血小板生成素在制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和認(rèn)知功能障礙的藥物中的用途
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及重組人源血小板生成素（TPO）用于制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物或保健品中的用途。本發(fā)明涉及的重組人血小板生成素的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所述。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，重組人源血小板生成素對(duì)腦缺血誘發(fā)的短期和長(zhǎng)期神經(jīng)功能異常和認(rèn)知功能障礙均具有顯著改善作用，有望開(kāi)發(fā)為治療腦缺血、腦血栓等引發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的新型藥物或保健品。
【專利說(shuō)明】血小板生成素在制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和認(rèn)知功能障礙的藥物中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及血小板生成素在治療與腦血管疾病相關(guān)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙中的新用途，更具體而言，涉及重組人源血小板生成素在制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物或保健品中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]TPO 概況
[0003]血小板生成素(Thrombopoietin，簡(jiǎn)稱ΤΡ0)，是新近發(fā)現(xiàn)的一個(gè)非常重要的造血調(diào)控因子，又稱為巨核細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育因子(megakaryocyte growth and developmentfactor, MGDF)、血小板生成刺激因子(thrombocytopoiesis stimulating factor, TSF)或C-MPL 配體(c-myeloproliferative leukemia ligand, C-MPL)?？茖W(xué)研究發(fā)現(xiàn)，天然 TPO是一種造血生長(zhǎng)因子，其可通過(guò)與c-Mpl原癌基因編碼的C-MPL受體特異性結(jié)合，調(diào)節(jié)巨核細(xì)胞增殖、分化、成熟。TPO能抑制造血祖細(xì)胞凋亡，也能促進(jìn)造血祖細(xì)胞的增生。TPO還能擴(kuò)增造血干細(xì)胞，單獨(dú)應(yīng)用可在促進(jìn)巨核系祖細(xì)胞增殖的同時(shí)促進(jìn)巨噬系和紅系在內(nèi)的各系祖細(xì)胞增殖，與ΕΡ0、干細(xì)胞因子等細(xì)胞因子存在相加或協(xié)同作用，共同促進(jìn)祖細(xì)胞增殖，促使造血細(xì)胞干細(xì)胞進(jìn)入增殖周期[I]。TPO應(yīng)用于正常動(dòng)物時(shí)其作用呈單系特異性，但應(yīng)用于放、化療后嚴(yán)重骨髓抑制動(dòng)物則能促進(jìn)其多系造血恢復(fù)，不但升高血小板數(shù)量，而且還增加外周血中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，從而降低死亡率。
[0004]TPO的表達(dá)、結(jié)構(gòu)與功能
[0005]TPO主要是由肝細(xì)胞分泌產(chǎn)生，從胎兒到成年，肝細(xì)胞持續(xù)表達(dá)ΤΡ0，因此TPO在胚胎的造血進(jìn)程中扮演著十分重要的作用。此外，腎遠(yuǎn)曲小管、肌肉、骨髓和脾臟也分泌表達(dá)TP0[2]。新近的研究發(fā)現(xiàn)，人大腦半球和小腦及小鼠神經(jīng)干細(xì)胞株C17.2在mRNA水平表達(dá)c-MPL，進(jìn)一步在蛋白水平證實(shí)TP`O受體c-MPL在人大腦半球神經(jīng)細(xì)胞表達(dá)[3]。
