[0064] 表1表明豆柏原料經(jīng)生物處理后制備為復(fù)合益菌肽的抗原蛋白ELISA試劑盒測 定結(jié)果

【權(quán)利要求】
1. 一種復(fù)合益菌肽，其特征在于它由菌酶復(fù)配發(fā)酵劑添加到豆柏中發(fā)酵而成，所述菌 酶復(fù)配發(fā)酵劑由四種益生菌、四種蛋白酶和碳源復(fù)合而成，所述四種益生菌分別為丁酸梭 菌、短小芽孢桿菌S3、植物乳桿菌和布拉酵母菌；所述四種蛋白酶分別為酸性蛋白酶、中 性蛋白酶、堿性蛋白酶和多肽蛋白酶；所述短小芽孢桿菌S3的分類命名為短小芽孢桿菌 應(yīng)其保藏編號為：CGMCC No. 9161。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合益菌肽，其特征在于：所述四種益生菌在菌酶復(fù)配發(fā)酵 劑中的含菌量分別是：丁酸梭菌：不低于IX 1〇6 CFU/g ;短小芽孢桿菌S3 :不低于IX 106 CFU/g ;植物乳桿菌：不低于1 X 106 CFU/g ;布拉酵母菌：不低于1 X 105 CFU/g。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合益菌肽，其特征在于：所述四種蛋白酶在菌酶復(fù)配發(fā)酵 劑中的含量分別是：酸性蛋白酶：不低于500U/g ;中性蛋白酶：不低于1000U/g ;堿性蛋白 酶：不低于4000U/g ;多肽蛋白酶：不低于4500U/g。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)合益菌肽，其特征在于：所述碳源為占菌酶復(fù)配發(fā)酵劑質(zhì) 量9% -10%的葡萄糖。
5. 權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的復(fù)合益菌肽的制備方法，其特征在于它包括如下步驟： (1) 在豆柏中添加占豆柏質(zhì)量50-60%的水形成發(fā)酵底料，接種占豆柏質(zhì)量10%的所述 菌酶復(fù)配發(fā)酵劑，混合均勻形成發(fā)酵物料； (2) 將所述發(fā)酵物料儲存于錫箔密封袋內(nèi)，于200°C封口，置于37°C恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，發(fā) 酵 72h ; (3) 發(fā)酵完成后，低溫烘干，粉碎過篩，形成所述復(fù)合益菌肽。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的復(fù)合益菌肽的制備方法，其特征在于：所述步驟（3)中發(fā)酵 物料于40°C低溫烘干，粉碎過60目篩。
7. 權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的復(fù)合益菌肽在制備用于飼喂乳仔豬的飼料添加劑中的 應(yīng)用。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的復(fù)合益菌肽在制備用于飼喂乳仔豬的飼料添加劑中的應(yīng)用， 其特征在于：所述復(fù)合益菌肽以占飼料質(zhì)量比為5-15%的比例添加到飼料中。
9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的復(fù)合益菌肽在制備用于飼喂乳仔豬的飼料添加劑中的應(yīng)用， 其特征在于：所述復(fù)合益菌肽拮抗豬糞大腸菌群。
【文檔編號】A23K1/14GK104222493SQ201410360547
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】李慧芬, 張大偉, 馬成 申請人:青島尚德生物技術(shù)有限公司