專利名稱：：一種防治缺血性腦損傷的藥物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種防治缺血性腦損傷的中藥組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：缺血性中風(fēng)相當(dāng)于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)稱謂的急性缺血性腦血管病，具有發(fā)病率高、病死率高、致殘率高、復(fù)發(fā)率高等特點(diǎn)，嚴(yán)重地危害著人類的健康，防治本病研究已成為社會(huì)和醫(yī)學(xué)界關(guān)注的重要課題之一。中醫(yī)藥防治本病具有一定優(yōu)勢(shì)，但本病治法研究大多集中在活血化瘀或益氣活血等方藥，具有一定療效，但還有許多不良作用也有待解決，且療效有待提高，迫切需要開(kāi)拓本病治療思路，尋求防治本病具有確切療效的治療藥物和方法，特別是具有中醫(yī)藥理論基礎(chǔ)和臨床經(jīng)驗(yàn)的中藥新藥，提高臨床療效。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種能有效防治缺血性腦損傷的中藥組合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供該中藥組合物的制備方法。根據(jù)《黃帝內(nèi)經(jīng)》，如《素問(wèn)調(diào)經(jīng)論》曰"血之與氣，并走于上，則為大厥"，《靈樞剌節(jié)真邪》曰"虛邪偏客于身半，…邪氣獨(dú)留，發(fā)為偏枯"，《素問(wèn)生氣通天論》曰"陽(yáng)氣者，大怒則形氣絕，而血菀于上，使人薄厥"，《素問(wèn)*通評(píng)虛實(shí)論》曰"…仆擊，偏枯…肥貴人則高粱之疾也"，及集以上對(duì)氣虛、血瘀、瘀毒等理論的探討，綜中醫(yī)各家之言，結(jié)合臨床實(shí)踐，提出氣虛血瘀、毒瘀阻絡(luò)是缺血性中風(fēng)的重要病機(jī)之一，認(rèn)為氣虛血瘀、毒瘀阻絡(luò)證是缺血性中風(fēng)的重要證型，是以氣虛為本，毒瘀為標(biāo)，氣虛不能行血，則血瘀，瘀血日久化熱成毒，或素有痰火、瘀熱，又時(shí)逢勞倦、內(nèi)傷、飲食不慎等誘因，致氣虛血鈍，毒瘀互結(jié)，阻損腦絡(luò)，卒發(fā)為中風(fēng)，臨床表現(xiàn)為口眼歪斜，語(yǔ)言不清，口角流涎或半身不遂，舌暗紅，或苔黃膩，脈弱或澀等。針對(duì)本證宜采用益氣通絡(luò)，清熱解毒法"辨證求因"治之，使補(bǔ)氣以治其本，促進(jìn)血行，通絡(luò)疏理血脈，清除病理因素，清熱解毒有利于消散毒瘀互結(jié)。方中以黃芪為君，益氣通絡(luò)，氣行血行，以葛根、三七為臣，通絡(luò)舒筋，兼養(yǎng)陰生津，清熱，黃芩、梔子為佐使，清熱解毒，三者相伍具有益氣通絡(luò)，清熱解毒的功效，適用于缺血性中風(fēng)中經(jīng)絡(luò)之氣虛血瘀、毒瘀阻絡(luò)證。本發(fā)明中藥組合物具有下述特點(diǎn)方中二溫二寒一甘涼，寒熱互濟(jì)，共奏益氣通絡(luò)，清熱解毒之功。本發(fā)明提供的中藥組合物能彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，開(kāi)拓新的治療思路。本發(fā)明藥物用于腦梗死恢復(fù)期的治療具有明顯治療效果。本發(fā)明公開(kāi)的防治缺血性腦損傷的中藥組合物是以生黃芪、三七、葛根、黃芩和梔子的提取物為主要活性成分與藥用輔料制成的口服制劑。本發(fā)明提供的中藥組合物是由下述重量配比的原料制成的口服制劑生黃芪7-20份、三七3-12份、葛根7-20份。優(yōu)選的重量份比例為生黃芪15份、三七5份、葛根15份。本發(fā)明藥物還可是由下述重量配比的原料制成的口服制劑生黃芪7-20份、三七3-12份、葛根7-20份、黃芩5-15份、梔子5-15份。優(yōu)選的重量份比例為生黃芪15份、三七5份、葛根15份、黃芩10份、梔子10份。本發(fā)明所述的口服制劑是指醫(yī)學(xué)上可接受的各種口服劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑或口服液。本發(fā)明公開(kāi)的中藥組合物的制備方法包括下列步驟1)有效成分制備a)將配比量的生黃芪加8-12倍量的質(zhì)量濃度為90_95%的乙醇浸漬10_15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70°C回收乙醇，濃縮至50-60°C時(shí)相對(duì)密度1.13，得提取液I。將生黃芪藥渣加水浸泡1.5-3小時(shí)后，提取3次，提取液離心，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.16，得提取液II。b)將配比量的葛根和黃芩加8-12倍量的質(zhì)量濃度為30-80%的乙醇浸漬10_15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70°C回收乙醇，濃縮至50-60°C時(shí)相對(duì)密度l.15，得提取液ni。2)制劑制備合并提取液I、II、III，按常規(guī)方法與藥用輔料制成液體口服制劑；或?qū)⒑喜⒑蟮奶崛∫哼M(jìn)行噴霧干燥，按常規(guī)方法與藥用輔料制成固體口服制劑。如果加入黃芩和梔子，本發(fā)明藥物的制備方法為1)有效成分制備a)將配比量的生黃芪加8-12倍量的質(zhì)量濃度為90_95%的乙醇浸漬10_15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70°C回收乙醇，濃縮至50-60°C時(shí)相對(duì)密度1.13，得提取液I。將生黃芪藥渣加水浸泡1.5-3小時(shí)后，提取3次，提取液離心，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.16，得提取液II。b)將配比量的葛根和黃芩加8-12倍量的質(zhì)量濃度為30-80%的乙醇浸漬10_15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70°C回收乙醇，濃縮至50-60°C時(shí)相對(duì)密度l.15，得提取液ni。c)將配比量的三七和梔子加8-12倍量的質(zhì)量濃度為30-80%的乙醇浸漬10_15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70°C回收乙醇，濃縮至50-60°C時(shí)相對(duì)密度l.15，，得提取液IV。2)制劑制備合并提取液I、II、III、IV，按常規(guī)方法與藥用輔料制成液體口服制劑；或?qū)⒑喜⒑蟮奶崛∫哼M(jìn)行噴霧干燥，按常規(guī)方法與藥用輔料制成固體口服制劑。