本發(fā)明屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種金絲4號(hào)棗的組培快繁方法。
背景技術(shù)：
“金絲4號(hào)”棗是山東省果樹研究所1990年從金絲2號(hào)自然雜交的實(shí)生棗樹中選育出的優(yōu)良單株。具有果大、整齊、含糖高、品質(zhì)優(yōu)、抗病、抗裂果、結(jié)果早、極豐產(chǎn)、抗逆、適應(yīng)性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。金絲4號(hào)棗果實(shí)近長(zhǎng)筒形，兩端平，中部略粗。平均果重10～12克，整齊度高。果肩平而略斜，無明顯梗洼，環(huán)洼中等深寬，果尖微凹，果面光滑，光亮艷麗，果皮細(xì)薄富韌性，白熟期淺綠白色，著色后呈淺棕紅色。果肉白色，質(zhì)地致密脆嫩，汁液較多，味極甜微酸，無苦辣草辛等雜味，口感極佳。皮薄肌豐，核小肉厚，清香甘甜，既可以鮮食，又可以制干，以其優(yōu)異的品質(zhì)和豐富的營(yíng)養(yǎng)備受消費(fèi)者歡迎?！敖鸾z4號(hào)”棗具有早實(shí)、豐產(chǎn)、抗逆性強(qiáng)的特點(diǎn)，是我國(guó)南方丘崗山地開發(fā)極具發(fā)展前途的樹種，已經(jīng)成為我國(guó)南方地區(qū)主栽棗品種。
目前，在實(shí)際栽培中，“金絲4號(hào)”棗大多采用根蘗苗分株、扦插和嫁接等方法進(jìn)行繁育，利用根孽分苗繁殖，需與嫁接繁殖相結(jié)合，不僅費(fèi)工費(fèi)時(shí)，成苗率較低，且易侵染各種植物病毒，而且采用根蘗苗分株、扦插和嫁接等方法進(jìn)行繁育繁殖率很低，生長(zhǎng)速度慢，弱病苗比例高，不能進(jìn)行周年生產(chǎn)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的大量需求。因而影響了其大面積的推廣。在此形勢(shì)下，采用棗樹組織培養(yǎng)技術(shù)則成了快速培育良種苗木的有效途徑。組織培養(yǎng)（Tissue Culture）是在無菌條件下，分離并在培養(yǎng)基中培養(yǎng)離體植物組織的技術(shù)，用組織培養(yǎng)方法快速繁殖，具有整株的遺傳一致性，生長(zhǎng)健壯，根系發(fā)達(dá)、移栽成活率高，果品品質(zhì)好，產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)。
棗樹的組織培養(yǎng)研究始于 2O 世紀(jì) 70 年代末，迄今為止，已有20多個(gè)品種以不同類型外植體建立了無菌離體繁殖體系。對(duì)于棗樹的組培方法也有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，如：1、【題名】毛葉棗組培快繁技術(shù)研究 【作者】續(xù)九如，李春立，孫建設(shè)【出處】北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003,25（3）【摘要】利用組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)毛葉棗的組培快繁技術(shù)進(jìn)行了研究。證明3、4月是1年內(nèi)采集外植體的最佳時(shí)期，在此階段對(duì)外植體進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，有效萌芽率最高。以MS為基本培養(yǎng)基篩選出適合毛葉棗組培各階段的適宜激素濃度和配比 ，分別為：?jiǎn)?dòng)培養(yǎng)基 MS+6-BA 0.8 mg/L+IBA 0.4mg/L；增殖培養(yǎng)基MS+ 6-BA 1.2 mg/L+IBA 0.5mg/L；生根培養(yǎng)基1/2MS+IBA 3.0mg/L并闡明了繼代次數(shù)與增殖系數(shù)和生根率的關(guān)系，提出毛葉棗繼代次數(shù)以8代左右為宜，8 代之后 應(yīng)進(jìn)行生根培養(yǎng)。2、【題名】酸棗組培快繁研究【作者】代麗，劉孟軍，王玖瑞，周俊義【出處】河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005,28（2）【摘要】:以休眠芽為試材 ，建立了酸棗的組培快繁體系。最適啟動(dòng)培養(yǎng)基為MS+ BA1.0+ IBA0.1或 MS+BA2.0+NAA0.1，增殖培養(yǎng)基為MS+BA2.0-3.0，萌芽率和壯芽率均超過了70％。增殖培養(yǎng)時(shí)，下部莖段的出芽率高于上部莖段 ，但萌發(fā)壯芽的比率則以上部莖段相對(duì)較高。1/2 MS+IBA0.5-1.0是酸棗快繁生根培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基，生根率最高可達(dá)92％。迄今為止，人們?cè)跅棙涞慕M培研究方面已取得了一些成就，運(yùn)用組培繁殖棗樹優(yōu)良品種的技術(shù)已逐步應(yīng)用到生產(chǎn)中，但是，棗的組織培養(yǎng)較困難，成本較高，不同品種間的繁殖條件差異較大，不同品種的棗樹的組培方法也不一樣。目前，在“金絲4號(hào)”棗的繁育上，由于采用傳統(tǒng)的根蘗苗分株、扦插和嫁接等方法進(jìn)行繁育，存在著繁育繁殖率很低，生長(zhǎng)速度慢，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場(chǎng)的大量需求等問題；因此，開發(fā)一種針對(duì)“金絲4號(hào)”棗的組培快繁方法進(jìn)行培養(yǎng)繁殖，能夠促進(jìn)優(yōu)良遺傳材料的快速繁殖，實(shí)現(xiàn) “金絲4號(hào)”棗樹的大量繁殖和快速推廣，是解決市場(chǎng)需求等問題的有效方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種操作簡(jiǎn)便，生產(chǎn)成本低，生根率高，繁殖率高，可應(yīng)用于大規(guī)模商品化育苗的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，采用該方法能有效、方便的在短時(shí)間內(nèi)獲得大量金絲4號(hào)棗組培苗，而且所獲得的組培苗成活率高，適合廣西喀斯特地貌山區(qū)種植。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
