本發(fā)明涉及一種復(fù)合益生菌生物消毒劑的制備方法。
背景技術(shù)：
我國畜禽養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展帶來了嚴(yán)重的環(huán)境污染問題，其中病原微生物污染是影響畜禽舍環(huán)境質(zhì)量的重要因素。研究表明，畜禽舍環(huán)境中的微生物含量與疾病發(fā)病率有著顯著的關(guān)系，給畜禽生產(chǎn)和人類健康帶來了嚴(yán)重的威脅。因此，降低畜禽舍環(huán)境中的微生物水平，是控制疾病流行、凈化養(yǎng)殖環(huán)境的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。定期消毒是目前畜禽舍環(huán)境凈化的重要措施，消毒的方式主要有沖洗、浸液、紫外和噴霧等4種方式，常用消毒劑為含氯、有機(jī)碘混合物或酚類等的化學(xué)消毒劑。然而，隨著化學(xué)消毒劑的大量使用，其潛在的化學(xué)毒性、腐蝕性、不穩(wěn)定性以及細(xì)菌耐藥性等問題日益凸顯。
因此，研發(fā)綠色環(huán)保的生物消毒劑改善畜禽舍環(huán)境、控制病原微生物，對于提高畜禽健康水平，促進(jìn)畜牧業(yè)健康發(fā)展顯得尤為重要。益生菌以天然無毒、無副作用、元殘留，可以促進(jìn)機(jī)體微生態(tài)平衡、抑制有害菌生長等優(yōu)勢已經(jīng)成為畜牧業(yè)研究的熱點。
目前，益生菌不僅作為一種新型綠色飼料添加劑在提高畜禽生產(chǎn)性能方面顯示了良好的應(yīng)用效果，而且在發(fā)酵床養(yǎng)殖模式中通過對墊料和畜禽糞便的協(xié)同發(fā)酵，促進(jìn)了養(yǎng)殖環(huán)境凈化與畜禽健康。辛國芹等報道，使用抗菌肽與乳酸菌混合制劑進(jìn)行肉雞場環(huán)境消毒，可顯著提高肉雞生產(chǎn)性能及免疫性能；陳靜等報道，微生態(tài)噴霧劑可以有效降低蛋雞舍NH。和H.S含量；仝永娟報道，規(guī)?；怆u舍噴灑芽孢桿菌復(fù)合制劑可以有效抑制大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的數(shù)量，并對雞只的生長和免疫健康有一定的促進(jìn)作用。然而，利用益生菌對規(guī)?；唸鲞M(jìn)行生物消毒的研究尚鮮見報道。
本研究以項目組前期從河南某規(guī)模肉鴨場分離鑒定獲得的3種益生菌菌株為材料，基于不同益生菌的協(xié)同作用，研制復(fù)合益生菌生物消毒劑，并以常規(guī)化學(xué)消毒劑為對照，對其實際應(yīng)用效果進(jìn)行了考察，以期為利用益生菌進(jìn)行畜禽舍生物消毒提供依據(jù)。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明提出一種復(fù)合益生菌生物消毒劑的制備方法。
一種復(fù)合益生菌生物消毒劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）對枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌3種益生菌菌株分別進(jìn)行活化與種子培養(yǎng)；然后將其種子培養(yǎng)液按體積分?jǐn)?shù)5％的接種量分別接種到相應(yīng)的50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
（2）所述枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)溫度為35℃，初始pH7，轉(zhuǎn)速120r／min，通氣量1.1vvm，24h后每隔2h取樣1次，測定產(chǎn)芽孢率，當(dāng)產(chǎn)芽孢率達(dá)到90％以上時停止發(fā)酵；
（3）乳酸桿菌的培養(yǎng)溫度為32-41℃，初始pH6.5，培養(yǎng)時間28h；
（4）酵母菌的培養(yǎng)溫度為25-30℃，初始pH6.0，轉(zhuǎn)速120r／min，通氣量0.8vvm，培養(yǎng)時間48h；
（5）發(fā)酵結(jié)束后，使用0.2μm微濾膜分別對3種益生菌發(fā)酵液進(jìn)行濃縮，活菌數(shù)不少于1×1011CFU／mL。
優(yōu)選地，所述步驟（2）發(fā)酵溫度穩(wěn)33℃。
優(yōu)選地，所述步驟（4）發(fā)酵溫度穩(wěn)28℃。