本發(fā)明提供的中藥組合物的提取物中含黃芪以黃芪甲苷(C41H68014)計(jì)，含量大于0.130%，含葛根以葛根素(C21H2。09)計(jì)，含量大于7%，含黃芩以黃芩苷(C21H18On)計(jì)，含量大于13%，均以HPLC法測(cè)定。用本發(fā)明治療腦梗死恢復(fù)期的中藥組合物進(jìn)行有關(guān)藥效實(shí)驗(yàn)—、對(duì)大鼠大腦中動(dòng)脈局灶性缺血再灌注損傷的保護(hù)作用采用大腦中動(dòng)脈局灶性栓塞(MCAO)模型，開(kāi)展本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)功能缺損的改善和腦梗死體積的改變等作用的實(shí)驗(yàn)研究。1.動(dòng)物清潔級(jí)SD大鼠，雄性，體重280±10g，2.分組與給藥將60只SD大鼠隨機(jī)分為6組。即假手術(shù)組(正常組)、腦缺血再灌注組(模型組)、本發(fā)明制劑膠囊按倍數(shù)梯度分高、中、低劑量三組(4g/kg/24h、2g/kg/24h、lg/kg/24h)、陽(yáng)性藥對(duì)照組(即尼莫地平組，10mg/kg/24h)。將各藥臨用前用生理鹽水配成混懸液，分別于再灌0h、6h及23h各灌胃給藥一次，假手術(shù)組與模型組灌服等量生理鹽水。3.腦缺血再灌注動(dòng)物模型_大腦中動(dòng)脈局灶性栓塞(MCAO)模型的制作大鼠稱重后用10%水合氯醛(0.4mL/100g體重)腹腔注射麻醉，按照LudmilaBelayev的方法(XudmilaBelayev，OfeliaFA，RaulB，etal.MiddleCerebralCorteryOcclusionintheratbyintraluminal,suturestroke，1996，27(9):1616-1612.)進(jìn)行大腦中動(dòng)脈局灶性栓塞(MCAO)，在頸正中部切開(kāi)并暴露右側(cè)頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈，以及頸外動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈的分支，結(jié)扎并剪斷頸外動(dòng)脈分支。用動(dòng)脈夾暫時(shí)阻斷頸總動(dòng)脈，在距頸總動(dòng)脈分叉0.81.Ocm處用雙重絲線結(jié)扎頸外動(dòng)脈，在頸外動(dòng)脈近心端剪一小口，將多聚賴氨酸處理的4-0(直徑0.26mm)尼龍線從小口輕輕插入，經(jīng)分叉處輕輕推入頸內(nèi)動(dòng)脈，當(dāng)將尼龍線插入距頸總動(dòng)脈分叉1.82.Ocm處并有輕微阻力，表明尼龍線已插至Willie's環(huán)大腦前動(dòng)脈起始處，阻塞了大腦中動(dòng)脈主干的起始部。隨后，在頸外動(dòng)脈尼龍線插入的近心端用絲線結(jié)扎。假手術(shù)組尼龍線只插入0.5cm左右。經(jīng)60min缺血后，將尼龍線輕輕抽出，扎緊切口，并松開(kāi)頸總動(dòng)脈的動(dòng)脈夾，進(jìn)行再灌注。手術(shù)過(guò)程中保持大鼠肛溫在3738°C，并一直維持至動(dòng)物麻醉蘇醒。模型成功的標(biāo)志是動(dòng)物蘇醒后出現(xiàn)同側(cè)Horner征和對(duì)側(cè)以前肢為重的偏癱(組織學(xué)證實(shí)，梗死灶位于同側(cè)額頂葉皮質(zhì)及尾狀核與殼核外側(cè)部)。4.檢測(cè)指標(biāo)(1)神經(jīng)功能癥狀觀察參照Bederson對(duì)MCA區(qū)梗塞后的神經(jīng)缺損程度進(jìn)行03分的等級(jí)記分標(biāo)準(zhǔn)(BedersonJB，PittsLH，Tsujim，etal.Ratmiddlecerebralarteryocclusion:evalimtionofthemodelanddevelopmentofaneurologicexamination[J]Stroke,1986，17(3):472.)。分別在大鼠再灌注24h時(shí)觀察并記錄神經(jīng)功能缺失癥狀，大鼠手術(shù)過(guò)程中死亡或死亡后解剖發(fā)現(xiàn)為顱底出血者剔除。(2)腦梗死體積計(jì)算在大鼠再灌注24h后分別斷頭取腦，生理鹽水沖洗殘血，置于-2(TC低溫冰箱快速冷凍1015min，待一定硬度取出，始于前図點(diǎn)前1mm每隔2mm切取冠狀組織6片，將腦片置2%TTC染色液中，37t:孵育30min待顯色完全。最后置于4%多聚甲醛溶液中固定24h，將固定的腦片按切片順序排列，用數(shù)碼相機(jī)照相后輸入計(jì)算機(jī)，用圖像分析的方法計(jì)算每一片的缺血面積(蒼白區(qū))。將每個(gè)腦片的缺血面積乘以厚度(2mm)，再將各腦片數(shù)值相加后得到腦梗死灶體積的近似值，除以總體積得到梗死體積百分率。5.結(jié)果(1)本發(fā)明制劑對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠神經(jīng)功能的影響結(jié)果(表1)可見(jiàn)模型組與假手術(shù)組相比具有顯著差異(p<0.01)，尼莫地平組與模型組相比具有顯著差異(P<0.05)，本發(fā)明制劑高、中、低劑量組與模型組相比具有顯著差異(p<0.01)。表明本發(fā)明制劑能使大鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀減輕，促進(jìn)神經(jīng)功能缺損癥狀的恢復(fù)。表l本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血后神經(jīng)功能缺損癥狀的影響(文士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較Ap<0.05，AAp<0.01。(2)本發(fā)明制劑對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠腦梗塞體積的影響結(jié)果(見(jiàn)表2)可見(jiàn)模型組與假手術(shù)組相比具有顯著差異(p<0.01)，與模型組比較，本發(fā)明制劑高、中、低劑量及尼莫地平均能顯著地縮小大鼠MCAO后腦組織梗死體積，降低腦梗死體積百分率。本發(fā)明制劑高、中、低劑量組的作用均較顯著。表2本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血后腦梗死體積百分率的影響(文士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較△p<0.05，△△p<0.01。