本發(fā)明屬于酵素領(lǐng)域，具體涉及一種元寶楓翅果活菌酵素原液的制備方法。
背景技術(shù)：
：元寶楓為槭樹科槭樹屬落葉喬木，因翅果酷似古代元寶而得名，其為單葉、對生，紙質(zhì)、常五裂，在我國分布較廣。研究發(fā)現(xiàn)元寶楓葉中含有糖、氨基酸、蛋白質(zhì)、黃酮、有機(jī)酸、單寧、萜烯等各類化學(xué)物質(zhì)。其中，黃酮類、蛋白質(zhì)、單寧、神經(jīng)酸的應(yīng)用價(jià)值較高，具有預(yù)防冠心病、心絞痛、血液循環(huán)障礙性疾病以及抗病毒、消炎利膽、消除人體自由基等功效。元寶楓翅果種子含油率較高，可以達(dá)到45-48％，而且元寶楓油中富含神經(jīng)酸。神經(jīng)酸又名鯊魚酸，化學(xué)名順-15-二十四碳烯酸，因最早發(fā)現(xiàn)于哺乳動物的神經(jīng)組織，故命名為神經(jīng)酸，是生物膜的重要組成成分，參與生物膜有關(guān)的多種特殊生理功能。元寶楓油脂脂肪酸組成中含有約5-6％的神經(jīng)酸，含神經(jīng)酸的植物在自然界分布較少，國際市場上神經(jīng)酸主要來自于深海魚類，而與深海魚類相比，元寶楓是可持續(xù)利用的神經(jīng)酸資源，神經(jīng)酸已經(jīng)成為各國科學(xué)家一致公認(rèn)的世界上唯一能夠修復(fù)受損神經(jīng)的神奇物質(zhì)。依據(jù)目前的科研研究，神經(jīng)酸具有以下三大功效：其一，神經(jīng)酸是大腦神經(jīng)纖維和神經(jīng)細(xì)胞的核心天然成分：神經(jīng)酸是大腦發(fā)育、維持功能的必須營養(yǎng)物質(zhì)，對促進(jìn)大腦發(fā)育、改善記憶力、提高腦神經(jīng)活躍度，防止腦神經(jīng)的衰老；其二，神經(jīng)酸能完整透過血腦屏障，直接作用于神經(jīng)纖維，讓受損、脫落的神經(jīng)纖維保護(hù)鞘再生，修復(fù)受損的神經(jīng)纖維，并溶解神經(jīng)纖維中堵塞的壞死組織，提高傳導(dǎo)速度和保證信息傳導(dǎo)的完整性，恢復(fù)各種神經(jīng)信息傳到的通道暢通；其三，促使修復(fù)后的神經(jīng)再生，重新產(chǎn)生新的分支和側(cè)芽，并大量增殖分化，數(shù)量不斷增多，恢復(fù)病人在語言、記憶、感覺和肢體等方面的部分或全部功能。所以用元寶楓翅果制成的酵素原液具有很高的保健價(jià)值。酵素現(xiàn)在的定義由中國生物發(fā)酵協(xié)會酵素分會把經(jīng)微生物發(fā)酵得到的具有初始生物活性的一類產(chǎn)品統(tǒng)稱為酵素。但由于許多制作者多關(guān)注加入不同水果，不注意發(fā)酵微生物和一些常見的功能性材料的使用，而且制成的產(chǎn)品的益生菌的活菌數(shù)亦不夠，酵素產(chǎn)品的開發(fā)和應(yīng)用受到其副作用和功能性不強(qiáng)的影響。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：為了克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種元寶楓翅果活菌酵素原液的制備方法，解決了現(xiàn)有酵素生產(chǎn)過程中不能保證無病原菌的污染，發(fā)酵時(shí)間過長，以及無法最大限度地保留活性物質(zhì)等問題。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。一種元寶楓翅果活菌酵素原液的制備方法，包括以下步驟：1）挑選材料：選擇成熟的、飽滿的元寶楓翅果作為發(fā)酵的主要原料；2）材料的處理：將撿練的元寶楓翅果先用純凈水洗兩遍，最后再用1-3%（w/w）NaCl溶液沖洗一遍，起低溫殺菌作用，翅果瀝干，裝入已經(jīng)滅菌的發(fā)酵容器中，再加入蜂蜜和純凈水，其中各組分按重量比為元寶楓翅果：蜂蜜：純凈水=20~50：1~3：20~70，即得元寶楓翅果發(fā)酵原液待用；3）菌種培養(yǎng)：將菌種活化擴(kuò)培并制備成發(fā)酵菌液：菌種采用的是商業(yè)生產(chǎn)用食品目錄中可添加的食用益生菌菌種乳酸菌一類，即植物乳桿菌，嗜酸乳桿菌，干酪乳桿菌，鼠李糖乳桿菌：（1）分別取上述四種甘油管保存的菌種一環(huán)在平板上劃線，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)24小時(shí)；（2）分別取MRS固體培養(yǎng)基平板上的純菌落一環(huán)接入裝有300ml種子培養(yǎng)液的500ml規(guī)格的三角瓶中，置于搖床，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速80rpm，溫度30℃，恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，然后將