專利名稱：一種檢測(cè)頭孢西丁產(chǎn)品中雜質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)頭孢西丁產(chǎn)品中雜質(zhì)的方法，具體涉及一種采用 高效液相色譜檢測(cè)頭孢西丁產(chǎn)品中雜質(zhì)的方法。
頭孢西丁屬于第二代頭孢菌素類藥物，是一種由頭霉素c經(jīng)化學(xué)修飾 衍生而來(lái)的半合成廣譜殺菌藥，其殺菌作用源于能夠抑制細(xì)菌細(xì)胞壁的合 成。相對(duì)于第一代頭孢菌素，頭孢西丁對(duì)第一代頭胞菌素耐藥的多數(shù)革蘭
陰性菌的作用明顯增強(qiáng)，對(duì)厭氧菌有高效；對(duì)多種p-內(nèi)酰胺酶更穩(wěn)定；對(duì) 腎臟的毒性也有所降低。頭孢西丁的化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú)特(見式I所示結(jié)構(gòu))，其 結(jié)構(gòu)中的曱氧基處于"反式"，能阻礙(3-內(nèi)酰胺酶接近)3-內(nèi)酰胺環(huán)，減低 酶對(duì)藥物的親和，從而保護(hù)(3-內(nèi)酰胺環(huán)不被破壞，使其對(duì)多種p-內(nèi)酰胺酶 的穩(wěn)定性比多數(shù)頭孢菌素更強(qiáng)，具有極高的穩(wěn)定性，尤其對(duì)眾多質(zhì)粒或染 色體介導(dǎo)的(3-內(nèi)酰胺酶高度穩(wěn)定，不易被(3-內(nèi)酰胺酶水解。<formula>formula see original document page 4</formula>與其他頭孢菌素相比，頭孢西丁抗菌鐠更廣，更均衡，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性 和陰性、厭氧菌或需氧菌皆有較強(qiáng)活性。其抗菌語(yǔ)較第一代頭孢菌素進(jìn)一 步擴(kuò)大，許多耐第一代頭孢菌素的革蘭陰性菌(如腸桿菌、吲哚陽(yáng)性變形 桿菌等)對(duì)頭孢西丁敏感。頭孢西丁這一對(duì)需氧菌和厭氧菌均具有較強(qiáng)活 性的特性，使其在臨床治療厭氧菌感染或混合感染中可能成為有前途替代 目前聯(lián)合用藥的一種選擇。頭孢西丁的抗菌i普廣、抗菌活性強(qiáng)、毒性低， 深受醫(yī)生和廣大病人的歡迎，具有優(yōu)異的臨床結(jié)果，成功地用于治療革蘭 氏陽(yáng)性、陰性需氧菌和厭氧菌引起的多種感染，其中包括上下呼吸道感染， 泌尿道感染，腹膜炎以及其它腹腔內(nèi)、盆腔內(nèi)感染，婦科感染，骨、關(guān)節(jié)和軟組織感染，敗血癥等。由于頭孢西丁見效快、劑量小、副作用低，臨 床療效顯著，非常值得提倡應(yīng)用。據(jù)報(bào)道，應(yīng)用頭孢西丁治療各種感染，
總有效率為74%。內(nèi)科病人中支氣管炎、肺炎、肺膿腫等呼吸道感染的有 效率為72.6%;急、慢性尿路感染的有效率分別為99.5%和77.8%。化膿 性骨關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、皮下膿腫等的有效率為66.7%。病原菌以革蘭陰性 桿菌為主，治療后細(xì)菌清除率為71.6%;大腸桿菌和肺炎桿菌的清除率分 別為89.6%和65.7%。金葡菌等革蘭陽(yáng)性球菌的清除效果也比較滿意。外 科、泌尿科和婦產(chǎn)科病人中臨床有效率分別為71.6%、 71.0%和85.2%, 3 組病人的總細(xì)菌清除率為75.2%,其中大腸桿菌、肺炎桿菌和沙雷菌屬的 清除率分別為79.2%、 82.1%和60.0%，革蘭陽(yáng)性和陰性球菌的細(xì)菌清除率 為83.3%。文獻(xiàn)資料顯示頭孢西丁對(duì)革蘭陽(yáng)性需氧菌感染的療效與頭孢唑 啉和頭孢孟多相似，對(duì)革蘭陰性需氧菌感染、厭氧菌感染以及厭氧和需氧 混合感染的療效比頭孢噻吩更佳。下呼吸道感染的有效率為80%,其中包 括其他抗生素治療無(wú)效者。由于頭孢西丁對(duì)需氧和厭氧菌(尤其是脆弱擬 桿菌)皆有作用，所以用于治療腹腔內(nèi)和女性生殖道感染的臨床有效率超 過(guò)85%。應(yīng)用頭孢西丁治療免疫缺陷者感染也獲得良好療效，且很少不良 反應(yīng)發(fā)生。
