專(zhuān)利名稱(chēng)：三肽硼酸(酯)類(lèi)化合物、其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥品生產(chǎn)領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一類(lèi)新的三肽硼酸(酯)類(lèi)化合 物、其制備方法和應(yīng)用，所述的三肽硼酸(酯)類(lèi)化合物具有很好的蛋白酶體抑制活性，可 用于各種基因疾病，如惡性腫瘤、多種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病、肌肉惡病質(zhì)、糖尿病等疾病的治療。
背景技術(shù)：
2004年10月6日，瑞典皇家科學(xué)院宣布，將本年度的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予以色列科 學(xué)家Aaron Ciechanover, Avram Hershko和美國(guó)科學(xué)家IrwinRose，因?yàn)樗麄児餐l(fā)現(xiàn)了 泛素(ubiquitin)-蛋白酶體(proteasome)(以下簡(jiǎn)稱(chēng)UPP)調(diào)節(jié)的蛋白降解過(guò)程。這說(shuō)明 泛素_蛋白酶體降解蛋白質(zhì)這一途徑在生命領(lǐng)域具有非凡的意義。泛素(簡(jiǎn)稱(chēng)Ub)是一個(gè)由76個(gè)氨基酸組成的高度保守的多肽鏈，分子量約 為8.5kD。很多分子、生物化學(xué)、細(xì)胞、遺傳和臨床研究表明，泛素-蛋白酶體降解蛋白 質(zhì)這一過(guò)程對(duì)很多生理過(guò)程的調(diào)控以及人類(lèi)許多重要疾病的發(fā)展過(guò)程都起到非常重要 的作用。近期發(fā)現(xiàn)，這一過(guò)程還對(duì)神經(jīng)退行性疾病、肌萎縮側(cè)索硬化癥(Amyotrophic Lateral Sclerosis, ALS)、阿爾茨海默病(Alzheimer， disease, AD)、帕金森病 (Parkinson，disease, PD)、亨廷頓舞蹈病(Huntington，disease, HD)、皮質(zhì)-紋狀體-脊 髓變性病(Creutzfeld-Jacob disease, CJD)以及糖尿病的發(fā)病都有很大的影響。已經(jīng)知道，蛋白酶體能調(diào)控參與細(xì)胞周期控制的蛋白質(zhì)的水平，如作用于Gl期和 有絲分裂期的周期素、cdk抑制劑、腫瘤抑制因子蛋白及其它調(diào)控蛋白。目前已證實(shí)UPP依 賴(lài)的蛋白降解途徑在控制細(xì)胞繁殖和細(xì)胞死亡方面起著重要的作用，而且這一途徑還對(duì)神 經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病如PD、AD等有重大的影響。使用新的抑制劑將會(huì)揭示泛素蛋白酶體更多 新的未知功能。目前已發(fā)現(xiàn)的蛋白酶體抑制劑可分為肽類(lèi)和非肽類(lèi)兩類(lèi)。肽類(lèi)抑制劑通常是由短 肽及其C末端連接的各種藥效團(tuán)構(gòu)成。其中，藥效團(tuán)與蛋白酶體上起催化作用的氨基酸殘 基(主要是N端蘇氨酸上的羥基)反應(yīng)生成可逆或不可逆的共價(jià)復(fù)合物，而肽鏈的其它部 分則選擇性地與亞基活性部位的其余殘基結(jié)合。目前，主要的藥效團(tuán)有醛基(肽醛類(lèi))、乙 烯基砜、硼酸(肽硼酸類(lèi))以及α ’，β ’ -環(huán)氧化酮等。與肽醛類(lèi)抑制劑相比，肽硼酸類(lèi)抑制劑更具有成藥性，因?yàn)檫@類(lèi)化合物的藥效團(tuán) 硼酸基或硼酸酯基的穩(wěn)定性和選擇性比醛基好，而且硼類(lèi)物質(zhì)的毒性非常低，它們可以最 終降解為環(huán)境友好的硼酸。例如，PS341，英文名Bortezomib或VELCADE，中文名硼替佐米，
又稱(chēng)為萬(wàn)珂，其結(jié)構(gòu)為 是一種二肽硼酸類(lèi)抑制劑，由美國(guó)千年制藥公司(MillenniumPharmaceuticals) 開(kāi)發(fā)的新型抗腫瘤藥物，已在美國(guó)、歐盟和我國(guó)上市，主要用于治療至少接受過(guò)二種以上療 法的多發(fā)性骨髓瘤(multiplemyeloma，MM)。該藥是目前全球唯一批準(zhǔn)用于臨床治療的蛋 白酶體抑制劑，它能克服傳統(tǒng)抗癌藥物的耐受性，為多發(fā)性骨髓瘤的治療帶來(lái)希望。USP5, 780，454公開(kāi)了新的硼酸酯類(lèi)化合物P-AA1-AA1-AA3-B^1) (Z2)，其中包括 三肽硼酸酯類(lèi)化合物，但僅公開(kāi)了少量三肽類(lèi)化合物，而且所述三肽的結(jié)構(gòu)只有兩類(lèi) L-Leu-L-Leu-L-Leu或L-Leu-L-Nal-L-Leu ；該專(zhuān)利提供的數(shù)據(jù)表明，其中二肽類(lèi)化合物的 活性?xún)?yōu)于三肽類(lèi)化合物。另?yè)?jù)美國(guó)專(zhuān)利(5，693，617)報(bào)道，三肽醛類(lèi)化合物是一類(lèi)活性很好的蛋白酶體抑 制劑。但是這類(lèi)抑制劑由于其藥效團(tuán)為醛基，使得它們的選擇性和穩(wěn)定性都非常差。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)一類(lèi)新的三肽的硼酸(酯)類(lèi)化合物具有更 好的蛋白酶體抑制活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新的、具有下述通式(I)結(jié)構(gòu)的三肽硼酸(酯)類(lèi)化合 物 其中，R1^R2和R3各自獨(dú)立的為L(zhǎng)-氨基酸側(cè)鏈，E為H或2，3-菔烷二醇酯基。其 中所述的氨基酸為α “氨基酸，優(yōu)選所述的氨基酸是天然氨基酸。優(yōu)選的，R1, R2和R3各自獨(dú)立的為CV6的直鏈或支鏈烷基、芳基甲基或芳雜環(huán)基甲 基，其中在芳基甲基或芳雜環(huán)基甲基的芳環(huán)上可任選的被選自Cy的直鏈或支鏈烷基、羥 基、氨基或鹵素的基團(tuán)所取代。在本發(fā)明化合物定義中，所用的術(shù)語(yǔ)"(V6的直鏈或支鏈烷基”是指含有1-6個(gè)碳 原子的、直鏈或支鏈的飽和烴基；優(yōu)選具有3-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如丙基、異 丙基、丁基、異丁基或叔丁基等，更優(yōu)選異丙基、異丁基或叔丁基；最優(yōu)選異丁基。類(lèi)似地，所 用的術(shù)語(yǔ)"(V4的直鏈或支鏈烷基”是指含有1-4個(gè)碳原子直鏈或支鏈的飽和烴基，例如甲 基、乙基、丙基、異丙基、異丁基或叔丁基等，優(yōu)選甲基。所用的術(shù)語(yǔ)“芳基”是指具有6-10個(gè)碳原子的芳香族基團(tuán)，優(yōu)選苯基或萘基。所用的術(shù)語(yǔ)“芳雜環(huán)基”是指含有選自N、0、S的雜原子的五員或六員環(huán)，且所述的 五員或六員環(huán)還可與苯環(huán)稠合；例如吡咯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吲哚基、苯并噻吩基、喹啉基或異喹啉基等，更優(yōu)選的芳雜環(huán)基為吲哚基。上述定義中，在芳基甲基或芳雜環(huán)基甲基的芳環(huán)上可任選的被選自Cy的直鏈或 支鏈烷基、羥基、氨基或鹵素的基團(tuán)所取代，其中所使用的術(shù)語(yǔ)“鹵素”是指氟、氯、溴和碘原 子，優(yōu)選為氟、氯或碘原子；所述芳環(huán)上的取代基優(yōu)選是甲基、羥基、氟或氯原子。優(yōu)選的，其中所述的禮、R2和R3各自獨(dú)立的為苯甲基、對(duì)羥基苯甲基、β -吲哚基 甲基、異丁基或2-萘基甲基等L-氨基酸側(cè)鏈，更優(yōu)選所述的R3基團(tuán)是異丁基。根據(jù)上述定義，本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)中的三肽結(jié)構(gòu)部分的三個(gè)氨基酸優(yōu)選的是下述 L-氨基酸的任意組合亮氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸和2-萘基丙氨酸；更優(yōu)選的，其中 所述的R3基團(tuán)是異丁基，即最靠近硼酸(酯)一端的氨基酸是亮氨酸。優(yōu)選的，本發(fā)明提供了下述化合物UN-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5a)，2、N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5b)，3、N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5c)，4、N-吡嗪甲?；?L-酪氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷5、N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷6、N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L-萘丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷7、N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5g)，8、N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5h)，9、N-吡嗪甲?；?L-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5i)，
\1/ \1/ \1/ d θ f
5 5 5
/. /. /.