一種金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，包括以下步驟：
(1)外植體的建立：于3月初，剪取16-18cm長(zhǎng)、當(dāng)年生優(yōu)質(zhì)粗壯的根蘗條，用自來水沖洗10分鐘后，于質(zhì)量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡10-13分鐘，再用自來水沖洗干凈，然后將洗凈后的根蘗條置于培養(yǎng)室中水培培養(yǎng)，每22-26小時(shí)換一次水，培養(yǎng)溫度為27-28℃，光照時(shí)間17-19h/d，光照強(qiáng)度2000～3500lx，培養(yǎng)至長(zhǎng)出2～3cm的水培芽后，取出根蘗條，清洗、消毒后剪取水培芽作為外植體；
（2）啟動(dòng)培養(yǎng)：將水培芽轉(zhuǎn)入經(jīng)高溫滅菌的啟動(dòng)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)不定芽的萌發(fā)，培養(yǎng)條件為溫度 25～28 ℃ ,光照強(qiáng)度為2000-2500lx，光照時(shí)間16-17h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)，新芽萌發(fā)之后，將其轉(zhuǎn)接到分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度為2000-2200lx，光照時(shí)間14-16h/d，溫度為27℃的條件下，培養(yǎng)40-45天；
（3）繼代培養(yǎng)：將植株莖段轉(zhuǎn)接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為25-26℃，光強(qiáng) 2000～25O0lx，光照時(shí)間為15h/d的條件下培養(yǎng)32-34d；
（4）生根培養(yǎng)：在無菌條件下，剪取長(zhǎng)2-2.5cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；培養(yǎng)溫度 26～28℃，光強(qiáng)1800～20001x，光照時(shí)間14-16h/d；
（5）煉苗：當(dāng)經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長(zhǎng)1.0～2.0 cm時(shí)，將組培苗進(jìn)行室內(nèi)煉苗，煉苗溫度為：27-28℃，光照強(qiáng)度為4000-6000lx，室內(nèi)瓶煉4-6天后，敞口煉苗5-7天；
（6）移栽：取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質(zhì)量濃度為0.2%KMnO4溶液消毒過的椰糠+蛭石+細(xì)河沙按照2-3:5:1的比例做基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕度為85％-90%，溫度 25～26℃，避免陽(yáng)光直射， 35-38 天后，移出溫室進(jìn)行全光照煉苗5-6d，及時(shí)澆水，然后移栽大田。
所述的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，步驟（1）中培養(yǎng)至長(zhǎng)出2～3cm的水培芽后對(duì)根蘗條清洗消毒的具體步驟為：取出根蘗條，用75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗3-4次，瀝干水分，放到質(zhì)量濃度為0.1%HgCL2溶液中浸泡消毒7分鐘，然后用無菌水沖洗7-8次，用鑷子夾取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取水培芽作為外植體。
所述的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，步驟（2）中的啟動(dòng)培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 1.2mg/L +萘乙酸（NAA）0.15～0.25mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH 值為 6.0-6.3。
所述的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，步驟（2）中的分生培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.5mg/L +維生素C 1.6-1.8mg/L+谷氨酸1.7 ～ 2.0mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH 值為6.0。
所述的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，步驟（3）中繼代培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.5-0.6mg/L +維生素C 0.7-0.9mg/L+維生素B2 1.5-1.8mg/L+谷氨酸1.7～2.0mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂8g/L, 培養(yǎng)基pH 值為6.1。
