本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種卡巴他賽磷脂組合物。同時，本發(fā)明還涉及所述卡巴他賽磷脂組合物的制備方法及其在制備治療腫瘤的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：卡巴他賽是一種半合成紫杉烷類化合物，其前體物從紫杉樹針葉中提取而獲得，化學(xué)名稱為4-乙酰氧基-2α-苯甲酰氧基-5β，20-環(huán)氧基-1-羥基-7β，10β-二甲氧基-9-氧代紫杉-11-烯-13α-基(2r，3s)-3-叔丁氧基羰基氨基-2-羥基-3-苯基丙酸酯。美國fda于2010年6月17日批準(zhǔn)其上市，與潑尼松聯(lián)用治療既往用含多西他賽治療方案的激素難治性轉(zhuǎn)移性前列腺癌(hormone-refractorymetastaticprostatecancer，hrpc)患者。大規(guī)模iii期癌癥試驗顯示，接受多烯紫杉醇為基礎(chǔ)的化療、且疾病進(jìn)展的去勢治療失敗轉(zhuǎn)移性前列腺癌男性患者，用卡巴他賽治療可顯著延長總生存期，使死亡風(fēng)險降低了30％?？ò退愖鳛槲⒐芤种苿芘c微管蛋白結(jié)合，促使微管雙聚體裝配成微管，阻止其去多聚化過程，抑制微管分解使細(xì)胞阻滯于g2和m期，從而抑制癌細(xì)胞的有絲分裂和增殖。紫杉類化合物中多西他賽和紫杉醇對p糖蛋白具有很高的親和力，因此容易耐藥。與多西他賽相比，卡巴他賽對p糖蛋白的親和力低，且卡巴他賽通過血腦屏障的能力強(qiáng)于多西他賽和紫杉醇，此外，卡巴他賽即使對多西他賽不敏感的腫瘤模型也顯示出廣譜的體內(nèi)抗腫瘤活性。與其它紫杉醇類藥物相比，該藥發(fā)生藥物耐受性的機(jī)率低，可用于治療多藥耐藥性腫瘤。目前，上市的卡巴他賽注射液是由法國sanofi-aventis公司研制，商品名為“jevtana”，為兩支西林瓶的組合包裝，一支為60mg卡巴他賽溶于1.5ml吐溫80溶液中，另一支為溶劑，為5.7ml13％(w/w)乙醇水溶液，這種制劑在向病人中輸注前還需要兩步稀釋過程。在第一步中，必須將含有卡巴他賽和吐溫80的小藥瓶與含有13％乙醇溶液的另一個小藥瓶混合；在第二步中，將該混合溶液用鹽水或5％葡萄糖稀釋，稀釋后需在24小時內(nèi)使用，否則將會產(chǎn)生沉淀。這樣使得該藥物注射液在臨床使用中存在一些問題：(1)吐溫80在臨床應(yīng)用中易產(chǎn)生 不良反應(yīng)并引起較多的并發(fā)癥，較為常見的包括嚴(yán)重的過敏反應(yīng)、體液潴留等，因此在使用前均須使用抗組胺類藥物和非甾體抗炎藥物進(jìn)行預(yù)處理，即使處理后，患者仍有可能出現(xiàn)不同程度的過敏反應(yīng)，需隨時進(jìn)行觀察。此外，吐溫80還具有溶血性、黏性大，且不能與聚氯乙烯輸送裝置一起使用(傾向于浸出高毒性的鄰苯二甲酸二乙基己酯)等問題，因此給臨床應(yīng)用帶來諸多不便和安全性問題。(2)藥物使用前的配制過程過于繁瑣，不便于病人的使用。因此，急需開發(fā)一種方便臨床使用、質(zhì)量可控、穩(wěn)定性好、高效、低毒的卡巴他賽新劑型降低毒副作用，充分發(fā)揮其抗腫瘤活性。針對卡巴他賽上市制劑存在的問題，制劑領(lǐng)域內(nèi)的專業(yè)人員提出了不少的解決方案：中國專利cn103768018a公開了一種卡巴他賽脂質(zhì)體注射劑及其制備方法，該脂質(zhì)體主要通過薄膜分散法制備而成，該工藝只適合實驗室規(guī)模制備脂質(zhì)體，難以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。中國專利cn104473873a公布了一種卡巴他賽長循環(huán)脂質(zhì)體注射液及其制備方法，該脂質(zhì)體處方中含表面活性劑聚乙二醇1000維生素e琥珀酸酯(tpgs)，可能帶來一些安全隱患；另外該處方組成中不含膽固醇，會大大降低脂質(zhì)體體內(nèi)外的穩(wěn)定性，進(jìn)而影響療效。