[0006]人TPO是一個(gè)糖蛋白，由335個(gè)氨基酸組成，分子量為30kD左右.它由N端(I~153氨基酸)結(jié)構(gòu)域和C端(154~335氨基酸)結(jié)構(gòu)域組成。N端結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列與人促紅細(xì)胞生成素的氨基酸序列同源性較高，其中有23%的氨基酸與人促紅細(xì)胞生成素完全一致，有50%氨基酸殘基相似。TPO的N末端結(jié)構(gòu)域中的Asp8-Gln28和Ala60-Argll7功能域?qū)τ赥PO與c-MPL受體結(jié)合并發(fā)揮相關(guān)功能至關(guān)重要。TPO的C末端結(jié)構(gòu)域是高度糖基化的區(qū)域，富含絲氨酸、蘇氨酸和脯氨酸，并有6個(gè)潛在的N—糖基化位點(diǎn)，該段的氨基酸變異較大，保守性不強(qiáng)。其對(duì)于維持TPO在血液中的半衰期十分重要，而且也與TPO的分泌有關(guān)[4]。
[0007]TPO分子與兩個(gè)MPL受體結(jié)合,促使兩個(gè)受體靠近形成二聚體,激活Janus激酶2使受體胞內(nèi)區(qū)的酪氨酸磷酸化，激活胞膜內(nèi)G蛋白信號(hào)系統(tǒng)和轉(zhuǎn)錄本5(STATS)等信號(hào)系統(tǒng)，G蛋白激活磷脂酶C，產(chǎn)生IP3、DG、Ca2+等第二信使分子，激活蛋白酶C，從而發(fā)生細(xì)胞學(xué)作用，刺激巨核細(xì)胞增殖、成熟及產(chǎn)生血小板。TPO還有另一功能，當(dāng)其與血小板細(xì)胞結(jié)合后被血小板吞入，貯存于granules內(nèi)，當(dāng)血小板上的MPL受體再次被其配體激活時(shí)，血小板內(nèi)的TPO被釋放進(jìn)入血液，進(jìn)而促進(jìn)血小板的生成[4]。
[0008]TPO的臨床應(yīng)用研究進(jìn)展
[0009]血小板減少癥是臨床上治療惡性血液疾病和腫瘤中遇到的重要問(wèn)題之一，當(dāng)腫瘤患者受到集中的化療和放療后，誘發(fā)的骨髓抑制及其并發(fā)的貧血、粒細(xì)胞減少和血小板減少是造成患者死亡的主要因素，也是臨床上限制放、化療劑量，提高療效的主要障礙。臨床研究表明TPO能有效地減輕實(shí)體瘤及完全緩解的白血病患者化療后血小板降低的程度，縮短其減少的持續(xù)時(shí)間，促進(jìn)血小板計(jì)數(shù)恢復(fù)，并減少血小板輸注需求?，F(xiàn)在多個(gè)公司利用基因工程技術(shù)大量生產(chǎn)重組人ΤΡ0，應(yīng)用于基礎(chǔ)和臨床研究。我國(guó)沈陽(yáng)三生制藥股份有限公司自主研制的國(guó)家一類新藥重組人血小板生成素(rhTPO) “特比奧”于2005年獲國(guó)家一類新藥證書(shū)，成為世界首個(gè)完成rhTPO臨床試驗(yàn)并被批準(zhǔn)上市的基因工程藥物。中試和臨床前動(dòng)物試驗(yàn)的數(shù)據(jù)證明，三生公司研制的rhTPO糖基化水平高，能夠特異性刺激巨核細(xì)胞的分化和增殖，在臨床藥效學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)、藥代動(dòng)力學(xué)等方面都表現(xiàn)出較好的結(jié)果，生產(chǎn)工藝先進(jìn)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。
[0010]癌癥病人在放療和化療后經(jīng)常出現(xiàn)嚴(yán)重的血小板減少，不僅危害病人的生命，還會(huì)制約癌癥化療藥物的使用劑量和療程，影響治療效果。目前治療血小板減少的常用方法是通過(guò)直接輸入血小板，該方法具有輸注昂貴、感染和免疫等副作用嚴(yán)重以及反復(fù)輸注痛苦等缺點(diǎn)，急需其他方法替代。臨床試驗(yàn)結(jié)果充分證明了 rhTPO的安全性和有效性。rhTPO能夠減緩實(shí)體瘤患者化療后血小板明顯減少的趨勢(shì)并緩解急性白血病患者接受治療后的血小板下降，加速血小板計(jì)數(shù)的恢復(fù)，減少輸注血小板的次數(shù)和數(shù)量[5]。化療后骨髓抑制、重度血小板減少是引起出血性白血病患者死亡主要原因之一。血小板輸注可減少出血并發(fā)癥，但重復(fù)輸注可增加輸血反應(yīng)(包括輸血相關(guān)的GVHD)及輸入性感染的危險(xiǎn)，長(zhǎng)期可導(dǎo)致血小板的無(wú)效輸注，并增加醫(yī)療費(fèi)用。