本發(fā)明屬于農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥及其制備方法。

背景技術(shù)：

煙草屬草茄木，茄科一年生或有限多年生草本植物，基部稍木質(zhì)化?；ㄐ蝽斏瑘A錐狀，多花；蒴果卵狀或矩圓狀，長約等于宿存萼。夏秋季開花結(jié)果。主要分布于南美洲、南亞、中國。煙草除能制成卷煙、旱煙、斗煙、雪茄煙等供人吸食外，尚有多種醫(yī)療用途。雖然煙草給人類帶了很多危害，甚至被稱為“毒草”，許多國家或地區(qū)明文限制流通或抽吸，世界衛(wèi)生組織成員還簽署了《煙草控制框架公約》。但作為一種歷史悠久的藥用植物，其醫(yī)療價值不能因其危害性而被抹殺?！度珖胁菟巺R編》記載，煙草性溫味甘，有毒，具有消腫、解毒、殺蟲等功效，主要用于疔瘡腫毒，頭癬，白癬，禿瘡，毒蛇咬傷等癥，還可治療項疽、背癰、風痰、鶴膝（包括骨結(jié)核、慢性化膿性膝關(guān)節(jié)炎等）等病。

煙草在種植期間易受多種病蟲害的危害，而且病蟲害的發(fā)生種類多、分布廣、傳播快及危害損失嚴重。我國煙草病害約有60余種，其中發(fā)生普遍或較重的有10多種。這些病蟲害給煙草生產(chǎn)造成了很大的經(jīng)濟損失。因此，防治煙草病蟲害是保證煙草優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的重要措施。

目前，用于煙草的化學殺蟲劑最主要的有三種，包括擬除蟲菊酯、有機磷殺蟲劑和氨基甲酸酯殺蟲劑，這些化學殺蟲劑的應用，保證了農(nóng)林畜產(chǎn)品的大幅度增產(chǎn)，但也給人類生存的環(huán)境、生態(tài)平衡和人類自身的健康帶來不利，如土壤、水體、大氣的污染和農(nóng)林畜產(chǎn)品的殘毒，每年造成大量的人畜中毒和死亡，化學殺蟲劑在殺滅害蟲的同時也傷害了害蟲的天敵，破壞生態(tài)平衡，使一些害蟲激增和猖撅，難以防治而形成惡性循環(huán)，反復使用化學殺蟲劑，使害蟲迅速產(chǎn)生抗藥性，使藥效下降或失效。同時化學殺蟲劑的更新?lián)Q代，研制代價越來越高，風險很大。尤其是對環(huán)境保護的嚴格要求和毒性研究的深入，對新的化學殺蟲劑的限制和要求越來越嚴。在這種形勢下，迫使人們?nèi)ふ曳老x的新途徑，殺蟲劑的研究和開發(fā)沿著高效、低毒、害蟲不易產(chǎn)生抗藥性，保護害蟲天敵無公害方向發(fā)展。

天然產(chǎn)物源于自然經(jīng)過無數(shù)年的優(yōu)化組合，可能更適應農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的要求，人們轉(zhuǎn)而從自然界尋找新的生物源殺蟲劑。生物源殺蟲劑按來源可分為微生物的代謝產(chǎn)物及其衍生物抗病菌農(nóng)藥和植物次級代謝產(chǎn)物殺蟲劑等。申請?zhí)枮?7104754的專利公開了一種煙草植保殺蟲劑，它由下列組分組成（含量為有效量百分比）：昆明山海棠堿50~60%，魚藤酮8~15%，百部堿8~15%，苦參堿8~15%，澤漆皂甙4~8%，馬錢堿4~8%，金葉子素4~8%，植物氰氫酸4~8%。該發(fā)明對作物真菌病，細菌病害有抑制作用，并能刺激作物生長，增強抗逆境能力，對煙草、小麥、油菜、水果、蔬菜等農(nóng)作物常見害蟲，如蚜蟲、紅蜘蛛、菜青蟲、小地老虎等有觸殺、胃毒作用。申請?zhí)枮?01610169191的專利公開了一種高效煙草生物藥肥，其配比方案如下：10%~30%地衣芽孢桿菌；20%~40%黃腐酸鹽；10%~30%枯草芽孢桿菌；10%~20%DA-6。該發(fā)明生物藥肥在提高煙草作物對有機肥的吸收利用的同時，做到安全的殺蟲殺菌，滿足了煙草農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和發(fā)展的需要。上述技術(shù)不同程度地采用了低毒、環(huán)保的生物源殺蟲劑，表明生物源殺蟲劑可以防治煙草的不同病蟲害，但防治效果穩(wěn)定性及殺蟲效果還有待進一步提高。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種專用于煙草的復合農(nóng)藥，抗菌效果穩(wěn)定、藥效強且對環(huán)境無污染。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：木醋液0.5~3份、甲殼素2~6份、大蒜素0.5~5份和中藥組合物10~30份，所述中藥組合物由下述重量份的原料制成：娑羅子10~30份、艾蒿10~30份、檳榔5~20份、水芹菜5~20份、桔梗5~20份、香樟5~15份、藍實3~12份、連翹3~12份、夾竹桃3~12份。