二、對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷腦組織病理、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)等的影響采用大腦中動(dòng)脈局灶性栓塞(MCAO)模型，開(kāi)展本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后腦組織病理、尼氏小體、及Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)等的影響，觀察本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血性損傷的保護(hù)作用及作用機(jī)理。1.動(dòng)物、分組與給藥、大腦中動(dòng)脈局灶性栓塞(MCAO)模型的制作同前。2.檢測(cè)指標(biāo)大鼠于再灌注2處后處死大鼠，立即取腦組織，置于4%多聚甲醛溶液中固定，石蠟包埋，切片。進(jìn)行病理組織觀察和免疫組化。3.結(jié)果:(1)本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血大鼠腦組織病理學(xué)的影響腦組織標(biāo)本石蠟切片經(jīng)HE染色，光鏡下檢測(cè)組織病理學(xué)的改變。假手術(shù)組大鼠大腦皮質(zhì)腦組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)基本正常，可見(jiàn)大型的錐體細(xì)胞，形態(tài)較完整，結(jié)構(gòu)清楚，核圓形，核仁明顯；模型組大鼠大腦皮質(zhì)腦組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，錐體細(xì)胞體積變小，胞核固縮，染色加深，胞體核分界不清，有神經(jīng)元纖維聚集現(xiàn)象，并出現(xiàn)散在的膠質(zhì)細(xì)胞增生；本發(fā)明制劑高、中、低劑量組和尼莫地平組大鼠大腦皮質(zhì)錐體細(xì)胞病變減輕，體積變小、核固縮的錐體細(xì)胞數(shù)目比模型組減少，固縮壞死的細(xì)胞數(shù)量減少。(2)本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血大鼠腦組織神經(jīng)元尼氏小體的影響甲苯胺藍(lán)是一種堿性染料，可特異性地對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行染色，將存在于神經(jīng)元胞漿和大樹(shù)突內(nèi)的尼氏體染成藍(lán)色，而細(xì)胞核為無(wú)色或淺藍(lán)色。腦組織標(biāo)本石蠟切片經(jīng)甲苯胺藍(lán)染色后，光鏡下檢測(cè)尼氏小體數(shù)量的改變。結(jié)果正常組神經(jīng)元體積較大，形態(tài)規(guī)則，尼氏體致密；模型組尼氏體稀疏，部分缺失，有較明顯的空泡變性，胞核呈皺縮狀，形態(tài)不一，有凹陷、三角及不規(guī)則形；本發(fā)明制劑高、中、低劑量組和尼莫地平組尼氏體較致密，無(wú)明顯缺失和空泡變性。選擇梗塞區(qū)域周圍腦組織4個(gè)視野，在MIAS-2000圖像分析儀檢測(cè)相應(yīng)神經(jīng)細(xì)胞漿內(nèi)尼氏小體，結(jié)果見(jiàn)表3。表3本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦組織神經(jīng)元尼氏小體的影響(文士S，n=10)組別劑量n尼氏小體數(shù)(個(gè)/400倍)假手術(shù)組NS10151.3±12.8模型組NS1055.6±15.3**本發(fā)明制劑高劑量組4g/kg10136.1±21.5AA本發(fā)明制劑中劑量組2g/kg10107.9土23.4AA本發(fā)明制劑低劑量組lg/kg1086.0±17.6A尼莫地平組10mg/kg1099.6土23.0AA注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較△p<0.05，△△p<0.01。從表3可見(jiàn)假手術(shù)組大腦尼氏小體的數(shù)量較多、密集；模型組大鼠尼氏小體的數(shù)量較少、有的甚至消失；本發(fā)明制劑高、中、低劑量組和尼莫地平組大鼠尼氏小體的數(shù)量明顯比模型組增加，具顯著差異(p<0.01或p<0.05)。(3)本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦組織中Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響采用SABC法進(jìn)行Bcl-2和Bax免疫組化染色，顯微鏡下觀察，腦組織神經(jīng)元細(xì)胞胞質(zhì)中有棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞，反之為陰性細(xì)胞。每張免疫組化切片中采集io個(gè)具有代表性的400X互不重疊視野，計(jì)數(shù)Bcl-2、Bax蛋白染色陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)，取其平均值作為該標(biāo)本的染色強(qiáng)度_陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表4。表4本發(fā)明制劑對(duì)腦缺曲再灌注大鼠腦組織中Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響(文士S，n=10)組別劑量Bel-2陽(yáng)性細(xì)胞(個(gè)/400倍)Bax陽(yáng)性細(xì)胞(個(gè)/400倍)Bel-2/Bax假手術(shù)組NS5.91±3.036.97±4.280.86±0.14模型組NS26.51±7.35**40.17±5.46**0.60±0.ll林本發(fā)明制劑高劑it組4g/kg51.52±8.21AA17.60±5.98AA2.70±0.26AA本發(fā)明制劑中劑ii組2g/kg45.52±10.50"23.42±7.06AA1.88±0.17AA本發(fā)明制劑低劑lt組lg/kg39.41±8.03A31.48±5.08A1.03±0.13AA尼莫地平組10mg/kg44.61±7.36AA25.57±4.91A△1.71±0.11AA注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較△p<0.05，△△p<0.01。從表4可見(jiàn)模型組Bcl-2、Bax蛋白染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多，本發(fā)明制劑高、中、低劑量組與模型組相比，Bcl-2蛋白染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯增多，Bax蛋白染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)明顯降低(P<0.01)，上調(diào)Bcl-2蛋白及下調(diào)Bax蛋白的表達(dá)，恢復(fù)二者的比例，調(diào)節(jié)抗凋亡和促凋亡作用。