匕日 匕日 匕日
酉酉酉
醇醇醇 .1 - 1 ^10、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-色氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(5j)，
11、N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(5k)，
12、N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L--亮丙氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(51)，
13、N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸菔烷二醇酉旨(5m)，
14、N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰_-L-苯丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6a)，
15、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-苯丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6b)，
16、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-酪氨酰-L--亮氨硼酸(6c)，
17、N-吡嗪甲?；?L-酪氨酰-L--苯丙氨酰-L--亮氨硼酸(6d)，
18、N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L--苯丙氨酰-L--亮氨硼酸(6e)，
19、N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L--萘丙氨酰-L--亮氨硼酸(6f)，
20、N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰_-L-萘丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6g)，
21、N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰_-L-萘丙氨酰_-L-亮氨硼酸(6h)，
22、N-吡嗪甲?；?L-色氨酰-L--苯丙氨酰-L--亮氨硼酸(6i)，
23、N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰_-L-色氨酰-L--亮氨硼酸(6 j)，
24、N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸(6k)，
25、N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L--亮丙氨酰-L--亮氨硼酸(61)，和
26、N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰_-L-亮氨酰-L--亮氨硼酸(6m) ο其中括號(hào)中的編號(hào)為該化合物在本發(fā)明的描述中所使用的編號(hào)。本發(fā)明的另一目的是提供了一種上述通式化合物的制備方法，該方法包括以吡嗪 甲酸為起始原料，依次引入二種所需的氨基酸，然后引入所需第三個(gè)氨基酸的硼酸酯，可得到本發(fā)明上述通式的硼酸酯類(lèi)化合物；如果需要制備相應(yīng)的硼酸化合物，可將上述硼酸酯 化合物水解。其中所述的R3基團(tuán)是異丁基，即最靠近硼酸(酯)一端的氨基酸是亮氨酸的通式 化合物可以吡嗪甲酸為起始原料，按照下述合成路線制備 在上述方法中主要包括逐個(gè)引入氨基酸的步驟，而每一引入氨基酸的步驟包括首 先與所述氨基酸的甲酯反應(yīng)，然后再水解得到相應(yīng)的氨基酸化合物，上述引入氨基酸的過(guò) 程可按照肽合成反應(yīng)中常規(guī)的方法進(jìn)行。其中所用的原料亮氨酸硼酸酯(在本文中簡(jiǎn)稱(chēng)為L(zhǎng)euBdiol-NH2)可按照文獻(xiàn) 中公開(kāi)的方法(Hall, D. G. , Structure, properties, andpreparation of boronic acid derivatives, WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KgaA，Weinheim. 2005，p8)制備；也可按照下
述合成路線制備 其中所使用的原料順式手性菔烷二醇〔(1S，2S，3R，5S) -2，6，6-三甲基二環(huán) [3. 1. 1]庚烷_(kāi)2，3-二醇〕是一種立體位阻較大的、非常有效的手性試劑。該試劑可在市場(chǎng) 上買(mǎi)到，也可以用現(xiàn)有技術(shù)已知的方法合成。
本發(fā)明的另一目的是提供了一種藥物組合物，該藥物組合物是一種蛋白酶體抑制 劑，可用于治療由蛋白酶體介導(dǎo)的疾病，例如可用于治療惡性腫瘤、多種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾 病、肌肉惡病質(zhì)或糖尿病等。該組合物以本發(fā)明的通式(I)的三肽硼酸(酯)類(lèi)化合物為 活性成分，其中還可以任意地含有藥用載體。具體的，該組合物含有治療有效量的本發(fā)明通式⑴化合物，以及一種或多種藥 學(xué)上可接受的載體。優(yōu)選的，本發(fā)明組合物中活性成分的含量是0.5%-99%，藥用載體的 含量是-99. 5%。本發(fā)明的組合物可以制成各種常規(guī)的藥用劑型，例如制成口服、腸胃外給藥的形 式，所述腸胃外給藥的形式例如是各種注射給藥、局部給藥、吸入給藥、直腸給藥或植入給 藥的形式。優(yōu)選注射給藥形式，例如注射劑、凍干粉針制劑或輸液劑型；或口服給藥形式，例 如是片劑、膠囊、顆粒劑或其它適于口服的液體制劑形式如溶液、乳液、懸浮劑等。優(yōu)選的口 服制劑是片劑，所述片劑可以制成包衣或腸溶形式，優(yōu)選所述的口服制劑被制成緩釋或定 量釋放的形式。為了制備適用的劑型，可根據(jù)需要在活性成分中添加一種或多種藥用載體，所述 的藥用載體包括各種常規(guī)的藥用輔劑，例如賦形劑、填充劑、稀釋劑、崩解劑、表面活性劑、 濕潤(rùn)劑、防腐劑、甜味劑、色素等。根據(jù)疾病的類(lèi)型、嚴(yán)重的程度以及患者的狀況，例如性別、年齡、體重等選用合適 的劑型和施用劑量，通常成人施用劑量在l-200mg/kg體重/天，優(yōu)選為l-50mg/kg體重/ 天之間。本發(fā)明的藥用組合物和該組合物的各種制劑可按照制藥領(lǐng)域已知的常規(guī)方法、使 用常規(guī)的藥用載體制備。本發(fā)明的三肽硼酸(酯)類(lèi)化合物對(duì)蛋白酶體具有良好的抑制活性，可作為一種 新的蛋白酶體抑制劑使用，用于治療惡性腫瘤、多種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病、肌肉惡病質(zhì)或糖尿 病等疾病。本發(fā)明的另一目的是提供了通式(I)化合物和含有所述化合物的藥物組合物的 藥用用途。即本發(fā)明提供了通式(I)化合物以及含有上述化合物的藥物組合物在制備蛋 白酶體抑制劑中的應(yīng)用，特別是該化合物或藥物組合物在制備治療惡性腫瘤、多種神經(jīng)系 統(tǒng)變性疾病、肌肉惡病質(zhì)或糖尿病等疾病的藥物中的應(yīng)用。所述的疾病包括各種惡性腫瘤、 神經(jīng)退行性疾病、肌萎縮側(cè)索硬化癥、阿爾茨海默病、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、皮質(zhì)_紋狀 體-脊髓變性病以及糖尿?。黄渲兴龅膼盒阅[瘤是白血病、胃癌、肝癌或鼻咽癌。本發(fā)明的另一目的是提供了一種治療各種惡性腫瘤、神經(jīng)退行性疾病、肌萎縮側(cè) 索硬化癥、阿爾茨海默病、帕金森病、亨廷頓舞蹈病、皮質(zhì)_紋狀體_脊髓變性病或糖尿病的 方法，該方法包括將治療有效量的通式(I)化合物施用于需要這種治療的患者；其中所述 的惡性腫瘤是白血病、胃癌、肝癌或鼻咽癌等。試驗(yàn)證明，本發(fā)明的三肽硼酸(酯)對(duì)蛋白酶體抑制作用具有很好的活性，其抗腫 瘤活性高于已知藥物硼替佐米，可用于替代硼替佐米治療惡性腫瘤，特別是用于治療多發(fā) 性骨髓瘤。在對(duì)HL-60人白血病、BGC-823人胃癌、Bel_7402人肝癌和KB人鼻咽癌的測(cè)試 模型實(shí)驗(yàn)中，本發(fā)明化合物也顯示出良好的活性。
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具體實(shí)施例方式下面通過(guò)具體的實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的說(shuō)明，其中例舉的實(shí)施 例僅是對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明，而不以任何方式限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。制備實(shí)施例1 L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽在IOOmL反應(yīng)瓶中加入25mL無(wú)水甲醇，冰鹽浴冷卻到-10°C以下，攪拌下緩慢滴加 SOCl2 (7mL, 96mmol)，然后于-10°C 以下反應(yīng) IOmin,再加入 L-苯丙氨酸(1. 65g，IOmmol)，低 溫反應(yīng)40min，撤去冰鹽浴，于室溫反應(yīng)48h，減壓濃縮，再加入15mL甲醇，反復(fù)減壓濃縮兩 次。加入50mL乙醚，放置，析出針狀結(jié)晶，過(guò)濾干燥，粗產(chǎn)品再用甲醇-乙醚重結(jié)晶，得白色 晶體 L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽 2. 0g，收率 95%，[a ]D25 =+37 . 2° (c = 1，CH3CH2OH)，m. p. 155-158°C制備實(shí)施例2 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酸甲酯將制備實(shí)施例1的產(chǎn)物L(fēng)-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(1. 12g，5. 2mmol)溶于20mL THF 中，用N-甲基嗎啉(NMM) (0. 7mL，6. 2mmol)中和，于冰浴下冷卻備用。在另一反應(yīng)瓶中加入 吡嗪甲酸(0. 65g，5. 2mmol)，用THF20mL溶解，冰水浴冷卻，于0°C加入二環(huán)己基碳二亞胺 (DCC) (1. 07g，5. 2mmol)，HOBt (0. 84g，6. 2mmol)，于 0°C反應(yīng) 40min，然后加入已制備并冷卻 好的中和完畢的L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽的THF溶液，TLC檢測(cè)反應(yīng)，2h后反應(yīng)完畢，過(guò)濾除 去不溶物N，N’ - 二環(huán)己基脲(D⑶)，濾液加入乙酸乙酯150mL，分別用5% NaHCO3溶液、10% 的檸檬酸溶液、5% NaHCO3溶液、飽和食鹽水溶液洗滌(2X20mL)。乙酸乙酯層用無(wú)水Na2SO4 干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，得化合物1.378，產(chǎn)物為白色固體，收率98%，!11. . :152-155°C。 1H-WR(O)Cl3, 300MHz) δ 3. 26 (-CH2, m, 2H)，3. 75 (-CH3, s, 3H)，5. 09 (-CH, m, 1H)，7. 15
7.32 (-Ph, m，5H) ,8. 23 (-C0NH, d, 1H) ,8. 52 (-Pyz, d, 1H) ,8. 74 (-Pyz, d, 1H) ,9. 37 (-Pyz, s, 1H)。制備實(shí)施例3 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酸將制備實(shí)施例2的產(chǎn)物N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酸甲酯(1.0g，3. 51mmol)用 IOmL丙酮溶解，冰水浴下慢慢滴加2N NaOH至pH值為12 13，繼續(xù)保持冰水浴中反應(yīng)， TLC檢測(cè)，2h后反應(yīng)完畢。冰水浴下滴加鹽酸至pH值為2 3，產(chǎn)生大量白色固體，過(guò)濾 產(chǎn)生的沉淀，用水、乙醚洗滌后晾干，得白色產(chǎn)品0.89g，收率93.6%，m.p. 166-1690C0 1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 3. 23 (-CH2, m, 2H)，4. 74 (-CH, m, 1H)，7. 16 7. 25 (-Ph, m, 5H)，
8.74 (-C0NH, t, 1H) ,8. 86 8. 89 (-Pyz, t，2H)，9. 14 (-Pyz, d, 1H)，13. 06 (-C00H, s, 1H)。制備實(shí)施例4 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯將L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽(0. 8g，3. 69mmol)用20mL THF溶解，用NMM(0. 49mL， 4. 43mmol)中和鹽酸，于冰浴下冷卻備用。在另一反應(yīng)瓶中加入制備實(shí)施例3的產(chǎn)物N-吡 嗪甲?；?L-苯丙氨酸(1.(^，3.69讓01)，用201^ THF溶解，冰水浴冷卻，于0°C加入二 環(huán)己基碳二亞胺(DCC) (0. 76g,3. 69mmol), HOBt (0. 60g,4. 42mmol)于 0 °C 反應(yīng) 40min，然 后加入已制備并冷卻好的中和完畢的L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽的THF溶液，TLC檢測(cè)反應(yīng)， 2h后反應(yīng)完畢，過(guò)濾除去不溶物D⑶，濾液加入乙酸乙酯80mL，分別用5 % NaHCO3溶液、 10%的檸檬酸溶液、5% NaHCO3溶液、飽和食鹽水溶液洗滌(2X20mL)。乙酸乙酯層用無(wú) 水Na2SO4干燥，過(guò)濾，減壓蒸除溶劑，得化合物1. 52g，產(chǎn)物為白色固體，收率95.6%，m. p. 111 113°C。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 3. 04(-CH2，m，2H)，3· 18 (-CH2, d，2Η)，3· 69 (-CH3, s,3H)，4. 82 (-CH, m, 2H)，6. 36 (-C0NH, d, 1H)，6. 92 7. 30 (-Ph, m, 10H)，8. 26 (-C0NH, d, 1H)， 8. 54 (-Pyz, d, 1H) ,8. 76 (-Pyz, d, 1H) ,9. 33 (-Pyz, s, 1H)。制備實(shí)施例5 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸將制備實(shí)施例4的產(chǎn)物N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯(1. 52g， 3. 52mmol)用IOmL丙酮溶解，冰水浴下慢慢滴加2N NaOH至pH值為12 13，繼續(xù)保持冰 水浴中反應(yīng)，TLC檢測(cè)，2h后反應(yīng)完畢。冰水浴下滴加鹽酸至pH值為2 3，產(chǎn)生大量白 色固體，過(guò)濾產(chǎn)生的沉淀，用乙醚洗滌后晾干得白色產(chǎn)品1.33g，收率90.5%，白色固體熔 點(diǎn)194-196 "C ；1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 12. 88 (s，1Η)，9. 10 (s，1H)，8. 