優(yōu)選地，所述中藥組合物由下述重量份的原料制成：娑羅子20~25份、艾蒿15~20份、檳榔8~12份、水芹菜8~12份、桔梗8~12份、香樟8~12份、藍實9份、連翹9份、夾竹桃9份。

優(yōu)選地，所述中藥組合物由下述重量份的原料制成：娑羅子23份、艾蒿18份、檳榔10份、水芹菜10份、桔梗10份、香樟10份、藍實9份、連翹9份、夾竹桃9份。

優(yōu)選地，所述煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：木醋液1~2份、甲殼素3~4份、大蒜素1~3份和中藥組合物20~25份。

一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥的制備方法，包括以下步驟：

1）分別稱取重量份的木醋液0.5~3份、甲殼素2~6份和大蒜素0.5~5份，然后在溫度30~40℃，轉(zhuǎn)速2000~2500rpm的條件下進行混合攪拌10~15分鐘，靜置15~20分鐘，得到混合物；

2）稱取重量份的中藥組合物10~30份加入所述混合物中，轉(zhuǎn)速3000~3200rpm攪拌30~40分鐘，靜置，即得。

優(yōu)選地，所述中藥組合物通過下述制備方法獲得，所述制備方法包括以下步驟：

1）分別稱取干燥的上述重量份配比的娑羅子、艾蒿、檳榔、桔梗、藍實、連翹和夾竹桃，混合，冷凍后在氮氣保護下進行粉碎，獲得粉碎物料Ⅰ；分別稱取干燥的上述重量份配比的水芹菜和香樟，混合，粉碎，獲得粉碎物料Ⅱ；

2）在所述粉碎物料Ⅰ中加入其重量4~6倍的水，加熱至40~50℃，保持40~50分鐘，趁熱過濾，得到濾液Ⅰ和藥渣Ⅰ，將濾液冷卻，密封保存；在所述藥渣Ⅰ加入其重量2~3倍的水，加熱至50~60℃，保持30~40分鐘，趁熱過濾，得到濾液Ⅱ和藥渣Ⅱ；將所述濾液Ⅰ和濾液Ⅱ合并得到濾液，將所述濾液濃縮至75℃時相對密度為1.12~1.15的浸膏，在所述浸膏中加入乙醇溶液，溫度25~30℃，保持18~24小時，然后過濾，得到濾液Ⅲ和沉淀物，將所述濾液Ⅲ減壓濃縮至55℃時相對密度為1.20~1.25的膏體；

3）在所述粉碎物料Ⅱ中加入其重量3~5倍重量的水，加入蒸餾燒瓶中，進行蒸餾，控制蒸餾速度為每秒回流滴出溶液2~3滴，蒸餾時間為35~40分鐘，蒸餾提取2~3次，將提取液合并用二氯甲烷進行萃取，去下層溶液，真空旋蒸儀蒸出二氯甲烷，即得萃取物；

4）將所述膏體和萃取物分別干燥，粉碎，合并，即得。

優(yōu)選地，所述乙醇溶液的體積分數(shù)為75~80%。

優(yōu)選地，所述浸膏與所述乙醇的重量體積比1g：10~20ml。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果如下：