三、對(duì)大鼠腦缺血損傷腦含水量和腦指數(shù)的影響采用頸總動(dòng)脈結(jié)扎致大鼠不完全性腦缺血模型，觀察本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血后腦含水量和腦指數(shù)等的影響。1.動(dòng)物同前。2.模型制作、分組與給藥將60只SD大鼠隨機(jī)分為6組，即假手術(shù)組(正常組)、腦缺血組(模型組)、本發(fā)明制劑膠囊高、中、低劑量組(4g/kg/24h、2g/kg/24h、1g/kg/24h)、尼莫地平組(10mg/kg/24h)，假手術(shù)組與模型組灌服等量生理鹽水。將本發(fā)明制劑膠囊和尼莫地平臨用前用生理鹽水配成混懸液，每日1次，連續(xù)給藥3d，末次給藥后30min后，結(jié)扎SD大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈形成急性實(shí)驗(yàn)性不完全性腦缺血模型。假手術(shù)組除不行頸總動(dòng)脈結(jié)扎外，余手術(shù)過(guò)程相同。3.檢測(cè)指標(biāo)腦含水量和腦指數(shù)測(cè)定雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎3小時(shí)以后，快速斷頭，開(kāi)顱取腦，生理鹽水沖洗殘血，以萬(wàn)分之一電子分析天平稱取腦濕重，從斷頭至稱重在5分鐘內(nèi)完成。計(jì)算腦指數(shù)(腦指數(shù)=腦濕重/體重X100%)。然后在IO(TC烤箱中烘烤至恒重(即兩次測(cè)量重量相同)時(shí)稱取腦干重，計(jì)算腦含水量％=(濕重-干重)/濕重X100%。4.結(jié)果:結(jié)果(表5)可見(jiàn)腦缺血模型組的腦指數(shù)和腦含水量與假手術(shù)組相比具有顯著差異(P<0.01)，提示腦含水量顯著增加；本發(fā)明制劑各劑量組和尼莫地平與腦缺血模型組相比腦含水量均顯著減少。本發(fā)明制劑量效關(guān)系呈正相關(guān)，大劑量組與腦缺血模型相比，其腦含水量和腦指數(shù)均顯著降低。表5本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血后腦指數(shù)和腦含水量的影響(文士S)組別劑量n腦指數(shù)(％)腦含水量(％)假手術(shù)組NS100.578±0.01375,145土0.692模型組NS100.719±0.037**80.468±0.597**本發(fā)明制劑高劑量組4g/kg100.632土0.025AA78.382士0.219AA本發(fā)明制劑中劑量組2g/kg100.688±0.03379.546±0.262A本發(fā)明制劑低劑量組lg/kg100.702±0.03279.605±0.508△尼莫地平組10mg/kg100.677±0.01679.559土0.244A注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較△p<0.05，△△p<0.01。四、對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷血清和腦組織中各項(xiàng)生化指標(biāo)的影響采用大鼠四血管阻斷法(4V0法)，開(kāi)展本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后血清和腦組織中超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)丙二醛(MaleicDialdehyde，MDA)、一氧化氮(NitricOxide，NO)、一氧化氮合酶(NitricOxideSynthase,N0S)等生化指標(biāo)的影響，觀察本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用。1.動(dòng)物、分組同實(shí)驗(yàn)"一"。2.給藥將各藥用生理鹽水制成口服液，每日早晚各一次，連續(xù)3天，并于手術(shù)前l(fā)h追加一次。假手術(shù)對(duì)照組、模型組按同樣方法灌服等量生理鹽水。3.模型制作大鼠腦缺血再灌注損傷模型采用改良的Pulsinelli四血管阻斷法(4V0法)。大鼠用10%水合氯醛(0.4ml/100g)腹腔注射麻醉，腹臥位固定，無(wú)菌枕部切口，暴露第一頸椎橫突翼小孔，用尖端約0.5mm電針電凝閉雙側(cè)翼小孔內(nèi)的椎動(dòng)脈。然后改為背部固定，頸正中切口，分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，穿線備用。次日在清醒的狀態(tài)下，用微動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈。假手術(shù)組除不行椎動(dòng)脈凝閉和頸總動(dòng)脈夾閉外，余手術(shù)過(guò)程相同。模型成功的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物意識(shí)喪失，四肢癱瘓，角膜反射及翻正反射消失；EEG描記的腦電波頻率減慢，波幅降低以至出現(xiàn)腦電波幾乎成一條直線。腦缺血再灌注組于頸總動(dòng)脈夾閉后30min放開(kāi)動(dòng)脈夾，使血流再通30min后迅速斷頭取腦，以備檢測(cè)有關(guān)指標(biāo)。假手術(shù)組于手術(shù)后60mim迅速斷頭取腦。4.檢測(cè)指標(biāo)由腹主動(dòng)脈抽取46ml血液，靜置60min后，4000r/min，離心10min，取血清，置-S(TC冰箱保存待測(cè)；斷頭取腦，低溫下取出腦組織，稱重后按重量體積比加生理鹽水制備成10X的組織勻漿，3000r/min離心10min，取上清，-S(rC冰箱保存待測(cè)。分別按照各試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定血清和腦組織勻漿中各生化指標(biāo)。5.結(jié)果(1)本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠血清和腦組織勻漿中SOD活力的影響結(jié)果見(jiàn)表6可知腦缺血再灌注組血清和腦組織勻漿中SOD的活力與假手術(shù)組相比具有顯著差異(P<0.01)，本發(fā)明制劑高、中、低劑量與腦缺血再灌注組相比均具有顯著差異，本發(fā)明制劑各組量效成正相關(guān)。提示本發(fā)明制劑可顯著提高腦缺血再灌注損傷大鼠血清和腦組織中SOD的活力(p<0.01或p<0.05)。表6本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血再灌注后血清和腦組織中SOD活力的影響(文士S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較Ap<0.05，AAp<0.01。