中國專利cn104306333a公開了一種卡巴他賽脂質(zhì)微球注射液及其制備方法，處方組成包含了表面活性劑(吐溫類)和兩親性聚氨基酸，臨床使用中仍有可能產(chǎn)生過敏、溶血等不良反應(yīng)。中國專利cn103393632a和cn104224750a均公開了卡巴他賽白蛋白納米制劑，白蛋白納米制劑本身存在體內(nèi)外穩(wěn)定性差且易被內(nèi)皮網(wǎng)狀系統(tǒng)清除等缺點(diǎn)，因而限制了該系統(tǒng)藥效上的提高。中國專利cn104856973a公開了卡巴他賽膠束載藥系統(tǒng)，該系統(tǒng)除了載體材料本身安全性存在問題外，膠束制劑在體內(nèi)的不穩(wěn)定性是該系統(tǒng)臨床應(yīng)用的另一大障礙。脂質(zhì)體作為藥物載體，既起到了對藥物的保護(hù)作用，又提高了藥物對機(jī)體特定部位的靶向性，因此在提高藥效方面具有很多優(yōu)越的特性。已公開的卡巴他賽脂質(zhì)體雖然較市售注射液有一定優(yōu)勢，但存在以下缺陷：(1)脂質(zhì)體體內(nèi)外穩(wěn)定性差，長期貯存過程中脂質(zhì)體易聚集；脂質(zhì)體進(jìn)入體內(nèi)后，由于血液中白蛋白、調(diào)理素、抗體等各種因素的作用以及所用脂質(zhì)相變溫度低于體溫等原因，包封藥物快速泄露， 大大削弱脂質(zhì)體制劑的優(yōu)勢，限制其療效的發(fā)揮。(2)所采用的脂質(zhì)體制備方法及工藝難以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，且制得的脂質(zhì)體粒徑難以控制，分布不均勻，包封率低、穩(wěn)定性差。(3)現(xiàn)有脂質(zhì)體處方中還含有表面活性劑，仍存在安全性問題。因此，對于卡巴他賽這個特定的藥物來說，必須針對其現(xiàn)有制劑出現(xiàn)的問題，尋找特定的制劑及制備工藝，以實現(xiàn)提高制劑穩(wěn)定性及療效、降低毒副作用的目的?？紤]到卡巴他賽結(jié)構(gòu)中含有大量的酯鍵，易水解、不穩(wěn)定，本專利公開的新型卡巴他賽磷脂組合物，將卡巴他賽和負(fù)電荷磷脂制成脂質(zhì)復(fù)合物，一方面，卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物不僅提高了卡巴他賽的化學(xué)穩(wěn)定性，還利用卡巴他賽和負(fù)電荷磷脂之間的相互作用增加了卡巴他賽磷脂組合物制劑的穩(wěn)定性，降低藥物的泄露，解決了目前卡巴他賽脂質(zhì)體制劑體內(nèi)外穩(wěn)定性差的問題；另外，針對目前卡巴他賽脂質(zhì)體制劑均采用薄膜分散法制備難以實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)的問題，本發(fā)明公開了采用噴霧干燥工藝制備磷脂組合物的方法。技術(shù)實現(xiàn)要素：針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的之一是為臨床提供一種穩(wěn)定的卡巴他賽磷脂組合物，此卡巴他賽磷脂組合物，不含吐溫-80，大大降低卡巴他賽現(xiàn)有制劑的不良反應(yīng)。本發(fā)明的另一目的是提供一種上述卡巴他賽磷脂組合物的制備方法。本發(fā)明所述卡巴他賽磷脂組合物包括卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物、磷脂和膽固醇，所述卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物由卡巴他賽和負(fù)電荷磷脂組成，兩者質(zhì)量比為1:1～30。所述卡巴他賽、磷脂和膽固醇之間的質(zhì)量比為1:(5～50):(0～25)，優(yōu)選為1:(5～30):(0.2～10)。