所述的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，步驟（4）中生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.05mg/L+ IAA0.15 mg/L+IBA 0.7～1.0 mg/L+5%糖蜜+瓊脂8g/L, pH=6.0-6.2。
本發(fā)明的有益效果為：
1、本發(fā)明是一種針對(duì)“金絲4號(hào)”棗的組培快繁方法，針對(duì)“金絲4號(hào)”棗品種進(jìn)行的研究，經(jīng)過不斷試驗(yàn)，得到了最適合該棗樹組培快繁所用的各種培養(yǎng)基，本發(fā)明的培養(yǎng)基所采用的碳源為糖蜜（糖廠蔗糖生產(chǎn)分離出來的不結(jié)晶的含糖液體），代替了常用的蔗糖，不僅降低了培養(yǎng)基的成本，而且糖蜜富含營(yíng)養(yǎng)成分，含有各種單糖、粗蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)，更容易被植物利用。本發(fā)明分生培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基中都加入了谷氨酸，谷氨酸不僅能提供有機(jī)氮源，同時(shí)也對(duì)植物體的生長(zhǎng)及不定芽，不定胚的分化起促進(jìn)作用，而且能夠被植物細(xì)胞很快吸收；在培養(yǎng)基中加入的維生素C 和維生素B2，能增強(qiáng)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)，利于外植體的生長(zhǎng)發(fā)育。
2、本發(fā)明的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法可以解決采用傳統(tǒng)繁育方法存在的繁殖率很低，生長(zhǎng)速度慢等問題，采用本發(fā)明的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法能夠極大地提高金絲4號(hào)棗的繁殖速度，降低弱苗、病苗的發(fā)生比例，加速了新品種的快速推廣和開發(fā)利用；采用該方法對(duì)金絲4號(hào)棗進(jìn)行進(jìn)行培養(yǎng)繁殖，能夠促進(jìn)優(yōu)良遺傳材料的快速繁殖，實(shí)現(xiàn) “金絲4號(hào)”棗樹的大量繁殖和快速推廣，解決市場(chǎng)的需求。
3、本發(fā)明的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法操作難度低、生產(chǎn)成本低，生根率高達(dá)88%以上，生產(chǎn)的組培苗成活率高，易于在大范圍內(nèi)推廣使用，采用本發(fā)明的金絲4號(hào)棗的組培快繁方法可以獲得大量整齊一致，遺傳性狀穩(wěn)定的再生植株，試驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性良好，可應(yīng)用于大規(guī)模商品化育苗，苗木能夠保持優(yōu)樹的優(yōu)良遺傳性狀，適合廣西北部山區(qū)大面積區(qū)域種植，特別是喀斯特地貌山區(qū)種植。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
一種金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，包括以下步驟：
(1)外植體的建立：于3月初，剪取16cm長(zhǎng)、當(dāng)年生優(yōu)質(zhì)粗壯的根蘗條，用自來水沖洗10分鐘后，于質(zhì)量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡10分鐘，再用自來水沖洗干凈，然后將洗凈后的根蘗條置于培養(yǎng)室中水培培養(yǎng)，每22小時(shí)換一
次水，培養(yǎng)溫度為27-28℃，光照時(shí)間17h/d，光照強(qiáng)度3500lx，培養(yǎng)至長(zhǎng)出2～3cm的水培芽后，取出根蘗條，用質(zhì)量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗3次，瀝干水分，放到質(zhì)量濃度為0.1%HgCL2溶液中浸泡消毒7分鐘，然后用無菌水沖洗7次，用鑷子夾取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取水培芽作為外植體；
（2）啟動(dòng)培養(yǎng)：將水培芽轉(zhuǎn)入經(jīng)高溫滅菌的啟動(dòng)培養(yǎng)基中（啟動(dòng)培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 1.2mg/L +萘乙酸（NAA）0.15mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH 值為6.0-6.3）誘導(dǎo)不定芽的萌發(fā)，培養(yǎng)條件為溫度 25℃ ,光照強(qiáng)度為2500lx，光照時(shí)間16h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)，新芽萌發(fā)之后，將其轉(zhuǎn)接到分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.5mg/L +維生素C 1.6mg/L+谷氨酸2.0mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH 值為6.0；在光照強(qiáng)度為2000lx，光照時(shí)間16h/d，溫度為27℃的條件下，培養(yǎng)40天；
