本發(fā)明涉及植物培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，涉及一種加速誘導(dǎo)綠蘿生芽的方法。

背景技術(shù)：

綠蘿(學(xué)名：epipremnumaureum)，屬于麒麟葉屬植物，大型常綠藤本，生長于熱帶地區(qū)，常攀援生長在雨林的巖石和樹干上，其纏繞性強(qiáng)，氣根發(fā)達(dá)，可以水培種植。成熟枝上葉柄粗壯，長30-40厘米，基部稍擴(kuò)大，上部關(guān)節(jié)長2.5-3厘米、稍肥厚，腹面具寬槽，葉鞘長，葉片薄革質(zhì)，翠綠色，通常(特別是葉面)有多數(shù)不規(guī)則的純黃色斑塊，全緣，不等側(cè)的卵形或卵狀長圓形，先端短漸尖，基部深心形，稍粗，兩面略隆起。

綠蘿原產(chǎn)地在印度尼西亞所羅門群島的熱帶雨林中，性喜溫暖、潮濕環(huán)境，要求土壤疏松肥沃、排水良好。在熱帶地區(qū)常攀援生長于巖石和樹干上，成為巨大的觀賞藤本植物，我國南方各地均有栽植。綠蘿耐陰性強(qiáng)，終年常綠，葉面有較厚的角質(zhì)層，能適應(yīng)室內(nèi)干燥的環(huán)境條件，是優(yōu)良的室內(nèi)觀葉植物。此外，還能吸附和去除室內(nèi)空氣中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物，是天然的“空氣凈化器”，具有較大的市場前景。

綠蘿的繁殖目前是通過扦插進(jìn)行繁殖，由于綠蘿生長環(huán)境高溫高濕，扦插繁殖的后代極易感病菌，生產(chǎn)中經(jīng)常出現(xiàn)大規(guī)模莖腐、根腐現(xiàn)象，給綠蘿的培育造成一定的經(jīng)濟(jì)損失。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于克服綠蘿的繁殖目前是通過扦插進(jìn)行繁殖，由于綠蘿生長環(huán)境高溫高濕，扦插繁殖的后代極易感病菌，生產(chǎn)中經(jīng)常出現(xiàn)大規(guī)模莖腐、根腐現(xiàn)象，給綠蘿的培育造成一定的經(jīng)濟(jì)損失的缺陷。

為解決上述問題，本發(fā)明提供一種加速誘導(dǎo)綠蘿生芽的方法，包括以下步驟：

選取母株，經(jīng)預(yù)處理后取綠蘿莖段外植體；

將所述綠蘿莖段外植體進(jìn)行藥物浸泡后，并接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，得愈傷組織；

將所述愈傷組織轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得第二代愈傷組織；

將所述第二代愈傷組織接種至芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得綠蘿叢生芽；

所述繼代培養(yǎng)基包括如下組分：改良ms培養(yǎng)基2號、6-芐氨基腺嘌呤、吲哚-3-乙酸、蔗糖和瓊脂粉；

所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組分：6-芐氨基腺嘌呤、吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖和瓊脂粉。

優(yōu)選地，所述選取母株，經(jīng)預(yù)處理后取綠蘿莖段外植體，包括：

選取母株運(yùn)用多菌靈灌根；

取所述母株生長點(diǎn)處莖段；

將所述莖段消毒，得綠蘿莖段外植體。

優(yōu)選地，所述選取母株運(yùn)用多菌靈灌根，包括：

選取母株使用80％多菌靈1000倍溶液進(jìn)行灌根30天，每10天1次。

優(yōu)選地，

所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號和愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號；

所述將所述綠蘿莖段外植體進(jìn)行藥物浸泡后，并接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，得愈傷組織，包括：

將所述綠蘿莖段外植體修剪后，得莖段段樣；

將所述莖段段樣用2g/l的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分鐘；

將藥物浸泡的所述莖段段樣接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)10天，得第一愈傷組織；

將所述第一愈傷組織轉(zhuǎn)接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，得第二愈傷組織。

優(yōu)選地，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號包括如下組分：

改良ms培養(yǎng)基1號、6-芐氨基腺嘌呤、植物生長調(diào)節(jié)劑、萘乙酸、d丁酯、蔗糖和瓊脂粉；

所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號包括如下組分：

改良ms培養(yǎng)基2號、6-芐氨基腺嘌呤、激動素、萘乙酸、吲哚丁酸和蔗糖、水解酪蛋白和蔗糖。

優(yōu)選地，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號按如下方法配置：

在改良ms培養(yǎng)基1號中，按照濃度加入2.0mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、0.1mg/l的植物生長調(diào)節(jié)劑、0.2mg/l的萘乙酸、0.05mg/l的d丁酯、30g/l的蔗糖和7g/l的瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值至5.6-5.8，即得；