然而，臨床研究發(fā)現(xiàn)國(guó)產(chǎn)rhTPO對(duì)白血病化療后血小板計(jì)數(shù)低于20X 109 / L的患者可減輕化療誘導(dǎo)血小板的下降程度，用藥組血小板計(jì)數(shù)下降的最低值比對(duì)照組平均`高了 IOXlO9 / L以上[6，7]。此外，新近的藥效比較臨床研究發(fā)現(xiàn):87例腫瘤化療患者中45例采用rhTPO治療，42例采用rhIL_ll治療，總有效率分別為86.6%和69%，rhTPO組明顯高于rhIL_ll組(Ρ〈0.05)。rhTPO組有一例患者因出現(xiàn)出血癥狀而采用輸注血小板。rhTPO組與rhIL-ΙΙ組的不良反應(yīng)發(fā)生率分別為13.2%與64%，且rhTPO組僅有6例患者發(fā)生I度不良反應(yīng)[8]。上述研究數(shù)據(jù)證實(shí)，rhTPO是具有糾正血小板減少癥的高新技術(shù)藥物，不良反應(yīng)少，偶有發(fā)熱、頭暈等也不需處理，可自行恢復(fù)，為我國(guó)500多萬(wàn)的腫瘤患者帶來(lái)了希望。
[0011]此外，臨床研究還證實(shí)，除了治療腫瘤放療后血小板減少，rhTPO還可以應(yīng)用其它臨床治療，包括治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)合并難治性血小板減少性紫癜患者，外周血干細(xì)胞移植后干預(yù)，骨髓增生異常綜合征(MDS)等[5]。經(jīng)過(guò)rhTPO干預(yù)兩周的有效率達(dá)83.33%，SLE合并難治性血小板減少性紫癜患者用藥后7天血小板計(jì)數(shù)即有升高，用藥后10-14天上升更明顯，提示rhTPO能較快促進(jìn)血小板的恢復(fù)。干預(yù)過(guò)程中僅2例發(fā)生不良反應(yīng)，均較輕微，能自行好轉(zhuǎn)[9，10]。應(yīng)用粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)動(dòng)員的外周血干細(xì)胞移植，仍是目前治療包括白血病在內(nèi)的多種腫瘤最有希望的方法，但有80%的患者在接受移植后3周內(nèi)需多次輸注血小板以防治出血并發(fā)癥。近來(lái)，應(yīng)用rhTPO動(dòng)員外周血干細(xì)胞治療的研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)29名乳腺癌患者進(jìn)行了 rhTPO+G-CSF動(dòng)員干細(xì)胞的聯(lián)合實(shí)驗(yàn)與傳統(tǒng)的G-CSF動(dòng)員相比，聯(lián)合組能夠明顯增加⑶34數(shù)量，并減少達(dá)到⑶343X IO6 / kg的干細(xì)胞采集次數(shù)，并且減少了血小板輸注次數(shù)[11]。rhTPO還可以應(yīng)用于骨髓增生異常綜合征(MDS)的治療。MDS是一種造血異常疾病，特點(diǎn)是骨髓病態(tài)造血，高風(fēng)險(xiǎn)向急性粒細(xì)胞白血病(AML)轉(zhuǎn)化，發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而增高，60歲以上老人為I / 500。MDS患者的平均存活期為2年，40%患者最后死于出血、感染或由輸血引起的鐵負(fù)荷過(guò)載，30%死于急性白血病，40%死于其它原因。研究證實(shí)，TPO具有刺激巨核細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)CFU-GM和BFU-E集落形成細(xì)胞生長(zhǎng)，對(duì)大多數(shù)AML白血病細(xì)胞無(wú)刺激效應(yīng)，且TPO能夠增強(qiáng)G-CSF，GM-CSF, IL-3等因子效應(yīng)，因此可以預(yù)見(jiàn)TPO有望用于MDS臨床治療并取得顯著療效[5，12]。
[0012]TPO與腦缺血損傷研究進(jìn)展
[0013]臨床研究發(fā)現(xiàn)，急性缺血性腦血管病患者血液ΤΡ0、內(nèi)皮素(Er)和降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)水平均較正常顯著升高，其中TP0、Er升高持續(xù)至來(lái)診后第3天。比較不同類型缺血性腦血管病或/和不同治療方法各時(shí)間點(diǎn)的血液TP0、Er、CGRP水平無(wú)顯著差異。ΤΡ0、Er、CGRP以及血小板(PL)之間均無(wú)相關(guān)性。研究結(jié)果提示急性缺血性腦血管病早期血清TPO升高，其升高受到血小板以外的因素調(diào)節(jié)，而溶栓治療對(duì)TPO水平無(wú)影響[13]。