1）本發(fā)明提供了一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥，申請人對煙草種植深有研究，在遵循煙草生長規(guī)律的基礎(chǔ)之上對多種天然組分進行混配和研究，發(fā)現(xiàn)木醋液、甲殼素、大蒜素及中藥組合物經(jīng)過適量混合能起到協(xié)同增效的作用，使得得到的復合農(nóng)藥抗菌能力顯著增強，擴大防治范圍，減輕抗藥性，降低藥害發(fā)生率，既高效又省工省時。

2）本發(fā)明復合農(nóng)藥可用于防治煙草生長周期出現(xiàn)的多種病蟲害，主要包括煙草花葉病、煙草野火病、煙草炭疽病和煙草蛙眼病，田間試驗發(fā)現(xiàn)煙草花葉病的發(fā)病率下降了52.1%，抗病率為92.7~99.5%；煙草野火病的發(fā)病率下降了71.6%，抗病率為93.5~99.2%；煙草炭疽病的發(fā)病率下降了76.2%，抗病率為96.4~100%；煙草蛙眼病的發(fā)病率下降了61.8%，抗病率為95.1~100%。因此，應用本發(fā)明復合農(nóng)藥可以顯著提高煙草的抗病殺蟲能力，兼治效果突出，藥效穩(wěn)定，具有廣泛的應用價值。

3）本發(fā)明所用原料均為低毒、環(huán)保原料。研究表明，木醋液具有抑菌活性，優(yōu)選玉米芯木醋液；甲殼素是一種線型的高分子多糖，具有抗菌活性，優(yōu)選分子量為1500~3000的甲殼素，復配后的抗菌能力更強；大蒜素為三硫代烯丙醚類化合物，天然存在于百合科植物大蒜的鱗莖中；中藥組合物由多種原料藥混合復配而成，無毒，不僅能夠抗菌，而且施用于煙草具有促進增長，提高煙葉質(zhì)量等效果。上述原料通過合理復配之后，相互補益，對煙草整個生長周期發(fā)生的病蟲害具有明顯的防治效果，吸收效果好，對非靶標對象沒有任何傷害。

具體實施方式

為了更好地理解本發(fā)明，下面結(jié)合實施例進一步清楚闡述本發(fā)明的內(nèi)容，但本發(fā)明的保護內(nèi)容不僅僅局限于下面的實施例。在下文的描述中，給出了大量具體的細節(jié)以便提供對本發(fā)明更為徹底的理解。然而，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的是，本發(fā)明可以無需一個或多個這些細節(jié)而得以實施。

實施例1：一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：木醋液1.5份、甲殼素3.5份、大蒜素2份和中藥組合物25份，所述中藥組合物由下述重量份的原料制成：娑羅子23份、艾蒿18份、檳榔10份、水芹菜10份、桔梗10份、香樟10份、藍實9份、連翹9份、夾竹桃9份。

本發(fā)明中，娑羅子為天師栗的干燥成熟種子，表面棕色或棕褐色，多皺縮，凹凸不平，略具光澤。艾蒿，為多年生草本或略成半灌木狀植物，植株有濃烈香氣，現(xiàn)代實驗研究證明，艾葉具有抗菌及抗病毒作用；平喘、鎮(zhèn)咳及祛痰作用；止血及抗凝血作用；鎮(zhèn)靜及抗過敏作用；護肝利膽作用等。檳榔，檳榔為棕櫚科植物檳榔的種子，檳榔有驅(qū)蟲、消積、下氣、行水、截瘧的功效。水芹菜，為傘形科植物少花水芹的全草。桔梗，為桔?？浦参锝酃５母稍锔?。香樟，為樟科植物黃樟的根或莖，樹干和樹根含揮發(fā)油2~4%，油中主要成分為黃樟醚，含量達60~95%，其次為β-蒎烯、水芹烯、丁香油酚和桂皮醛等。藍實，藍實為蓼科植物蓼藍的果實。連翹，又名黃花條、連殼、青翹、落翹、黃奇丹等，含木脂體類化合物、黃酮類化合物、苯乙烯類衍生物等，有抗菌、強心、利尿、鎮(zhèn)吐等藥理作用。夾竹桃，為夾竹桃科植物夾竹桃的葉或樹皮，以葉入藥。

