本發(fā)明涉及飼料添加劑技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑。
背景技術(shù)：
隨著人民生活水平的不斷提高，人們對于安全、綠色、健康農(nóng)產(chǎn)品的需求，也是與日俱增。因此如何在養(yǎng)殖中使用安全、無毒、綠色、環(huán)保的添加劑，成為時下科研院校研究的熱點問題之一。其中，中草藥添加劑的使用已經(jīng)被很多業(yè)內(nèi)人士所公認。中草藥飼料添加劑具有低毒性、無抗藥性、多功能性等優(yōu)點，已在畜牧生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。而微生物在中草藥發(fā)酵過程中發(fā)揮著強大的分解轉(zhuǎn)化能力，并能產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物，可大幅提高中草藥中活性成分的含量，提高療效，降低毒副作用，這對于注重養(yǎng)殖成本的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)顯得尤為重要。
石斑魚，屬鱸形目，體長橢圓形稍側(cè)扁，體色變異甚多，常呈褐色或紅色，并具條紋和斑點，為暖水性的大中型海產(chǎn)魚類。石斑魚可分為很多種類：海紅斑，東星斑，西星斑，泰星斑，豹星斑，老鼠斑，老虎斑，青斑等。目前人工養(yǎng)殖的主要是青斑、老虎斑。石斑魚因其營養(yǎng)豐富，肉質(zhì)細嫩潔白，類似雞肉，素有“海雞肉”之稱。石斑魚又是一種低脂肪、高蛋白的上等食用魚，被港澳地區(qū)推為中國四大名魚之一，在日本、新加坡、馬來西亞等國家也有巨大的市場潛力，是出口創(chuàng)匯的優(yōu)良品種。由于天然產(chǎn)量的不足，人工養(yǎng)殖石斑魚已成為滿足石斑魚市場需求的最主要的途徑。但是其養(yǎng)殖過程中所存在的抗生素使用過量、養(yǎng)殖風(fēng)險大等弊端成為制約其發(fā)展的瓶頸因素。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種綠色、環(huán)保、高效的石斑魚發(fā)酵中藥免疫增強劑。
本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：
一種石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑，其特征在于復(fù)方中草藥由以下質(zhì)量比的中草藥組成：山茶籽15～35份、黃芪20～35份、山楂10～25份、甘草6～10份、淫羊藿6～8份、生梔子8～15份、白頭翁15～28份、當歸5～7份、黨參3～5份。
本發(fā)明提供一種石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑，所選發(fā)酵劑為黑曲益生菌株(中國普通微生物菌株保藏管理中心，菌種編號CGMCC3.3289)和植物乳桿菌(中國普通微生物菌株保藏管理中心，菌種編號CGMCC1.124)組成的復(fù)合發(fā)酵劑，其中黑曲益生菌株的接種量為2～4％，植物乳桿菌的接種量為3～5％。
本發(fā)明提供一種石斑魚發(fā)酵中草藥免疫增強劑的制備方法，具體包括以下步驟：
(1)復(fù)方中草藥的制備：按照上述配方準確稱量中草藥，將其粉碎至80目，混合均勻，制得復(fù)方中草藥；
(2)中藥水溶性活性物質(zhì)浸提和滅菌：向復(fù)方中草藥粉劑中加入5～10倍的蒸餾水，加入葡萄糖1～2％、酵母膏0.1～0.4％、K2HPO4 0.05～0.2％，調(diào)節(jié)pH至4.5～5.5，升溫至95～100℃浸泡3小時；
(3)好氧發(fā)酵：選用50L液體發(fā)酵罐，裝液量為60～70％，接種黑曲霉益生菌株，接種量為2～4％，控制發(fā)酵溫度30～40℃，轉(zhuǎn)速150～300rpm，通氣量10～20L/min，在此條件下發(fā)酵48～72h；