通常，以頭孢噻吩為原料，通過(guò)曱氧基化、去乙?；奔籽貂；?步反應(yīng)合成頭孢西丁鈉。具體來(lái)說(shuō)，首先，在合成7-a-曱氧基-7-[(2,塞吩 基)乙酰氨基]-4-頭孢烷酸環(huán)己胺鹽的過(guò)程中，通過(guò)Williamson反應(yīng)在頭孢 p塞吩主核的7位生成曱氧基；其次，在合成3-羥曱基-7-a-[(2-噻吩基)乙酰 氨基]-4-頭孢烷酸醋酸千星鹽的過(guò)程中，中間體頭孢烷酸環(huán)己胺鹽水解生 成去曱酰氨基西丁，這樣導(dǎo)致終產(chǎn)品中含有去曱酰氨基西丁、 S-3-西丁、 p塞吩內(nèi)酯和西丁內(nèi)酯等幾種主要雜質(zhì)，這些雜質(zhì)在制劑使用過(guò)程中易導(dǎo)致 過(guò)敏等不良反應(yīng)，因此在生產(chǎn)過(guò)程中控制這四種雜質(zhì)的含量是非常重要 的?，F(xiàn)有的檢測(cè)方法多采用自身對(duì)照法測(cè)定有關(guān)物質(zhì)，僅對(duì)單個(gè)雜質(zhì)或總 雜質(zhì)的含量進(jìn)行測(cè)定，而不能同時(shí)對(duì)產(chǎn)品中的四種雜質(zhì)加以區(qū)分并分別進(jìn) 行定量研究。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的目的是提供一種能夠同時(shí)有效定量檢測(cè)頭孢西丁產(chǎn)品 中四種雜質(zhì)去曱酰氨基西丁、 S-3-西丁、噻吩內(nèi)酯和西丁內(nèi)酯的方法。用于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述技術(shù)目的的技術(shù)方案如下
一種釆用高效液相色譜4全測(cè)頭孢西丁產(chǎn)品中雜質(zhì)的方法，該方法包括 采用反相十八烷基鍵合相硅膠色譜柱，以用磷酸調(diào)節(jié)pH為3.5的0.7%(重 量/體積)磷酸氛二鉀水溶液作為流動(dòng)相A,乙腈作為流動(dòng)相B組成混合流 動(dòng)相，按照以下條件進(jìn)行梯度洗脫
0至5分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比為95: 5;
5至15分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由95: 5勻速變化至70:
30; 30: 15: 95:
15至35分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由70: 30勻速變化至 70;
35至45分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由30: 70勻速變化至 85;
45至60分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由15: 85勻速變化至
在上述方法中，高效液相色譜法優(yōu)選采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為 254nm。反相十八烷基鍵合相硅膠色譜柱優(yōu)選為YWG-C12H25色譜柱?；?合流動(dòng)相的流速可以為0.8ml/min。
上述方法包括分別將已知量的頭孢西丁產(chǎn)品，以及已知量的去甲酰氨 基西丁、 S-3-西丁、噻吩內(nèi)酯和西丁內(nèi)酯的混合物進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)， 并將頭孢西丁產(chǎn)品的高效液相圖譜與去曱酰氨基西丁、 S-3-西丁、噻吩內(nèi) 酯和西丁內(nèi)酯的混合物的高效液相圖譜進(jìn)行比較。具體來(lái)說(shuō)，上述方法包
括分別將已知量的頭孢西丁產(chǎn)品，以及已知量的去曱酰氨基西丁、 S-3-西 丁、漆吩內(nèi)酯和西丁內(nèi)酯的混合物進(jìn)行高效液相色鐠檢測(cè)，并將頭孢西丁 產(chǎn)品的高效液相圖譜與去曱酰氨基西丁、 S-3-西丁、 p塞吩內(nèi)酯和西丁內(nèi)酯 的混合物的高效液相圖譜中對(duì)應(yīng)的峰進(jìn)行峰面積比較。其中，優(yōu)選地，已 知量的去曱酰氨基西丁、 S-3-西丁、噻吩內(nèi)酯或西丁內(nèi)酯與已知量的頭孢 西丁產(chǎn)品的質(zhì)量之比均小于0.25%。
該檢測(cè)方法經(jīng)過(guò)方法學(xué)^瞼證，樣品對(duì)雜質(zhì)測(cè)定無(wú)干擾，各雜質(zhì)在測(cè)定 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回收率符合含量測(cè)定的要求，結(jié)果見表l。表1方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果
雜質(zhì)種類 線性方程
曱酰胺西丁 Y= 1257x-1428.4
5隱3-西丁 Y= 1467x-1598.5
