一種通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，包括以下步驟：（1）以紅霉素生產(chǎn)菌為出發(fā)菌株，將紅霉素生產(chǎn)菌在斜面培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)6-7天。（2）預(yù)培養(yǎng)后的紅霉素生產(chǎn)菌進(jìn)行紫外線誘變：用15W功率的紫外燈管和固定距離為20cm的條件下照射2分鐘進(jìn)行誘變，誘變后立即涂培養(yǎng)基平板。（3）誘變后活菌落進(jìn)行離子束輻照誘變：誘變溫度為25℃，誘變劑量為50Gy，誘變后再經(jīng)培養(yǎng)基平板初篩和搖瓶發(fā)酵方法復(fù)篩，所得活菌落即為高產(chǎn)的突變紅霉素生產(chǎn)菌。通過本方法，得到高產(chǎn)的突變紅霉素生產(chǎn)菌，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，誘變處理后的突變紅霉素生產(chǎn)菌抗生素產(chǎn)量得到提高，100L發(fā)酵罐放罐效價(jià)達(dá)到15600u/ml，發(fā)酵液中A組分含量由原來的72%提高到85%，B組分含量由原來的2.7%降低到1.1%，為發(fā)酵液的后續(xù)處理帶來了極大方便，產(chǎn)品質(zhì)量和純度得到提高，降低了生產(chǎn)成本。
【專利說明】一種通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，屬于生物工程領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]紅霉素屬大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，具有廣譜抗菌作用。對(duì)G+菌有強(qiáng)大抗菌作用，尤其對(duì)耐青霉素的金葡菌有效。對(duì)立克次體、支原體、螺旋體有較強(qiáng)的抑制作用。對(duì)阿米巴原蟲、滴蟲也有抑制作用。
[0003]紅霉素是白色或類白色的結(jié)晶性粉末，微有吸濕性，味苦，易溶于醇類、丙酮、氯仿、酯類(如乙酯、丁酯、戊酯等)，微溶于乙醚。紅霉素在水中極微溶解，其溶解度隨溫度的升聞而減小，以55°C時(shí)為最小。
[0004]紅霉素是從紅霉素鏈霉菌的培養(yǎng)液中分離出來的一種堿性抗生素，我國(guó)于1957年試制成功后并逐步投入生產(chǎn)。后來從發(fā)酵液中分離出來紅霉素A、B、C、D、E等組分，其中以紅霉素A為主要組分， 抗菌活性強(qiáng)、且毒副作用較??；其它組分抗菌活性弱，而毒副作用又較A大。
[0005]紅霉素B的理化性狀與紅霉素A很相似，溶點(diǎn)為198°C，紫外吸收峰在286nm (甲醇)處。比較難溶于水，極易溶于乙醚、丙酮、氯仿和乙酸乙酯，并且和酸類結(jié)合成的鹽易溶于水。
[0006]通常所稱的紅霉素即指紅霉素A及其鹽類。但是在紅霉素生產(chǎn)中，發(fā)酵液中同時(shí)含有紅霉素A、B、C、D、E等組分，這為后續(xù)的提純處理增加了困難，而且紅霉素B的含量控制是產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標(biāo)。國(guó)內(nèi)外抗生素工業(yè)發(fā)展歷史證明，菌種的不斷更新?lián)Q代，是生產(chǎn)水平大幅度提高，是抗生素工業(yè)迅速發(fā)展的關(guān)鍵之一。由于新的高產(chǎn)菌株不斷用于生產(chǎn)，所以青霉素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、卡那霉素、慶大霉素、頭孢菌素C等產(chǎn)品的發(fā)酵單位，都比他們的原始菌種提高幾十倍、幾百倍、甚至幾千倍，與此同時(shí)，菌種選育在提高產(chǎn)品質(zhì)量、擴(kuò)大品種、改善工藝條件等方面也發(fā)揮了重大作用。菌種選育是抗生素工業(yè)生產(chǎn)及科研工作的主要環(huán)節(jié)，既是關(guān)鍵又是基礎(chǔ)。
[0007]根據(jù)誘發(fā)突變機(jī)理，利用物理或化學(xué)的因素處理微生物群體細(xì)胞，使其中部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，從而引起微生物的性狀變異。然后從群體中挑選出少數(shù)具有優(yōu)良性狀的菌株。經(jīng)特性考察和復(fù)試用于生產(chǎn)，這個(gè)過程稱為誘變育種。誘變育種的主要環(huán)節(jié)是:以合適的誘變劑處理大量而分散的微生物細(xì)胞(一般處理孢子懸液)，在引起絕大多數(shù)細(xì)胞致死的同時(shí)，使變異率大大提高，然后通過有效的篩選方法淘汰負(fù)變菌株，留用變異幅度最大的正變菌株。目前誘變育種是提高菌種生產(chǎn)能力、提高產(chǎn)品質(zhì)量、擴(kuò)大品種和簡(jiǎn)化工藝的主要育種方法。