(2)本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠血清和腦組織勻槳中MDA含量的影響結(jié)果見(jiàn)表7可知腦缺血再灌注組血清和腦組織勻漿中MDA的含量與假手術(shù)組相比具有顯著差異(P<0.01)，本發(fā)明制劑高、中、低劑量組與尼莫地平組與腦缺血再灌注組相比均具有顯著差異。提示本發(fā)明制劑能顯著降低腦缺血再灌注大鼠血清和腦組織中MDA的含量(p<0.01或p<0.05)。表7本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血再灌注后血清和腦組織中MDA含量的影響(X士S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較Ap<0.05，AAp<0.01。(3)本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠血清和腦組織勻漿中NO含量的影響結(jié)果見(jiàn)表8可知模型組血清和腦組織勻漿中NO的含量與假手術(shù)組相比具有顯著差異(p<0.01)，本發(fā)明制劑高、中劑量組和尼莫地平組可明顯降低血清和腦組織中NO的含量(p<0.01或p<0.05)。表8本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血再灌注后血清和腦組織中NO含量的影響(文士S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>0101]注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較△p<0.05，△△p<0.01。(4)本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠血清和腦組織勻漿中NOS活力的影響結(jié)果見(jiàn)表9可知模型組血清和腦組織勻漿中NOS的活力與假手術(shù)組相比具有顯著差異(P<0.01)，本發(fā)明制劑高、中劑量組和尼莫地平組可明顯降低血清和腦組織中NOS的活力(p<0.01或p<0.05)。表9本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血再灌注后血清和腦組織中NOS活力的影響(文士S，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較Ap<0.05，AAp<0.01。五、對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷血清和腦組織中炎癥因子及炎癥基因表達(dá)的影響采用大腦中動(dòng)脈局灶性栓塞(MCAO)模型，開(kāi)展本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后血清和腦組織中IL-113、IL-6、TNFa的炎癥因子水平，以及腦組織中IL_1PmRNA，IL-6mRNA等炎癥基因表達(dá)的影B向，從分子水平闡述腦缺血后炎癥損傷的分子機(jī)制，觀察本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血損傷的保護(hù)作用。1.動(dòng)物、分組與給藥、大腦中動(dòng)脈局灶性栓塞(MCAO)模型的制作同實(shí)驗(yàn)"一"。2.檢測(cè)指標(biāo)于再灌注24h后用10%水合氯醛(0.4mL/100g體重)腹腔注射麻醉，由腹主動(dòng)脈抽取46ml血液，靜置60min后，4000r/min，離心10min，取血清，置-80"冰箱保存待測(cè)。斷頭取腦，低溫下取出缺血側(cè)腦組織，近額極1/3立即投入液氮中保存，備用，作進(jìn)一步的RT-PCR實(shí)驗(yàn)；后2/3稱重后按重量體積比加生理鹽水制備成10%的組織勻漿，3000r/min離心10min，取上清，_801:冰箱保存待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法(ELISA法)的試劑盒檢測(cè)血清和腦組織勻漿中IL-113、IL-6、TNFa。3.結(jié)果(1)本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠血清和腦組織中IL-113、IL-6、TNFa炎癥細(xì)胞因子含量的影響表10本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠曲清和腦組織中IL-113含量的影響(文士S，n=10)組<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較△p<0.05，△△p<0.01。表11本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠血清和腦組織中IL-6含量的影響(X±S，n=10)組別劑量IL-6(血清，ng/ml)IL-6(腦組織，ng/ml)假手術(shù)組NS1,541±0.2855.202±0.338模型組NS3.590±0.402**12.070±0.471**本發(fā)明制劑高劑量組4g/kg2.044±0.288AA8.629±0.580AA本發(fā)明制劑中劑量組2g/kg2.762±0.309A△9.080±0.299△A本發(fā)明制劑低劑量組lg/kg3.211±0.35011.273±0.524A尼莫地平組lOmg/kg3.102±0.28210.031±0.538AA注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較△p<0.05，△△p<0.01。表12本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠血清和腦組織中TNFa含量的影響(文士S，n=10)組別齊廿量TNFa(血清，ng/ml)TNFa(腦組織，ng/ml)假手術(shù)組NS0.381±Q.0722.780±0.134模型組NS0.600±0.075林5.718±0.311**本發(fā)明制劑高劑量組4g/kg0.413±0.099△A4.102±0.204AA本發(fā)明制劑中劑量組2g/kg0.461±0.093A4.993±0.199AA本發(fā)明制劑低劑量組lg/kg0.512±0.0605.229±0.299△尼莫地平組lOmg/kg0.480±0.0845.147±0.329△注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較Ap<0.05，AAp<0.01。結(jié)果從表10、表11、表12可知，腦缺血再灌注模型組血清和腦組織中IL-IP、IL-6、TNFa的含量均明顯升高(p<0.01)，本發(fā)明制劑高、中、低劑量可明顯降低血清和腦組織中IL-113、IL-6、TNFa的含量(與模型組比p<0.01或p<0.05)，表明本發(fā)明制劑能顯著地抗腦缺血引起的炎癥反應(yīng)，消除炎癥因子。