90-8. 87 (m，1H)， 8. 77-8. 73 (m, 1H)，8. 75-8. 65 (m, 2H)，7. 24-7. 14 (m, 10H)，4. 84-4. 80 (m, 1H)，4. 53-4. 50 (m, 1H), 3. 14-2. 89(m，4H)。制備實(shí)施例6 N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酸以萘丙氨酸甲酯煙酸鹽為原料，合成及后處理同制備實(shí)施例3。得紅褐色粘稠固 體 2. 96g，收率 97. 4%。1H-NMR(DMS0-d6，300MHz) δ 4. 78(_CH，s，1H)，6. 92 7. 54 ( = CH, m，5H)，8· 74 (-C0NH, -Pyz, d，2H)，8· 87 (-Pyz, s, 1H)，9· 15 (-Pyz, s, 1H)，10. 86 (-NH, s, 1H)， 13. 04(-C00H, s，1H)。制備實(shí)施例7 N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以上一制備實(shí)施例6的產(chǎn)物N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酸為原料，合成方法及后處 理同制備實(shí)施例4。得黃色粘稠狀物1.89g，收率94.2%。產(chǎn)品直接用于下步皂化。制備實(shí)施例8 N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酸以制備實(shí)施例7的產(chǎn)物2b為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。收率77%， 白色固體，熔點(diǎn)196-197°C ；1H-WR(DMS0-d6，300MHz) δ 9. 07 (s, 1H) ,8. 86 (d, J = 2. 7Hz, 1H)，8. 70 (d, J=L 2Hz, 1H)，8. 68-8. 62 (m, 2H)，7. 83-7. 72 (m, 4H)，7. 45-7. 37 (m, 3H)， 7. 24-7. 17 (m, 5H)，4. 93-4. 91 (m, 1H)，4. 53-4. 50 (m, 1H)，3. 24-2. 98 (m, 4H).制備實(shí)施例9 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酸甲酯以酪氨酸甲酯鹽酸鹽及制備實(shí)施例3產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施 例4。得黃色粘稠狀物，收率92%。產(chǎn)品直接用于下步皂化。制備實(shí)施例10 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-酪氨酸以制備實(shí)施例9產(chǎn)物2c為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。得泡沫狀固 體，收率83 %。，直接用于下一步反應(yīng)。制備實(shí)施例11 N-吡嗪甲?；?L-酪氨酸以N-吡嗪甲酸和酪氨酸甲酯鹽酸鹽為原料，合成方法同制備實(shí)施例3，得乳白色 粘稠狀固體，收率89%，產(chǎn)品直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例12 N-吡嗪甲?；?L-酪氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制備實(shí)施例11產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例4。得黃色粘稠狀 物2. 26g，收率95. 5%。產(chǎn)品直接用于下步皂化。制備實(shí)施例13 N-吡嗪甲酰基-L-酪氨酰-L-苯丙氨酸以制備實(shí)施例12產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。得泡沫狀固體， 收率86%。直接用于下一步反應(yīng)。制備實(shí)施例14 L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽
以L-亮氨酸為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例1。得白色晶體1. 7g，收率 94%，[a ]D25 =+20 . 2° (c = 1，CH3OH)，m. p. :149_150°C。制備實(shí)施例15 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸甲酯以制備實(shí)施例14產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例2。得紅色粘 稠液體 2. 47g,收率 98 %。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 0. 97 0. 99 (-CH3, m，6H)，1. 69
1.83 (-CH2, -CH, m, 3H)，3. 78 (-CH3, s，3H)，4. 82 4. 90 (-CH, m, 1H)，8. 15 (-C0NH, d, 1H)， 8. 57 (-Pyz, q, 1H)，8· 78 (-Pyz, d, 1H)，9· 40 (-Pyz, s，1Η)。制備實(shí)施例16 N-吡嗪甲?；?L-亮氨酸以制備實(shí)施例15的產(chǎn)物N-吡嗪甲?；?L-亮氨酸甲酯為原料，合成方法及后 處理同制備實(shí)施例3。得白色固體2. 22g，收率為95%，m. p. 36-380C0 1H-NMR(DMS0_d6， 300MHz) δ 0· 88 0· 91 (-CH3, t, 6Η)，1· 57 1. 64 (-CH2, m, 2H)，1. 81 1. 91(_CH，m，1H)， 4. 48 4. 55 (-CH, m, 1H)，8. 77 (-C0NH, q，1H)，8. 90 8. 95 (-Pyz，dd,2H) ,9. 19 (-Pyz，d, 1H), 12. 8K-COOH, s，lH)。制備實(shí)施例17 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制備實(shí)施例16產(chǎn)物N-吡嗪甲?；?L-亮氨酸為原料，合成方法及后處理 同制備實(shí)施例4。產(chǎn)物為黃色粘稠狀物，收率93%。1H-NMR (⑶Cl3，300MHz) δ 0.92 0. 96 (-CH3, dd, 6H)，1. 64 1. 79 (-CH2, -CH, m, 3H)，3. 02 3. 20 (-CH2, m, 2H)，3. 74 (-CH3, s，3H)，4. 64 (-CH, m, 1H)，4. 88 (-CH, dd, 1H)，6. 64 (-C0NH, d, 1H)，7. 03 7. 10 (-Ph, m, 5H)， 8. 03 (-C0NH, d，1H)，8. 55 (-Pyz，q，1H)，8. 79 (-Pyz，d，1H)，9. 36 (-Pyz，d，1H)。制備實(shí)施例18 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯丙氨酸以制備實(shí)施例17產(chǎn)物2e為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例18。得粘稠狀 固體，收率 95. 6% ；1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 12. 61 (s，1Η)，9. 20 (s，1Η)，8. 98-8. 91 (m， 1H)，8. 77 (s，1H)，8. 66-8. 62 (m, 1H)，8. 46-8. 44 (m, 1H)，7. 22-7. 15 (m, 5H)，4. 61 (s，1H)， 4. 48-4. 46 (m, 1H)，3. 10-2. 87 (m, 2H)，1. 98-1. 92 (m, 1H)，1. 62-1. 59 (m, 2H)，0. 92-0. 88 (m, 6H).制備實(shí)施例19 N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L-萘丙氨酸甲酯以制備實(shí)施例16產(chǎn)物N-吡嗪甲?；?L-亮氨酸為原料，合成及后處理同制備實(shí) 施例4。得黃色粘稠狀物2. lg，收率93%。產(chǎn)品直接用于下步皂化。制備實(shí)施例20 N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L-萘丙氨酸以制備實(shí)施例19產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。得白色固體，收 率 83%，m. p. jg-lOOtVH-WlUDMSO-dj；，300MHz) δ 9. 16 (s，1H)，8· 89(d, J = 2. 4Hz, 1H)， 8. 70 (d, J=L 5Hz, 1H)，8. 58 (d, J = 9. OHz，1H)，8. 46 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，7. 79-7. 73 (m, 4H)，4. 60-4. 57 (m, 1H)，4. 55-4. 53 (m, 1H)，1. 54-1. 45 (m, 3H)，0. 83-0. 79 (m, 6H).制備實(shí)施例21 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酸甲酯以制備實(shí)施例3產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例4。得黃色粘稠狀物
2.3g，收率93.5%。產(chǎn)品直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例22 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酸以制備實(shí)施例21產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。得白色固體，收 率 79%, m. p. :191-193°C ；1H-WR(DMS0_d6，300MHz) δ 9. 07 (d, J=L 2Hz, 1H)，8· 86 (d, J
12=2. 7Hz, 1H)，8. 68 (d, J = 1. 5Hz, 1H)，8. 64-8. 56 (m，2H)，7. 81-7. 72(m，4H)，7. 42-7. 40 (m, 3H)，7. 17-7. 11 (m, 5H)，4. 83-4. 79 (m, 1H)，4. 59-4. 55 (m, 1H)，3. 26-3. 02 (m, 4H).制備實(shí)施例23 N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制備實(shí)施例6產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例4。得黃色粘稠狀物 1.898，收率94.2%。產(chǎn)品直接用于下步皂化。制備實(shí)施例24 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘丙氨酸以制備實(shí)施例23產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。得淡黃色固 體，收率 72 %，熔點(diǎn)208-209 "C ；1H-WR(DMS0_d6，300MHz) δ 9. 04(s，1H)，8· 84(d, J = 2. 4Hz, 1Η)，8. 73-8. 69 (m, 1Η)，8. 67-8. 66 (m, 2Η)，7. 82-7. 69 (m, 8H)，7. 74-7. 69 (m, 6H)，
7.44-7. 35 (m, 6H)，4. 95-4. 91 (m, 1H)，4. 64-4. 60 (m, 1H)，3. 28-3. 08 (m, H)。制備實(shí)施例25 L-色氨酸甲酯鹽酸鹽以L-色氨酸為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例1。得白色晶體3.02g，收率 93%，[a ]D25 =+16. 5° (c = 1，CH3OH)，m. p. :206_208°C。制備實(shí)施例26 N-吡嗪甲?；?L-色氨酸甲酯以N-吡嗪甲酸和制備實(shí)施例25產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例2。 得紅褐色粘稠狀物3. 18g，收率96%，直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例27 N-吡嗪甲酰基-L-色氨酸以制備實(shí)施例26為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例3。得紅褐色粘稠固體 2. 96g，收率 97. 4 %。1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 4. 78 (-CH, s，1Η)，6· 92 7· 54 ( = CH， m，5H)，8· 74 (-C0NH, -Pyz, d，2H)，8· 87 (-Pyz, s, 1Η)，9· 15 (-Pyζ, s, 1Η)，10. 86 (-ΝΗ, s, 1Η)， 13. 04(-C00H, s，1Η)。制備實(shí)施例28 N-吡嗪甲?；?L-色氨酰-L-苯丙氨酸甲酯以制備實(shí)施例27產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例4。得黃色粘稠物
2.13g，收率96.8%，未經(jīng)分離，直接用于皂化。制備實(shí)施例29 N-吡嗪甲?；?L-色氨酰-L-苯丙氨酸以制備實(shí)施例28為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例3。收率96. 4%，白 色固體，熔點(diǎn)74-76 "C ；1H-WR(DMS0-d6，300MHz) δ 10. 79 (s, 1H)，9. 13 (s，1H)，8. 86 (s, 1H)，8. 68 (s，1H)，8. 62-8. 59 (m, 2H)，7. 54-6. 84 (m, 10H)，4. 84 (s, 1H)，4. 58-4. 50 (m, 2H)，
3.20-3. 09 (m, 4H)。制備實(shí)施例30 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-色氨酸甲酯以制備實(shí)施例3產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例4。得淡黃色油狀液 體 1. 65g，收率 94. 8%。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 3. 13 3. 24 (_CH2，m，4Η)，3. 68 (_CH3，s， 3H)，4· 90 (-CH, q, 1H)，5. 06(_CH，m，1H)，6· 79(_NH，s，1H)，6· 91 7. 34(-Ph, = CH，m，10H)，
8.26 8. 33 (-C0NH, t，2H)，8. 43 (-Pyz, d, 1H)，8. 63 (-Pyz, d, 1H)，9. 14 (-Pyz, s，1H)。制備實(shí)施例31 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-色氨酸以制備實(shí)施例30產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。得淡黃色固體， 收率 93. 7 %，m. ρ· 106-108 "C ；1H-WR(DMS0_d6，300MHz) δ 12. 59 (s, 1H)，10. 87 (s, 1H)，
9.16-9. 12 (m, 1H)，8. 89-8. 87 (m, 1H)，8. 75-8. 72 (m, 1H)，8. 66-8. 59 (m, 2H)，7. 56-6. 96 (m, 10H)，4. 88-4. 85 (m, 1H)，4. 59-4. 56 (m, 1H)，3. 22-3. 05 (m, 4H).