本實施例煙草專用抗病菌農(nóng)藥的制備方法，包括以下步驟：

1）分別稱取上述重量份的木醋液、甲殼素和大蒜素，然后在溫度35℃，轉(zhuǎn)速2500rpm的條件下進行混合攪拌15分鐘，靜置20分鐘，得到混合物；

2）稱取上述重量份的中藥組合物加入所述混合物中，轉(zhuǎn)速3000rpm攪拌35分鐘，靜置，即得。

本實施例所述中藥組合物通過下述制備方法獲得：

1）分別稱取干燥的上述娑羅子、艾蒿、檳榔、桔梗、藍實、連翹和夾竹桃，混合，冷凍后在氮氣保護下進行粉碎，獲得粉碎物料Ⅰ；分別稱取干燥的上述水芹菜和香樟，混合，粉碎，獲得粉碎物料Ⅱ；

2）在所述粉碎物料Ⅰ中加入其重量5倍的水，加熱至50℃，保持45分鐘，趁熱過濾，得到濾液Ⅰ和藥渣Ⅰ，將濾液冷卻，密封保存；在所述藥渣Ⅰ加入其重量2倍的水，加熱至55℃，保持35分鐘，趁熱過濾，得到濾液Ⅱ和藥渣Ⅱ；將所述濾液Ⅰ和濾液Ⅱ合并得到濾液，將所述濾液濃縮至75℃時相對密度為1.13的浸膏，在所述浸膏中加入體積分數(shù)為75%的乙醇溶液，溫度28℃，保持24小時，然后過濾，得到濾液Ⅲ和沉淀物，將所述濾液Ⅲ減壓濃縮至55℃時相對密度為1.23的膏體；

3）在所述粉碎物料Ⅱ中加入其重量4倍重量的水，加入蒸餾燒瓶中，進行蒸餾，控制蒸餾速度為每秒回流滴出溶液2~3滴，蒸餾時間為38分鐘，蒸餾提取2次，將提取液合并用二氯甲烷進行萃取，去下層溶液，真空旋蒸儀蒸出二氯甲烷，即得萃取物；

4）將所述膏體和萃取物分別干燥，粉碎，合并，即得。

所述浸膏與所述乙醇的重量體積比為1g：16ml。

所述煙草專用抗病菌農(nóng)藥的使用方法是：加入所述抗病菌農(nóng)藥重量200倍以上的水，充分攪拌混合，制成噴灑藥劑；隔15~20天噴灑一次，防治2~3次。

實施例2：一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：木醋液1份、甲殼素4份、大蒜素1份和中藥組合物20份，所述中藥組合物由下述重量份的原料制成：娑羅子25份、艾蒿15份、檳榔12份、水芹菜8份、桔梗12份、香樟12份、藍實9份、連翹9份、夾竹桃9份。

本實施例煙草專用抗病菌農(nóng)藥的制備方法，包括以下步驟：

1）分別稱取上述重量份的木醋液、甲殼素和大蒜素，然后在溫度30℃，轉(zhuǎn)速2000rpm的條件下進行混合攪拌15分鐘，靜置15分鐘，得到混合物；

2）稱取上述重量份的中藥組合物加入所述混合物中，轉(zhuǎn)速3200rpm攪拌30分鐘，靜置，即得。

本實施例所述中藥組合物通過下述制備方法獲得：

1）分別稱取干燥的上述重量份配比的娑羅子、艾蒿、檳榔、桔梗、藍實、連翹和夾竹桃，混合，冷凍后在氮氣保護下進行粉碎，獲得粉碎物料Ⅰ；分別稱取干燥的上述重量份配比的水芹菜和香樟，混合，粉碎，獲得粉碎物料Ⅱ；