本發(fā)明所述方法制備的復(fù)合益生菌生物消毒劑能顯著降低鴨舍內(nèi)NH3含量與活菌數(shù)，而且可以顯著提高肉鴨平均日增質(zhì)量、降低料肉比，對抑制肉鴨盲腸大腸桿菌的生長，促進(jìn)乳酸桿菌的增殖有顯著效果。
具體實施方式
實施例1。
一種復(fù)合益生菌生物消毒劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）對枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌3種益生菌菌株分別進(jìn)行活化與種子培養(yǎng)；然后將其種子培養(yǎng)液按體積分?jǐn)?shù)5％的接種量分別接種到相應(yīng)的50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
（2）所述枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)溫度為35℃，初始pH7，轉(zhuǎn)速120r／min，通氣量1.1vvm，24h后每隔2h取樣1次，測定產(chǎn)芽孢率，當(dāng)產(chǎn)芽孢率達(dá)到90％以上時停止發(fā)酵；
（3）乳酸桿菌的培養(yǎng)溫度為32-41℃，初始pH6.5，培養(yǎng)時間28h；
（4）酵母菌的培養(yǎng)溫度為25-30℃，初始pH6.0，轉(zhuǎn)速120r／min，通氣量0.8vvm，培養(yǎng)時間48h；
（5）發(fā)酵結(jié)束后，使用0.2μm微濾膜分別對3種益生菌發(fā)酵液進(jìn)行濃縮，活菌數(shù)不少于1×1011CFU／mL。
實施例2。
一種復(fù)合益生菌生物消毒劑的制備方法，包括以下步驟：
（1）對枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌3種益生菌菌株分別進(jìn)行活化與種子培養(yǎng)；然后將其種子培養(yǎng)液按體積分?jǐn)?shù)5％的接種量分別接種到相應(yīng)的50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
（2）所述枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)溫度為35℃，初始pH7，轉(zhuǎn)速120r／min，通氣量1.1vvm，24h后每隔2h取樣1次，測定產(chǎn)芽孢率，當(dāng)產(chǎn)芽孢率達(dá)到90％以上時停止發(fā)酵；
（3）乳酸桿菌的培養(yǎng)溫度為32-41℃，初始pH6.5，培養(yǎng)時間28h；
（4）酵母菌的培養(yǎng)溫度為25-30℃，初始pH6.0，轉(zhuǎn)速120r／min，通氣量0.8vvm，培養(yǎng)時間48h；
（5）發(fā)酵結(jié)束后，使用0.2μm微濾膜分別對3種益生菌發(fā)酵液進(jìn)行濃縮，活菌數(shù)不少于1×1011CFU／mL；
（6）所述步驟（2）發(fā)酵溫度穩(wěn)33℃。
實施例3。
一種復(fù)合益生菌生物消毒劑的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）對枯草芽孢桿菌、乳酸桿菌、酵母菌3種益生菌菌株分別進(jìn)行活化與種子培養(yǎng)；然后將其種子培養(yǎng)液按體積分?jǐn)?shù)5％的接種量分別接種到相應(yīng)的50L發(fā)酵罐中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
（2）所述枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)溫度為35℃，初始pH7，轉(zhuǎn)速120r／min，通氣量1.1vvm，24h后每隔2h取樣1次，測定產(chǎn)芽孢率，當(dāng)產(chǎn)芽孢率達(dá)到90％以上時停止發(fā)酵；
（3）乳酸桿菌的培養(yǎng)溫度為32-41℃，初始pH6.5，培養(yǎng)時間28h；
（4）酵母菌的培養(yǎng)溫度為25-30℃，初始pH6.0，轉(zhuǎn)速120r／min，通氣量0.8vvm，培養(yǎng)時間48h；
（5）發(fā)酵結(jié)束后，使用0.2μm微濾膜分別對3種益生菌發(fā)酵液進(jìn)行濃縮，活菌數(shù)不少于1×1011CFU／mL；
（6）所述步驟（4）發(fā)酵溫度穩(wěn)28℃。