[0014]另一臨床研究發(fā)現(xiàn)，新生兒缺氧缺血性腦病(HIE)的血小板參數(shù)及血清促血小板生成素(TPO)水平發(fā)生明顯變化?；純杭毙云谘“蹇倲?shù)(PLT)較正常對(duì)照組顯著降低(P〈0.001)，平均血小板體積(MPV)和血小板體積分布寬度(PDW)較正常對(duì)照組明顯增高(P<0.01);血清TPO水平較正常對(duì)照組顯著升高(P〈0.001);患兒恢復(fù)期PLT、MPV、PDW與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性(P>0.05);血清TPO水平較對(duì)照組仍顯著升高(P〈0.001)。研究結(jié)果提示HIE患兒血清TPO水平明顯升高除與血小板的數(shù)量變化有關(guān)外，還可能與其參與組織損傷保護(hù)和修復(fù)有關(guān)[14]。
[0015]綜上所述，rhTPO具有良好的臨床治療安全性以及廣泛的治療用途，然而目前為止，還未有文獻(xiàn)報(bào)道rhTPO可以應(yīng)用于治療包括腦缺血在內(nèi)的腦血管疾病誘發(fā)的認(rèn)知功能 障礙。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016]本發(fā)明的一個(gè)目的是提供血小板生成素用于制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物或保健品的用途。
[0017]本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供含有血小板生成素的藥物組合物用于制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物或保健品的用途。
[0018]本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的方法。
[0019]根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了血小板生成素用于制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物或保健品的用途。
[0020]根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了含有血小板生成素的藥物組合物用于制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物或保健品的用途，其中，所述藥物組合物包含治療有效量的血小板生成素和藥學(xué)上允許的任意一種或多種輔料。
[0021]本發(fā)明中，優(yōu)選地，所述血小板生成素可為重組人源血小板生成素。例如，所述重組人源血小板生成素的氨基酸序列如下:
[0022]spappacdlrvlskilrdshvlhsrlsqcpevhplptpvllpavdfslgewktqmeetkaqdiIgavtIllegvmaargqlgptclssllgqlsgqvrlllgalqsllgtqlppqgrttahkdpnaiflsfqhllrgkvrflmlvggstlcvrrappttavpsrtslvltlnelpnrtsglletnftasarttgsgllkwqqgfrakipgllnqtsrsldqipgylnrihellngtrglfpgpsrrtlgapdissgtsdtgslppnlqpgyspspthpptgqytlfplpptlptpvvqlhPllpdpsaptptptspIlntsythsqnlsqeg (SEQ ID NO:1)。
[0023]本發(fā)明首次證實(shí)了重組人源血小板生成素在治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和認(rèn)知功能障礙中的作用。
[0024]本發(fā)明中，優(yōu)選地，所述腦血管疾病包括:腦血栓、腦缺血、腦中風(fēng)、血管性癡呆、血管性認(rèn)知功能障礙。
[0025]根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的方法，所述方法包括向患者施用治療有效量的本發(fā)明的血小板生成素(優(yōu)選為重組人源血小板生成素)或者含有血小板生成素(優(yōu)選為重組人源血小板生成素)的藥物組合物。