所述負(fù)電荷磷脂選自磷脂酰甘油和磷脂酰乙醇胺中的任意一種或幾種，磷脂酰甘油可選自心磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(dppg)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dmpg)和二油酰磷脂酰甘油(dopg)，優(yōu)選為二硬脂酰磷脂酰甘油(dspg)；磷脂酰乙醇胺可選自聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(peg-pe)、聚乙二醇-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(peg-dmpe)、聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(peg-dppe)和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg-dspe)，優(yōu) 選為聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(peg-dspe)，其中所述peg的分子量為1000-5000da，優(yōu)選地，所述peg分子量為2000da。所述磷脂選自大豆磷脂(spc)、蛋黃卵磷脂(epc)、氫化大豆磷脂(hspc)、氫化卵磷脂(hepc)、鞘磷脂(sm)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(dspc)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dppc)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(dmpc)和二油酰磷脂酰膽堿(dopc)中的一種或幾種，優(yōu)選為氫化大豆磷脂(hspc)?？ò退惲字M合物的粒徑會影響其在體內(nèi)的循環(huán)時間，為使卡巴他賽磷脂組合物在體內(nèi)消除速度變慢并保持較高的血藥濃度，從而發(fā)揮長效作用。因此，在本發(fā)明實施例中，所述卡巴他賽磷脂組合物的粒徑為50～300nm，優(yōu)選為50～200nm。本發(fā)明的卡巴他賽磷脂組合物中，藥物包封率大于80％，以便脂質(zhì)制劑能通過增強(qiáng)滲透和滯留作用(epr效應(yīng))聚集在腫瘤組織，減少在其它正常組織的分布，從而提高藥效，降低毒性。本發(fā)明的卡巴他賽磷脂組合物中卡巴他賽的濃度不低于1mg/ml。所述卡巴他賽磷脂組合物進(jìn)一步包括凍干保護(hù)劑，其用量按磷脂重量比計算，1重量份的磷脂加1～50重量份的凍干保護(hù)劑。在本發(fā)明優(yōu)選實施例中，所述凍干保護(hù)劑為選自蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、麥芽糖、白蛋白中的一種或多種。本發(fā)明另一方面提供了制備卡巴他賽磷脂組合物的方法，其包括以下步驟：(1)將卡巴他賽和負(fù)電荷磷脂加到有機(jī)溶劑中，20～80℃下攪拌0.5～2小時，得到澄清透明的溶液，取出溶液進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或噴霧干燥以除去有機(jī)溶劑，即得卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物；(2)將卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物、磷脂、膽固醇溶于有機(jī)溶劑中，40～80℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或噴霧干燥除去有機(jī)溶劑，加入水形成混懸液，在10000～30000psi壓力下高壓均質(zhì)或進(jìn)行高壓擠出后，即得卡巴他賽磷脂組合物；或(3)將卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物、磷脂、膽固醇溶于有機(jī)溶劑中得有機(jī)相，將其注入到水中高速攪拌，高速攪拌的轉(zhuǎn)速為5000～30000rpm， 在10000～30000psi壓力下高壓均質(zhì)或進(jìn)行擠出處理后，即得卡巴他賽磷脂組合物。