一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，利用小麥代替常規(guī)的馬鈴薯制備固體、液體菌種培養(yǎng)基，并在所有采用的培養(yǎng)基中均加入魚粉、蝦米粉來滿足蛹蟲草生長過程中所需的碳源、氮源、維生素及各種礦質(zhì)元素，以提高菌種穩(wěn)定性。將母種擴(kuò)繁接種至制備好的斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)；之后選取菌絲生長健壯的栽培種接種到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)制備液體菌種；最后將液體菌種接種到大米培養(yǎng)基中，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明提供的蛹蟲草的培養(yǎng)方法能夠提高菌種穩(wěn)定性，保持其優(yōu)良性狀得以延續(xù)，菌種使用期限約為普通培養(yǎng)方法的5倍。
【專利說明】
一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及蛹蟲草生產(chǎn)領(lǐng)域，具體涉及一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蛹蟲草為子囊菌門，肉座目，蟲草菌科，學(xué)名為Cora^ceAs又名北冬蟲夏草、北蟲草等，與冬蟲夏草同屬，世界性分布，天然資源數(shù)量很少。蛹蟲草含有多種與冬蟲夏草相同的生物活性物質(zhì)，包括蟲草素、腺苷等核苷類物質(zhì)、還包括蟲草多糖、S0D(超氧化物歧化酶)及氨基酸等，而其中最主要的活性成分為蟲草素，研究表明蟲草素具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、抗真菌、抗白血病、降血脂等多種藥理活性。近年來，由于冬蟲夏草資源嚴(yán)重匱乏，蛹蟲草已漸漸在醫(yī)療保健領(lǐng)域成為冬蟲夏草的替代品，以滿足市場需求。
[0003]目前蛹蟲草已進(jìn)入規(guī)模化生產(chǎn)階段，其人工培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)相當(dāng)成熟，但其仍面臨著一個(gè)巨大的問題是菌種不穩(wěn)定，極易退化，在周年生產(chǎn)的情況下，一株菌種最多使用半年，產(chǎn)量就會(huì)嚴(yán)重下降，這就大大影響了蛹蟲草的產(chǎn)量。菌種退化是食用菌使用過程中普遍存在的現(xiàn)象，其中菌種退化的一個(gè)重要原因就是營養(yǎng)缺乏，優(yōu)良菌株的生產(chǎn)性能是和培養(yǎng)條件緊密相關(guān)的，若培養(yǎng)條件不佳，如培養(yǎng)基中缺乏某些元素，會(huì)導(dǎo)致菌種生長速度減慢、性能衰退，也會(huì)引起子實(shí)體生長速度減慢、產(chǎn)量降低等，因此為蛹蟲草生長提供豐富的適宜比例的營養(yǎng)成分及培養(yǎng)方法就成為關(guān)鍵，目前就關(guān)于蛹蟲草栽培培養(yǎng)基配制成分有很多，包括麥麩、小米、蛋氨酸、賴氨酸等，未發(fā)現(xiàn)有用小麥煮汁、添加魚粉、蝦米粉的制備培養(yǎng)基進(jìn)tx提尚蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，克服現(xiàn)有蛹蟲草栽培中菌種不穩(wěn)定、極易退化的技術(shù)難點(diǎn)，提供豐富且適當(dāng)比例的營養(yǎng)成分來提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，既能保證蛹蟲草的產(chǎn)量和質(zhì)量的穩(wěn)定性，又能縮短生長周期，提高蛹蟲草生產(chǎn)穩(wěn)定性。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，所述的方法包括如下:
(1)選取菌絲生長健壯的母種擴(kuò)繁接種至制備好的試管斜面培養(yǎng)基；
(2)接種完成后，置于恒溫箱中22-24°C下進(jìn)行黑暗培養(yǎng)1-3天，之后在18-22°C下每日光照7-9小時(shí)培養(yǎng)2-4天，最后在16-20°C下每日光照15-18小時(shí)培養(yǎng)2_4天，即得栽培種；
(3)選取菌絲生長健壯的栽培種接種到液體培養(yǎng)基中制備液體菌種；
(4)接種完成后，置于18-22°C下靜置培養(yǎng)1-2天，之后在搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，120-180r/min、20-25°C下培養(yǎng)2-4天，最后在18-22°C下、100-120r/min條件下培養(yǎng)兩天，即得液體菌種；
(5)將液體菌種接種到大米培養(yǎng)基中，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，栽培35-40天時(shí)即進(jìn)行采摘，采摘前一周選擇幼嫩的子實(shí)體進(jìn)行菌種分離，利用上述斜面培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，再次進(jìn)行栽培，如此循環(huán)周年使用。