[0026]根據(jù)本發(fā)明，可以將治療有效量的上述血小板生成素(優(yōu)選為重組人源血小板生成素)和藥學(xué)上允許的任意一種或多種輔料制成藥物組合物。其制劑可以是藥學(xué)上的任意一種劑型，包括但不限于，片齊?、膠囊齊?、丸劑、注射劑等。
[0027]為實(shí)施本發(fā)明的方法，血小板生成素(優(yōu)選為重組人源血小板生成素)可通過(guò)口月艮、腸胃外、皮下、靜脈注射、吸入式噴霧或通過(guò)植入式貯存器等給藥。
[0028]本發(fā)明公開(kāi)了血小板生成素，尤其是重組人源血小板生成素，在制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物中的用途。通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)手段首次證明，重組人源血小板生成素能顯著改善腦血栓誘發(fā)的短期和長(zhǎng)期神經(jīng)功能異常，同時(shí)能明顯改善腦血栓誘發(fā)的長(zhǎng)期認(rèn)知功能障`礙，可以用于制備治療腦血管疾病引發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物或保健品。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的重組人源血小板生成素對(duì)腦缺血誘發(fā)的短期和長(zhǎng)期神經(jīng)功能損傷和認(rèn)知功能障礙均具有顯著改善作用，有望開(kāi)發(fā)為治療腦缺血、腦血栓等引發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的新型藥物或保健品。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0029]圖1顯示腦血栓手術(shù)7天后大鼠在APA行為學(xué)測(cè)試中認(rèn)知功能數(shù)據(jù)。
[0030]*Ρ〈0.05, #Ρ〈0.01，*#Ρ〈0.001相比于溶劑對(duì)照組。每組6-9只動(dòng)物。
[0031]圖2顯示大鼠缺血損傷后2小時(shí)、I天、3天、7天的神經(jīng)功能評(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)。
[0032]樸〈0.05，*撲〈0.01相比與溶劑對(duì)照組。每組6-9只動(dòng)物。
【具體實(shí)施方式】
[0033]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不限制本發(fā)明的范圍。
[0034]重組人源血小板生成素為購(gòu)自美國(guó)Leinco技術(shù)公司(Leinco Technologies,Inc.，St.Louis，M0，USA)的T155型號(hào)產(chǎn)品，其氨基酸序列如SEQ ID N0:1所述，使用前將重組人源血小板生成素溶解于磷酸鹽緩沖液，并按每千克體重給予0.1 μ g的濃度給藥；組織纖維蛋白溶解酶激活劑購(gòu)自美國(guó)Genentech公司(Genentech, Inc., South San Francisco,CA，USA)，使用前將組織纖維蛋白溶解酶激活劑溶解于生理鹽水，按每千克體重給予IOmg的濃度給藥；此外，溶劑對(duì)照組為磷酸鹽緩沖液(濃度為0.2mol/L，pH值為7.4)。本實(shí)驗(yàn)中所用動(dòng)物為Wistar雄性大鼠(300_350g)，由美國(guó)查爾斯河實(shí)驗(yàn)室(Charles RiverLaboratories)所提供。
[0035]實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1:重組人源血小板生成素對(duì)腦缺血誘發(fā)神經(jīng)損傷的保護(hù)作用
[0036]目的和原理:
[0037]以手術(shù)方式用導(dǎo)管插入，于頸內(nèi)動(dòng)脈注射血栓，在腦內(nèi)置入血栓造成大鼠大腦中動(dòng)脈缺血[15],以模擬缺血型中風(fēng)患者。應(yīng)用APA(Active place avoidance)行為學(xué)評(píng)價(jià)模型[16]評(píng)價(jià)大腦中動(dòng)脈缺血損傷造成的短期和長(zhǎng)期神經(jīng)行為學(xué)變化以及長(zhǎng)期的認(rèn)知功能變化。