進(jìn)一步地，在步驟(2)或步驟(3)的水中加入選自蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖和麥芽糖、白蛋白中的一種或多種作為凍干保護(hù)劑，其用量按磷脂重量比計算，1重量份磷脂加1～50重量份凍干保護(hù)劑。本發(fā)明卡巴他賽磷脂組合物的制備方法中，所述步驟(1)、(2)和(3)中的有機(jī)溶劑各自獨(dú)立的選自氯仿、甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙醚和丙酮中一種或幾種，優(yōu)選為氯仿、甲醇和乙醇中的一種或幾種。本發(fā)明還提供了一種上述卡巴他賽磷脂組合物在制備用于治療腫瘤或耐藥性腫瘤的藥物中的用途。在優(yōu)選實施方案中，所述腫瘤包括但不限于前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胃癌或乳腺癌。在優(yōu)選實施方案中，所述腫瘤為耐藥性腫瘤，所述耐藥性腫瘤包括但不限于耐藥性前列腺癌、耐藥性非小細(xì)胞肺癌、耐藥性胃癌或耐藥性乳腺癌。術(shù)語“腫瘤”是指腫瘤性細(xì)胞的集合體。術(shù)語“腫瘤性細(xì)胞”是指具有不受正常的細(xì)胞生長調(diào)控機(jī)制調(diào)控的具有異常生長表型的細(xì)胞。由于腫瘤性細(xì)胞不一定在任何時間點(diǎn)上都復(fù)制，因此術(shù)語“腫瘤性細(xì)胞”包括活躍復(fù)制的細(xì)胞以及臨時處于靜息狀態(tài)(g1或g0)不復(fù)制的細(xì)胞。局灶化的腫瘤性細(xì)胞群被稱為腫瘤。如上面所提到的，本文所用的術(shù)語腫瘤也指彌散性惡性疾病，如白血病，這種疾病就沒有局灶化的實質(zhì)腫瘤塊。腫瘤可以是惡性的，也可以是良性的。惡性腫瘤也被稱為癌。在優(yōu)選實施方案中，腫瘤是指上皮癌，如乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、腎癌、胃癌、膀胱癌或卵巢癌，或者胃腸道的任何癌。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明將負(fù)電荷磷脂與卡巴他賽制備成脂質(zhì)復(fù)合物，再與磷脂、膽固醇制備成卡巴他賽磷脂組合物，可通過負(fù)電荷磷脂與卡巴他賽之間的相互作用，增加藥物在卡巴他賽磷脂組合物中的體內(nèi)外穩(wěn)定性，大大減少藥物在存放過程或體內(nèi)循環(huán)過程中藥物的泄露，從而有助于提高療效。這一技術(shù)優(yōu)勢在其它相關(guān)專利文獻(xiàn)中未見報道。采用磷脂組合物作為卡巴他賽的載體，將藥物包封于磷脂組合物 中，能明顯提高藥物在體內(nèi)的化學(xué)穩(wěn)定性，更好的發(fā)揮抗腫瘤作用；因卡巴他賽磷脂組合物屬納米制劑范疇，能顯著延長藥物在血液中的循環(huán)時間，改善其體內(nèi)分布，增加藥物在腫瘤部位的聚集，提高藥效，降低毒副作用，從而提高治療指數(shù)。本發(fā)明的卡巴他賽磷脂組合物的粒徑為50～200nm，能有效穿透腫瘤血管，通過增強(qiáng)滲透和滯留作用(epr效應(yīng))聚集在腫瘤部位，實現(xiàn)被動靶向作用。本發(fā)明卡巴他賽磷脂組合物的制備可采用注入法或噴霧干燥法結(jié)合高壓均質(zhì)或擠出工藝實現(xiàn)，較現(xiàn)有制備方法更易實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，并能解決現(xiàn)有制備技術(shù)粒徑大且不均勻的問題，更好控制產(chǎn)品的質(zhì)量。附圖說明圖1為根據(jù)本發(fā)明實施例1制備的卡巴他賽磷脂組合物復(fù)溶后的粒徑分布圖；圖2為根據(jù)本發(fā)明實施例2制備的卡巴他賽磷脂組合物復(fù)溶后的zeta電位圖；圖3為根據(jù)本發(fā)明實施例1制備的卡巴他賽磷脂組合物的藥效測試結(jié)果圖；圖4為根據(jù)本發(fā)明實施例1制備的卡巴他賽磷脂組合物在耐藥性肺癌的藥效測試結(jié)果圖。