所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號按如下方法配置：

6-芐氨基腺嘌呤、激動素、萘乙酸、吲哚丁酸和蔗糖。

在改良ms培養(yǎng)基2號中，按照濃度加入3.0mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、0.1mg/l的激動素、0.2mg/l的萘乙酸、0.1mg/l的吲哚丁酸、30g/l的蔗糖、200-500g/l的水解酪蛋白和7g/l的瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值至5.6-5.8，即得。

優(yōu)選地，所述改良ms培養(yǎng)基1號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：1-5mg/l；

鹽酸硫胺素：3-6mg/l；

鹽酸吡哆醇：0.5-2mg/l；

煙酸：0.5-3mg/l；

精氨酸：50mg/l；

天冬氨酸：100mg/l；

谷氨酸：150mg/l；

所述改良ms培養(yǎng)基2號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：1-5mg/l；

鹽酸硫胺素：3-6mg/l；

鹽酸吡哆醇：0.5-2mg/l；

煙酸：0.5-3mg/l；

精氨酸：100mg/l；

天冬氨酸：50mg/l；

谷氨酸：200mg/l。

優(yōu)選地，所述將所述愈傷組織轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得第二代愈傷組織，包括：

將所述第二愈傷組織轉(zhuǎn)接至亟待培養(yǎng)基中在光照強(qiáng)度1500-20001x、光照時間12小時/日、溫度25℃-28℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)；

每40天繼代一次，得第二代愈傷組織。

優(yōu)選地，所述將所述第二代愈傷組織接種至芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得綠蘿叢生芽，包括：

將所述第二代愈傷組織接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2000～30001x，每日光照時間為12小時/日，溫度為25～28℃，濕度為50～65％，培養(yǎng)30～40天，得綠蘿叢生芽。

優(yōu)選地，所述繼代培養(yǎng)基，按如下方法進(jìn)行配制：

在改良ms培養(yǎng)基2號中，按照濃度加入2.0mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值至5.6-5.8，即得；

所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，按如下方法進(jìn)行配制：

在ms培養(yǎng)基中，加入0.1mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、2.0mg/l的吲哚丁酸、0.5mg/l的萘乙酸、30g/l的蔗糖、7g/l瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值5.8-6.0，即得。

本發(fā)明提供一種加速誘導(dǎo)綠蘿生芽的方法，選取母株，經(jīng)預(yù)處理后取綠蘿莖段外植體；將所述綠蘿莖段外植體進(jìn)行藥物浸泡后，并接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，得愈傷組織；將所述愈傷組織轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得第二代愈傷組織；將所述第二代愈傷組織接種至芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得綠蘿叢生芽。本發(fā)明通過綠蘿組織培養(yǎng)技術(shù)培育的綠蘿莖段的無菌苗，可加速誘導(dǎo)綠蘿生芽，縮短生長周期，避免或減小外界不良因素引起的大規(guī)模莖腐、根腐所帶來的損失，避免了目前對綠蘿通過扦插進(jìn)行繁殖，扦插繁殖的后代極易感病菌，生產(chǎn)中經(jīng)常出現(xiàn)大規(guī)模莖腐、根腐現(xiàn)象，給綠蘿的培育造成一定的經(jīng)濟(jì)損失的問題。

具體實(shí)施方式

為了更清楚地說明本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明的權(quán)利要求做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，可以理解的是，以下僅示出了本發(fā)明的某些實(shí)施例，因此不應(yīng)被看作是對范圍的限定，任何人在本發(fā)明權(quán)利要求范圍內(nèi)所做的有限次的修改，仍在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。

本發(fā)明提供一種加速誘導(dǎo)綠蘿生芽的方法，包括以下步驟：

選取母株，經(jīng)預(yù)處理后取綠蘿莖段外植體；

將所述綠蘿莖段外植體進(jìn)行藥物浸泡后，并接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，得愈傷組織；

將所述愈傷組織轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得第二代愈傷組織；

將所述第二代愈傷組織接種至芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得綠蘿叢生芽；

所述繼代培養(yǎng)基包括如下組分：改良ms培養(yǎng)基2號、6-芐氨基腺嘌呤、吲哚-3-乙酸、蔗糖和瓊脂粉；

所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括如下組分：6-芐氨基腺嘌呤、吲哚丁酸、萘乙酸、蔗糖和瓊脂粉。