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌液按體積比3-4：3-4：1-2：1-2的比例混合，即為發(fā)酵菌液備用；（3）上述種子培養(yǎng)液制備：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，檸檬酸氫二銨[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐溫801.0mL乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸錳（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸餾水定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH至6.2-6.4；（4）接種發(fā)酵：按發(fā)酵原液體積的1~5%將發(fā)酵菌液加入到發(fā)酵體系中，發(fā)酵溫度為25~35℃，發(fā)酵時(shí)間8~16d。（5）發(fā)酵液處理：發(fā)酵完成后的發(fā)酵液經(jīng)粗過濾，過濾篩目數(shù)為20~32目；再細(xì)過濾，過濾篩目數(shù)為80~100目，濾液即為元寶楓翅果活菌酵素原液。有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：1）利用鹽溶液消毒殺菌、嚴(yán)格控制發(fā)酵溫度，接入益生菌種，有效的降低了酵素營養(yǎng)成分的損失，最大限度保留了酵素活性；2）接入了益生菌乳酸菌一類，優(yōu)勢菌株抑制了其他雜菌滋生，保證了產(chǎn)品的質(zhì)量穩(wěn)定；3）發(fā)酵的總時(shí)間為8-16d，時(shí)間短避免不飽和脂肪酸的過多氧化，有利于保留元寶楓翅果本身含有的活性物質(zhì)，以及本身的風(fēng)味物質(zhì)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。實(shí)施例1一種元寶楓翅果活菌酵素原液的制備方法，包括以下步驟：1）挑選材料：選擇成熟的、飽滿的元寶楓翅果作為發(fā)酵的主要原料；2）材料的處理：將撿練的元寶楓翅果稱量20份，先用純凈水洗兩遍，最后再用1%（w/w）NaCl溶液沖洗一遍，鹽溶液消毒殺菌，翅果瀝干，裝入已經(jīng)滅菌的發(fā)酵容器中，再加入1份的蜂蜜和70份的純凈水，即得元寶楓翅果發(fā)酵原液待用；3）菌種培養(yǎng)：將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌分別活化擴(kuò)培并制備成發(fā)酵菌液：（1）取甘油管保存菌種一環(huán)在平板上劃線，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)24小時(shí)；（2）取MRS固體培養(yǎng)基平板菌落一環(huán)接入裝有300ml種子培養(yǎng)液的500ml規(guī)格的三角瓶中，置于搖床，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速80rpm，溫度30℃，恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，然后將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌液按體積比3：3：2：2的比例混合，即為發(fā)酵菌液備用；（3）上述種子培養(yǎng)液制備：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，檸檬酸氫二銨[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐溫801.0mL乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸錳（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸餾水定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH至6.2-6.4；4）接種發(fā)酵：按發(fā)酵原液體積的2%比例將發(fā)酵菌液混合（其中植物乳桿菌：嗜酸乳桿菌：干酪乳桿菌：鼠李糖乳桿菌的比例（v/v）為3份：3份：2份：2份）加入到發(fā)酵體系中，發(fā)酵溫度為25℃，發(fā)酵時(shí)間16d；5）發(fā)酵液處理：發(fā)酵完成后的發(fā)酵液經(jīng)粗過濾，過濾篩目數(shù)為20~32目；再細(xì)過濾，過濾篩目數(shù)為80~100目，濾液即為元寶楓翅果活菌酵素原液，pH值3.5，乳酸菌總菌數(shù)達(dá)3.6×108cfu/ml。