本發(fā)明涉及動物模型構建，特別是涉及一種凡納濱對蝦腸道氧化損傷模型的構建方法及其應用。

背景技術：

1、油脂為水產動物生長提供能量和必需脂肪酸，對水產動物的生長、代謝和飼料成本都有重要的影響。然而，在儲存和加工過程中，飼用油脂中不飽和脂肪酸的非共軛雙鍵高度不穩(wěn)定，在熱、光、氧等的誘導下，容易發(fā)生脂質過氧化反應，產生醛、酮等一系列有害的初級和次級氧化產物，引起水產動物組織器官的氧化損傷，破壞正常生理功能，危及健康。對蝦養(yǎng)殖生產中，常以魚油等富含不飽和脂肪酸的油脂作為飼料原料，而魚油氧化導致的蝦腸道氧化損傷在生產上十分常見，由此造成的腸道屏障功能損壞、消化能力和免疫力下降給養(yǎng)殖生產造成了重大損失。

2、丙二醛是油脂中不飽和脂肪酸氧化的經典終產物，穩(wěn)定性好，是客觀評價油脂酸敗程度的敏感指標之一。丙二醛具有高度生物學活性，可引起腸道上皮細胞膜脂質過氧化，從而破壞細胞膜結構和胞內酶活性，誘導dna損傷和細胞凋亡，進而造成組織損傷。研究表明，多種對蝦對飼料中的丙二醛反應敏感，可在短期內引發(fā)病理反應。然而，目前尚未建立起相關模型，使得油脂氧化導致腸道損傷的病理和藥理研究缺乏有效的工具。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供一種凡納濱對蝦腸道氧化損傷模型的構建方法及其應用，以解決上述現(xiàn)有技術存在的問題。本發(fā)明以凡納濱對蝦為實驗動物，構建一種丙二醛誘導其腸道氧化損傷的動物模型，為油脂氧化誘導對蝦腸道氧化損傷的病理和藥理研究提供有效的工具。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、技術方案一：一種丙二醛誘導的腸道氧化損傷動物模型的構建方法，包括將含有丙二醛溶液的飼料投喂體重為6-10g/尾的凡納濱對蝦這一步驟。

4、鑒于對蝦的年齡比哺乳動物的年齡難確定，通常生產上用“體重”，而非“日齡”表示對蝦的生長階段。

5、進一步地，所述丙二醛溶液的質量濃度為10％。

6、進一步地，所述飼料的粗蛋白含量為40-42％、粗脂肪含量為6-7％和過氧化值含量低于10.0meq/kg。

7、進一步地，所述飼料中的丙二醛含量為200mg/kg。

8、進一步地，所述投喂的天數(shù)不低于14天。

9、進一步地，所述凡納濱對蝦的體重為8-10g/尾。

10、進一步地，所述投喂的頻率為每日投喂3次。

11、技術方案二：一種所述的構建方法所構建的丙二醛誘導的腸道氧化損傷動物模型的評價方法，包括以下步驟：

12、設立對照組，所述對照組為投喂不含丙二醛飼料的凡納濱對蝦，將丙二醛誘導的腸道氧化損傷動物模型作為模型組，模型組和對照組檢測下述指標：

13、1)中腸的組織病理學特征；

14、2)與中腸炎癥、緊密連接及抗氧化酶活性相關基因的表達水平；

15、通過模型組和對照組指標的差異，確認腸道氧化損傷動物模型是否構建成功。

16、進一步地，所述組織病理學特征包括組織切片和熒光定量分析。

17、進一步地，所述通過模型組和對照組指標的差異，確認腸道氧化損傷動物模型是否構建成功為：當與所述對照組相比，所述模型組的絨毛高度、絨毛寬度、腸壁厚度和肌層厚度顯著下降，平均降幅>25％；所述模型組腸道的tnf-a、tgf-β1和nrf2基因相對表達量顯著提高，平均增幅>80％；所述模型組腸道的keap-1、ll-2、zo-1、dorsal、cat和sod基因的相對表達量顯著減少，平均降幅>30％，則所述腸道氧化損傷動物模型構建成功。