[0008]紅霉素是紅霉素生產(chǎn)菌在發(fā)酵過程中產(chǎn)生的一種次級(jí)代謝產(chǎn)物，隨著發(fā)酵周期的延長(zhǎng)，紅霉素在發(fā)酵液中含量逐步增多，與此同時(shí)，其他次級(jí)代謝產(chǎn)物也在不斷的積累，這些都使發(fā)酵液中的環(huán)境越來越不利于菌體產(chǎn)素，對(duì)產(chǎn)量的提高有著較大的制約。紅霉素生產(chǎn)菌經(jīng)過誘變后，利用含有紅霉素的培養(yǎng)基篩選，篩選出的菌體對(duì)自身所產(chǎn)紅霉素的耐受程度提高，從而使菌體的產(chǎn)素能力以及產(chǎn)量得到提高。誘變后的菌株用于生產(chǎn)，發(fā)酵液中A組分含量提高，B組分含量降低，為發(fā)酵液的后續(xù)處理帶來了極大的方便，降低了雜質(zhì)含量，使廣品質(zhì)量得到提聞。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 目前，提高紅霉素生產(chǎn)菌產(chǎn)紅霉素的能力，仍以誘變育種為主要手段。針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法。
[0010]本發(fā)明的一種通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其包括以下步驟:
(1)將紅霉素生產(chǎn)菌在斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)6-7天后獲得新鮮成熟孢子；
(2)將紅霉素生產(chǎn)菌新鮮成熟斜面制成孢子懸液，孢子量在IX IO6個(gè)/mL，取5mL孢子懸液移至培養(yǎng)皿中，于15W紫外線燈管和固定距離20cm照射2分鐘，誘變后進(jìn)行梯度稀釋立即涂培養(yǎng)基平板；
(3)挑取步驟(2)誘變后活菌落進(jìn)行離子束輻照誘變:誘變溫度為25°C，誘變劑量為50Gy，誘變后進(jìn)行梯度稀釋涂培養(yǎng)基平板初篩。挑單菌落至斜面培養(yǎng)基，34 土 1°C，培養(yǎng)6_7天，再經(jīng)搖瓶發(fā)酵方法進(jìn)行復(fù)篩，所得突變菌即為高產(chǎn)紅霉素生產(chǎn)菌。
[0011](4)步驟(1)或步驟(3)斜面養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g,氯化鈉3g，瓊脂粉20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g。步驟(2)的平板培養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品15g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g。
[0012](5)步驟(3)平板培養(yǎng)基配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g。
[0013](6)步驟(3)的搖瓶發(fā)酵是將紅霉素生產(chǎn)菌在種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)成熟的種子液接入發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)基。
[0014](7)步驟(3)種子培養(yǎng)基配方為:玉米淀粉28g，糊精7g，中溫黃豆餅粉12.6g，硫酸銨1.2g,硝酸銨1.2g,氯化鈉3g,玉米楽；7.5g,分析純碳酸韓6g,豆油2ml,加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.0。種子液培養(yǎng)條件為:34± 1°C，220轉(zhuǎn)/分，振蕩培養(yǎng)42_46h。
[0015](8)搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:玉米淀粉18g，糊精24g，中溫黃豆餅粉18g，硫酸銨2g，輕質(zhì)碳酸鈣6g，豆油4ml，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.0。
[0016](9)按照搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基配方配制搖瓶發(fā)酵液50mL，放入500mL帶擋板的三角瓶中。