[0038]實(shí)驗(yàn)方法:
[0039]該實(shí)驗(yàn)采用栓塞型大鼠大腦缺血手術(shù)模型評(píng)價(jià)動(dòng)物的認(rèn)知功能。實(shí)驗(yàn)分為四組:假手術(shù)組(不進(jìn)行缺血手術(shù))、溶劑對(duì)照組(進(jìn)行缺血手術(shù))、重組人源血小板生成素組(進(jìn)行缺血手術(shù))、組織纖維蛋白溶解酶激活劑組(進(jìn)行缺血手術(shù))。通過(guò)手術(shù)模擬腦血栓造成大鼠大腦中動(dòng)脈缺血損傷，手術(shù)后兩小時(shí)靜脈注射給藥，分別給予磷酸鹽緩沖液、重組人源血小板生成素(0.1 μ g/kg)、或組織纖維蛋白溶解酶激活劑(10mg/kg)。
[0040]術(shù)后7天，應(yīng)用APA評(píng)價(jià)大鼠的認(rèn)知功能。該模型在一個(gè)緩慢旋轉(zhuǎn)(I分鐘I圈)的圓形平臺(tái)裝置中進(jìn)行， 平臺(tái)為金屬材質(zhì)，直徑82厘米，周?chē)懈?0厘米的透明墻壁。整個(gè)行為學(xué)歷時(shí)一天，共訓(xùn)練7次，每次訓(xùn)練10分鐘，每?jī)纱伍g隔10分鐘。測(cè)試前，實(shí)驗(yàn)者在每只大鼠頸后皮下埋植電極。之后將大鼠置于平臺(tái)裝置上，自由探索10分鐘后應(yīng)用點(diǎn)跟蹤電腦程序(BioSignal Group, Brooklyn, NY)記錄大鼠訓(xùn)練時(shí)的路徑。在動(dòng)物的測(cè)試環(huán)境中，有一個(gè)60度的固定扇形區(qū)域是電擊區(qū)域(該區(qū)域不隨平臺(tái)裝置而轉(zhuǎn)動(dòng)，動(dòng)物根據(jù)周?chē)臻g環(huán)境來(lái)識(shí)別和確定該區(qū)域)。進(jìn)入該區(qū)域的大鼠足部會(huì)遭受電擊(〈0.3mA，60Hz，500ms)。大鼠學(xué)習(xí)記憶能力通過(guò)總路徑、進(jìn)入電擊區(qū)域的次數(shù)、受電擊次數(shù)、最長(zhǎng)逃避時(shí)間、第一次以及第二次進(jìn)入電擊區(qū)域的時(shí)間進(jìn)行評(píng)價(jià)，其中總路徑反映動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)能力。
[0041]除上述評(píng)價(jià)手段外，分別于大鼠手術(shù)后2小時(shí)、I天、3天、7天進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。改進(jìn)的神經(jīng)功能評(píng)分包括一系列的神經(jīng)功能障礙測(cè)試，具體的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下:
[0042]A.運(yùn)動(dòng)功能測(cè)試:
[0043]I)提尾測(cè)試——提尾后通過(guò)比較對(duì)側(cè)肢體癱瘓程度評(píng)價(jià):前肢不能伸展一 I分；后肢不能伸展一I分；30秒內(nèi)頭部側(cè)彎與垂直軸角度超過(guò)10度一I分。
[0044]2)動(dòng)物置于地上，不能直線行走一I分；朝對(duì)側(cè)旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)-2分；對(duì)側(cè)偏癱一3分。
[0045]B.感覺(jué)功能測(cè)試:
[0046]I)視覺(jué)和觸覺(jué)測(cè)試障礙一 I分；
[0047]2)肢體本體感受功能測(cè)試障礙-1分。
[0048]C.平衡木評(píng)分測(cè)試:
[0049]抓住平衡木時(shí)間超過(guò)60秒一 I分；
[0050]單肢脫離抱住平衡木-2分；
[0051 ] 兩肢脫離抱住平衡木-3分；[0052]40秒后從平衡木上掉下-4分；
[0053]20秒后從平衡木上掉下-5分；
[0054]20秒內(nèi)從平衡木上掉下-6分。
[0055]D.反射和異常運(yùn)動(dòng)測(cè)試:
[0056]耳廓反射障礙-1分；
[0057]角膜反射障礙-1分；
[0058]驚嚇?lè)瓷湔系K一 I分；
[0059]肌陣攣或肌張力障礙一 I分。