p羞吩內(nèi)酯 Y = 657.1x-798.1
西丁內(nèi)酉旨 Y = 496.7x-491.2
相關(guān)系數(shù)回收率RSD
0.9998101.51.21
0.9999100.21.32
0.9998100.50.87
0.999699.60.94
本發(fā)明的有益效果在于完善了頭孢西丁產(chǎn)品，例如注射用頭孢西丁鈉 的雜質(zhì)檢測(cè)方法，針對(duì)頭孢西丁中四種明確的雜質(zhì)同時(shí)進(jìn)行了定量檢測(cè)。 該方法簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)，能夠更有效地用于控制產(chǎn)品的質(zhì)量，減少不良反 應(yīng)的發(fā)生，確保人體用藥的安全。


以下，結(jié)合附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施例，其中 圖1為供試品溶液的高效液相色譜圖； 圖2為對(duì)照品溶液的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步i兌明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例4又用于 說(shuō)明本發(fā)明，而不用于限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1
采用反相高效液相色鐠法，通過(guò)不同極性的混合溶劑進(jìn)行梯度洗脫， 于紫外254nm處測(cè)定雜質(zhì)的吸收峰，并利用已知的雜質(zhì)對(duì)照品，計(jì)算出雜 質(zhì)的含量。
(1)色譜條件
色譜柱YWG-C12H25柱(廠家為天津試劑二廠)； 儀器島津10A高效液相色譜儀LC-10AT溶劑輸送泵，SPD-10AV 紫外檢測(cè)器，浙江大學(xué)2010色譜工作站；
試劑乙腈(色譜純)、磷酸二氫鉀(A.R.)、磷酸(A.R.);
流動(dòng)相A: 0.7%(重量/體積)磷酸氫二鉀溶液，用磷酸調(diào)節(jié)pH為3.5;
流動(dòng)相B:乙腈；按照下表所列梯度進(jìn)行洗脫
表2梯度洗脫禾呈序 時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相A%(體積/體積)流動(dòng)相B% (體積/體積)
0-5 95 5
5-15 95-70 5-30
15-35 70-30 30-70
35-45 30-15 70-85
45-60 15-95 85-5
(2)測(cè)定法精密稱取適量頭孢西丁產(chǎn)品，加起始流動(dòng)相A制成每 lml含頭孢西丁 5mg的溶液，作為供試品溶液；分別精密量取適量已知對(duì) 照雜質(zhì)甲酰胺西丁、 S-3-西丁、 p塞吩內(nèi)酯、西丁內(nèi)酯，分別加上起始流動(dòng) 相A制成每lml含甲酰胺西丁、 S-3-西丁、噻吩內(nèi)酯、西丁內(nèi)酯各12.5(ag 的溶液，作為對(duì)照品溶液。按照上述色譜條件操作，精密量取供試品溶液 與對(duì)照溶液各20(^1分別注入液相色譜儀，按照上述梯度洗脫分別進(jìn)行操: 作。供試品溶液的色語(yǔ)圖如圖1所示，其中各雜質(zhì)峰能夠完全分離，按保 留時(shí)間，依次為曱酰胺西丁、 S-3-西丁、瘞吩內(nèi)酯、西丁內(nèi)酯等的雜質(zhì)峰， 供試樣品的各雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液中相對(duì)應(yīng)的雜質(zhì)峰面積(即各 雜質(zhì)的質(zhì)量不得大于頭孢西丁產(chǎn)品重量的0.25%),參見圖2。
分別取?？谑兄扑帍S有限公司生產(chǎn)的批號(hào)為081101、 081102、 081103 注射用頭孢西丁鈉，按照上述^r測(cè)方法測(cè)定有關(guān)雜質(zhì)，測(cè)定結(jié)果如表3所 示。
表3不同批次的雜質(zhì)檢測(cè)結(jié)果
批號(hào)曱酰胺西?。?-3-西?。塞0分內(nèi)酯％西丁內(nèi)酯％
(重量)(重量)(重量)(重量)
0811010.16%0.12%0.08%0.02%
0811020.15%0.12%0.04%0.03%
0811030.16%0.15%0.07%0.03%
權(quán)利要求