[0017](10)將培養(yǎng)成熟的紅霉素生產(chǎn)菌種子液5mL接入發(fā)酵搖瓶中，34土 TC，260轉(zhuǎn)/分，振蕩培養(yǎng)7天左右，得紅霉素，利用HPLC測(cè)定效價(jià)。
[0018](11)發(fā)酵罐培養(yǎng)基配方為:玉米淀粉1.5kg，糊精0.25kg，中溫黃豆餅粉1.29kg，硫酸銨0.1kg,氯化鈉0.15kg,玉米衆(zhòng)0.85kg,輕質(zhì)碳酸韓0.3kg,豆油350ml,加水定容至60L，調(diào) pH 值至 7.0。
[0019](12)將培養(yǎng)成熟的紅霉素生產(chǎn)菌種子液按照10% (V/V)的接種量接入100L發(fā)酵罐中，34± I °C，培養(yǎng)7天左右，得紅霉素，利用HPLC測(cè)定效價(jià)。
[0020]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明通過兩種誘變、兩次篩選，得到對(duì)較高濃度紅霉素充分耐受的突變紅霉素生產(chǎn)菌。提高了紅霉素生產(chǎn)菌對(duì)自身所產(chǎn)抗生素的耐受性，使菌體穩(wěn)定產(chǎn)素期延長(zhǎng)，從而使菌體的產(chǎn)素能力以及產(chǎn)量得到提高。誘變后的菌株用于生產(chǎn)，發(fā)酵液中A組分提高，B組分降低，為發(fā)酵液的后續(xù)處理帶來了極大的方便，更重要的是降低了雜質(zhì)含量，使產(chǎn)品質(zhì)量得到提高，IOOL發(fā)酵罐放罐效價(jià)達(dá)到15600 u/ml，發(fā)酵液中A組分含量由原來的72%提高到85%，B組分含量由原來的2.7%降低到1.1%，為發(fā)酵液的后續(xù)處理帶來了極大方便，產(chǎn)品質(zhì)量和純度得到提高，降低了生產(chǎn)成本。
【具體實(shí)施方式】
[0021]普通紅霉素生產(chǎn)菌在發(fā)酵過程中，隨著發(fā)酵周期的延長(zhǎng)，次級(jí)代謝產(chǎn)物不斷的積累，發(fā)酵液中的環(huán)境變得不利于紅霉素生產(chǎn)菌的生長(zhǎng)和產(chǎn)素，穩(wěn)定產(chǎn)素的時(shí)間相對(duì)較短。將紅霉素生產(chǎn)菌誘變后會(huì)形成表型各異的紅霉素生產(chǎn)菌突變庫，其中很可能含有少量對(duì)自身所產(chǎn)抗生素耐受者，關(guān)鍵是將這部分在突變庫中占極少比例的自身所產(chǎn)抗生素耐受型突變紅霉素生產(chǎn)菌從大量無義突變中篩選出來，如果自身所產(chǎn)抗生素耐受型突變紅霉素生產(chǎn)菌確實(shí)在突變庫中存在，將突變庫接入高濃度紅霉素培養(yǎng)基后，自身所產(chǎn)抗生素耐受型突變紅霉素生產(chǎn)菌就會(huì)生長(zhǎng)，而大量無義突變紅霉素生產(chǎn)菌則死亡，從而通過誘變及篩選得到自身所產(chǎn)抗生素耐受型突變紅霉素生產(chǎn)菌。
[0022]以下通過實(shí)施例進(jìn)一步對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述:
實(shí)施例1:
第一次誘變與篩選:將紅霉素生產(chǎn)菌在斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)6-7天后獲得新鮮成熟孢子；利用紅霉素生產(chǎn)菌新鮮成熟斜面制IOml孢子懸液，孢子量在I X IO6個(gè)/mL，分成兩份。
[0023]取一份(作為對(duì)照)涂 平板培養(yǎng)基，平板培養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品15g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至
7.2，分析純碳酸鈣2.5g。培養(yǎng)6-7天，顯示紅霉素生產(chǎn)菌未生長(zhǎng)。
[0024]另取一份(作為誘變份)孢子懸液移至培養(yǎng)皿中，于15W紫外線燈管和固定距離20cm照射2分鐘，誘變后進(jìn)行梯度稀釋立即涂培養(yǎng)基平板，平板培養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品15g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g。在平板上生長(zhǎng)的菌落即為初次誘變成功的能耐受1.5%紅霉素的突變紅霉素生產(chǎn)菌。