[0006]所述的斜面培養(yǎng)基配方:180-220g/L小麥汁、葡萄糖18-22g/L、瓊脂18-22g/L、硫酸鎂0.5-1.58/1、磷酸二氫鉀1-38/1、維生素8 0.05-0.15g/L、蝦米粉3-7g/L、魚粉3-7g/L;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁40min，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸饋水定容至100ml，分裝至試管，121°C下滅菌30min，取出擱斜面，冷卻后儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br>[0007]所述的液體培養(yǎng)基配方:180-220g/L小麥汁、葡萄糖18-22g/L、硫酸鎂0.5-1.5g/L、磷酸二氫鉀l_3g/L、維生素B 0.05-0.15g/L、蝦米粉3-7g/L、魚粉3-7g/L;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁40min，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸餾水定容至100ml，分裝至三角瓶，121°C下滅菌30min，冷卻備用。
[0008]大米培養(yǎng)基配方為大米25-35g，營養(yǎng)液40-45ml，所述營養(yǎng)液配方:蔗糖18-22g/L、蛋白胨8-12g/L、硫酸鎂0.5-1.58/1、磷酸二氫鉀1-38/1，維生素8 0.05-0.15g/L、魚粉3-7g/L、4下米粉 3-7g/L。
[0009]本發(fā)明主要是提供一種蛹蟲草菌種培養(yǎng)方法，通過提供的培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌絲健壯、不易斷裂、活力高、生長速度快，子實(shí)體粗細(xì)均勻、整齊、顏色鮮亮，反復(fù)周年使用的情況下，菌種可使用的時(shí)間為普通培養(yǎng)的5倍左右。
[0010]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于:在固體培養(yǎng)完成后，菌絲基本覆蓋整個(gè)斜面，短小、濃密、呈橙黃色，顯微鏡下觀察菌絲粗壯，不易斷裂，與母種菌絲顯微結(jié)構(gòu)極為相似;液體菌種培養(yǎng)完成后，菌絲球密度大，細(xì)小的微粒，不需要進(jìn)行切碎，均勻分布在培養(yǎng)基內(nèi)，對液體菌種進(jìn)行處理，觀察顯微結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)菌絲形態(tài)結(jié)構(gòu)與母種極為相似;且經(jīng)過此方法培養(yǎng)的菌株，液體菌絲球細(xì)小、密度大，可以稀釋8-10倍進(jìn)行接種，一定程度上節(jié)約了菌種制備成本，同樣一支試管菌種利用率提高2倍左右;蛹蟲草一直保持著生長速度快、整齊、子實(shí)體產(chǎn)量多、顏色鮮艷的特征。本發(fā)明不但能大大增強(qiáng)菌種的生產(chǎn)能力，還降低生產(chǎn)成本，獲得菌種不僅保證了生產(chǎn)的穩(wěn)定性，還縮短了蛹蟲草的生產(chǎn)周期，符合規(guī)?；a(chǎn)需求。
【具體實(shí)施方式】
[0011]實(shí)施例1
(I)選取菌絲生長健壯的母種擴(kuò)繁接種至制備好的試管斜面培養(yǎng)基；
(2 )接種完成后，置于恒溫箱中22 0C下進(jìn)行黑暗培養(yǎng)2天，之后在20 0C下每日光照8小時(shí)培養(yǎng)3天，最后在18 °C下每日光照16小時(shí)培養(yǎng)3天，即得栽培種；
(3)選取菌絲生長健壯的栽培種接種到液體培養(yǎng)基中制備液體菌種；
(4)接種完成后，置于20°C下靜置培養(yǎng)I天，之后在搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，150r/min、22°C下培養(yǎng)3天，最后在20 V下、I lOr/min條件下培養(yǎng)兩天，即得液體菌種；
(5)將液體菌種接種到大米培養(yǎng)基中，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，栽培35天時(shí)即進(jìn)行采摘，采摘前一周選擇幼嫩的子實(shí)體進(jìn)行菌種分離，利用上述斜面培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，再次進(jìn)行栽培，如此循環(huán)周年使用。
[0012]所述的斜面培養(yǎng)基配方:200g/L小麥汁、葡萄糖20g/L、瓊脂20g/L、硫酸鎂lg/L、磷酸二氫鉀2g/L、維生素B 0.18/1、蝦米粉58/1、魚粉58/1;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁401^11，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸餾水定容至100ml，分裝至試管，121°C下滅菌30min，取出擱斜面，冷卻后儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br>[0013]所述的液體培養(yǎng)基配方:200g/L小麥汁、葡萄糖20g/L、硫酸鎂lg/L、磷酸二氫鉀2g/L、維生素B 0.18/1、蝦米粉58/1、魚粉58/1;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁401^11，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸餾水定容至100ml，分裝至三角瓶，121°C下滅菌30min，冷卻備用。
[0014]大米培養(yǎng)基配方為大米30g，營養(yǎng)液42ml，所述營養(yǎng)液配方:蔗糖20g/L、蛋白胨10g/L、硫酸鎂lg/L、磷酸二氫鉀2g/L，維生素B 0.18/1、魚粉58/1、蝦米粉58/1。
[0015]接種大米培養(yǎng)基，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，35天后進(jìn)行采摘，28天時(shí)選擇幼嫩的子實(shí)體進(jìn)行菌種分離，利用上述斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，再次進(jìn)行栽培，如此循環(huán)周年使用，菌種可使用時(shí)間是普通培養(yǎng)的5.0-5.4倍。