具體實施方式下面結(jié)合具體實例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，這些實例僅是示范性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。在以下實施例中，所有原料和輔料采用市售產(chǎn)品，其中卡巴他賽購自上海佰世凱化學(xué)科技有限公司公司；hspc、dppc、dmpc、dspc、dopc、大豆磷脂、卵磷脂、dspg、dmpg、dppg、dopg、peg-dppe、peg-dspe、peg-dmpe、膽固醇均購自上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司。粒徑測定儀(型號：nano-zs90)購自英國malvern公司；高壓均質(zhì)機(jī)(型號：m-110)購自美國microfluidics公司；冷凍干燥劑(型號：rd85s4)購自美國millrock公司；噴霧干燥儀(型號：b-290)購自瑞士buchi公司。實施例1卡巴他賽磷脂組合物凍干粉的制備稱取60mg卡巴他賽、300mgdspg加入10ml氯仿:甲醇(9:1，v/v)中于60℃攪拌0.5h，至溶液澄清透明，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物。取上述卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物、1200mghspc、120mg膽固醇，用40ml氯仿:甲醇(9:1，v/v)溶液溶解，經(jīng)噴霧干燥(入口溫度：45℃)得白色顆粒，加入30ml含10wt％蔗糖的水溶液水化，然后在20000psi壓力下高壓均質(zhì)5次，即得淡藍(lán)色帶乳光的卡巴他賽磷脂組合物，分裝至西林瓶中，冷凍干燥(預(yù)凍：-35℃5h，初級干燥：-30℃10h，二次干燥：4℃10h)即得卡巴他賽磷脂組合物凍干粉。卡巴他賽磷脂組合物凍干粉加水復(fù)溶后，測定卡巴他賽磷脂組合物粒徑、電位及包封率，其粒徑(見圖1)、電位(見圖2)及包封率分別為83.4nm、-64.3mv和86.2％。實施例2卡巴他賽磷脂組合物注射液的制備稱取60mg卡巴他賽、600mgdmpg加入20ml氯仿:甲醇(1:1，v/v)中40℃攪拌1h，至溶液澄清透明，噴霧干燥(入口溫度：55℃)得卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物。取上述卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物、1200mg大豆磷脂、200mg膽固醇于250ml圓底燒瓶中，用40ml氯仿:甲醇(1:1，v/v)溶液溶解，于45℃下經(jīng)減壓干燥除去有機(jī)溶劑，在圓底燒瓶壁形成脂膜，加入30ml純水水合，依次經(jīng)0.2μm、0.1μm微孔濾膜過濾器擠出各4次，即得卡巴他賽磷脂組合物注射液，測得卡巴他賽磷脂組合物粒徑和包封率分別為80.5nm和86.7％。實施例3卡巴他賽磷脂組合物凍干粉的制備稱取60mg卡巴他賽、1200mgdppg加入20ml二氯甲烷:甲醇(1:1，v/v)中60℃攪拌1h，至溶液澄清透明，噴霧干燥(入口溫度：55℃)得卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物。取上述卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物、1800mg卵磷脂、200mg膽固醇于250ml圓底燒瓶中，用40ml二氯甲烷:甲醇(1:1，v/v)溶液溶解，于45℃下經(jīng)減壓干燥除去有機(jī)溶劑，在圓底燒瓶壁形成脂膜，加入30ml含10wt％蔗糖及5wt％乳糖的水溶液水合，在20000psi壓力下高壓均質(zhì)4次，將所得混懸液分裝至西林瓶中，經(jīng)冷凍干燥即得卡巴他賽磷 脂組合物凍干粉。將卡巴他賽磷脂組合物凍干粉加水復(fù)溶后，測得卡巴他賽磷脂組合物粒徑和包封率分別為150.4nm和83.1％。實施例4卡巴他賽磷脂組合物凍干粉的制備稱取60mg卡巴他賽、100mgdopg加入10ml氯仿：甲醇(1:1，v/v)中60℃攪拌0.5h，至溶液澄清透明，噴霧干燥(入口溫度：55℃)得卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物。