實(shí)施例2一種元寶楓翅果活菌酵素原液的制備方法，包括以下步驟：1）挑選材料：選擇成熟的、飽滿的元寶楓翅果作為發(fā)酵的主要原料；2）材料的處理：將撿練的元寶楓翅果稱量50份，先用純凈水洗兩遍，最后再用2%（w/w）NaCl溶液沖洗一遍，鹽溶液消毒殺菌，翅果瀝干，裝入已經(jīng)滅菌的發(fā)酵容器中，再加入2份的蜂蜜和60份的純凈水，即得元寶楓翅果發(fā)酵原液待用；3）菌種培養(yǎng)：將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌分別活化擴(kuò)培并制備成發(fā)酵菌液：（1）取甘油管保存菌種一環(huán)在平板上劃線，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)24小時(shí)；（2）取MRS固體培養(yǎng)基平板菌落一環(huán)接入裝有300ml種子培養(yǎng)液的500ml規(guī)格的三角瓶中，置于搖床，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速80rpm，溫度30℃，恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，然后將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌液按體積比3：4：1：2的比例混合，即為發(fā)酵種子菌液備用；（3）種子培養(yǎng)液制備：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，檸檬酸氫二銨[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐溫801.0mL乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸錳（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸餾水定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH至6.2-6.4；4）接種發(fā)酵：按發(fā)酵原液體積的5%比例將發(fā)酵菌液混合（其中植物乳桿菌：嗜酸乳桿菌：干酪乳桿菌：鼠李糖乳桿菌的比例（v/v）為3份：4份：1份：2份）加入到發(fā)酵體系中，發(fā)酵溫度為30℃，發(fā)酵時(shí)間12d；5）發(fā)酵液處理：發(fā)酵完成后的發(fā)酵液經(jīng)粗過濾，過濾篩目數(shù)為20~32目；再細(xì)過濾，過濾篩目數(shù)為80~100目，濾液即得到元寶楓翅果活菌酵素原液，pH值3.2，乳酸菌總菌數(shù)達(dá)7.2×108cfu/ml。實(shí)施例3一種元寶楓翅果活菌酵素原液的制備方法，包括以下步驟：1）挑選材料：選擇成熟的、飽滿的元寶楓翅果作為發(fā)酵的主要原料；2）材料的處理：將撿練的元寶楓翅果稱量40份，先用純凈水洗兩遍，最后再用3%（w/w）NaCl溶液沖洗一遍，鹽溶液消毒殺菌，翅果瀝干，裝入已經(jīng)滅菌的發(fā)酵容器中，再加入3份的蜂蜜和20份的純凈水，即得元寶楓翅果發(fā)酵原液待用；3）菌種培養(yǎng)：將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌分別擴(kuò)培并制備成發(fā)酵菌液：（1）取甘油管保存菌種一環(huán)在平板上劃線，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)24小時(shí)；（2）取MRS固體培養(yǎng)基平板菌落一環(huán)接入裝有300ml種子培養(yǎng)液的500ml規(guī)格的三角瓶中，置于搖床，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速80rpm，溫度30℃，恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，然后將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌液按體積比4：3：2：1的比例混合，即為發(fā)酵種子菌液備用；（3）種子培養(yǎng)液制備：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，檸檬酸氫二銨[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐溫801.0mL乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸錳（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸餾水定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH至6.2-6.4；4）接種發(fā)酵：按發(fā)酵原液體積的4%比例將發(fā)酵菌液混合（其中植物乳桿菌：嗜酸乳桿菌：干酪乳桿菌：鼠李糖乳桿菌的比例（v/v）為4份：3份：2份：1份）加入到發(fā)酵體系中，發(fā)酵溫度為35℃，發(fā)酵時(shí)間10d；5）發(fā)酵液處理：發(fā)酵完成后的發(fā)酵液經(jīng)粗過濾，過濾篩目數(shù)為20~32目；再細(xì)過濾，過濾篩目數(shù)為80~100目，濾液即為元寶楓翅果活菌酵素原液，pH值3.4，乳酸菌總菌數(shù)達(dá)5.6×108cfu/ml。