（3）繼代培養(yǎng)：將植株莖段轉(zhuǎn)接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)中，繼代培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.5mg/L +維生素C 0.7mg/L+維生素B2 1.8mg/L+谷氨酸1.8mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂8g/L, 培養(yǎng)基pH 值為6.1；在培養(yǎng)溫度為25-26℃，光強(qiáng) 2000lx，光照時(shí)間為15h/d的條件下培養(yǎng)34d；
（4）生根培養(yǎng)：在無菌條件下，剪取長(zhǎng)2-2.5cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.05mg/L+ IAA0.15 mg/L+IBA 0.7mg/L+5%糖蜜+瓊脂8g/L, pH=6.0-6.2；培養(yǎng)溫度 26～28℃，光強(qiáng)18001x，光照時(shí)間16h/d；
（5）煉苗：當(dāng)經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長(zhǎng)1.0～2.0 cm時(shí)，將組培苗進(jìn)行室內(nèi)煉苗，煉苗溫度為：27-28℃，光照強(qiáng)度為4000lx，室內(nèi)瓶煉6天后，敞口煉苗5天；
（6）移栽：取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質(zhì)量濃度為0.2%KMnO4溶液消毒過的椰糠+蛭石+細(xì)河沙按照2:5:1的比例做基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕度為85％-90%，溫度 25～26℃，避免陽(yáng)光直射， 35天后，移出溫室進(jìn)行全光照煉苗5d，及時(shí)澆水，然后移栽大田。
實(shí)施例2
一種金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，包括以下步驟：
(1)外植體的建立：于3月初，剪取17cm長(zhǎng)、當(dāng)年生優(yōu)質(zhì)粗壯的根蘗條，用自來水沖洗10分鐘后，于質(zhì)量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡12分鐘，再用自來水沖洗干凈，然后將洗凈后的根蘗條置于培養(yǎng)室中水培培養(yǎng)，每24小時(shí)換一
次水，培養(yǎng)溫度為27-28℃，光照時(shí)間18h/d，光照強(qiáng)度3000lx，培養(yǎng)至長(zhǎng)出2～3cm的水培芽后，取出根蘗條，用75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗4次，瀝干水分，放到質(zhì)量濃度為0.1%HgCL2溶液中浸泡消毒7分鐘，然后用無菌水沖洗8次，用鑷子夾取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取水培芽作為外植體；
（2）啟動(dòng)培養(yǎng)：將水培芽轉(zhuǎn)入經(jīng)高溫滅菌的啟動(dòng)培養(yǎng)基中（啟動(dòng)培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 1.2mg/L +萘乙酸（NAA）0.20mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH 值為6.0-6.3）誘導(dǎo)不定芽的萌發(fā)，培養(yǎng)條件為溫度25～28℃ ,光照強(qiáng)度為2300lx，光照時(shí)間16h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)，新芽萌發(fā)之后，將其轉(zhuǎn)接到分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.5mg/L +維生素C 1.7mg/L+谷氨酸1.8mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH 值為6.0；在光照強(qiáng)度為2100lx，光照時(shí)間15h/d，溫度為27℃的條件下，培養(yǎng)43天；
（3）繼代培養(yǎng)：將植株莖段轉(zhuǎn)接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)中，繼代培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.6mg/L +維生素C 0.8mg/L+維生素B2 1.7mg/L+谷氨酸1.9mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂8g/L, 培養(yǎng)基pH 值為6.1；在培養(yǎng)溫度為25-26℃，光強(qiáng) 23O0lx，光照時(shí)間為15h/d的條件下培養(yǎng)33d；
（4）生根培養(yǎng)：在無菌條件下，剪取長(zhǎng)2-2.5cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.05mg/L+ IAA0.15 mg/L+IBA 0.8mg/L+5%糖蜜+瓊脂8g/L, pH=6.0-6.2；培養(yǎng)溫度 27℃，光強(qiáng)19001x，光照時(shí)間15h/d；
（5）煉苗：當(dāng)經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長(zhǎng)1.0～2.0cm時(shí)，將組培苗進(jìn)行室內(nèi)煉苗，煉苗溫度為：27-28℃，光照強(qiáng)度為5000lx，室內(nèi)瓶煉5天后，敞口煉苗6天；