制備實(shí)施例32 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-亮氨酸甲酯以制備實(shí)施例3產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例4。得白色粘稠固體
1.20g，收率94. 5%，直接用于下一步皂化。制備實(shí)施例33 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-亮氨酸以制備實(shí)施例32產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。收率93.9%，淡 黃色固體，熔點(diǎn)142-144°C ；1H-WR (DMS0-d6，300MHz) δ 12. 70 (s, 1H) ,9. 15-9. 12 (m, 1H), 8. 90-8. 88 (m, 1H)，8. 79-8. 74 (m, 1H)，8. 68-8. 65 (m, 1H)，8. 57-8. 53 (m, 1H)，7. 27-7. 15 (m, 5H) ,4. 90-4. 82 (m, 1H) ,4. 32-4. 25 (m, 1H) , 3. 21-3. 04(m，2H)，1. 68-1. 54(m，3H)， 0. 94-0. 91 (m, 3H)，0. 87-0. 85 (m, 3H).制備實(shí)施例34 N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L-亮氨酸甲酯以制備實(shí)施例16產(chǎn)物N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酸為原料，合成方法及后處理同制 備實(shí)施例4。得黃色粘稠狀物1.69g，收率91.8%。產(chǎn)品直接用于下步皂化。制備實(shí)施例35 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酸以制備實(shí)施例34產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。得粘稠固體，收 率83% .，直接用于下一步反應(yīng)。制備實(shí)施例36 N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-亮氨酸甲酯以制備實(shí)施例6產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例4。得黃色粘稠狀物 1.8g，收率92.5%。產(chǎn)品直接用于下步皂化。制備實(shí)施例37 N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-亮氨酸以制備實(shí)施例36產(chǎn)物為原料，合成方法及后處理同制備實(shí)施例5。得白色固體，收 率 78%，熔點(diǎn) AS-lOOtVH-WlUDMSO-dj；，300MHz) δ 9. 09 (d, J = 1. 2Hz, 1H)，8· 86 (d, J =
2.7，1Η)，8. 71-8. 70 (m, 2Η)，8. 57 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，7. 84-7. 45 (m, 4H)，7. 43-7. 42 (m, 3H)， 5. 02-4. 96 (m, 1H)，4. 32-4. 28 (m, 1H)，1. 66-1. 58 (m, 3H)，0. 89 (d, J = 6. 6Hz,3H)，0. 83 (d, J =6. 3Hz,3H).制備實(shí)施例38(化，25，31 ，55)-2，6，6-三甲基二環(huán)[3.1. 1]庚烷 _2，3-二醇將Me3N0.2H20(11.3g，102^ol)用 16mL 水溶解，攪拌下再加入 α -菔烯(13. 2g， 96. 9mmol)、74mL叔丁醇、7. 4mL吡啶和四氧化鋨(60mg，0. 236mmol)。然后通氮?dú)猓?0分鐘 后，加熱至回流。TLC檢測(cè)，15小時(shí)反應(yīng)完畢。自然降至室溫，加入NaHSO3(1. 2g，11. 5mmol)， 適量NaCl飽和水溶液。分出有機(jī)相，水層用乙醚提取(3X20mL)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉 干燥。濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯石油醚=1 30)，得白色固體15. 33g，收率92.9%， [a JD20 = -IO. 79° (c = 5. 5，甲苯)，m. p. Jz-SrCtj1H-WR(CDCl3JOOMHz) δ 0. 94(-CH3, s，3Η)，1. 28 (-CH3, s，3Η)，1. 32 (-CH3, s，3Η)，1. 34 1. 38 (-CH2, d, 1H)，1. 66 (-CH2, m, 1H)，1. 93 (-CH, m, 1H)，2. 01 (-CH2, t, 1H)，2. 20 (-CH, m, 1H)，2. 33 (H2O, s，2H)，2. 49 (-CH2, m, 1H) ,4. 00(-CH, q, 1H) ； 13C-NMR(CDCl3, 300MHz) δ 24. 11,27. 80,28. 00,29. 54,38. 21, 8. 99，40. 51，53. 98，69. 26，73. 88 ；元素分析 CltlH18O2 計(jì)算值C，70. 55 ；H, 10. 66 ；實(shí)測(cè)值C， 70. 55 ；H, 10. 67。制備實(shí)施例39 二氯甲基硼酸二甲酯于250mL瓶中加入無(wú)水二氯甲烷(4. 26mL，66mmol)和120mL無(wú)水四氫呋喃，通 入氮?dú)?，降溫?110 °C，然后慢慢滴加正丁基鋰的環(huán)己烷溶液(25. 2mL,60mmol)，滴加完畢后低溫繼續(xù)攪拌1小時(shí)，再加入硼酸三甲酯(7. 5mL，66mmol)，繼續(xù)低溫?cái)嚢?小時(shí)后加 入5N HCl溶液12mL，自然升至室溫。反應(yīng)液轉(zhuǎn)入分液漏斗，分出有機(jī)相，水層用乙醚提取 (2 X IOmL)，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥。蒸除溶劑得白色粘稠狀固體9. 3g，收率99. 4%。 產(chǎn)品未經(jīng)純化直接用于下步反應(yīng)。制備實(shí)施例40 二氯甲基硼酸-α-菔烷二醇酯于25mL瓶中加入制備實(shí)施例38產(chǎn)物α -菔烷二醇(3. 23g, 0. 019mmol)和制備 實(shí)施例38產(chǎn)物二氯甲基硼酸二甲酯(5. 38g，0.035mmol)，5mL THF溶解，室溫下攪拌。TLC 檢測(cè)，18h后反應(yīng)完畢。柱層析分離(乙酸乙酯石油醚=1 20)得無(wú)色液體4. 92g，收 率 98.5%。1H-Wr(CdcI3JOOMHz) δ 0. 85 (-CH3, s，3Η)，1. 21 (-CH2, t，1H)，1. 31 (-CH3, s, 3H)，1. 47 (-CH3, s，3H)，1. 92 1. 97 (-CH2, CH, m, 2H)，2. 15 (-CH, t，1H)，2. 25 2. 43 (-CH2, m，2H)，4. 47 (-CH，q，1H)，5. 40 (-CH，s, 1H) ； 13C-WR(CDCl3，75MHz) δ 23. 92,26. 18，26. 93， 28. 18,34. 98,38. 31,39. 16,51. 09,79. 41,88. 08。MS(EI) :m/z 262. 0 (M+),計(jì)算值m/z 262. O0制備實(shí)施例41 2-甲基-4-氯-丁基硼酸-α-菔烷二醇酯將制備實(shí)施例40產(chǎn)物二氯甲基硼酸- α -菔烷二醇酯(1. 18g，4. 49mmol)用12mL 乙醚溶解，室溫下攪拌。通入氮?dú)?，并降溫至_78°C，然后慢慢滴加新制的叔丁基格式試劑 的乙醚溶液(6mL，4. 50mmol)，滴加完畢后，加入干燥好的ZnCl2粉末(0. 44g，3. 25mmol)。 自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC檢測(cè)，18h后反應(yīng)完畢。過(guò)濾除去ZnCl2及反應(yīng)生 成的MgBr2，濃縮后柱層析分離(乙酸乙酯石油醚=1 200)得無(wú)色液體1. 13g，收率 88. 5 V0o 1H-WR (CDCl3, 300MHz) δ 0. 85-0. 94 (-CH3, m, 9H)，1. 19 (-CH, q, 1H)，1. 30 (-CH3, s，3H)，1. 42 (-CH3, s，3H)，1. 62 (CH, m, 1H)，1. 75-1. 95 (-CH2, m, 4H)，2. 10 (-CH, t，1H)， 2. 21-2. 40 (-CH2, m,2H) ,3. 54(-CH, m, 1H) ,4. 37 (-CH, q，1H)。13C-NMR (CDCl3, 75MHz) δ 21. 18,22. 84,23. 93,25. 54,26. 27,26. 97,28. 37,35. 24,38. 18,39. 27,42. 72,51. 11， 86. 63 ；MS (EI) :m/z 284. 2 (M+)，計(jì)算值m/z 284. 6。制備實(shí)施例42 2-甲基-4-氨基-丁基硼酸-α -菔烷二醇酯鹽酸鹽 (LeuBdiol-NH2)于150mL茄形瓶中加入LiN (SiMe3)2 (9. 5mL，17. 98讓01)，通入氮?dú)?，并降?至-78°C，然后用注射器慢慢加入含有制備實(shí)施例41產(chǎn)物2-甲基-4-氯-丁基硼酸_ α -菔 烷二醇酯(4. 7g，16. 54mmol)的THF溶液，滴加完畢后，自然升至室溫，繼續(xù)室溫下攪拌。TLC 檢測(cè)，20h后反應(yīng)完畢。減壓蒸除溶劑，并用乙醚帶兩次，加50mL石油醚溶解，過(guò)濾除去不溶 物。將濾液降溫至_78°C，加入65mL氯化氫的乙醚溶液，然后自然慢慢升至室溫，出現(xiàn)大量 乳白色固體。冷凍使完全析出結(jié)晶，過(guò)濾，乙醚洗滌產(chǎn)品得乳白色固體2. Sg,收率56. 2%0 產(chǎn)品未經(jīng)純化，直接用于下步反應(yīng)。實(shí)施例IN-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5a)々將0. 42g (Immol)制備實(shí)施例5的N-吡嗪甲酰
15基-L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酸溶于7ml四氫呋喃，在_20°C下加入HOBt 0. 16g(1.2mmol) 和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽0. 29g(1.5mm0l)，反應(yīng)30分鐘后，加入 0. 3g(Immol)制備實(shí)施例 42 得到的 LeuBdiol-NH2 和 N, N- 二異丙基乙胺 0. 26g(2mmol)， 在-20°C下攪拌過(guò)夜。TLC檢測(cè)反應(yīng)完畢，過(guò)濾除去不溶物，減壓蒸除溶劑，用20mL乙酸乙 酯溶解，分別用10%的檸檬酸溶液、5% NaHCO3溶液、飽和食鹽水溶液洗滌(3X 15mL)。乙 酸乙酯層用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾，濃縮后柱層析分離得0. 54g化合物4a，為白色固體，收 率 82 %。熔點(diǎn) 78-80 "C ；1H-WR (CDCl3, 500MHz) δ 9. 31-9. 26 (m, 1H) ,8. 82-8. 77 (m, 1H)， 8. 58-8. 54 (m, 1H)，8. 23-8. 19 (m, 1H)，7. 32-6. 99 (m, 10H)，6. 48-6. 42 (m, 1H)，5. 72-5. 67 (m, 1H) , 4. 80-4. 77 (m, 1H) ,4. 59-4. 55 (m, 1H) ,4. 36-4. 33 (m, 1H) , 3. 19-3. 09 (m, 4H)， 2. 90-2. 88 (m, 1H)，2. 36-2. 22 (m, 2H)，2. 08-2. 03 (m, 1H)，1. 94-1. 86 (m, 2H)，1. 47-1. 39 (m, 3H)，1. 30-1. 28(m，3H)，1. 29-1. 21 (m，3H)，0· 90-0. 83(m，9H) ；13C-NMR(CDCl3,125MHz) 169. 86，169. 77，163. 21，147. 63，144. 33，143. 52，142. 69，136. 25，135. 94，129. 22，129. 13， 128. 81，128. 45，127. 28，126. 72,84. 72,54. 73,54. 27,51. 50,39. 41,39. 37,38. 37,38. 03， 37. 84,37. 64,35. 68,28. 53,28. 44,27. 05,26. 36,26. 32,25. 58,23. 96,22. 36 ；MS(EI) :m/z 665. 6 (M)+. 實(shí)施例2 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸(6a)
丙酮溶解，加入NH4OAC溶液(0. 1N, 11. 6mL)，最后加入NaIO4 (0. 32g，1. 5mmol)，室溫?cái)嚢璺?應(yīng)。TLC檢測(cè)顯示，IOh后反應(yīng)完全。向反應(yīng)溶液中加入NaOH溶液(2N，0. 5mL)，CH2Cl2萃 取。用濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液PH值約為3。用012(12萃取(3 Xl5mL)，合并有機(jī)相，無(wú)水Na2SO4干 燥，過(guò)濾，蒸干得到淡黃色固體 5a 0. 19g，收率 72. 1%。m. p. :112_114°C。1H-NMR(O)Cl3, 300MHz) δ 0. 88 (-CH3, d，3H)，0. 90 (-CH3, d，3H)，1. 25 2. 17 (-CH2, -CH, -B (OH)2, m, 5H)， 2. 96 3. 17 (-CH, m, 5H)，4. 65 4. 77 (-CH, m, 2H)，6. 38 6. 42 (-C0NH, m, 1H)，6. 84 7. 07 (-Ph, -C0NH, m，6H)，7. 24 7. 29 (-Ph, m，5H)，8. 18(_C0NH，s, 1H)，8· 53(-Pyz, s, 1H) ,8. 77(-Pyz, s, 1H) ,9. 15 9. 26 (-Pyz, m, 1Η) ；13C-NMR(CDCl3, 75MHz) δ 22. 51, 23. 17，25. 66，37. 30，37. 54，51. 70，53. 64，54. 96，126. 75，127. 41，128. 41，128. 54，128. 88， 129. 20，135. 66，135. 89，142. 72，143. 32，144. 28，147. 75，163. 32，163. 58，169. 74，170. 01 ； MS (ESI) :m/z 530. 4907 (M-H) ；FT-MS :m/z 532. 27179 (M+H)，計(jì)算值532. 27258。
實(shí)施例3N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5b)
。以制備實(shí)施例8產(chǎn)物為原料，合成及后處理同實(shí)施例
1，得白色固體，87%收率，熔點(diǎn):98-100°Co 1H-Wr(Cdci3JOOMHz) δ 9. 13 (s, 1H) ,8. 74 (d,
z0H將實(shí)施例 1 產(chǎn)物 5a(0. 33g，0. 5mmol)用 12mL 的J = 2. 4Hz, 1H) ,8. 48 (d, J = 2. 1Hz，1H)，8. 23-8. 20 (d，J = 7. 5Hz，1H)，7. 80-7. 69 (m， 4H)，7. 46-7. 43 (m, 2H)，7. 35 (d, J = 8. 4Hz, 1H)，7. 02-6. 95 (m, 5H)，6. 53-6. 45 (m, 1H)， 4. 65-4. 57 (m, 1H)，4. 29-4. 27 (m, 1H)，3. 40-3. 26 (m, 2H)，3. 13-3. 02 (m, 1H)，2. 95-2. 84 (m, 1H)，2. 35-2. 27 (m, 1H)，2. 20-2. 15 (m, 1H)，2. 04-1. 99 (m, 1H) , 1. 89-1. 80 (m, 1H)， 1. 39-1. 23 (m, 12H) ,0. 87-0. 83(m，9H) ；13C_NMR (CDC13，75MHz) :170. 39，169. 85，163. 19， 147. 57，144. 32，143. 59，142. 71，136. 13，133. 51，133. 46，132. 47，129. 22，128. 56，128. 35， 128. 01，127. 66，127. 57，127. 51，126. 65，126. 24，125. 84,54. 55,54. 42,53. 64,51. 35， 39. 70，39. 55，38. 19，37. 85，37. 74，35. 50，28. 61，27. 08，26. 24，25. 36，25. 21，24. 03， 22. 97,22. 01 ；HRMS 計(jì)算值 C42H51BN505 (M+l)+716. 3978，實(shí)測(cè)值 716. 3986.