實(shí)施例4一種元寶楓翅果活菌酵素原液的制備方法，包括以下步驟：1）挑選材料：選擇成熟的、飽滿的元寶楓翅果作為發(fā)酵的主要原料；2）材料的處理：將撿練的元寶楓翅果稱量30份，先用純凈水洗兩遍，最后再用3%（w/w）NaCl溶液沖洗一遍，鹽溶液消毒殺菌，翅果瀝干，裝入已經(jīng)滅菌的發(fā)酵容器中，再加入3份的蜂蜜和40份的純凈水，即得元寶楓翅果發(fā)酵原液待用；3）菌種培養(yǎng)：將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌分別擴(kuò)培并制備成發(fā)酵菌液：（1）取甘油管保存菌種一環(huán)在平板上劃線，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)24小時(shí)；（2）取MRS固體培養(yǎng)基平板菌落一環(huán)接入裝有300ml種子培養(yǎng)液的500ml規(guī)格的三角瓶中，置于搖床，培養(yǎng)條件：轉(zhuǎn)速80rpm，溫度30℃，恒溫培養(yǎng)24小時(shí)，然后將植物乳桿菌、嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的菌液按體積比3：4：2：1的比例混合，即為發(fā)酵種子菌液備用；（3）種子培養(yǎng)液制備：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，檸檬酸氫二銨[（NH4）2HC6H5O7]2.0g，葡萄糖(C6H12O6·H2O)20.0g，吐溫801.0mL乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）5.0g磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O）2.0g硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.58g硫酸錳（MnSO4·H2O）0.25g，加蒸餾水定容至1000mL，調(diào)節(jié)pH至6.2-6.4；4）接種發(fā)酵：按發(fā)酵原液體積的1%比例將發(fā)酵菌液混合（其中植物乳桿菌：嗜酸乳桿菌：干酪乳桿菌：鼠李糖乳桿菌的比例（v/v）為3份：4份：2份：1份）加入到發(fā)酵體系中，發(fā)酵溫度為35℃，發(fā)酵時(shí)間8d；5）發(fā)酵液處理：發(fā)酵完成后的發(fā)酵液經(jīng)粗過濾，過濾篩目數(shù)為20~32目；再細(xì)過濾，過濾篩目數(shù)為80~100目，濾液即為元寶楓翅果活菌酵素原液，pH值3.5，乳酸菌總菌數(shù)達(dá)2.6×108cfu/ml。為了體現(xiàn)本發(fā)明方法的有效性，另做一組按傳統(tǒng)方法不加菌種自然發(fā)酵的對比試驗(yàn)，具體步驟如下：1）挑選材料：選擇成熟的、飽滿的元寶楓翅果作為發(fā)酵的主要原料：2）材料的處理：將撿練的元寶楓翅果稱量30份，先用純凈水洗兩遍，最后再用3%（w/w）NaCl溶液沖洗一遍，鹽溶液消毒殺菌，翅果瀝干，裝入已經(jīng)滅菌的發(fā)酵容器中，再加入3份的蜂蜜和40份的純凈水，即得元寶楓翅果發(fā)酵體系發(fā)酵；5）發(fā)酵液處理：發(fā)酵完成后的發(fā)酵液經(jīng)粗過濾，過濾篩目數(shù)為20~32目；再細(xì)過濾，過濾篩目數(shù)為80~100目，即得自然發(fā)酵濾液。下表是將本發(fā)明實(shí)施例與對比例的檢測結(jié)果：項(xiàng)目實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4對比pH3.53.23.43.55.5乳酸菌總菌數(shù)(cfu/ml)3.6×1087.2×1085.6×1082.6×1081.2×103神經(jīng)酸含量(%)0.0050.0090.0080.0050.001本發(fā)明按照上述實(shí)施例進(jìn)行了說明，應(yīng)當(dāng)理解，上述實(shí)施例不以任何形式限定本發(fā)明，凡采用等同替換或等效變換方式所獲得的技術(shù)方案，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3