綠蘿(學(xué)名：epipremnumaureum)，屬于麒麟葉屬植物，大型常綠藤本，生長于熱帶地區(qū)，常攀援生長在雨林的巖石和樹干上，其纏繞性強(qiáng)，氣根發(fā)達(dá)，可以水培種植。成熟枝上葉柄粗壯，長30-40厘米，基部稍擴(kuò)大，上部關(guān)節(jié)長2.5-3厘米、稍肥厚，腹面具寬槽，葉鞘長，葉片薄革質(zhì)，翠綠色，通常(特別是葉面)有多數(shù)不規(guī)則的純黃色斑塊，全緣，不等側(cè)的卵形或卵狀長圓形，先端短漸尖，基部深心形，稍粗，兩面略隆起。

綠蘿原產(chǎn)地在印度尼西亞所羅門群島的熱帶雨林中，性喜溫暖、潮濕環(huán)境，要求土壤疏松肥沃、排水良好。在熱帶地區(qū)常攀援生長于巖石和樹干上，成為巨大的觀賞藤本植物，我國南方各地均有栽植。綠蘿耐陰性強(qiáng)，終年常綠，葉面有較厚的角質(zhì)層，能適應(yīng)室內(nèi)干燥的環(huán)境條件，是優(yōu)良的室內(nèi)觀葉植物。此外，還能吸附和去除室內(nèi)空氣中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物，是天然的“空氣凈化器”，具有較大的市場前景。

本發(fā)明提供一種加速誘導(dǎo)綠蘿生芽的方法，選取母株，經(jīng)預(yù)處理后取綠蘿莖段外植體；將所述綠蘿莖段外植體進(jìn)行藥物浸泡后，并接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，得愈傷組織；將所述愈傷組織轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得第二代愈傷組織；將所述第二代愈傷組織接種至芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得綠蘿叢生芽。本發(fā)明通過綠蘿組織培養(yǎng)技術(shù)培育的綠蘿莖段的無菌苗，可加速誘導(dǎo)綠蘿生芽，縮短生長周期，避免或減小外界不良因素引起的大規(guī)模莖腐、根腐所帶來的損失，避免了目前對綠蘿通過扦插進(jìn)行繁殖，扦插繁殖的后代極易感病菌，生產(chǎn)中經(jīng)常出現(xiàn)大規(guī)模莖腐、根腐現(xiàn)象，給綠蘿的培育造成一定的經(jīng)濟(jì)損失的問題。

優(yōu)選地，所述選取母株，經(jīng)預(yù)處理后取綠蘿莖段外植體，包括：

選取母株運(yùn)用多菌靈灌根；

取所述母株生長點(diǎn)處莖段；

將所述莖段消毒，得綠蘿莖段外植體。

優(yōu)選地，所述選取母株運(yùn)用多菌靈灌根，包括：

選取母株使用80％多菌靈1000倍溶液進(jìn)行灌根30天，每10天1次。

上述，為本發(fā)明中對綠蘿外植體的選取過程，具體的，包括選取形態(tài)正常、生長旺盛的健壯母株預(yù)處理(使用80％多菌靈可濕性粉劑1000倍液灌根，每十天一次)，20天后，切取莖端頂芽或帶節(jié)莖段(去除葉及葉柄)，經(jīng)表面除雜、清洗后的外植體轉(zhuǎn)入超凈工作臺進(jìn)行消毒處理，得到無菌的綠蘿莖段外植體。

需要理解的是，多菌靈又名棉萎靈、苯并咪唑44號。多菌靈是一種廣譜性殺菌劑，對多種作物由真菌(如半知菌、多子囊菌)引起的病害有防治效果?？捎糜谌~面噴霧、種子處理和土壤處理等。

優(yōu)選地，

所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號和愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號；

所述將所述綠蘿莖段外植體進(jìn)行藥物浸泡后，并接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，得愈傷組織，包括：