實(shí)施例4 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸(6b)/\ ^OH在100ml圓底瓶中，將實(shí)施例3產(chǎn)物硼酸酯
\0H
5b (0. 357g 0. 5mmol)溶于無(wú)水二氯甲烷中，滴加1N的三溴化硼二氯甲烷溶液2. 5ml，冰浴 下攪拌，2小時(shí)后，TLC檢測(cè)反應(yīng)結(jié)束，滴加50ml水撲滅反應(yīng)，二氯甲烷萃取(15mlX4次)， 合并有機(jī)相，飽和食鹽水洗(15ml X 4次)，無(wú)水硫酸鈉干燥，過(guò)濾濃縮，乙醚二氯甲烷重結(jié) 晶得乳白色固體0. 18g。產(chǎn)率 63. 5%。熔點(diǎn):134-135°Co 咕-匪R(CDC13，300MHz) 8 9. 15 (s， 1H)，8. 73(d, J = 2. 4Hz, 1H)，8. 46(d, J = 2. 1Hz, 1H)，8. 24-8. 17 (m, 1H)，7. 76-7. 66(m，4H)， 7. 44-7. 40 (m, 3H)，7. 32-7. 25 (m, 1H)，6. 90-6. 86 (m, 5H)，6. 52-6. 46 (m, 2H)，4. 81-4. 67 (m, 2H) ,3. 31-3. 26 (m, 1H) ,3. 11 (d, J = 6. 9Hz，2H)，2. 93-2. 89 (m, 1H)，1. 92 (s，br,2H)， 1. 55-1. 21 (m，3H)，0. 85-0. 82(m，6H) ；13C_NMR (CDC13，75MHz) :172. 96，169. 99，163. 61， 147. 70，144. 24，143. 30，142. 70，137. 28，135. 61，133. 47，133. 19，132. 49，129. 13，128. 64， 128. 35，128. 07，127. 64，127. 55，127. 11,126. 71,126. 39，125. 92,54. 88,51. 86,39. 85， 39. 34,37. 43,37. 23，36. 88,25. 68,23. 12,22. 46. HRMS 計(jì)算值 C32H36BN505 (M_l廣580. 2727， 實(shí)測(cè)值580. 2736。 實(shí)施例5 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5c)YJ Y S bn K以制備實(shí)施例10產(chǎn)物為原料，合成及后處理同實(shí)
OH
施例1制備，得淡黃色固體，收率81%。熔點(diǎn)；llQ-UOt。1!!-匪R(CD30D，300MHz) 8 9. 18(s， 1H) ,8. 68 (d, J = 10. 2Hz, 1H) ,8. 48 (s, 1H) ,8. 26 (d, J = 7. 5Hz，1H)，7. 82-7. 74 (m，1H)， 7. 27-7. 18 (m, 5H)，6. 80-6. 76 (m, 3H)，6. 49-6. 40 (m, 2H)，4. 82-4. 61 (m, 2H)，4. 29-4. 27 (d, J =8. 1Hz, 1H)，3. 13-3. 06 (m, 2H)，2. 95-2. 84 (m, 3H)，2. 35-2. 27 (m, 2H)，2. 04-2. 02 (m, 1H)， 1. 85-1. 80(m，2H)，1. 43-1. 26 (m,9H) ,0. 88-0. 83 (m, 9H) ； 13C_NMR(CD30D，75MHz) :170. 17，163. 36，155. 62，147. 61，143. 96，143. 44，142. 83，135. 95，130. 37，129. 21，128. 78，127. 47， 127. 23，126. 61，126. 44，115. 34,85. 30,54. 86,54. 74,52. 91,51. 54,40. 16,39. 82,39. 64， 38. 10,37. 57,36. 97,35. 80,35. 69,28. 73,27. 10,26. 28,25. 41,24. 04,23. 06,22. 97， 22. 03,21. 95 ；HRMS 計(jì)算值 C38H49BN506 (M+1)+682. 3770，實(shí)測(cè)值 682. 3767。
實(shí)施例6 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸(6c) fiY V Y V Y、^^以實(shí)施例5產(chǎn)物5c為原料，合成及后處理同實(shí)施
例 4，得黃色固體，產(chǎn)率 56. 3 %。熔點(diǎn)298-300 °C。屯-匪1 (003( ，300MHz) 8 9. 13(s, 1H) ,8. 78 (t, J = 2. 4Hz，1H)，8. 67-8. 66(dd，J = 1. 2，2. 4Hz，1H)，7. 23—7. 16 (m，5H)， 7. 16-7. 01 (m, 2H)，6. 66-6. 18 (m, 2H)，4. 80-4. 73 (m, 2H)，3. 20-3. 18 (m, 1H)，3. 08-3. 02 (m, 3H)，2. 68-2. 56 (m, 1H)，1. 62-1. 54 (m, 2H)，1. 33-1. 26 (m, 2H)，1. 14-1. 04 (m, 2H)， 0. 89-0. 83 (m, 6H) ；13C_WR(CD30D，300M) -.111. 69，173. 05，165. 13，164. 95，157. 77，157. 68， 148. 79，145. 59，144. 96，144. 79，144. 49，137. 82，131. 47，131. 35，130. 34，129. 56，127. 97， 127. 40，127. 16,116. 41,56. 11,55. 90,52. 87,52. 67,40. 70,38. 82，38. 49,37. 65,37. 30， 26. 83，26. 61，23. 89，23. 69，22. 31，21. 83. HRMS 計(jì)算值 C28H34BN506(M_l廣546. 2529，實(shí)測(cè)值 546. 2527。 實(shí)施例7 N-吡嗪甲?；?L-酪氨酰-L-苯氨酰L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5d) 八以制備實(shí)施例13產(chǎn)物為原料，按照實(shí)施例1的合成
方法制備，得淡黃色固體，收率80%。熔點(diǎn)90-92°C。屯-匪R(CD30D，300MHz) 8 9. 29 (s, 1H)，8. 74 (d, J = 2. 4Hz, 1H)，8. 50 (d, J = 2. 1Hz, 1H)，8. 26 (d, J = 7. 8，1H)，7. 11-6. 99 (m, 8H)，6. 74 (d, J = 8. 4Hz,2H)，6. 74-6. 71 (m, 1H)，6. 50-6. 42 (m, 1H)，4. 70-4. 26 (m, 1H)， 4. 51-4. 27 (m, 1H)，4. 29-4. 17 (m, 2H)，3. 07-2. 93 (m, 5H)，2. 37-2. 31 (m, 1H)，2. 21-2. 16 (m, 1H) , 2. 06-2. 03 (m, 1H)，1. 90-1. 80 (m，2H)，1. 40-1. 26 (m，6H) ,0. 90-0. 79 (m, 12H)； 13C-NMR(CD30D，75MHz) :171. 36，170. 18，163. 03，155. 47，147. 50，144. 29，143. 74，142. 73， 135.95，130.29，130.15，129.31,128.50，127.51,126.83,116.47,116.64,85.33,55.08， 53. 19，51. 55，39. 73，39. 64，39. 40，38. 23，38. 16，37. 44，37. 14，35. 67，28. 73，28. 54， 27. 14,26. 30,25. 44,24. 07,22. 98,22. 02 ；HRMS 計(jì)算值 C38H49BN506 (M+1)+682. 3770，實(shí)測(cè)值 682.3795。實(shí)施例8 N-吡嗪甲?；?L-酪氨酰-L-苯丙氨酰L-亮氨硼酸(6d)
18oh以實(shí)施例7產(chǎn)物5d為原料，合成及后處理方法同實(shí)
施例 4，得黃色固體，產(chǎn)率 71. 5%0 熔點(diǎn):219-221°C 屯-匪1 (。03( ，300MHz) 8 9. 15 (s， 1H)，8. 78 (d, J = 2. 4Hz, 1H)，8. 66 (d, J = 2. 1Hz, 1H)，7. 24-7. 19 (m, 5H)，7. 13-7. 00 (m, 2H)， 6. 97-6. 62 (m, 2H)，4. 80-4. 71 (m, 2H)，3. 11-3. 06 (m, 3H)，2. 93-2. 87 (m, 1H)，2. 64-2. 54 (m, 1H) , 1. 62-1. 54 (m，2H) , 1. 40-1. 29 (m, 2H) , 1. 16-1. 11 (m, 2H) ,0. 92-0. 81 (m, 6H)； 13C-NMR(CD30D，75MHz) -.111. 20，173. 18，164. 92，157. 51，148. 68，145. 62，144. 93，144. 73， 137. 17，136. 96，131. 36，130. 46，130. 33，129. 69，129. 62，128. 25，128. 19，116. 32,56. 34， 56. 17,52. 61,40. 77,38. 46,38. 11,37. 82,26. 62,23. 86,21. 91. ESI :MS(ESI)實(shí)測(cè)值 (M+Na/z) +570. 2168，計(jì)算值570. 2500 (M+Na)。實(shí)施例9 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-苯氨酰L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5e)以制備實(shí)施例18產(chǎn)物為原料，按照實(shí)施例1的合成方法制備，收率87%。
得白色固體，m. p. 63-65 °C 'H-NMR^DC^, 500MHz)
8 9. 32 (s, 1H)，8. 78-8. 67 (m, 1H)，8. 55-8. 21 (m, 1H)，8. 10-7. 95 (m, 1H)，7. 15-6. 99 (m, 6H)， 6. 04-5. 96 (m, 1H)，4. 65-4. 34 (m, 2H)，4. 30-4. 15 (m, 1H)，3. 22-3. 01 (m, 2H)，2. 37-2. 22 (m, 2H)，2. 12-2. 04 (m, 1H)，1. 93-1. 90 (m, 2H)，1. 76-1. 63 (m, 3H)，1. 48-1. 39 (m, 1H)，1. 28 (s, 3H)，1. 29-1. 22 (m，3H)，0. 94-0. 90(m，6H)，0. 86-0. 83(m，9H) ； 13C_NMR(CDC13，125MHz) 171. 35，170.30，163. 15，147. 47，144. 38，143. 72，142.63，136.451，129. 10，128.37， 126. 66，84. 55，54. 50，52. 02，51. 45，40. 73，38. 31，38. 03，37. 95，37. 77，35. 63，28. 48， 27. 00,26. 26,25. 52,24. 78,23. 91,22. 89,22. 29,21. 78 ；MS (EI) :m/z 631. 6(M)+。