18、技術方案三：一種所述的構建方法所構建得到的丙二醛誘導腸道氧化損傷動物模型在油脂氧化誘導對蝦腸道氧化損傷的藥物篩選中的應用。

19、本發(fā)明公開了以下技術效果：

20、凡納濱對蝦是世界三大對蝦養(yǎng)殖品種之一，也是我國養(yǎng)殖量最大的對蝦品種。其組織結構和生理特征在對蝦科物種中具有典型性和代表性，因此本發(fā)明選用凡納濱對蝦作為模型構建的實驗動物。本發(fā)明構建的凡納濱對蝦腸道氧化損傷模型，可作為油脂氧化導致對蝦腸道損傷的通用模型，具有建模時間短、操作簡便、重復性好、病理表現(xiàn)典型且不會造成動物死亡等優(yōu)點，從而使模型變得穩(wěn)定而可靠。

技術特征：

1.一種丙二醛誘導的腸道氧化損傷動物模型的構建方法，其特征在于，包括將含有丙二醛溶液的飼料投喂體重為6-10g/尾的凡納濱對蝦這一步驟。

2.根據(jù)權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述丙二醛溶液的質量濃度為10％。

3.根據(jù)權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述飼料的粗蛋白含量為40-42％、粗脂肪含量為6-7％和過氧化值含量低于10.0meq/kg。

4.根據(jù)權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述飼料中的丙二醛含量為200mg/kg。

5.根據(jù)權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述投喂的天數(shù)不低于14天。

6.根據(jù)權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述投喂的頻率為每日投喂3次。

7.一種權利要求1-6任一項所述的構建方法所構建的丙二醛誘導的腸道氧化損傷動物模型的評價方法，其特征在于，包括以下步驟：

8.根據(jù)權利要求7所述的評價方法，其特征在于，所述組織病理學特征包括組織切片和熒光定量分析。

9.根據(jù)權利要求7所述的評價方法，其特征在于，所述通過模型組和對照組指標的差異，確認腸道氧化損傷動物模型是否構建成功為：當與所述對照組相比，所述模型組的絨毛高度、絨毛寬度、腸壁厚度和肌層厚度顯著下降，平均降幅>25％；所述模型組腸道的tnf-a、tgf-β1和nrf2基因相對表達量顯著提高，平均增幅>80％；所述模型組腸道的keap-1、ll-2、zo-1、dorsal、cat和sod基因的相對表達量顯著減少，平均降幅>30％，則所述腸道氧化損傷動物模型構建成功。

10.一種如權利要求1-6任一項所述的構建方法所構建得到的丙二醛誘導腸道氧化損傷動物模型在油脂氧化誘導對蝦腸道氧化損傷的藥物篩選中的應用。

技術總結
本發(fā)明公開了一種凡納濱對蝦腸道氧化損傷模型的構建方法及其應用，屬于動物模型構建技術領域。該構建方法，包括將含有丙二醛溶液的飼料投喂體重為6?10g/尾的凡納濱對蝦這一步驟；所述丙二醛溶液的質量濃度為10％；所述飼料的粗蛋白含量為40?42％、粗脂肪含量為6?7％和過氧化值含量低于10.0meq/kg；所述飼料中的丙二醛含量為200mg/kg；所述投喂的天數(shù)不低于14天。本發(fā)明構建的凡納濱對蝦腸道氧化損傷模型，可作為油脂氧化導致對蝦腸道損傷的通用模型，具有建模時間短、操作簡便、重復性好、病理表現(xiàn)典型且不會造成動物死亡等優(yōu)點，從而使模型變得穩(wěn)定而可靠。

技術研發(fā)人員：王子怡,周萌,羅佳琳,譚小紅,李澤鴻
受保護的技術使用者：仲愷農業(yè)工程學院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/15