[0016]實(shí)施例2
一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，所述的方法包括如下:
(I)選取菌絲生長健壯的母種擴(kuò)繁接種至制備好的試管斜面培養(yǎng)基；
(2 )接種完成后，置于恒溫箱中22 0C下進(jìn)行黑暗培養(yǎng)I天，之后在18 °C下每日光照7小時(shí)培養(yǎng)2天，最后在16 °C下每日光照15小時(shí)培養(yǎng)2天，即得栽培種；
(3)選取菌絲生長健壯的栽培種接種到液體培養(yǎng)基中制備液體菌種；
(4)接種完成后，置于18°C下靜置培養(yǎng)I天，之后在搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，120r/min、20°C下培養(yǎng)2天，最后在18°C下、lOOr/min條件下培養(yǎng)兩天，即得液體菌種；
(5)將液體菌種接種到大米培養(yǎng)基中，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，栽培37天時(shí)即進(jìn)行采摘，采摘前一周選擇幼嫩的子實(shí)體進(jìn)行菌種分離，利用上述斜面培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，再次進(jìn)行栽培，如此循環(huán)周年使用。
[0017]所述的斜面培養(yǎng)基配方:180g/L小麥汁、葡萄糖18g/L、瓊脂18g/L、硫酸鎂0.5g/L、磷酸二氫鉀lg/L、維生素B 0.05g/L、蝦米粉3g/L、魚粉3g/L;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁40min，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸餾水定容至1000ml，分裝至試管，121 °C下滅菌30min，取出擱斜面，冷卻后儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br>[0018]所述的液體培養(yǎng)基配方:180g/L小麥汁、葡萄糖18g/L、硫酸鎂0.5g/L、磷酸二氫鉀lg/L、維生素B 0.05g/L、蝦米粉3g/L、魚粉3g/L;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁40min，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸餾水定容至100ml，分裝至三角瓶，121°C下滅菌30min，冷卻備用。
[0019]大米培養(yǎng)基配方為大米25g，營養(yǎng)液40ml，所述營養(yǎng)液配方:鹿糖18g/L、蛋白胨8g/L、硫酸鎂0.5g/L、磷酸二氫鉀lg/L，維生素B 0.05g/L、魚粉3g/L、蝦米粉3g/L。
[0020]接種大米培養(yǎng)基，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，37天后進(jìn)行采摘，30天時(shí)選擇幼嫩的子實(shí)體進(jìn)行菌種分離，利用上述斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，再次進(jìn)行栽培，如此循環(huán)周年使用，菌種可使用的時(shí)間是普通培養(yǎng)方法的4.1-4.6倍。
[0021]實(shí)施例3
一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，所述的方法包括如下:
(I)選取菌絲生長健壯的母種擴(kuò)繁接種至制備好的試管斜面培養(yǎng)基；
(2 )接種完成后，置于恒溫箱中24 0C下進(jìn)行黑暗培養(yǎng)3天，之后在22 0C下每日光照9小時(shí)培養(yǎng)4天，最后在20°C下每日光照18小時(shí)培養(yǎng)4天，即得栽培種；
(3)選取菌絲生長健壯的栽培種接種到液體培養(yǎng)基中制備液體菌種； (4)接種完成后，置于22°C下靜置培養(yǎng)2天，之后在搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，180r/min、25°C下培養(yǎng)4天，最后在22 °C下、120r/min條件下培養(yǎng)兩天，即得液體菌種；
(5)將液體菌種接種到大米培養(yǎng)基中，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，栽培40天時(shí)即進(jìn)行采摘，采摘前一周選擇幼嫩的子實(shí)體進(jìn)行菌種分離，利用上述斜面培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，再次進(jìn)行栽培，如此循環(huán)周年使用。
[0022]所述的斜面培養(yǎng)基配方:220g/L小麥汁、葡萄糖22g/L、瓊脂22g/L、硫酸鎂1.5g/L、磷酸二氫鉀3g/L、維生素B 0.15g/L、蝦米粉7g/L、魚粉7g/L;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁40min，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸餾水定容至100ml，分裝至試管，121°C下滅菌30min，取出擱斜面，冷卻后儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br>[0023]所述的液體培養(yǎng)基配方:220g/L小麥汁、葡萄糖22g/L、硫酸鎂1.5g/L、磷酸二氫鉀3g/L、維生素B 0.15g/L、蝦米粉7g/L、魚粉7g/L;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁40min，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸餾水定容至100ml，分裝至三角瓶，121°C下滅菌30min，冷卻備用。