實(shí)施例10 N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L-苯丙氨酰L-亮氨硼酸(6e)
NH 、 / t
HN
lo
\
:NH
o
4§11以實(shí)施例9產(chǎn)物5e為原料，合成方法及后處理
OH
同實(shí)施例2。蒸干得到黃色固體19. 7mg，收率68. 4%。m. p. 113-116°C。力-匪1 (0)(13， 300MHz) S 0. 78 0. 82 (_CH3，m, 13H)，1. 19 1. 57 (_CH2，_CH，_B (OH) 2，m, 7H)，1. 95 (-CH, d, 1H)，2. 89 3. 09 (-CH, -CH2, m, 3H)，4. 28 4. 41 (-CH, m, 1H) ,4. 61 4. 76 (-CH, m, 1H)，6. 92 7. 02 (-Ph, -C0NH, m, 6H)，7. 19 7. 25 (-C0NH, m, 1H)，7. 96 8. 02 (-C0NH, m, 1H) ,8. 47(-Pyz, s, 1H) ,8. 72(-Pyz, s，lH)，9. 16 9. 25 (_Pyz，m，1H) ；MS (ESI)實(shí)測(cè)值m/
19z496. 3710 (M-H)，計(jì)算值497. 2809。 實(shí)施例11 N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L-萘氨酰L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5f)
以制備實(shí)施例20產(chǎn)物為原料，合成及后處理方法
同實(shí)施例 1,收率 85%，白色固體，熔點(diǎn)140-142 °C .咕-匪1 (0)(13，300MHz) 8 9. 195 (d, J = 1. 5Hz，lH)，8. 71(d，J = 2. 4Hz, 1H) ,8. 40 (t, J = 1. 2Hz，1H)，7. 93 (d，J = 8. 1Hz, 1H)，7. 66-7. 61 (m, 4H)，7. 36-7. 32 (m, 3H)，6. 75 (d, J = 7. 8Hz, 1H)，6. 00 (d, J = 4. 8,1H)， 4. 78-4. 71 (m, 1H)，4. 59-4. 53 (m, 1H)，4. 27 (dd, J = 8. 7Hz, 1H)，3. 23 (d, J = 6. 6Hz,2H)， 3. 14-3. 10 (m, 1H)，2. 28-2. 20 (m, 1H)，2. 17-2. 08 (m, 1H)，2. 00-2. 05 (m, 1H)，1. 87-1. 57 (m, 6H)，1. 41-1. 27(m，9H)，0. 92-0. 90(m，6H)，0. 83-0. 77(m，9H) ；13C_NMR (CDC13，75MHz) 171. 05，170. 61, 163. 13，147. 52，144. 24，143. 45，142. 59，142. 47，133. 933，133. 25， 132. 22，128. 13，127. 99，127. 48，127. 26，125. 95，125. 52,85. 83,53. 06,51. 98，51. 88， 51. 32，40. 63，39.68，39.56，38. 19，35. 48，28.56，27. 10，26. 23，25. 33，25. 22，24.78， 24. 04，22. 89,21. 80 ；HRMS 計(jì)算值 C39H53BN505 (M+l) +682. 4134，實(shí)測(cè)值 682. 4155。
實(shí)施例12 N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸(6f)
以實(shí)施例11產(chǎn)物5f 為原料，合成及后處理方
法同實(shí)施例4，得乳白色固體，產(chǎn)率56. 3 %，熔點(diǎn)157-159 °C。力-匪R(CDC13，300MHz) 8 9. 13-9. 10 (m, 1H)，8. 67 (s, 1H)，8. 36 (s, 1H)，7. 98-7. 94 (m, 2H)，7. 59-7. 29 (m, 7H)， 7. 22-7. 19 (m, 2H)，4. 98-4. 84 (m, 1H)，4. 41-4. 37 (m, 1H)，3. 46-3. 35 (m, 2H)，3. 24-3. 10 (m, 1H)，1. 71-1. 25(m，8H)，0. 88-0. 78 (m, 12H) ； 13C_NMR(CDC13，75MHz) -.111. 48，163，92，147， 65，144，15，143. 31，143. 07，142. 56，133.56，133.22，132.25，129. 16，128. 69，128.24， 127. 51，127. 10，125. 98，125. 58,52. 95,52. 77,51. 91,41. 12,40. 23,36. 76,25. 68,24. 72， 23. 12，22. 83，22. 44，21. 69. HRMS 計(jì)算值 C29H37BN505 (M_l廣546. 2893，實(shí)測(cè)值 546. 2906。
實(shí)施例13 N-吡嗪甲酰基-L-苯丙氨酰-L-萘氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5g)
o \ H 9
20
C
B
/ /
NH
V
N no
SH
N n ^ n K^r^i以制備實(shí)施例22產(chǎn)物為原料，合成制備及后 j|N N
處理方法同實(shí)施例1，得白色固體，收率86%，熔點(diǎn):97-98°Co i-NMR (⑶Cl3，300MHz) 實(shí)施例14N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸(6g)
以實(shí)施例13產(chǎn)物5g為原料，合成方法及后處理同
實(shí)施例4，得乳白色固體，產(chǎn)率53%，熔點(diǎn)137-138°C。屯-匪R(CDC13，300MHz) 8 9. 90 (s, 1H)，8. 61 (s，1H)，8. 26 (s, 1H)，8. 09-7. 98 (m, 1H)，7. 50-7. 23 (m, 12H)，7. 19-7. 07 (m, 1H)， 6. 73-6. 56 (m, 2H)，4. 88-4. 76 (m, 1H)，4. 72-4. 67 (m, 1H)，3. 33-3. 28 (m, 1H)，3. 14-3. 12 (d, J = 6. 3Hz，2H)，3. 02-2. 97(m，1H)，2. 04(s，br，2H)，1. 51-1. 42(m，3H)，0. 87-0. 80(m，6H)； 13C-NMR(CDC13，75MHZ) :173. 10，170. 06，163. 51,147. 59，143. 90，142. 95，142. 86，142. 64， 142. 52，135. 90，135. 70，133. 45，133. 23，133. 07，132. 14，129. 29，128. 88，128. 24，127. 94， 127. 46，127. 14，125. 90，125. 53,54. 94,51. 96,42. 92,39. 98,37. 26,36. 92,25. 69,23. 14， 22. 56 ；HRMS 計(jì)算值 C32H35BN505 (M_l廣580. 2736，實(shí)測(cè)值 580. 2729。 實(shí)施例15N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-萘氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5h)
以制備實(shí)施例24產(chǎn)物為原料，合成及后
處理同實(shí)施例1，得白色固體，收率82 %，熔點(diǎn)136-137 °C。t-NMR (CD30D, 300MHz) 8 9. 10 (s，1H) ,8. 63 (d, J = 2. 4Hz，1H)，8. 26 (d, J = 2. 4Hz, 1H) ,8. 12-8. 02 (m, 1H)， 7. 81-7. 57(m，6H)，7. 53-7. 32(m，8H)，7. 20-7. 17 (dd, J = 1. 8,8. 4Hz，2H)，6. 51-6. 49 (m, 1H) ,6. 00 (d, J = 5. 1Hz，1H)，4. 87-4. 72(m，2H)，4. 28-4. 24(dd，J = 1. 5，8. 7Hz，1H)， 3. 33-3. 31 (d, J = 6. 3Hz,2H)，3. 24-3. 22 (m, 1H)，3. 07-3. 00 (m, 1H)，2. 33-2. 25 (m, 1H)， 2. 18-2. 13 (m, 1H)，2. 04-2. 00 (m, 1H)，1. 87-1. 67 (m, 2H)，1. 36-1. 25 (m, 8H)，0. 87-0. 74 (m, 12H) ； 13C-NMR(CD30D，75MHz) :170. 46，169. 85，163. 22，147. 46，144. 00. 143. 16，142. 61，
21142. 49，133. 58，133. 45，133. 34，132. 50，132. 13，128. 58，127. 97，127. 71，127. 57，127. 44， 126. 31. 125. 90，125. 52,85. 76,54. 41,53. 30,51. 35,39. 58,38. 19,37. 98,37. 59,35. 50， 28. 59，27. 10，26. 24，25. 33，25. 18，24. 04，21. 96 ；HRMS 計(jì)算值 C46H53N505 (M+1) +766. 4134，實(shí) 測(cè)值 766. 4148。實(shí)施例16 N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸(6h)以實(shí)施例15產(chǎn)物5h為原料，合成方法及后處理同實(shí)施例4，得乳白色 固體，產(chǎn)率 72. 1 %,熔 ^ 145-146 °C。iH-WI^CDClySOOMHz) S 8. 95(s，1H)，
8. 54(s，lH)，8. 16(s，lH)，8. 17-8. ll(m，lH)，7. 74-7. 16 (m,
14H)，7. 08-6. 95 (m, 2H)，6. 87-6. 50 (m, 2H)，4. 95-4. 87 (m, 1H)，4. 79-4. 68 (m, 1H)， 3. 28-3. 26 (m, 2H)，3. 00-2. 86 (m, 1H)，2. 33 (s, br, 2H)，1. 38-1. 35 (m, 3H)，0. 81-0. 79 (m, 6H) ； 13C-NMR(CDC13，75MHz) :170. 18，169. 61,163. 56，147. 51，143. 79，141. 90，142. 55， 133. 42，133. 126，133. 01, 132. 46，132. 07，128. 58，128. 09，127. 39，127. 14，127. 01， 126. 32，125. 94，125. 83，125. 49，54. 79，51. 52，39. 78，37. 49，37. 30，36. 95，25. 64，23. 09， 22. 39，22. 19 ；HRMS 計(jì)算值 C36H37BN505 (M-l)"630. 2893，實(shí)測(cè)值 630. 2895。
