脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的引物和探針及試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及基因檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的引物和探針及試劑盒。所述試劑盒包括脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的引物和探針，所述引物包括9對(duì)引物，所述探針包括15條探針；本發(fā)明的脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的引物和探針及試劑盒利用熒光定量PCR技術(shù)，增加現(xiàn)有專利技術(shù)中所沒有的常見突變位點(diǎn)的檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)一次性特異的檢測(cè)16種由于SMN基因缺失、轉(zhuǎn)換與點(diǎn)突變導(dǎo)致的SMA患者并實(shí)現(xiàn)對(duì)SMA患者的分型。
【專利說(shuō)明】脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的引物和探針及試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及基因檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的引 物和探針及試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 脊髓性肌萎縮癥（spinal muscular atrophy，SM)是一種較常見的遺傳性疾病， 兒童起病的SM呈常染色體隱性遺傳。攜帶者發(fā)生率為1/35-1/80,最近報(bào)道中國(guó)人群SM 致病基因的攜帶者頻率為1/42,群體發(fā)病率為1/5000-1/10000活產(chǎn)嬰兒，居兒童致死性常 染色體遺傳病的第二位，僅次于囊性纖維變性。脊髓性肌萎縮癥國(guó)際協(xié)會(huì)根據(jù)SM患者的 發(fā)病年齡和臨床表現(xiàn)分為4型：1型（嚴(yán)重型）、11型（中間型）JII型（輕型）和IV型（成 人型）。
[0003] 目前，臨床上常用于輔助脊髓性肌萎縮癥檢測(cè)的方法主要有肌電圖、肌肉活檢組 織化學(xué)染色及血清肌酸磷酸激酶（CPK)檢測(cè)。但SM的臨床變異性大，肌電圖在兒童患者 不易配合檢查，肌肉活檢為有創(chuàng)性檢查，令家長(zhǎng)難以接受，且需冰凍切片組化染色的條件， 更難以在臨床上廣泛開展，即使可以推行，肌電圖和肌肉活檢亦均缺乏特異性，因此本病 極易誤診。為了能夠更準(zhǔn)確地對(duì)患者進(jìn)行確診，以防止重癥患者的出生，就需要對(duì)患者的 基因型進(jìn)行檢測(cè)。發(fā)展至今，在國(guó)內(nèi)外用于SM基因診斷的主要方法有：①連鎖分析；② 聚合酶鏈反應(yīng)單鏈構(gòu)象多態(tài)性（PCR-SSCP)技術(shù)；③錯(cuò)配聚合酶鏈反應(yīng)一限制性片段長(zhǎng)度 多態(tài)性（PCR-RFLP)分析；④變性高效液相分析技術(shù)（DHPLC);⑤多重連接探針依賴性擴(kuò) 增技術(shù)（MLPA)⑥實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)技術(shù)；⑦高分辨率溶解曲線（Hight Resolution Melting Analysis，HRMA);⑧數(shù)字 PCR 技術(shù)（Digital PCR)。現(xiàn)有產(chǎn)品及專利 見表1。
[0004] 表 1
[0005]

【權(quán)利要求】
1. 脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的引物和探針，其特征在于，所述引物包括9對(duì) 引物，所述探針包括15條探針； 所述9對(duì)引物為：
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的引物和探針，其特征在 于，所述15條探針的5'端和3'端分別設(shè)有熒光基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)，具體如下：
3. 脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括PCR反 應(yīng)液，所述PCR反應(yīng)液中包含權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)所述的脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢 測(cè)的引物和探針。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的脊髓性肌萎縮癥基因熒光定量檢測(cè)的試劑盒，其特征在于， 所述PCR反應(yīng)液包括如下含量的各組分：

【文檔編號(hào)】C12N15/11GK104480206SQ201410767333
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月12日
【發(fā)明者】劉晶晶, 李長(zhǎng)遠(yuǎn), 向筑 申請(qǐng)人:亞能生物技術(shù)（深圳）有限公司