2）在所述粉碎物料Ⅰ中加入其重量4倍的水，加熱至40℃，保持45分鐘，趁熱過濾，得到濾液Ⅰ和藥渣Ⅰ，將濾液冷卻，密封保存；在所述藥渣Ⅰ加入其重量2倍的水，加熱至50℃，保持38分鐘，趁熱過濾，得到濾液Ⅱ和藥渣Ⅱ；將所述濾液Ⅰ和濾液Ⅱ合并得到濾液，將所述濾液濃縮至75℃時相對密度為1.15的浸膏，在所述浸膏中加入體積分數(shù)為80%的乙醇溶液，溫度25℃，保持24小時，然后過濾，得到濾液Ⅲ和沉淀物，將所述濾液Ⅲ減壓濃縮至55℃時相對密度為1.25的膏體；

3）在所述粉碎物料Ⅱ中加入其重量3倍重量的水，加入蒸餾燒瓶中，進行蒸餾，控制蒸餾速度為每秒回流滴出溶液2~3滴，蒸餾時間為35分鐘，蒸餾提取2次，將提取液合并用二氯甲烷進行萃取，去下層溶液，真空旋蒸儀蒸出二氯甲烷，即得萃取物；

4）將所述膏體和萃取物分別干燥，粉碎，合并，即得。

所述浸膏與所述乙醇的重量體積比為1g：12ml。

所述煙草專用抗病菌農(nóng)藥的使用方法同實施例1，不再贅述。

實施例3：一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：木醋液2份、甲殼素3份、大蒜素3份和中藥組合物23份，所述中藥組合物由下述重量份的原料制成：娑羅子20份、艾蒿20份、檳榔8份、水芹菜12份、桔梗8份、香樟8份、藍實9份、連翹9份、夾竹桃9份。

本實施例煙草專用抗病菌農(nóng)藥的制備方法，包括以下步驟：

1）分別稱取上述重量份的木醋液、甲殼素和大蒜素，然后在溫度30~40℃，轉(zhuǎn)速2200rpm的條件下進行混合攪拌10分鐘，靜置20分鐘，得到混合物；

2）稱取上述重量份的中藥組合物加入所述混合物中，轉(zhuǎn)速3000rpm攪拌40分鐘，靜置，即得。

本實施例所述中藥組合物通過下述制備方法獲得：

1）分別稱取干燥的上述重量份配比的娑羅子、艾蒿、檳榔、桔梗、藍實、連翹和夾竹桃，混合，冷凍后在氮氣保護下進行粉碎，獲得粉碎物料Ⅰ；分別稱取干燥的上述重量份配比的水芹菜和香樟，混合，粉碎，獲得粉碎物料Ⅱ；

2）在所述粉碎物料Ⅰ中加入其重量6倍的水，加熱至50℃，保持45分鐘，趁熱過濾，得到濾液Ⅰ和藥渣Ⅰ，將濾液冷卻，密封保存；在所述藥渣Ⅰ加入其重量3倍的水，加熱至60℃，保持40分鐘，趁熱過濾，得到濾液Ⅱ和藥渣Ⅱ；將所述濾液Ⅰ和濾液Ⅱ合并得到濾液，將所述濾液濃縮至75℃時相對密度為1.12的浸膏，在所述浸膏中加入體積分數(shù)為75%的乙醇溶液，溫度30℃，保持20小時，然后過濾，得到濾液Ⅲ和沉淀物，將所述濾液Ⅲ減壓濃縮至55℃時相對密度為1.21的膏體；

3）在所述粉碎物料Ⅱ中加入其重量5倍重量的水，加入蒸餾燒瓶中，進行蒸餾，控制蒸餾速度為每秒回流滴出溶液2~3滴，蒸餾時間為40分鐘，蒸餾提取3次，將提取液合并用二氯甲烷進行萃取，去下層溶液，真空旋蒸儀蒸出二氯甲烷，即得萃取物；

4）將所述膏體和萃取物分別干燥，粉碎，合并，即得。

所述浸膏與所述乙醇的重量體積比為1g：18ml。

所述煙草專用抗病菌農(nóng)藥的使用方法同實施例1，不再贅述。

實施例4：一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：木醋液0.5份、甲殼素6份、大蒜素0.5份和中藥組合物10份，所述中藥組合物由下述重量份的原料制成：娑羅子10份、艾蒿30份、檳榔5份、水芹菜5份、桔梗5份、香樟15份、藍實12份、連翹12份、夾竹桃3份。