(2)本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦組織中炎癥基因表達(dá)的影響大鼠腦組織經(jīng)Trizol—步法抽提總RNA，RT-PCR擴(kuò)增，電泳分離后成像，用圖像分析軟件分析凝膠圖像以檢測(cè)顯色條帶的灰度值，與內(nèi)參P-actin之比值即表示IL-1PmRNA、IL-6mRNA表達(dá)水平。結(jié)果見(jiàn)表13可知，模型組腦組織IL-113mRNA、IL_6mRNA表達(dá)水平均比假手術(shù)組明顯增加(P〈0.01)，本發(fā)明制劑高、中、低劑量可明顯降低腦缺血再灌注大鼠腦組織中IL-1PmRNA、IL-6mRNA的表達(dá)(與模型組比p<0.01或p<0.05)。表13本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦組織中IL-1PmRNA、IL_6mRNA表達(dá)水平的影響a±S，n=10)組別劑量IHPmRNAIL-6mRNA假手術(shù)組NS0.■906±0.2521.546±0.224模型組NS1.729±0.185**8.938±0.643**本發(fā)明制劑高劑量組4g/kg1.,130±0.166AA5.553±0.319AA本發(fā)明制劑中劑量組2g/kg1.,305±0.212A△6.871±0.402A△本發(fā)明制劑低劑量組lg/kg1.425±0.215A7.957±0.556△尼莫地平組10mg/kg1.,302±0.332A7.161±0.319A△注與假手術(shù)組比較*p<0.05，**p<0.01;與模型組比較△p<0.05，△△p<0.01。六、對(duì)小鼠減壓缺氧耐力影響的實(shí)驗(yàn)研究觀察本發(fā)明制劑對(duì)小鼠缺氧耐力的影響，給健康ICR小鼠灌服不同劑量本發(fā)明制劑和尼莫地平一定時(shí)間后，采用小鼠減壓缺氧耐力實(shí)驗(yàn)方法，記錄動(dòng)物死亡時(shí)間來(lái)觀察其作用。1.動(dòng)物清潔級(jí)ICR小鼠，雌雄各半，體重(20±2)g。2.分組與給藥將50只ICR小鼠按雌雄隨機(jī)分為5組。即缺氧模型組；本發(fā)明制劑高、中、低劑量組(28mg/20g/24h、56mg/20g/24h、112mg/20g/24h);尼莫地平組(lmg/20g/24h)。將本發(fā)明制劑和尼莫地平臨用前用生理鹽水配成混懸液，灌胃給藥，每日早晚各一次，連續(xù)7天，并于實(shí)驗(yàn)前l(fā)h追加一次。模型組灌服等量的生理鹽水。3.小鼠減壓缺氧耐力實(shí)驗(yàn)將ICR小鼠放入密閉真空玻璃瓶中，每次兩只，打開(kāi)真空泵減壓至0.08Mpa后，開(kāi)始記錄動(dòng)物死亡時(shí)間，并將真空泵減壓衡定在0.08Mpa水平。4.結(jié)果:小鼠減壓缺氧耐力試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表14。(本發(fā)明制劑高、中、低劑量組、尼莫地平組與模型組相比均具有顯著差異(p<0.01或p<0.05);本發(fā)明制劑各組量效呈正相關(guān)；本發(fā)明制劑各組與尼莫地平組相比無(wú)顯著差異。表14本發(fā)明制劑對(duì)小鼠減壓缺氧耐力的影響(文士S，n=10)(mg;g24h)、瞎漏司(秒、)S§172,03±5.12模型組NS172,03±5.12本發(fā)明制劑高劑lt組28.0215.12±7,64AA本發(fā)明制劑中劑』t組56.0207.11±8.54AA本發(fā)明制劑低劑i魏.112.0187.47±8.74A尼莫地平組1.0210,27±9.43△△注與模型組比較△p<0.05，△△p<0.01。七、急性毒性試驗(yàn)利用急性毒性實(shí)驗(yàn)，觀察本發(fā)明制劑對(duì)小鼠的急性毒性表現(xiàn)或最大耐受劑量?？疾毂景l(fā)明制劑的安全性。1.動(dòng)物清潔級(jí)ICR小鼠，雌雄各半，體重(20±2)g。2.藥品本發(fā)明制劑膠囊臨用時(shí)取107.lg，加蒸餾水至lOOml，濃度107.lg/100ml。3.試驗(yàn)方法將小鼠實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)一周，實(shí)驗(yàn)前禁食不禁水12h，灌胃給予107.lg/100ml的本發(fā)明制劑膠囊40ml/kg，隔6小時(shí)后同樣劑量灌胃給藥1次，共2次，總劑量為85.68g/kg，相當(dāng)于生藥226.7g/kg。觀察給藥后小鼠的反應(yīng)和7天內(nèi)的死亡情況，并于給藥第3天和第7天稱重。4.結(jié)果:小鼠在給藥后活動(dòng)減少，行動(dòng)遲緩，在6小時(shí)以后可見(jiàn)大便呈棕黑色，稍軟。在給藥后24小時(shí)后小鼠一般狀況和大便均恢復(fù)正常，在7天的觀察期內(nèi)未見(jiàn)有小鼠死亡，雌雄小鼠的體重均略有增長(zhǎng)，見(jiàn)表15。表15本發(fā)明制劑對(duì)小鼠體重的影響(文士S，g)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>結(jié)論分別采用大鼠大腦中動(dòng)脈局灶性栓塞(MCAO)模型，急性不完全性腦缺血模型，四血管阻斷法(4V0法)，以及小鼠減壓缺氧耐力實(shí)驗(yàn)和急性毒性實(shí)驗(yàn)，開(kāi)展本發(fā)明制劑對(duì)大鼠腦缺血和再灌注損傷后神經(jīng)功能，病理改變，以及血清、腦組織中各項(xiàng)指標(biāo)等的影響，探討本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血性損傷的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)本發(fā)明制劑可以顯著地減輕MCAO模型大鼠的神經(jīng)功能缺損癥狀，促進(jìn)神經(jīng)功能缺損癥狀的恢復(fù)；顯著地縮小大鼠MCAO后腦組織梗死體積，降低腦梗死體積百分率；明顯改善腦缺血及再灌注對(duì)腦組織的病理?yè)p害，抑制尼氏小體數(shù)量減少或消失；顯著地降低腦缺血模型大鼠的腦指數(shù)和腦含水量；顯著地提高缺血再灌注后大鼠血清和腦組織中SOD活性、明顯降低MDA含量、NO含量和NOS活性等，減輕自由基對(duì)腦的損傷；顯著延長(zhǎng)減壓缺氧小鼠存活時(shí)間，提高其生存能力。表明本發(fā)明制劑對(duì)腦缺血損傷具有明顯的保護(hù)作用。同時(shí)本發(fā)明制劑能明顯降低腦缺血及再灌注大鼠血清和腦組織中IL-IP、IL-6和TNFa的含量，降低缺血性損傷腦組織中IL-1PmRNA、IL_6mRNA的表達(dá)水平，減輕缺血區(qū)炎癥反應(yīng)；顯著增加缺血再灌注后Bcl-2蛋白表達(dá)，降低Bax蛋白的表達(dá)，上調(diào)Bcl_2蛋白及下調(diào)Bax蛋白的表達(dá)，恢復(fù)二者的比例，調(diào)節(jié)它們抗凋亡和促凋亡作用。