實(shí)施例17N-吡嗪甲?；?L-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5i)
以制備實(shí)施例26產(chǎn)物為原料，合成及后處理同實(shí)
施例 1，得白色固體，收率 78%，熔點(diǎn):127-129°Co 屯-匪 R(CDC13，300MHz) 8 9. 24(s,lH), 8. 76 (d, J = 2. 4Hz,lH),8. 51 (d, J = 2. 4Hz，1H)，8. 50-8. 46 (m，1H)，8. 22-8. 14 (m，1H)， 7. 40-7. 38 (m, 5H)，7. 01-6. 88 (m, 4H)，6. 78-6. 58 (m, 1H)，6. 09-5. 97 (m, 1H)，5. 75-5. 71 (m, 2H) ,4. 82-4. 75 (m，2H) , 3. 51-3. 45 (m, 1H) , 3. 31-3. 01 (m，4H)，1. 25-1. 23 (m, 10H)， 0. 99-0. 89 (m, 8H)，0. 88-0. 85 (m, 6H) ；MS (EI) m/z703. 6 (M_l) \
實(shí)施例18 N-吡嗪甲?；?L-色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸(6i)
OH以實(shí)施例17產(chǎn)物5i為原料，合成及后處理同實(shí)施
例2，蒸干得到黃色粘稠固體11. 4mg,收率49. 2%0力-匪R(CDC13，300MHz) 8 0. 79 (_CH3，d, 6H)，1. 40 1. 60(-CH2，-CH，m，3H)，1. 97 2. 13 (_CH2，_B (OH) 2，m，10H) ,3. 15 3. 19 (-CH,m, 1H)，3. 53 3. 58 (-CH, m, 1H)，3. 75 3. 98 (-CH, m, 1H)，4. 87 4. 98 (-CH, m, 1H)， 5. 05 (-CH, s，1H)，6. 89 (-C0NH, m, 1H)，7. 16 7. 19 (_Ph，吲哚，m, 9H)，8. 06 (-C0NH, d, 1H)， 8. 64(-Pyz, d, 1H) ,9. 17(-Pyz, s, 1H) ,9. 28(-Pyz, d, 1H) ,9. 72 (-NH, s, 1H)。實(shí)施例19 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5j)以制備實(shí)施例30產(chǎn)物為原料，合成及后處理同實(shí)施例1，得淡黃色固
體，收率 79 %，熔點(diǎn)153-155 °C。iH-NMlUCDCly
300MHz) 8 9. 08 (s, 1H) ,8. 73-8. 69 (m, 1H) ,8. 48 (s，1H)，8. 34 (s，1H) ,8. 11-7. 94 (m, 1H)， 7. 32-7. 21 (m, 5H)，7. 08-6. 88 (m, 4H)，6. 62-6. 42 (m, 1H)，6. 01 (s, 1H)，5. 65-5. 58 (m, 2H)， 4. 38-4. 29 (m, 2H)，3. 20-3. 01 (m, 4H)，1. 40-1. 24 (m, 10H)，0. 99-0. 89 (m, 8H)，0. 83-0. 80 (m, 6H) ；MS (EI)m/z 704. 7 (M+)。 實(shí)施例20 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸(6 j)
以實(shí)施例19產(chǎn)物5j為原料，合成方法及后處 理同實(shí)施例2，蒸干得到黃色粘稠固體49. 3mg,收率42. 4 %。'H-NMR(CDC13，300MHz) 8 0. 81(-CH3, m，6H)，1. 23 1. 45(_CH2，_CH，m, 3H)，1. 89 2. 07(_CH2，_B(0H)2，m, 10H)， 3.05 3. 11(-CH, m，lH)，3. 33 3. 48 (-CH, m，1H)，3. 45 3. 78 (-CH, m，lH)，4. 64 4. 81 (-CH, m, 1H)，5. 25 (_CH，d, 1H)，6. 76 (-C0NH, m, 1H)，7. 08 7. 16 (_Ph，吲哚，m, 9H)， 8. 12(-C0NH, d，lH)，8. 57(-Pyz, d，lH)，9. 07(-Pyz, d，1H)，9. 21 (_Pyz，d，lH)，9. 28 (-NH, d, 1H)。 實(shí)施例21N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯(5k)
以制備實(shí)施例32產(chǎn)物為原料，合成及后處理同
實(shí)施例 1，得白色固體，收率 81%。熔點(diǎn)68-70°C。屯-匪 R(CDC13，300MHz) 8 9. 33(s,lH), 8. 76-8. 73 (d, 1H)，8. 54 (s, 1H)，8. 29-8. 10 (m, 1H)，7. 29-7. 25 (m, 5H)，6. 39-6. 31 (m, 2H)， 4. 82-4. 79 (m, 1H)，4. 44-4. 41 (m, 1H)，4. 30-4. 27 (m, 1H)，3. 22-3. 19 (m, 3H)，2. 32-2. 17 (m, 3H)，2. 05-2. 02 (m, 1H)，1. 89-1. 27 (m, 14H) ,0. 96-0. 83 (m, 15H) ；MS (EI)m/z 631. 6 00。 實(shí)施例22 N-吡嗪甲?；?L-苯丙氨酰_L亮氨酰_L_亮氨硼酸(6k)
以實(shí)施例21產(chǎn)物5k為原料，合成方法及后處理
同實(shí)施例2，蒸干得到黃色固體16. 7mg,收率73. 2 %，熔點(diǎn)116-118 °C。力-匪_。13， 300MHz) 8 9. 30-9. 21 (m, 1H)，8. 74 (s, 1H)，8. 47 (s, 1H)，8. 33-8. 29 (m, 1H)，7. 32-7. 22 (m, 6H)，6. 99-6. 91 (m, 1H)，4. 93-4. 57 (m, 2H)，3. 21 (s，2H)，2. 85-2. 58 (m, 1H)，2. 18-1. 25 (m, 8H) ,0. 96-0. 82 (m, 12H) ；MS (ESI)實(shí)測(cè)值m/z 496. 3977 (M_H)，計(jì)算值497. 2809。
實(shí)施例23 N-吡嗪甲?；?L-亮氨酰-L-亮氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(51)
以制備實(shí)施例34產(chǎn)物為原料，合成方法及
后處理同實(shí)施例1，得粘稠狀固體，收率87%。屯-匪_。13，300MHz) 6 9.41(s,1H), 8. 76-8. 65 (m, 1H)，8. 56-8. 45 (m, 1H)，8. 18-8. 10 (m, 1H)，5. 43-5. 38 (m, 1H)，4. 71-4. 50 (m, 1H) ,4. 38-4. 32 (m, 1H) ,4. 07-3. 97 (m, 2H) , 3. 86-3. 84 (m, H) , 2. 52-2. 08 (m, 3H)， 2. 04-1. 90 (m, 6H)，1. 67-1. 60(m，2H)，1. 41-1. 25 (m, 10H)，0. 99-0. 83(m，21H) ；MS (EI)m/z 597. 5(M)+。 實(shí)施例24 N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮氨酰_L_亮氨硼酸(61)
/OH以實(shí)施例23產(chǎn)物51為原料，合成方法及后處理
同實(shí)施例2，得到黃色粘稠固體14. 4mg，收率62. 8%。力-匪1 _13，300MHz) S 0. 81 0. 97 (-CH3, m，18H)，l. 19 2. 82(-CH2, _CH，_B(0H)2，m, 11H) ,2. 85 2. 91(-CH, m，1H)， 4. 53(-CH，s，1H), 4. 69 4. 86(_CH，m，1H) ,6. 99 (-C0NH, d, 1H)，7. 16 (-C0NH, d, 1H) ,8. 06 8. 28 (-C0NH，m，1H)，8. 50(-Pyz, s，lH)，8. 71(-Pyz, s，lH)，9. 30(-Pyz, s, 1H) ；MS (ESI)實(shí)測(cè) 值:m/z 462. 3825 (M_H)，計(jì)算值463. 2966。 實(shí)施例25N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰-L-亮氨酰_L_亮氨硼酸菔烷二醇酯(5m)
以制備實(shí)施例36產(chǎn)物為原料，合成及后處理方
法同實(shí)施例 1，得白色固體，收率 81%。熔點(diǎn):99-100°C . iH-NMlUCDCly 300MHz) 8 9. 31(s, 1H) ,8. 73 (s, 1H) ,8. 49 (d, J = 1. 8Hz，1H)，8. 33 (d，J = 7. 5Hz，1H)，7. 66-7. 58 (m，4H)， 7. 44-7. 38 (m, 3H)，6. 48-6. 36 (m, 2H)，4. 94-4. 85 (m, 1H)，4. 42-4. 30 (m, 1H)，4. 25-4. 16 (m,
241H) ,3. 39-3. 37 (d, J = 6.3Hz，2H)，3. 19-3. 11 (m，1H)，2. 35-2. 27 (m，1H)，2. 20-2. 15 (m, 1H) , 1. 89-1. 84 (m, 2H) , 1. 68-1. 61 (m, 2H) , 1. 37-1. 36 (m, 3H) , 1. 53-1. 43 (m, 4H)， 1. 28-1. 21 (m，3H)，0. 94-0. 89(m，6H)，0. 83-0. 79 (m, 9H) ；13C_NMR(CDC13，75MHz) -.111. 81， 170. 10，163. 298，147. 59，144. 34，143. 72，142. 77，133. 46，132. 47，128. 56，128. 12， 127. 62，127. 16，126. 18，125. 80,85. 60,54. 70,54. 53,51. 40,51. 20,50. 96,40. 89,40. 08， 39. 85，39. 56，38. 18，38. 09，35. 58，28. 59，27. 08，26. 25，25. 26，25. 46，24. 51，24. 03， 23. 00,22. 71,22. 15,21. 94 ；HRMS 計(jì)算值 C39H53BN505 (M+l)+682. 4134，實(shí)測(cè)值 682. 4152.