本實施例中抗病菌農(nóng)藥的制備方法和使用方法，中藥組合物的制備方法參閱實施例1，不再贅述。

實施例5：一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：木醋液3份、甲殼素2份、大蒜素5份和中藥組合物30份，所述中藥組合物由下述重量份的原料制成：娑羅子30份、艾蒿10份、檳榔20份、水芹菜20份、桔梗20份、香樟5份、藍實3份、連翹3份、夾竹桃12份。

本實施例中抗病菌農(nóng)藥的制備方法和使用方法，中藥組合物的制備方法參閱實施例1，不再贅述。

實施例6：一種煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：木醋液0.8份、甲殼素5份、大蒜素4份和中藥組合物15份，所述中藥組合物由下述重量份的原料制成：娑羅子15份、艾蒿25份、檳榔15份、水芹菜15份、桔梗15份、香樟6份、藍實6份、連翹6份、夾竹桃10份。

本實施例中抗病菌農(nóng)藥的制備方法和使用方法，中藥組合物的制備方法參閱實施例1，不再贅述。

實施例7：本實施例所描述的煙草專用抗病菌農(nóng)藥，與實施例1不同的是：

所述煙草專用抗病菌農(nóng)藥，還包括：微生物菌劑1.5重量份，所述微生物菌劑由質(zhì)量分數(shù)35%枯草芽孢桿菌和質(zhì)量分數(shù)65%細黃鏈霉菌組成。

枯草芽孢桿菌，Bacillus subtilis，有效活菌數(shù)≥1000億cfu/g；細黃鏈霉菌，Streptomyces microflavus，有效活菌數(shù)≥1.5億/g。

本實施例煙草專用抗病菌農(nóng)藥與實施例1不同的是：步驟2）分別稱取中藥組合物和微生物菌劑加入所述混合物中，轉(zhuǎn)速3000rpm攪拌40分鐘，靜置，即得。

實施例8：本實施例所描述的煙草專用抗病菌農(nóng)藥，與實施例1所不同的是：

所述煙草專用抗病菌農(nóng)藥，還包括：微生物菌劑2.0重量份，所述微生物菌劑由質(zhì)量分數(shù)45%枯草芽孢桿菌和質(zhì)量分數(shù)55%細黃鏈霉菌組成。

本實施例煙草專用抗病菌農(nóng)藥與實施例1不同的是：步驟2）分別稱取中藥組合物和微生物菌劑加入所述混合物中，轉(zhuǎn)速3000rpm攪拌35分鐘，靜置，即得。

對比例1：煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：木醋液1.5份、甲殼素3.5份、大蒜素2份。

對比例2：煙草專用抗病菌農(nóng)藥，由如下重量份的原料制備而成：娑羅子23份、艾蒿18份、檳榔10份、水芹菜10份、桔梗10份、香樟10份、藍實9份、連翹9份、夾竹桃9份。

效果評價

抗菌試驗

1.1供試藥劑

實驗組：ⅠA：本發(fā)明實施例1制備的抗病菌農(nóng)藥；

ⅠB：本發(fā)明實施例7制備的抗病菌農(nóng)藥；

對照組：ⅡA：對比例1制備的抗病菌農(nóng)藥；

ⅡB：對比例2制備的抗病菌農(nóng)藥。

1.2抑制活性試驗

1）測定方法1

供試病菌：煙草花葉病毒（Tobacco mosaic virus）。

供試植物：枯斑寄主心葉煙。育苗時將心葉煙種子先用溫湯浸種30min。然后將種子直接播于育苗盆內(nèi)，將其放入光照培養(yǎng)箱，溫度22℃，光照16h/d，濕度60%，進行培養(yǎng)，當煙草長到5~6片真葉時供試。

接種：采用汁液摩擦法接種；

選用5~6葉期心葉煙作為供試病菌的枯斑寄主；

試驗在防蟲溫室內(nèi)進行。取供試藥劑，用蒸餾水配置成0.05g/ml水溶液，加入供試病菌，使病毒終濃度為10μg/ml?；旌?0min，在枯斑寄主心葉煙采用半葉法摩擦接種左（右）半葉上，另以含TMV病毒的蒸餾水（病毒終濃度為10μg/ml）為對照，每處理接種5片葉，試驗重復3次。3天后待出現(xiàn)明顯枯斑后，及時記錄枯斑數(shù)目，計算抑制率（%），以平均抑制率進行評價抑制效果；