1.一種采用高效液相色譜檢測(cè)頭孢西丁產(chǎn)品中雜質(zhì)的方法，該方法包括采用反相十八烷基鍵合相硅膠色譜柱，以用磷酸調(diào)節(jié)pH為3.5的0.7％(重量/體積)磷酸氫二鉀水溶液作為流動(dòng)相A，乙腈作為流動(dòng)相B組成混合流動(dòng)相，按照以下條件進(jìn)行梯度洗脫0至5分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比為95∶5；5至15分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由95∶5勻速變化至70∶30；15至35分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由70∶30勻速變化至30∶70；35至45分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由30∶70勻速變化至15∶85；45至60分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由15∶85勻速變化至95∶5。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色鐠法采 用紫外纟全測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述反相十八烷基 鍵合相硅膠色譜柱為YWG-C12H25色鐠柱。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述混合 流動(dòng)相的流速為0.8ml/min。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法 包括分別將已知量的頭孢西丁產(chǎn)品，以及已知量的去曱酰氨基西丁、 S-3-西丁、噻吩內(nèi)酯和西丁內(nèi)酯的混合物進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，并將頭孢西 丁產(chǎn)品的高效液相圖譜與去甲酰氨基西丁、 5-3-西丁、瘞吩內(nèi)酯和西丁內(nèi) 酯的混合物的高效液相圖譜進(jìn)行比較。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法 包括分別將已知量的頭孢西丁產(chǎn)品，以及已知量的去曱酰氨基西丁、 西丁、 p塞吩內(nèi)酯和西丁內(nèi)酯的混合物進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，并將頭孢西 丁產(chǎn)品的高效液相圖譜與去曱酰氨基西丁、 5-3-西丁、噻吩內(nèi)酯和西丁內(nèi) 酯的混合物的高效液相圖i普中對(duì)應(yīng)的峰進(jìn)行峰面積比較。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述已知量的去曱酰氨基西丁、 5-3-西丁、噻吩內(nèi)酯或西丁內(nèi)酯與已知量的頭孢西丁產(chǎn)品的 質(zhì)量之比均小于0.25%。
全文摘要
本發(fā)明提供一種檢測(cè)頭孢西丁產(chǎn)品中雜質(zhì)的方法，該方法采用高效液相色譜法，其中包括采用反相十八烷基鍵合相硅膠色譜柱，以用磷酸調(diào)節(jié)pH為3.5的0.7％(重量/體積)磷酸氫二鉀水溶液作為流動(dòng)相A，乙腈作為流動(dòng)相B組成混合流動(dòng)相，按照以下條件進(jìn)行梯度洗脫0至5分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比為95∶5；5至15分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由95∶5勻速變化至70∶30；15至35分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由70∶30勻速變化至30∶70；35至45分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由30∶70勻速變化至15∶85；45至60分鐘流動(dòng)相A與流動(dòng)相B的體積比由15∶85勻速變化至95∶5。該方法對(duì)頭孢西丁中四種雜質(zhì)分別進(jìn)行定量檢測(cè)，簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)。
文檔編號(hào)G01N30/00GK101556262SQ200910137569
公開日2009年10月14日 申請(qǐng)日期2009年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月14日
發(fā)明者張志蘭, 曾袆華, 捷 李 申請(qǐng)人:?？谑兄扑帍S有限公司