實(shí)施例26 N-吡嗪甲?；?L-萘丙氨酰_L_亮氨酰_L_亮氨硼酸(6m)
J = 2. 1Hz, 1H) ,8. 45 (d, J = 1. 8Hz, 1H) ,8. 40 (d, J = 7. 5Hz，1H)，7. 74-7. 66 (m，4H)， 7. 45-7. 42 (m, 3H)，7. 37 (d, J = 8. 7Hz, 1H)，5. 05-4. 93 (m, 1H)，4. 53-4. 45 (m, 1H)，3. 38 (d, J = 8. 7Hz，2H)，2. 98-2. 83 (m, 1H)，1. 99 (s，br,2H)，1. 80-1. 51 (m, 1H)，1. 50-1. 29 (m, 6H), 0. 86-0. 74 (m, 12H) ； 13C_NMR(CDC13，75MHz) :170. 59，170. 45，163. 83，147. 74，144. 27， 143. 61，142. 77，133. 46，133. 27，132. 47，128. 59，128. 12，127. 63，127. 05，126. 24，125. 84， 54. 76,39. 88,37. 74，25. 78,24. 61,24. 48,23. 03,22. 82,22. 63,21. 60,21. 45. MS (ESI)實(shí)測(cè) 值:m/z 462. 3825 (M_H)，計(jì)算值463. 2966。 試驗(yàn)實(shí)施例1三肽硼酸(酯)化合物的蛋白酶體抑制作用采用熒光肽的方法測(cè)定蛋白酶體的活性，用SuC-leu-leu-Val-Tyr-AMC(SuC代表 琥珀酰，AMC代表7-氨基-4-甲基香豆素，從SIGMA購(gòu)買(mǎi))測(cè)定糜蛋白酶樣活性(ChT_L)； 用Z-Ala-Arg-Arg-AMC(Z代表芐氧羰基，從Calbiochem購(gòu)買(mǎi))測(cè)定胰蛋白酶樣活性(T-L)； 用Z-leu-leu-Glu-代表0萘酰胺，從SIGMA購(gòu)買(mǎi))測(cè)定多肽-谷氨酰-多肽水 解酶活性(PGPH)。所述的活性測(cè)定方法是37°C下將1 y g從大鼠肝臟中提取20S蛋白酶體用含有不 同濃度的化合物、50 u M的熒光肽和20mM三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽的100 u L溶液分別培養(yǎng) 一小時(shí)，在380/440nm和335/410nm的激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)下分別用Fluostar OPTIMA和BMG Germany光譜熒光劑測(cè)定AMC及0 NA物質(zhì)的釋放的熒光，用0. 1 % DMS0作為溶劑空白。比 較溶劑空白的熒光來(lái)計(jì)算抑制率。所述的試驗(yàn)以抗腫瘤藥物硼替佐米(bortezomib)(白血 病治療藥)，即PS341作為陽(yáng)性對(duì)照的比較化合物。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表1。表1本發(fā)明化合物的蛋白酶體抑制作用
試驗(yàn)實(shí)施例2體外抗腫瘤活性初篩試驗(yàn)本實(shí)施例所采用的試驗(yàn)方法是藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的抗腫瘤活性試驗(yàn)方法，例如可參見(jiàn) 下述文獻(xiàn)(J. Immunol Method, 1983，65，55)。測(cè)試模型A :MTT法(HL-60人白血病)；B :SRB法(BGC-823人胃癌)；C :SRB法 (Bel-7402人肝癌)；D :SRB法(KB人鼻咽癌)。用本發(fā)明的實(shí)施例1-26的化合物進(jìn)行上述試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果分別列于表2-5。其中 試驗(yàn)結(jié)果的表示方法是“+++”表示3個(gè)劑量的抑制率均大于50% ；“++”表示2個(gè)劑量的 抑制率大于50% ；“ + ”表示1個(gè)劑量的抑制率大于50%。表2對(duì)HL-60人白血病細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制活性(MTT法)
表3對(duì)BGC-823人胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制活性(SRB法)
化合物 編號(hào)不同劑量下的測(cè)試效應(yīng)(抑制率％)結(jié)果0.05 ^M0.5|iM5b68.5994.7696.54+++6b56.3593.6996.69+++5c3.1955.9996.09++6c2.6425.1097.70+5d23.6493.6397.85++6d4.3346.6697.55+5f38.2789.1583.02++6f80.3095.5296.79+++5g77.6295.4395.89+++6g76.8695.5597.09+++5h55.0088.9795.40+++6h44.9488.0697.58++5m45.9784.5397.18++6m60.3181.9396.99+++ 表4對(duì)Bel-7402人肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制活性(SRB法)
27
表5對(duì)KB人鼻咽癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制活性(SRB法)
化合物 編號(hào)不同劑量下的測(cè)試效應(yīng)(抑制率％)結(jié)果0.05nM0.5^iM5(aM5b40.3595.0695.78++6b23.3391.4796.64++5c1.8429.8391.36+6c-13.57-5.1695.40+5d0.8373.2394.76++6d3.2317.3496.20+5f3.7493.4195.26++6f32.1195.6997.80++5g62.7995.5096.51+++6g59.4395.9796.66+++5h20.8391.2594.62++6h14.2591.7797.40++5m8.5985.6196.17++6m40.8486.4294.69++以上試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明(1)本發(fā)明的三肽硼酸(酯)具有很好的體外抗腫瘤活性。多 數(shù)化合物在5 u M濃度下可達(dá)到> 90%的抑制率，甚至在0. 05 u M濃度下個(gè)別化合物仍能達(dá) 到> 50. 0%的抑制率；⑵保護(hù)基菔烷二醇的脫除與否，對(duì)活性影響很小。試驗(yàn)實(shí)施例3體外抗腫瘤活性(IC5(1)
根據(jù)上述抗腫瘤細(xì)胞活性初步篩選試驗(yàn)結(jié)果，選擇其中活性較好的化合物在 HL-60(早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株)、BXPC-3(人胰腺癌細(xì)胞株)、U266(多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞 株)及BGC-823(人胃癌細(xì)胞株)四種腫瘤細(xì)胞株上測(cè)定了它們的IC5Q值。其中前三種腫 瘤細(xì)胞株由American Type Culture (Manassas, VA)獲得，BGC-823 (人胃癌細(xì)胞株)從中 國(guó)藥科大學(xué)獲得。試驗(yàn)方法HL_60細(xì)胞于含有20%胎牛血清的IMDM培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度 37°C，培養(yǎng)環(huán)境含5% C02 ；BGC-823細(xì)胞及BXPC-3細(xì)胞在含有10%胎牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度37°C，培養(yǎng)環(huán)境含5% C02 ；U266細(xì)胞在含有15%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基上培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度37°C，培養(yǎng)環(huán)境含5% C02。采用標(biāo)準(zhǔn)的MTT法測(cè)定細(xì)胞的生長(zhǎng)。在96孔板的每個(gè)孔中加入150 y L (含3000 個(gè)細(xì)胞)的分散液并使其生長(zhǎng)，24小時(shí)后，將10個(gè)50 yL含不同濃度藥物的介質(zhì)加入相應(yīng) 的孔中，繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)。然后在37°C下將20 y L含有5mg/ml MTT的溶液加入到每個(gè)孔 中培養(yǎng)4小時(shí)。在4°C下1000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘，將上層介質(zhì)小心棄去。將沉淀物溶于 lOOii L的DMS0中，在540nm波長(zhǎng)下用Infinite M200 (Tecan, Austria)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度。結(jié)果用IC5(I值來(lái)表示，取三次獨(dú)立測(cè)定的平均值。結(jié)果見(jiàn)表6。表6部分化合物的IC5Q值 結(jié)果顯示，多數(shù)化合物顯示出比PS341更好的選擇性，而且在一些腫瘤瘤株上的 活性明顯高于PS341。如除6c外，其它化合物對(duì)BGC-823細(xì)胞的生抑制率均高于PS341 ；6f 對(duì)3種細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率均高于PS341。試驗(yàn)實(shí)施例4體內(nèi)抗腫瘤活性動(dòng)物ICR小鼠，雌雄各半(18-22克)，由北京醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物部提供。腫瘤細(xì)胞株小鼠H22由天然藥物及仿生藥物國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室藥理組細(xì)胞庫(kù)提{共。方法取小鼠腫瘤細(xì)胞，經(jīng)處理后將細(xì)胞稀釋為5xl06/ml。在無(wú)菌條件下，按 0. 2ml/只，接種于小鼠左前肢腋下。接種24h后，分組給藥，每天口服給藥一次，連續(xù)10天。 第12天剝瘤稱(chēng)重，計(jì)算每組平均瘤重、標(biāo)準(zhǔn)差及P值。表7化合物6f和6m的體內(nèi)抗腫瘤活性 NS 空白組；***P < 0. 001 ；*P < 0. 05以上體內(nèi)抗腫瘤活性試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明三肽硼酸化合物的活性與硼替佐米 (PS341)相當(dāng)，但毒性明顯降低，尤其是化合物6g毒性更低，有望研發(fā)成為效果更好、毒副 作用更低的蛋白酶體抑制劑。以上已經(jīng)詳細(xì)描述了本發(fā)明的實(shí)施方案，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)很明顯可以做很 多改進(jìn)和變化而不會(huì)背離本發(fā)明的基本精神。所有這些變化和改進(jìn)都認(rèn)為是本發(fā)明的范圍 之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種具有下述通式(I)結(jié)構(gòu)的三肽硼酸類(lèi)化合物其中，R1、R2和R3各自獨(dú)立的為C1 6直鏈或支鏈的烷基、芳基甲基或芳雜環(huán)基甲基，其中在芳基甲基或芳雜環(huán)基甲基的芳環(huán)上可任選的被選自C1 4的直鏈或支鏈烷基、羥基、氨基或鹵素的基團(tuán)所取代；E為H或2，3 蒎烷二醇酯基。F2009101472920C0000011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中所述的芳基是苯基或萘基，所述的雜芳環(huán)基是 吲哚基，和/或所述芳環(huán)上的取代基是甲基、羥基、氯原子或氟原子。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化合物，其中所述的禮、1 2和R3各自獨(dú)立的為苯甲基、對(duì)羥基 苯甲基、β -吲哚基甲基、異丁基或2-萘基甲基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中所述的R3基團(tuán)是異丁基。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述化合物，其中所述的化合物是N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-N-吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲酰基 吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲酰基 吡嗪甲?；?吡嗪甲酰基 吡嗪甲?；?吡嗪甲酰基 吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?吡嗪甲?；?L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L--L-苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 萘丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 亮氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 亮氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷匕日 匕日 匕日 匕日酉酉酉酉醇醇醇醇 .1 ^ - ^ ,1匕日 匕日 匕日 匕日 匕日酉酉酉酉酉醇醇醇醇醇 .1 ^ - ^ ,1 ^苯丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷二醇酯 色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 亮氨酰-L-亮丙氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 萘丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸菔烷 苯丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸； 萘丙氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸； 苯丙氨酰-L-酪氨酰-L-亮氨硼酸 酪氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸 亮氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸 亮氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸 苯丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸； 萘丙氨酰-L-萘丙氨酰-L-亮氨硼酸； 色氨酰-L-苯丙氨酰-L-亮氨硼酸 苯丙氨酰-L-色氨酰-L-亮氨硼酸 苯丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸N-吡嗪甲酰基-L-亮氨酰-L-亮丙氨酰-L-亮氨硼酸；和 N-吡嗪甲酰基-L-萘丙氨酰-L-亮氨酰-L-亮氨硼酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5所述化合物的制備方法，該方法包括以吡嗪甲酸為起始原料，依 次引入二種所需的氨基酸，然后引入所需第三個(gè)氨基酸的硼酸酯，可得到本發(fā)明上述通式 的硼酸酯類(lèi)化合物；如果需要制備相應(yīng)的硼酸化合物，可將上述硼酸酯化合物水解。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述化合物的制備方法，當(dāng)其中所述的R3基團(tuán)是異丁基時(shí)，所述的 通式化合物可按下述合成路線制備 優(yōu)選其中所用的原料L-亮氨硼酸酯可按下述合成路線制備
8.藥物組合物，其中含有權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的三肽硼酸類(lèi)化合物作為活性成 分，和任選的含有一種或多種藥用載體，優(yōu)選其中所的活性成分的含量是0.5% -99%，藥 用載體的含量是_99.5%。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，其中所述的組合物被制成口服或腸胃外給藥的 形式，所述腸胃外給藥的形式包括注射給藥、局部給藥、吸入給藥、直腸給藥或植入給藥的 形式；優(yōu)選的，其中口服給藥的劑型是片劑、膠囊、顆粒劑或適于口服的液體制劑形式，或所 述的口服制劑是緩釋或定量釋放的形式；其中所述注射給藥的藥物組合物是注射劑、凍干粉針制劑或適于輸液的劑型。
10.權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述的化合物或權(quán)利要求8或9所述的的藥物組合物在制 備蛋白酶體抑制劑中的應(yīng)用；優(yōu)選其中所述的蛋白酶體抑制劑是惡性腫瘤、多種神經(jīng)系統(tǒng) 變性疾病、肌肉惡病質(zhì)或糖尿病的治療劑；其中所述的惡性腫瘤是白血病、胃癌、肝癌或鼻咽癌。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥品生產(chǎn)領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明公開(kāi)了具有通式(I)結(jié)構(gòu)的一系列三肽硼酸(酯)類(lèi)蛋白酶體抑制劑、其制備方法和應(yīng)用，通過(guò)合成和初步生物活性評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明化合物具有很好的蛋白酶體抑制活性，可作為蛋白酶體抑制劑，用于各種基因疾病如惡性腫瘤、多種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病、肌肉惡病質(zhì)或糖尿病等疾病的治療。
文檔編號(hào)A61P35/00GK101928329SQ20091014729
公開(kāi)日2010年12月29日 申請(qǐng)日期2009年6月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月19日
發(fā)明者姚書(shū)揚(yáng), 崔景榮, 朱永強(qiáng), 李潤(rùn)濤, 程鐵明, 葛澤梅 申請(qǐng)人:北京大學(xué)