抑制率=（對照枯斑數(shù)-處理枯斑數(shù)）/對照枯斑數(shù)×100。

2）測定方法2

供試病菌：炭疽菌（Colletotrichum destructivum O'Gara）、煙草尾孢菌（Cercospora nicotianae Ell. et Ev.）、野火病菌（Pseudomonas tabaci (Wolf et Foster) Stevens）。

供試藥劑對病原菌分生孢子萌發(fā)抑制作用采用懸滴法，計數(shù)前添加0.1%升汞抑制其萌芽，不同視野計數(shù)100個孢子以上，極性小不易溶于水的粗提物用微量二甲基亞砜溶解后用水稀釋成所需濃度進行測試，對照組水溶液中也加入同量二甲基亞砜。

病原菌菌絲生長的抑制作用采用生長速率法。無菌條件下，用孔徑為0.8cm的打孔器取菌落邊緣生長旺盛的菌種移入含有提取物0.01g/mL的PDA培養(yǎng)平板上(提取物在處理前先經(jīng)過高溫滅菌，再用無菌水調(diào)配濃度，以減少污染。極性小的粗提物先溶解在丙酮中后再與40~50℃瓊脂培養(yǎng)基混合，以利分散均勻)，以培養(yǎng)基內(nèi)加等量無菌水為對照，每處理重復3次，26℃恒溫培養(yǎng)，待對照菌落接近培養(yǎng)皿邊緣時，測定菌落直徑，每個菌落按十字交叉法測量2次，以其平均數(shù)代表菌落的大小，計算抑制率。

抑制率計算公式如下：

孢子萌發(fā)抑制率(%)=(對照孢子萌發(fā)數(shù)-處理孢子萌發(fā)數(shù))/對照孢子萌發(fā)數(shù)×100；

菌絲生長抑制率(%)=(對照純生長量-處理純生長量)/對照菌落直徑×100。

1.3供試藥劑對供試病菌的抑菌活性

表1 供試藥劑對供試病菌的抑制率

從表1可以看出，本發(fā)明實施例1所制備的抗病菌農(nóng)藥對煙草花葉病毒的抑制率為98.7%，均明顯高于對比例1和2，同時高于對比例1和2的抑制率之和，達到了協(xié)同增效的目的。本發(fā)明抗病菌農(nóng)藥對野火病菌、炭疽菌和煙草尾孢菌的孢子萌發(fā)抑制率均在80%以上，其中實施例制備的抗病菌農(nóng)藥對炭疽菌的孢子萌發(fā)抑制率最高，為95.6%，實施例7制備的抗病菌農(nóng)藥對對炭疽菌的孢子萌發(fā)抑制率最高，為96.2%；而對比例1和2對野火病菌、炭疽菌和煙草尾孢菌的孢子萌發(fā)抑制率波動較大，例如：對比例1對炭疽菌的孢子萌發(fā)抑制率為31.6%，對比例2對煙草尾孢菌的孢子萌發(fā)抑制率為47.2%。本發(fā)明抗病菌農(nóng)藥對野火病菌、炭疽菌和煙草尾孢菌的菌絲生長抑制率均在75%以上，其中實施例制備的抗病菌農(nóng)藥對野火病菌的菌絲生長抑制率最高，為97.5%；相比而言，對比例1和2對三種病原菌的菌絲抑制率明顯較弱。

此外，實驗組ⅠA和ⅠB相比而言，實驗組ⅠB的各項效果要優(yōu)于ⅠA，對抑制效果具有增強作用，可以作為更加優(yōu)選的方案。上述實驗表明，本發(fā)明抗病菌農(nóng)藥用于煙葉病菌的防治具有顯著且穩(wěn)定的抑制效果，藥效強，增效明顯。

雖然以上描述了本發(fā)明的具體實施方式，但是熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應當理解，我們所描述的具體的實施例只是說明性的，而不是用于對本發(fā)明的范圍的限定，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在依照本發(fā)明的精神所作的等效的修飾以及變化，都應當涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求所保護的范圍內(nèi)。