[0025]第二次誘變與篩選:對(duì)第一次誘變成功的能耐受1.5%紅霉素的初次突變紅霉素生產(chǎn)菌進(jìn)行離子束輻照誘變。將初次突變紅霉素生產(chǎn)菌在斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)6-7天后獲得新鮮成熟孢子；利用初次突變紅霉素生產(chǎn)菌新鮮成熟斜面制IOml孢子懸液，孢子量在IX IO6個(gè)/mL，分成兩份。取一份(作為對(duì)照)涂平板培養(yǎng)基，平板培養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g,硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g。培養(yǎng)6_7天，顯示紅霉素生產(chǎn)菌未生長(zhǎng)。一份(作為誘變份)進(jìn)行離子束輻照誘變，誘變溫度為25°C，誘變劑量為50Gy。誘變后進(jìn)行梯度稀釋立即涂培養(yǎng)基平板，平板培養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g。在平板上生長(zhǎng)的菌落即為再次誘變成功的能耐受2.0%紅霉素的突變紅霉素生產(chǎn)菌。將第二次篩選出的耐自身所產(chǎn)抗生素的紅霉素生產(chǎn)菌進(jìn)行遺傳穩(wěn)定性試驗(yàn)，共轉(zhuǎn)接10代，證明其是否是遺傳穩(wěn)定的耐自身所產(chǎn)抗生素的突變紅霉素生產(chǎn)菌。將第二次篩選出的耐自身所產(chǎn)抗生素的紅霉素生產(chǎn)菌和初次突變紅霉素生產(chǎn)菌分別接入種子瓶培養(yǎng)基，種子培養(yǎng)基配方為:玉米淀粉28g，糊精7g，中溫黃豆餅粉12.6g，硫酸銨1.2g，硝酸銨1.2g，氯化鈉3g,玉米衆(zhòng)7.5g,分析純碳酸Ii6g,豆油2ml，加水定容至1000ml,調(diào)pH值至7.0。34±1°C,220轉(zhuǎn)/分，振蕩培養(yǎng)42-46h。按照搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基配方配制搖瓶發(fā)酵液50mL，放入500mL帶擋板的三角瓶中。將第二次篩選出的耐自身所產(chǎn)抗生素的紅霉素生產(chǎn)菌和初次突變紅霉素生產(chǎn)菌在種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)成熟的種子液接入發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)基，搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:玉米淀粉18g，糊精24g，中溫黃豆餅粉18g，硫酸銨2g，輕質(zhì)碳酸鈣6g，豆油4ml，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.0。34± 1°C，260轉(zhuǎn)/分，振蕩培養(yǎng)5天左右，顯示初次突變紅霉素生產(chǎn)菌未能生長(zhǎng)，菌絲斷裂嚴(yán)重，自溶，第二次篩選出的耐自身所產(chǎn)抗生素紅霉素生產(chǎn)菌生長(zhǎng)。
[0026]實(shí)施例2: 將第二次篩選出的耐自身所產(chǎn)抗生素的紅霉素生產(chǎn)菌的種子液，接入發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)基中，34 ± I °C，260轉(zhuǎn)/分，振蕩培養(yǎng)7天左右，紅霉素含量達(dá)到8200u/ml。
[0027]普通的紅霉素生產(chǎn)菌用此方法，紅霉素含量只達(dá)到5600u/ml。
[0028]實(shí)施例3:
將第二次篩選出的耐自身所產(chǎn)抗生素的紅霉素生產(chǎn)菌的種子液，接入含100L發(fā)酵罐中培養(yǎng)，34 ± I °C，7天左右，放罐效價(jià)可達(dá)到15600u/ml，發(fā)酵液中A組分含量由原來的72%提高到85%，B組分含量由原來的2.7%降低到1.1%。
[0029]普通的紅霉素生產(chǎn)菌用此方法，紅霉素含量只達(dá)到8900u/ml。