(4)厭氧發(fā)酵：好氧發(fā)酵結(jié)束后，接種植物乳桿菌，接種量為3～5％，發(fā)酵溫度為35～45℃，發(fā)酵24～48h；
(5)發(fā)酵后處理：發(fā)酵完成后將發(fā)酵液體用1～2倍體積比麩皮吸附，在40～60℃鼓風(fēng)干燥箱中干燥，水分控制在7～10％；
(6)粉碎：將干燥后的產(chǎn)品粉碎過80目篩，即得石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑。
本發(fā)明提供一種石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑，所述石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑產(chǎn)品在水產(chǎn)飼料全價料中所用的質(zhì)量比例為0.2～1.0％；或所述的飼料添加劑在預(yù)混料、濃縮料以全價料中所需的比例添加使用。
本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是：
在發(fā)酵中草藥飼料添加劑制備過程中采用““有氧和厭氧異步發(fā)酵”混菌發(fā)酵工藝，與現(xiàn)有的同類中草藥飼料添加劑產(chǎn)品相比作用效果更顯著；發(fā)酵中草藥飼料添加劑具有中草藥和益生菌的雙重優(yōu)點，可保護石斑魚腸道健康，保持腸道微生態(tài)平衡和最佳免疫狀態(tài)，提高營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收率；刺激石斑魚非特異性免疫機制，增強其免疫應(yīng)答能力；提高養(yǎng)殖收益，降低養(yǎng)殖風(fēng)險。本發(fā)明作為抗生素替代物使用，無耐藥和藥物殘留等問題，且對石斑魚無不良影響，使用安全。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明進一步說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。
實施例1
一種石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑，具體制備步驟如下：
(1)稱量：按照如下配方準確稱量中草藥：山茶籽25份、黃芪20份、山楂10份、甘草7份、淫羊藿6份、生梔子10份、白頭翁20份、當歸5份、黨參5份。
(2)復(fù)方中草藥的制備：將稱量后的中草藥粉碎至80目，混合均勻，制得復(fù)方中草藥；
(3)中藥水溶性活性物質(zhì)浸提和滅菌：向復(fù)方中草藥粉劑中加入8倍的蒸餾水，加入葡萄糖1％、酵母膏0.2％、K2HPO4 0.05％，調(diào)節(jié)pH至5.0，升溫至95～100℃浸泡3小時；
(4)好氧發(fā)酵：選用50L液體發(fā)酵罐，裝液量為60～70％，接種黑曲霉益生菌株，接種量為2％，控制發(fā)酵溫度30℃，轉(zhuǎn)速150～300rpm，通氣量10～20L/min，在此條件下發(fā)酵64；
(5)厭氧發(fā)酵：好氧發(fā)酵結(jié)束后，接種植物乳桿菌，接種量為3％，發(fā)酵溫度為37℃，發(fā)酵32h；
(6)發(fā)酵后處理：發(fā)酵完成后將發(fā)酵液體用1.5倍體積比麩皮吸附，在40～60℃鼓風(fēng)干燥箱中干燥，水分控制在7～10％；
(7)粉碎：將干燥后的產(chǎn)品粉碎過80目篩，即得石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑。
實施例2
一種石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑，具體制備步驟如下：
(1)稱量：按照如下配方準確稱量中草藥：山茶籽20份、黃芪25份、山楂15份、甘草10份、淫羊藿8份、生梔子12份、白頭翁25份、當歸7份、黨參5份。
(2)復(fù)方中草藥的制備：將稱量后的中草藥粉碎至80目，混合均勻，制得復(fù)方中草藥；