將所述綠蘿莖段外植體修剪后，得莖段段樣；

將所述莖段段樣用2g/l的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分鐘；

將藥物浸泡的所述莖段段樣接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)10天，得第一愈傷組織；

將所述第一愈傷組織轉(zhuǎn)接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，得第二愈傷組織。

上述，為本發(fā)明中愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)過程，具體的，包括將綠蘿莖段修剪至長度為2～3cm的莖段，常規(guī)消毒后用聚乙烯吡硌烷酮(pvp)2g/l浸泡10-15分鐘，然后接種到愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號中，在溫度為23～25℃，濕度為50～65％的條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)，暗培養(yǎng)10天后給予1500～20001x光照繼續(xù)培養(yǎng)，20天后得到初期綠蘿愈傷組織；將得到的初期綠蘿愈傷組織轉(zhuǎn)接入愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號中，在溫度為25～28℃，濕度為50～65％的條件下暗培養(yǎng)一周后給予光照條件20001x，繼續(xù)培養(yǎng)，加速愈傷組織的形成。

優(yōu)選地，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號包括如下組分：

改良ms培養(yǎng)基1號、6-芐氨基腺嘌呤、植物生長調(diào)節(jié)劑、萘乙酸、d丁酯、蔗糖和瓊脂粉；

所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號包括如下組分：

改良ms培養(yǎng)基2號、6-芐氨基腺嘌呤、激動素、萘乙酸、吲哚丁酸和蔗糖、水解酪蛋白和蔗糖。

優(yōu)選地，所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號按如下方法配置：

在改良ms培養(yǎng)基1號中，按照濃度加入2.0mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、0.1mg/l的植物生長調(diào)節(jié)劑、0.2mg/l的萘乙酸、0.05mg/l的d丁酯、30g/l的蔗糖和7g/l的瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值至5.6-5.8，即得；

所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號按如下方法配置：

6-芐氨基腺嘌呤、激動素、萘乙酸、吲哚丁酸和蔗糖。

在改良ms培養(yǎng)基2號中，按照濃度加入3.0mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、0.1mg/l的激動素、0.2mg/l的萘乙酸、0.1mg/l的吲哚丁酸、30g/l的蔗糖、200-500g/l的水解酪蛋白和7g/l的瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值至5.6-5.8，即得。

優(yōu)選地，所述改良ms培養(yǎng)基1號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：1-5mg/l；

鹽酸硫胺素：3-6mg/l；

鹽酸吡哆醇：0.5-2mg/l；

煙酸：0.5-3mg/l；

精氨酸：50mg/l；

天冬氨酸：100mg/l；

谷氨酸：150mg/l；

所述改良ms培養(yǎng)基2號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：1-5mg/l；

鹽酸硫胺素：3-6mg/l；

鹽酸吡哆醇：0.5-2mg/l；

煙酸：0.5-3mg/l；

精氨酸：100mg/l；

天冬氨酸：50mg/l；

谷氨酸：200mg/l。

上述，需要理解的是，ms培養(yǎng)基是murashige和skoog于1962年為煙草細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)計(jì)的，其特點(diǎn)是無機(jī)鹽和離子濃度較高，是較穩(wěn)定的離子平衡溶液，它的硝酸鹽含量高，其養(yǎng)分的數(shù)量和比例合適，能滿足植物細(xì)胞的營養(yǎng)和生理需要，因而適用范圍比較廣，多數(shù)植物組織培養(yǎng)快速繁殖用它作為培養(yǎng)基的基本培養(yǎng)基?；诖?，這種培養(yǎng)基就用他們的名字來命名。其配方如表所示。

表1ms培養(yǎng)基配方表

優(yōu)選地，所述將所述愈傷組織轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得第二代愈傷組織，包括：

將所述第二愈傷組織轉(zhuǎn)接至亟待培養(yǎng)基中在光照強(qiáng)度1500-20001x、光照時間12小時/日、溫度25℃-28℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)；

每40天繼代一次，得第二代愈傷組織。

上述，為本發(fā)明中愈傷組織的繼代培養(yǎng)過程，具體的，包括將愈傷組織轉(zhuǎn)接到繼代培養(yǎng)基中，然后將其置于led燈作為光源的環(huán)境下，在光照強(qiáng)度為1500～20001x，每日光照時間為12小時，溫度為23-25℃，濕度為50～65％的條件下，進(jìn)行愈傷組織的繼代培養(yǎng)，經(jīng)過40天，獲得第二代愈傷組織。

優(yōu)選地，所述將所述第二代愈傷組織接種至芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，得綠蘿叢生芽，包括：

將所述第二代愈傷組織接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2000～30001x，每日光照時間為12小時/日，溫度為25～28℃，濕度為50～65％，培養(yǎng)30～40天，得綠蘿叢生芽。

上述，為本發(fā)明中叢生芽的培養(yǎng)過程，具體的，包括將愈傷組織接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件：光照強(qiáng)度為2000～30001x，每日光照時間為12小時，溫度為25～28℃，濕度為50～65％，培養(yǎng)30～40天后獲得綠蘿叢生芽。