[0024]大米培養(yǎng)基配方為大米35g，營養(yǎng)液45ml，所述營養(yǎng)液配方:蔗糖22g/L、蛋白胨12g/L、硫酸鎂1.5g/L、磷酸二氫鉀3g/L，維生素B 0.15g/L、魚粉7g/L、蝦米粉7g/L。
[0025]接種大米培養(yǎng)基，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，40天后進(jìn)行采摘，32天時(shí)選擇幼嫩的子實(shí)體進(jìn)行菌種分離，利用上述斜面培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，再次進(jìn)行栽培，如此循環(huán)周年使用，菌種可使用時(shí)間是普通培養(yǎng)的4.5-4.9倍。
[0026]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述的方法包括如下: (1)選取菌絲生長健壯的母種擴(kuò)繁接種至制備好的試管斜面培養(yǎng)基； (2)接種完成后，置于恒溫箱中22-24°C下進(jìn)行黑暗培養(yǎng)1-3天，之后在18-22°C下每日光照7-9小時(shí)培養(yǎng)2-4天，最后在16-20°C下每日光照15-18小時(shí)培養(yǎng)2_4天，即得栽培種； (3)選取菌絲生長健壯的栽培種接種到液體培養(yǎng)基中制備液體菌種； (4)接種完成后，置于18-22°C下靜置培養(yǎng)1-2天，之后在搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，120-180r/min、20-25°C下培養(yǎng)2-4天，最后在18-22°C下、100-120r/min條件下培養(yǎng)兩天，即得液體菌種； (5)將液體菌種接種到大米培養(yǎng)基中，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，栽培35-40天時(shí)即進(jìn)行采摘，采摘前一周選擇幼嫩的子實(shí)體進(jìn)行菌種分離，利用上述斜面培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，再次進(jìn)行栽培，如此循環(huán)周年使用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述的方法包括如下: (1)選取菌絲生長健壯的母種擴(kuò)繁接種至制備好的試管斜面培養(yǎng)基； (2)接種完成后，置于恒溫箱中22°C下進(jìn)行黑暗培養(yǎng)2天，之后在20 °C下每日光照8小時(shí)培養(yǎng)3天，最后在18 °C下每日光照16小時(shí)培養(yǎng)3天，即得栽培種； (3)選取菌絲生長健壯的栽培種接種到液體培養(yǎng)基中制備液體菌種； (4)接種完成后，置于20°C下靜置培養(yǎng)I天，之后在搖床上進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，150r/min、22°C下培養(yǎng)3天，最后在20 V下、I lOr/min條件下培養(yǎng)兩天，即得液體菌種； (5)將液體菌種接種到大米培養(yǎng)基中，放入栽培室進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)，栽培35天時(shí)即進(jìn)行采摘，采摘前一周選擇幼嫩的子實(shí)體進(jìn)行菌種分離，利用上述斜面培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，再次進(jìn)行栽培，如此循環(huán)周年使用。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述的斜面培養(yǎng)基配方:180-220g/L小麥汁、葡萄糖18-22g/L、瓊脂18_22g/L、硫酸鎂0.5-1.5g/L、磷酸二氫鉀l_3g/L、維生素B 0.05-0.15g/L、蝦米粉3-7g/L、魚粉3-7g/L;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁40min，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸餾水定容至100ml，分裝至試管，121°C下滅菌30min，取出擱斜面，冷卻后儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，其特征在于:所述的液體培養(yǎng)基配方:180-220g/L小麥汁、葡萄糖18-22g/L、硫酸鎂0.5-1.5g/L、磷酸二氫鉀l-3g/L、維生素B 0.05-0.15g/L、蝦米粉3-7g/L、魚粉3-7g/L;培養(yǎng)基制備:小麥煮汁40min，八層紗布過濾，取汁，加入其余物質(zhì)，蒸餾水定容至100ml，分裝至三角瓶，121 °C下滅菌30min，冷卻備用。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種提高蛹蟲草菌種穩(wěn)定性的培養(yǎng)方法，其特征在于:大米培養(yǎng)基配方為大米25-35g，營養(yǎng)液40-45ml，所述營養(yǎng)液配方:蔗糖18-22g/L、蛋白胨8-12g/L、硫酸鎂0.5-1.5g/L、磷酸二氫鉀l-3g/L，維生素B 0.05-0.15g/L、魚粉3_7g/L、蝦米粉3_7g/L0
【文檔編號】A01G1/04GK105875198SQ201610275399
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月29日
【發(fā)明人】高益槐, 王 忠, 李菲
【申請人】安發(fā)（福建）生物科技有限公司