(3)中藥水溶性活性物質(zhì)浸提和滅菌：向復(fù)方中草藥粉劑中加入10倍的蒸餾水，加入葡萄糖1.5％、酵母膏0.2％、K2HPO4 0.1％，調(diào)節(jié)pH至5.2，升溫至95～100℃浸泡3小時；
(4)好氧發(fā)酵：選用50L液體發(fā)酵罐，裝液量為60～70％，接種黑曲霉益生菌株，接種量為2％，控制發(fā)酵溫度32℃，轉(zhuǎn)速150～300rpm，通氣量10～20L/min，在此條件下發(fā)酵60
(5)厭氧發(fā)酵：好氧發(fā)酵結(jié)束后，接種植物乳桿菌，接種量為4％，發(fā)酵溫度為35℃，發(fā)酵36h；
(6)發(fā)酵后處理：發(fā)酵完成后將發(fā)酵液體用1.2倍體積比麩皮吸附，在40～60℃鼓風(fēng)干燥箱中干燥，水分控制在7～10％；
(7)粉碎：將干燥后的產(chǎn)品粉碎過80目篩，即得石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑。
實施例3
一種石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑，具體制備步驟如下：
(1)稱量：按照如下配方準確稱量中草藥：山茶籽30份、黃芪20份、山楂15份、甘草10、淫羊藿6、生梔子10、白頭翁15、當歸6、黨參5。
(2)復(fù)方中草藥的制備：將稱量后的中草藥粉碎至80目，混合均勻，制得復(fù)方中草藥；
(3)中藥水溶性活性物質(zhì)浸提和滅菌：向復(fù)方中草藥粉劑中加入6倍的蒸餾水，加入葡萄糖1.2％、酵母膏0.1、K2HPO4 0.15％，調(diào)節(jié)pH至5.0，升溫至95～100℃浸泡3小時；
(4)好氧發(fā)酵：選用50L液體發(fā)酵罐，裝液量為60～70％，接種黑曲霉益生菌株，接種量為2％，控制發(fā)酵溫度30℃，轉(zhuǎn)速150～300rpm，通氣量10～20L/min，在此條件下發(fā)酵70h；
(5)厭氧發(fā)酵：好氧發(fā)酵結(jié)束后，接種植物乳桿菌，接種量為3％，發(fā)酵溫度為37℃，發(fā) 酵26h；
(6)發(fā)酵后處理：發(fā)酵完成后將發(fā)酵液體用2體積比麩皮吸附，在40～60℃鼓風(fēng)干燥箱中干燥，水分控制在7～10％；
(7)粉碎：將干燥后的產(chǎn)品粉碎過80目篩，即得石斑魚用發(fā)酵中草藥免疫增強劑。
為驗證本發(fā)明免疫增強劑的效果，通過以下試驗進行驗證。
試驗條件及管理：選取健康的石斑魚480尾，體重為55±5g，暫養(yǎng)14d后，隨機分為四組，即對照組，試驗1組，試驗2組，試驗3組，每組3個重復(fù)，每組40尾。對照組飼喂基礎(chǔ)飼料；試驗1組飼喂添加實施例1免疫增強劑的基礎(chǔ)飼料，添加量為0.5％；試驗2組飼喂添加有本發(fā)明實施例2免疫增強劑的基礎(chǔ)飼料，添加量為0.5％；試驗3組飼喂添加有本發(fā)明實施例3免疫增強劑的基礎(chǔ)飼料，添加量為0.5％。連續(xù)投喂42天，每天投料3次，投餌率為2％。試驗結(jié)束后，尾靜脈采血，測定血清生化指標，結(jié)果見表1。
試驗期間的水溫在26.5～28.4℃,有循環(huán)濾泵和充氣泵，定期換水和清洗濾棉，維持溶解氧在5.8～7.6mg/L，pH值在6.3～7.8，控制氨(NH3)的濃度小于0.02mg/L,控制亞硝酸鹽(NO2-)的含量小于0.20mg/L。
表1 發(fā)酵中草藥免疫增強劑對石斑魚血清生化指標的影響
由表1可知，發(fā)酵中草藥添加劑組的溶菌酶活力和堿性磷酸酶均高于對照組；發(fā)酵中草藥添加劑組的ALT、AST、GRE的含量均低于對照組?？山档汪~體內(nèi)。說明飼料中添加發(fā)酵中草藥免疫增強劑對谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶的活性有很好的降低誘導(dǎo)作用，還可刺激機體免疫 功能，提高溶菌酶活力，增強石斑魚的免疫力。