優(yōu)選地，所述繼代培養(yǎng)基，按如下方法進(jìn)行配制：

在改良ms培養(yǎng)基2號中，按照濃度加入2.0mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值至5.6-5.8，即得；

所述芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，按如下方法進(jìn)行配制：

在ms培養(yǎng)基中，加入0.1mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、2.0mg/l的吲哚丁酸、0.5mg/l的萘乙酸、30g/l的蔗糖、7g/l瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值5.8-6.0，即得。

實(shí)施例1：

按如下方法及培養(yǎng)溶液對綠蘿外植體進(jìn)行培養(yǎng)：

步驟1，選取母株使用80％多菌靈1000倍溶液進(jìn)行灌根30天，每10天1次；

步驟2，取所述母株生長點(diǎn)處莖段；

步驟3，將所述莖段消毒，得綠蘿莖段外植體；

步驟4，將所述綠蘿莖段外植體修剪后，得莖段段樣；

步驟5，將所述莖段段樣用2g/l的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分鐘；

步驟6，將藥物浸泡的所述莖段段樣接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)10天，得第一愈傷組織；

步驟7，將所述第一愈傷組織轉(zhuǎn)接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，得第二愈傷組織；

步驟8，將所述第二愈傷組織轉(zhuǎn)接至亟待培養(yǎng)基中在光照強(qiáng)度1500-20001x、光照時間12小時/日、溫度25℃-28℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)；

步驟9，每40天繼代一次，得第二代愈傷組織；

步驟10，將所述第二代愈傷組織接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2000～30001x，每日光照時間為12小時/日，溫度為25～28℃，濕度為50～65％，培養(yǎng)30～40天，得綠蘿叢生芽。

溶液配置：

1、改良ms培養(yǎng)基1號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，調(diào)整其中大量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/4，微量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/2；

還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：5mg/l；

鹽酸硫胺素：6mg/l；

鹽酸吡哆醇：2mg/l；

煙酸：3mg/l；

精氨酸：50mg/l；

天冬氨酸：100mg/l；

谷氨酸：150mg/l；

2、改良ms培養(yǎng)基2號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，調(diào)整其中大量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/4，微量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/2；

還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：5mg/l；

鹽酸硫胺素：6mg/l；

鹽酸吡哆醇：2mg/l；

煙酸：3mg/l；

精氨酸：100mg/l；

天冬氨酸：50mg/l；

谷氨酸：200mg/l。

3、繼代培養(yǎng)基按如下方法進(jìn)行配制：

在改良ms培養(yǎng)基2號中，按照濃度加入2.0mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值至5.6-5.8，即得。

4、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，按如下方法進(jìn)行配制：

在ms培養(yǎng)基中，加入0.1mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、2.0mg/l的吲哚丁酸、0.5mg/l的萘乙酸、30g/l的蔗糖、7g/l瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值5.8-6.0，即得。

實(shí)施例2：

按如下方法及培養(yǎng)溶液對綠蘿外植體進(jìn)行培養(yǎng)：

步驟1，選取母株使用80％多菌靈1000倍溶液進(jìn)行灌根30天，每10天1次；

步驟2，取所述母株生長點(diǎn)處莖段；

步驟3，將所述莖段消毒，得綠蘿莖段外植體；

步驟4，將所述綠蘿莖段外植體修剪后，得莖段段樣；

步驟5，將所述莖段段樣用2g/l的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分鐘；

步驟6，將藥物浸泡的所述莖段段樣接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)10天，得第一愈傷組織；

步驟7，將所述第一愈傷組織轉(zhuǎn)接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，得第二愈傷組織；

步驟8，將所述第二愈傷組織轉(zhuǎn)接至亟待培養(yǎng)基中在光照強(qiáng)度1500-20001x、光照時間12小時/日、溫度25℃-28℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)；

步驟9，每40天繼代一次，得第二代愈傷組織；

步驟10，將所述第二代愈傷組織接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2000～30001x，每日光照時間為12小時/日，溫度為25～28℃，濕度為50～65％，培養(yǎng)30～40天，得綠蘿叢生芽。

溶液配置：

1、改良ms培養(yǎng)基1號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，調(diào)整其中大量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/4，微量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/2；