[0060]上述的評(píng)價(jià)指標(biāo)綜合反映了運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、平衡以及反射功能(分?jǐn)?shù)范圍為O —18，分?jǐn)?shù)越大表明神經(jīng)行為損傷越明顯)[17]。
[0061]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
[0062]圖1顯示了重組人源血小板生成素對(duì)腦缺血誘發(fā)神經(jīng)功能損傷的保護(hù)作用。測(cè)試了四個(gè)組別，總路徑?jīng)]有表現(xiàn)出明顯的差異(圖1A)，提示假手術(shù)組、溶劑對(duì)照組、重組人源血小板生成素組與組織纖維蛋白溶解酶激活劑組的運(yùn)動(dòng)沒(méi)有明顯的異常，因而大鼠在其他認(rèn)知功能測(cè)試中的數(shù)據(jù)不是因?yàn)檫\(yùn)動(dòng)能力的差異所導(dǎo)致。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)組相比，腦血栓手術(shù)組大鼠進(jìn)入 電擊區(qū)域的次數(shù)(圖1B)和遭受電擊的次數(shù)(圖1C)明顯增加，而最長(zhǎng)的逃避時(shí)間(圖1D)、第一次進(jìn)入電擊區(qū)域的時(shí)間(圖1E)和第二次進(jìn)入電擊區(qū)域的時(shí)(圖1F)均明顯縮短。腦血栓組大鼠給予重組人源血小板生成素后，上述認(rèn)知功能障礙現(xiàn)象得到明顯改善，學(xué)習(xí)記憶的能力幾乎表現(xiàn)為與假手術(shù)組一致。然而，組織纖維蛋白溶解酶激活劑干預(yù)組相比于溶劑對(duì)照組沒(méi)有明顯的改善作用。
[0063]圖2顯示重組人源血小板生成素對(duì)腦缺血誘發(fā)認(rèn)知功能障礙的保護(hù)作用。相比于假手術(shù)組，大鼠缺血損傷2小時(shí)、I天、3天、7天后神經(jīng)功能評(píng)分圖2A和平衡木評(píng)分圖2B數(shù)據(jù)均提示大鼠的神經(jīng)行為出現(xiàn)顯著障礙。重組人源血小板生成素干預(yù)組與組織纖維蛋白溶解酶激活劑干預(yù)組均能一定程度改善上述損傷，并且在缺血手術(shù)后第一天的評(píng)分?jǐn)?shù)據(jù)相比于溶劑對(duì)照組出現(xiàn)明顯改善。
[0064]參考文獻(xiàn):
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【權(quán)利要求】
1.血小板生成素用于制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物或保健品的用途。
2.含有血小板生成素的藥物組合物用于制備治療腦血管疾病誘發(fā)的神經(jīng)功能異常和/或認(rèn)知功能障礙的藥物或保健品的用途，其中，所述藥物組合物包含治療有效量的血小板生成素和藥學(xué)上允許的任意一種或多種輔料。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中，所述血小板生成素為重組人源血小板生成素。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其中，所述重組人源血小板生成素的氨基酸序列如SEQID NO:1 所述。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其中，所述腦血管疾病包括:腦血栓、腦缺血、腦中風(fēng)、血管性癡呆、血管性認(rèn)知功能障礙。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其中，所述藥物組合物通過(guò)口服、腸胃外、皮下、靜脈注射、吸入式噴霧或通過(guò)植入`式貯存器等給藥。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK103768581SQ201210407748
【公開(kāi)日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2012年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2012年10月23日
【發(fā)明者】章海燕, 周瑾, 唐希燦, 佛蘭克·巴龍, 阮志, 丹尼爾·羅森鮑姆, 李潔 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所, 紐約州立大學(xué)研究基金會(huì)