表明本發(fā)明制劑可通過(guò)抑制炎癥因子和炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)，抑制神經(jīng)元凋亡等機(jī)制，發(fā)揮對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。根據(jù)臨床實(shí)際和中國(guó)藥典等記載，結(jié)合急性毒性實(shí)驗(yàn)研究，本發(fā)明制劑膠囊的小鼠口服最大耐受劑量是人臨床用量的340倍，表明采用本發(fā)明制劑抗腦缺血性損傷具有安全等特點(diǎn)。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1、顆粒劑制備a)將900g生黃芪加10倍量的質(zhì)量濃度為90%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.13，得提取液I。將生黃芪藥渣加水浸泡2小時(shí)后，提取3次，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)，分離后上清液濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.16，得提取液II。b)將900g葛根、600g黃芩加IO倍量的質(zhì)量濃度為60%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，得提取液III。c)將300g三七、600g梔子加10倍量的質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，，得提取液IV。d)合并提取液I、II、III、IV進(jìn)行噴霧干燥(進(jìn)液速度6000ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度140°C)，得干燥粉，對(duì)噴霧干燥粉稱重，加入150g糊精，干擠制粒(主壓力6MPa，側(cè)壓力0.6MPa)，整粒，分裝于鋁箔袋中，每包6g，滅菌，即得。用HPLC法測(cè)定含黃芪以黃芪甲苷(C41H68014)計(jì)2.257mg/包，含葛根以葛根素(C21H2。09)計(jì)0.135g/包，含黃芩以黃芩苷(C21H18On)計(jì)O.303g/包。實(shí)施例2、顆粒劑制備a)將750g生黃芪加10倍量的質(zhì)量濃度為90X的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.13，得提取液I。將生黃芪藥渣加水浸泡2小時(shí)后，提取3次，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)，分離后上清液濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.16，得提取液II。b)將750g葛根、500g黃芩加10倍量的質(zhì)量濃度為60%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，得提取液III。c)將250g三七、500g梔子加10倍量的質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，，得提取液IV。d)合并提取液I、II、III、IV進(jìn)行噴霧干燥(進(jìn)液速度6000ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度140°C)，得干燥粉，對(duì)噴霧干燥粉稱重，加入150g糊精，干擠制粒(主壓力6MPa，側(cè)壓力0.6MPa)，整粒，分裝于鋁箔袋中，每包6g，滅菌，即得。用HPLC法測(cè)定含黃芪以黃芪甲苷(C41H68014)計(jì)1.881mg/包，含葛根以葛根素(C21H2。09)計(jì)0.113g/包，含黃芩以黃芩苷(C21H18On)計(jì)O.253g/包。實(shí)施例3、膠囊劑制備a)將900g生黃芪加10倍量的質(zhì)量濃度為90X的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.13，得提取液I。將生黃芪藥渣加水浸泡2小時(shí)后，提取3次，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)，分離后上清液濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.16，得提取液II。b)將900g葛根、600g黃芩加IO倍量的質(zhì)量濃度為60%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，得提取液III。c)將300g三七、600g梔子加10倍量的質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，，得提取液IV。d)合并提取液I、II、III、IV進(jìn)行噴霧干燥(進(jìn)液速度6000ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度140°C)，得干燥粉，對(duì)噴霧干燥粉稱重，加入10%噴霧干燥乳糖，干擠制粒(主壓力6MPa，側(cè)壓力0.6MPa)，加入5%硬脂酸鎂，混勻，灌膠囊，每粒0.5g，滅菌，即得。用HPLC法測(cè)定含黃芪以黃芪甲苷(C41H68014)計(jì)O.457mg/g，含葛根以葛根素(C21H2。09)計(jì)27mg/g，含黃芩以黃芩苷(C21H18Ou)計(jì)61mg/g。實(shí)施例4、膠囊劑制備a)將750g生黃芪加10倍量的質(zhì)量濃度為90X的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.13，得提取液I。將生黃芪藥渣加水浸泡2小時(shí)后，提取3次，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)，分離后上清液濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.16，得提取液II。b)將750g葛根、500g黃芩加10倍量的質(zhì)量濃度為60%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，得提取液III。c)將250g三七、500g梔子加10倍量的質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，，得提取液IV。