（6）移栽：取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質(zhì)量濃度為0.2%KMnO4溶液消毒過的椰糠+蛭石+細(xì)河沙按照3:5:1的比例做基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕度為85％-90%，溫度 25～26℃，避免陽(yáng)光直射， 37天后，移出溫室進(jìn)行全光照煉苗6d，及時(shí)澆水，然后移栽大田。
實(shí)施例3
一種金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，包括以下步驟：
(1)外植體的建立：于3月初，剪取18cm長(zhǎng)、當(dāng)年生優(yōu)質(zhì)粗壯的根蘗條，用自來水沖洗10分鐘后，于質(zhì)量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡13分鐘，再用自來水沖洗干凈，然后將洗凈后的根蘗條置于培養(yǎng)室中水培培養(yǎng)，每26小時(shí)換一
次水，培養(yǎng)溫度為27-28℃，光照時(shí)間19h/d，光照強(qiáng)度2000lx，培養(yǎng)至長(zhǎng)出2～3cm的水培芽后，取出根蘗條，用質(zhì)量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗4次，瀝干水分，放到質(zhì)量濃度為0.1%HgCL2溶液中浸泡消毒7分鐘，然后用無菌水沖洗7次，用鑷子夾取清洗好的莖段，放置在滅菌的接種碟上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取水培芽作為外植體；
（2）啟動(dòng)培養(yǎng)：將水培芽轉(zhuǎn)入經(jīng)高溫滅菌的啟動(dòng)培養(yǎng)基中（啟動(dòng)培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 1.2mg/L +萘乙酸（NAA）0.25mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂6g/L，培養(yǎng)基pH 值為6.0-6.3）誘導(dǎo)不定芽的萌發(fā)，培養(yǎng)條件為溫度 25～28℃ ,光照強(qiáng)度為2500lx，光照時(shí)間16h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)，新芽萌發(fā)之后，將其轉(zhuǎn)接到分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.5mg/L +維生素C 1.8mg/L+谷氨酸1.7mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH 值為6.0；在光照強(qiáng)度為2200lx，光照時(shí)間14h/d，溫度為27℃的條件下，培養(yǎng)45天；
（3）繼代培養(yǎng)：將植株莖段轉(zhuǎn)接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)中，繼代培養(yǎng)基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.2mg/L+萘乙酸（NAA）0.5mg/L +維生素C 0.9mg/L+維生素B2 1.5mg/L+谷氨酸2.0mg/L +3.5%糖蜜+瓊脂8g/L, 培養(yǎng)基pH 值為6.1；在培養(yǎng)溫度為25-26℃，光強(qiáng)25O0lx，光照時(shí)間為15h/d的條件下培養(yǎng)32d；
（4）生根培養(yǎng)：在無菌條件下，剪取長(zhǎng)2-2.5cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)；生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.05mg/L+ IAA0.15 mg/L+IBA1.0 mg/L+5%糖蜜+瓊脂8g/L, pH=6.0-6.2；培養(yǎng)溫度 26～28℃，光強(qiáng)20001x，光照時(shí)間14h/d；
（5）煉苗：當(dāng)經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長(zhǎng)1.0～2.0 cm時(shí)，將組培苗進(jìn)行室內(nèi)煉苗，煉苗溫度為：27-28℃，光照強(qiáng)度為6000lx，室內(nèi)瓶煉4天后，敞口煉苗7天；
（6）移栽：取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質(zhì)量濃度為0.2%KMnO4溶液消毒過的椰糠+蛭石+細(xì)河沙按照3:5:1的比例做基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕度為85％-90%，溫度 25～26℃，避免陽(yáng)光直射，38天后，移出溫室進(jìn)行全光照煉苗6d，及時(shí)澆水，然后移栽大田。
以下為本發(fā)明金絲4號(hào)棗的組培快繁方法得到的金絲4號(hào)棗組培苗的繁育結(jié)果：
種植地點(diǎn)：廣西來賓市象州縣（象州縣位于廣西北部，氣候冬天最低零下2度，夏天32度，丘陵山坡較多，適宜棗樹生長(zhǎng)）。
由上表可以看出，本發(fā)明金絲4號(hào)棗的組培快繁方法，繁殖系數(shù)高，生根率達(dá)88%以上，營(yíng)養(yǎng)杯移栽成活率在86%以上，大田移栽成活率在89%以上，組培苗移栽后能迅速適應(yīng)露天環(huán)境，生長(zhǎng)迅速，抗外界不良環(huán)境能力強(qiáng)。采用本發(fā)明的方法對(duì)金絲4號(hào)棗進(jìn)行繁育，能有效、方便的在短時(shí)間內(nèi)獲得大量金絲4號(hào)棗組培苗，而且苗木能夠保持優(yōu)樹的優(yōu)良遺傳性狀，適合大面積區(qū)域種植，帶動(dòng)了當(dāng)?shù)氐墓麡渖a(chǎn)。