[0030]最后，還需注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的具體實(shí)施例子。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例子，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其特征依次包括以下步驟: (1)將紅霉素生產(chǎn)菌在斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，34土 1°C，培養(yǎng)6-7天后獲得新鮮成熟孢子； (2)將紅霉素生產(chǎn)菌新鮮成熟斜面制成孢子懸液，孢子量在IX IO6個(gè)/mL，取5mL孢子懸液移至培養(yǎng)皿中，于15W紫外線燈管和固定距離20cm照射2分鐘，誘變后進(jìn)行梯度稀釋立即涂培養(yǎng)基平板； (3)挑取步驟(2)誘變后活菌落進(jìn)行離子束輻照誘變:誘變溫度為25°C，誘變劑量為50Gy，誘變后進(jìn)行梯度稀釋涂培養(yǎng)基平板初篩；挑單菌落至斜面培養(yǎng)基，34土 1°C，培養(yǎng)6_7天，再經(jīng)搖瓶發(fā)酵方法進(jìn)行復(fù)篩，所得突變菌即為高產(chǎn)的紅霉素生產(chǎn)菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其特征在于:步驟(1)或步驟(3)斜面養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g ;步驟(2)的平板培養(yǎng)基的配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品15g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其特征在于:步驟(3)是將步驟(2)誘變后的活菌落在斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)6-7天后制成孢子懸液，進(jìn)行離子束輻照誘變。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其特征在于:步驟(3)平板培養(yǎng)基配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g ;搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基配方為:玉米淀粉18g，糊精24g，中溫黃豆餅粉18g，硫酸銨2g，輕質(zhì)碳酸鈣6g，豆油4ml，紅霉素標(biāo)準(zhǔn)品20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其特征在于:其所用培養(yǎng)基配方為:可溶性淀粉6g，玉米漿7.2g，硫酸銨3g，氯化鈉3g，瓊脂粉20g，加水定容至1000ml，調(diào)pH值至7.2，分析純碳酸鈣2.5g。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其特征在于:步驟(3)的搖瓶發(fā)酵是將紅霉素生產(chǎn)菌在種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)成熟的種子液接入發(fā)酵搖瓶培養(yǎng)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其特征在于:種子培養(yǎng)基配方為:玉米淀粉28g，糊精7g，中溫黃豆餅粉12.6g，硫酸銨1.2g，硝酸銨1.2g,氯化鈉3g,玉米衆(zhòng)7.5g,分析純碳酸|丐6g,豆油2ml,加水定容至1000ml,調(diào)pH值至7.0 ;種子液培養(yǎng)條件為:34±1°C，220轉(zhuǎn)/分，振蕩培養(yǎng)42_46h。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其特征在于:按照搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基配方配制搖瓶發(fā)酵液50mL，放入500mL帶擋板的三角瓶中。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的通過紅霉素生產(chǎn)菌誘變提高抗生素產(chǎn)量的方法，其特征在于:將培養(yǎng)成熟的紅霉素生產(chǎn)菌種子液5mL接入發(fā)酵搖瓶中，34±1°C,260轉(zhuǎn)/分,振蕩培養(yǎng)7天左右，得紅霉素，測(cè)定效價(jià)。
【文檔編號(hào)】C12N15/01GK103667248SQ201210363098
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2012年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2012年9月26日
【發(fā)明者】張麗麗, 于新令, 王鳳灘 申請(qǐng)人:山東方明藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司