d)合并提取液I、II、III、IV進(jìn)行噴霧干燥(進(jìn)液速度6000ml/min，進(jìn)風(fēng)溫度140°C)，得干燥粉，對(duì)噴霧干燥粉稱重，加入10%噴霧干燥乳糖，干擠制粒(主壓力6MPa，側(cè)壓力0.6MPa)，加入5%硬脂酸鎂，混勻，灌膠囊，每粒0.5g，滅菌，即得。用HPLC法測(cè)定含黃芪以黃芪甲苷(C41H68014)計(jì)O.449mg/g，含葛根以葛根素(C21H2。09)計(jì)25mg/g，含黃芩以黃芩苷(C21H18Ou)計(jì)59mg/g。實(shí)施例5、口服液制備a)將900g生黃芪加10倍量的質(zhì)量濃度為90X的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.13，得提取液I。將生黃芪藥渣加水浸泡2小時(shí)后，提取3次，提取液離心(15000轉(zhuǎn)/分)，分離后上清液濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.16，得提取液II。b)將900g葛根、600g黃芩加IO倍量的質(zhì)量濃度為60%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，得提取液III。c)將300g三七、600g梔子加10倍量的質(zhì)量濃度為70%的乙醇浸漬12小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心(15000轉(zhuǎn)/分)，上清液60-7(TC減壓回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.15，，得提取液IV。d)合并提取液I、II、III、IV，加3倍量95^乙醇，攪勻，冷藏24小時(shí)，取上清液減壓回收乙醇，加水稀釋至4.25L，靜置，取上清液濾過(guò)，灌裝，每支10ml，滅菌，即得。用HPLC法測(cè)定含黃芪以黃芪甲苷(C41H68014)計(jì)O.145mg/ml，含葛根以葛根素(C21H2。09)計(jì)8.57mg/ml，含黃芩以黃芩苷(C21H18Ou)計(jì)20.3mg/ml。權(quán)利要求一種防治缺血性腦損傷的藥物，由下述重量配比的原料制成的口服制劑生黃芪7-20份、三七3-12份、葛根7-20份。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的防治缺血性腦損傷的藥物，其中，原料藥的重量配比為生黃芪15份、三七5份、葛根15份。3.權(quán)利要求1或2所述的防治缺血性腦損傷的藥物的制備方法，包括如下步驟1)有效成分制備a)將配比量的生黃芪加8-12倍量的質(zhì)量濃度為90-95%的乙醇浸漬10-15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-7(TC回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.13，得提取液I。將生黃芪藥渣加水浸泡1.5-3小時(shí)后，提取3次，提取液離心，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.16，得提取液II。b)將配比量的葛根和黃芩加8-12倍量的質(zhì)量濃度為30-80%的乙醇浸漬10-15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70°C回收乙醇，濃縮至50-60°C時(shí)相對(duì)密度l.15，得提取液ni。2)制劑制備合并提取液I、II、III，按常規(guī)方法與藥用輔料制成液體口服制劑；或?qū)⒑喜⒑蟮奶崛∫哼M(jìn)行噴霧干燥，按常規(guī)方法與藥用輔料制成固體口服制劑。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的防治缺血性腦損傷的藥物，其中原料藥還包括黃芩5-15份、梔子5-15份。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的防治缺血性腦損傷的藥物，其中原料藥的重量配比為生黃芪15份、三七5份、葛根15份、黃芩10份、梔子10份。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的防治缺血性腦損傷的藥物的制備方法，包括如下步驟1)有效成分制備a)將配比量的生黃芪加8-12倍量的質(zhì)量濃度為90-95%的乙醇浸漬10-15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-7(TC回收乙醇，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.13，得提取液I。將生黃芪藥渣加水浸泡1.5-3小時(shí)后，提取3次，提取液離心，濃縮至50-6(TC時(shí)相對(duì)密度1.16，得提取液II。b)將配比量的葛根和黃芩加8-12倍量的質(zhì)量濃度為30-80%的乙醇浸漬10-15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70°C回收乙醇，濃縮至50-60°C時(shí)相對(duì)密度l.15，得提取液ni。c)將配比量的三七和梔子加8-12倍量的質(zhì)量濃度為30-80%的乙醇浸漬10-15小時(shí)后，回流提取2次，合并提取液，離心，濾液真空60-70°C回收乙醇，濃縮至50-60°C時(shí)相對(duì)密度1.15，，得提取液IV。2)制劑制備合并提取液I、II、III、IV，按常規(guī)方法與藥用輔料制成液體口服制劑；或?qū)⒑喜⒑蟮奶崛∫哼M(jìn)行噴霧干燥，按常規(guī)方法與藥用輔料制成固體口服制劑。7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的防治缺血性腦損傷的藥物，其特征在于，所述口服制劑為醫(yī)學(xué)上可接受的口服劑型。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的防治缺血性腦損傷的藥物，其特征在于，所述藥物為膠囊劑、片劑、顆粒劑或口服液中的一種。全文摘要本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，具體涉及一種防治缺血性腦損傷的中藥組合物及其制備方法。本發(fā)明公開(kāi)的防治缺血性腦損傷的中藥組合物是以生黃芪、三七、葛根、黃芩和梔子的提取物為主要活性成分與藥用輔料制成的口服制劑。該制劑對(duì)臨床表現(xiàn)為口眼歪斜，語(yǔ)言不清，口角流涎或半身不遂，舌暗紅，或苔黃膩，脈弱或澀等腦梗死恢復(fù)期癥狀具有明顯治療效果。文檔編號(hào)A61K36/488GK101732402SQ201010104499公開(kāi)日2010年6月16日申請(qǐng)日期2010年1月27日優(yōu)先權(quán)日2010年1月27日發(fā)明者萬(wàn)海同,張宇燕,楊潔紅申請(qǐng)人:浙江中醫(yī)藥大學(xué)