還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：1mg/l；

鹽酸硫胺素：3mg/l；

鹽酸吡哆醇：0.5mg/l；

煙酸：0.5mg/l；

精氨酸：50mg/l；

天冬氨酸：100mg/l；

谷氨酸：150mg/l；

2、改良ms培養(yǎng)基2號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，調(diào)整其中大量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/4，微量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/2；

還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：1mg/l；

鹽酸硫胺素：3mg/l；

鹽酸吡哆醇：0.5mg/l；

煙酸：0.5mg/l；

精氨酸：100mg/l；

天冬氨酸：50mg/l；

谷氨酸：200mg/l。

3、繼代培養(yǎng)基按如下方法進(jìn)行配制：

在改良ms培養(yǎng)基2號中，按照濃度加入2.0mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值至5.6-5.8，即得。

4、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，按如下方法進(jìn)行配制：

在ms培養(yǎng)基中，加入0.1mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、2.0mg/l的吲哚丁酸、0.5mg/l的萘乙酸、30g/l的蔗糖、7g/l瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值5.8-6.0，即得。

實(shí)施例3：

按如下方法及培養(yǎng)溶液對綠蘿外植體進(jìn)行培養(yǎng)：

步驟1，選取母株使用80％多菌靈1000倍溶液進(jìn)行灌根30天，每10天1次；

步驟2，取所述母株生長點(diǎn)處莖段；

步驟3，將所述莖段消毒，得綠蘿莖段外植體；

步驟4，將所述綠蘿莖段外植體修剪后，得莖段段樣；

步驟5，將所述莖段段樣用2g/l的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分鐘；

步驟6，將藥物浸泡的所述莖段段樣接種至愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基1號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)10天，得第一愈傷組織；

步驟7，將所述第一愈傷組織轉(zhuǎn)接入誘導(dǎo)培養(yǎng)基2號中，在溫度25℃-28℃和濕度50％-65％的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，得第二愈傷組織；

步驟8，將所述第二愈傷組織轉(zhuǎn)接至亟待培養(yǎng)基中在光照強(qiáng)度1500-20001x、光照時間12小時/日、溫度25℃-28℃條件下進(jìn)行培養(yǎng)；

步驟9，每40天繼代一次，得第二代愈傷組織；

步驟10，將所述第二代愈傷組織接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在光照強(qiáng)度2000～30001x，每日光照時間為12小時/日，溫度為25～28℃，濕度為50～65％，培養(yǎng)30～40天，得綠蘿叢生芽。

溶液配置：

1、改良ms培養(yǎng)基1號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，調(diào)整其中大量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/4，微量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/2；

還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：3mg/l；

鹽酸硫胺素：4mg/l；

鹽酸吡哆醇：1mg/l；

煙酸：1mg/l；

精氨酸：50mg/l；

天冬氨酸：100mg/l；

谷氨酸：150mg/l；

2、改良ms培養(yǎng)基2號按如下方法配置：

以ms培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，調(diào)整其中大量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/4，微量元素為所述ms培養(yǎng)基原有含量的1/2；

還包括以下成分，并調(diào)整含量為：

肌醇：2mg/l；

鹽酸硫胺素：4mg/l；

鹽酸吡哆醇：1mg/l；

煙酸：1mg/l；

精氨酸：100mg/l；

天冬氨酸：50mg/l；

谷氨酸：200mg/l。

3、繼代培養(yǎng)基按如下方法進(jìn)行配制：

在改良ms培養(yǎng)基2號中，按照濃度加入2.0mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、0.3mg/l的吲哚-3-乙酸、30g/l的蔗糖和7g/l的瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值至5.6-5.8，即得。

4、芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基，按如下方法進(jìn)行配制：

在ms培養(yǎng)基中，加入0.1mg/l的6-芐氨基腺嘌呤、2.0mg/l的吲哚丁酸、0.5mg/l的萘乙酸、30g/l的蔗糖、7g/l瓊脂粉，調(diào)節(jié)ph值5.8-6.0，即得。

應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個實(shí)施方式僅包含一個獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個整體，各實(shí)施方式中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。

發(fā)明人聲明，本發(fā)明通過上文所列出的一系列的詳細(xì)說明僅僅是針對本發(fā)明的可行性實(shí)施方式的具體說明，但本發(fā)明并不局限于上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程。并且即不意味著本發(fā)明應(yīng)依賴上述詳細(xì)工藝設(shè)備和工藝流程才能實(shí)施。所屬技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該明了，對本發(fā)明的任何改進(jìn)，對本發(fā)明產(chǎn)品各原料的等效替換及輔助成分的添加、具體方式的選擇等，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍和公開范圍之內(nèi)。