取上述卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物、300mgdppc、100mg膽固醇于250ml圓底燒瓶中，用20ml氯仿:甲醇(1:1，v/v)溶液溶解，于45℃下經(jīng)減壓干燥除去有機(jī)溶劑，在圓底燒瓶壁形成脂膜，加入30ml含10wt％海藻糖及5wt％甘露醇的水溶液水合，在20000psi壓力下高壓均質(zhì)4次，將所得混懸液分裝至西林瓶中，經(jīng)冷凍干燥即得卡巴他賽磷脂組合物凍干粉。將卡巴他賽磷脂組合物凍干粉加水復(fù)溶后，測得卡巴他賽磷脂組合物粒徑和包封率分別為110.3nm和87.8％。實施例5卡巴他賽磷脂組合物凍干粉的制備稱取60mg卡巴他賽、1000mgpeg-dppe加入10ml乙醇中55℃攪拌0.5h，至溶液澄清透明，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物。取上述卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物、2000mgdmpc、100mg膽固醇于250ml圓底燒瓶中，用20ml乙醇溶解，于60℃下經(jīng)減壓干燥除去有機(jī)溶劑，在圓底燒瓶壁形成脂膜，加入20ml含10wt％蔗糖及2.5wt％麥芽糖的水溶液水合，在20000psi壓力下高壓均質(zhì)4次，將所得混懸液分裝至西林瓶中，經(jīng)冷凍干燥即得卡巴他賽磷脂組合物凍干粉。將卡巴他賽磷脂組合物凍干粉加水復(fù)溶后，測得卡巴他賽磷脂組合物粒徑和包封率分別為180.3nm和85.1％。實施例6卡巴他賽磷脂組合物凍干粉的制備稱取60mg卡巴他賽、400mgpeg-dspe加入10ml乙醇中50℃攪拌40min，至溶液完全澄清透明，噴霧干燥(入口溫度：55℃)得卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物。將上述脂質(zhì)復(fù)合物、dspc1200mg、膽固醇400mg于250ml圓底燒瓶中，以20ml無水乙醇溶解后經(jīng)噴霧干燥(入口溫度：45℃)得白色顆粒，加入30ml10wt％蔗糖水溶液水合變成白色脂質(zhì)懸液，依次經(jīng)0.45μm、0.22μm、0.1μm微孔濾膜整粒(各3次)，將最終分散物 分裝入西林瓶中，然后冷凍干燥即得卡巴他賽磷脂組合物凍干粉。將卡巴他賽磷脂組合物凍干粉加水復(fù)溶，測得卡巴他賽磷脂組合物粒徑和包封率分別為90.3nm和83.9％。實施例7卡巴他賽磷脂組合物凍干粉的制備稱取60mg卡巴他賽、500mgpeg-dmpe加入10ml乙醇中50℃攪拌40min，至溶液完全澄清透明，噴霧干燥(入口溫度：55℃)得卡巴他賽脂質(zhì)復(fù)合物。將上述脂質(zhì)復(fù)合物、dopc2400mg、膽固醇400mg加入3ml無水乙醇溶解后并于60℃保溫，加入相同溫度的30ml10wt％蔗糖水溶液，在轉(zhuǎn)速20000rpm下高速攪拌3min，再在15000psi壓力下高壓均質(zhì)3次，將最終分散物分裝入西林瓶中，然后冷凍干燥即得卡巴他賽磷脂組合物凍干粉。將卡巴他賽磷脂組合物凍干粉加水復(fù)溶，測得卡巴他賽磷脂組合物粒徑和包封率分別為170.7nm和82.9％。實施例8卡巴他賽磷脂組合物的穩(wěn)定性取實施例1中的卡巴他賽磷脂組合物凍干粉適量，密封，于冰箱4℃放置，于0、1、2、3、6月取樣，對粒徑、包封率、含量等指標(biāo)進(jìn)行測定，評價卡巴他賽磷脂組合物的穩(wěn)定性。含量測定以及有關(guān)物質(zhì)檢測均采用，高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄ⅴd)，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈、甲醇、水的混合液為流動相，檢測波長為230nm；有機(jī)溶劑殘留采用氣相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄ⅴe)，選用peg-20毛細(xì)管柱，n2為載氣，結(jié)果見表1。結(jié)果表明本發(fā)明的卡巴他賽磷脂組合物在放置6個月后，各項質(zhì)量指標(biāo)與0月相比無明顯變化，表明本發(fā)明磷脂組合物穩(wěn)定性良好，具有潛在臨床應(yīng)用價值。表1本發(fā)明卡巴他賽磷脂組合物穩(wěn)定性實施例9卡巴他賽磷脂組合物的急性毒性研究利用實施例1中所述的制劑評價卡巴他賽磷脂組合物的毒性。取體重18～22g性別一致的昆明小鼠60只(購自中國科學(xué)院上海藥物研究所實驗動物中心)，隨機(jī)分成6組，每組10只，分別尾靜脈注射卡巴他賽磷脂組合物和卡巴他賽注射液，組間劑量按等比級數(shù)排列，比值1∶0.8，觀察并記錄給藥10天內(nèi)各組動物的反應(yīng)和死亡率，用簡化機(jī)率單位法計算ld50，其95％的可信限分別為：卡巴他賽注射液ld5095％的可信限＝60.4±1.2mg/kg，卡巴他賽磷脂組合物ld5095％的可信限＝140.7±1.6mg/kg。ld50毒性實驗結(jié)果表明，卡巴他賽磷脂組合物與卡巴他賽注射液相比，毒性明顯降低。實施例10卡巴他賽磷脂組合物的藥動學(xué)研究將實施例1的卡巴他賽磷脂組合物制劑加5％葡萄糖注射液復(fù)溶，卡巴他賽濃度約為2mg/ml。參考jevtana說明書配制卡巴他賽注射液作為參比制劑，并將其以5％葡萄糖注射液稀釋至2mg/ml備用。將體重100～200g的12只sd大鼠(購自中國科學(xué)院上海藥物研究所實驗動物中心)隨機(jī)分成甲乙2組，實驗前禁食一夜。甲組為對照組，于右后股靜脈注射卡巴他賽注射液(2mg/ml)；乙組為受試組，于右后股靜脈注射卡巴他賽磷脂組合物，分別于0.083、0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、12、24小時眼眶取血，取血量約0.3ml，置于肝素化離心管中，于轉(zhuǎn)速10000rpm下離心10min，取100μl血漿，加入400μl甲醇，渦旋1min，-20℃放置1h用以沉淀蛋白，然后于轉(zhuǎn)速20000rpm下離心10min。取上清液進(jìn)樣測定血液中卡巴他賽藥物濃度。藥代動力學(xué)參數(shù)用winnonlinprofessionalv6.3(pdayarsight,usa)軟件采用非房室模型分析處理，結(jié)果見表2。表2本發(fā)明卡巴他賽磷脂組合物和卡巴他賽注射液的藥動學(xué)參數(shù)參數(shù)卡巴他賽磷脂組合物注射液kel(l/kg)0.47±0.02*0.98±0.05t1/2(h)8.37±0.17*2.57±0.14auc0-24(h*μg/l)9372±216*3478±173auc0-∞(h*μg/l)9732±338*3491±281注：kel為消除速度常數(shù)，t1/2為半衰期，auc為血藥濃度時間曲線下面積，*代表與注射液相比具有顯著性差異。結(jié)果表明：卡巴他賽磷脂組合物的t1/2、auc0-24和auc0-∞分別是參比制劑卡巴他賽注射液的3.26、2.69和2.79倍，具有顯著性差異；kel是參比制劑的0.48倍，具有顯著差異；這說明在同樣劑量條件下，藥物被包裹在卡巴他賽磷脂組合物內(nèi)后延長了藥物在血液中的循環(huán)時間，使藥物在體內(nèi)消除速度變慢并保持了較高的血藥濃度，從而有可能發(fā)揮長效作用。卡巴他賽磷脂組合物改變了卡巴他賽在大鼠體內(nèi)的藥動學(xué)性質(zhì)，具有一定的緩釋和長循環(huán)特征。實施例11卡巴他賽磷脂組合物的藥效學(xué)研究balb/c裸鼠(購自中國科學(xué)院上海藥物研究所實驗動物中心)適應(yīng)環(huán)境5天，將對數(shù)生長期的pc-3a細(xì)胞消化后制成5×106/ml細(xì)胞懸液，在balb/c裸鼠右前肢皮下注射0.1ml細(xì)胞懸液，建立荷瘤模型。待小鼠腫瘤平均體積長至100mm3左右時，將裸鼠隨機(jī)分為3組，每組10只。各組分別于第1、4、7天通過尾靜脈注射給藥，給藥劑量為卡巴他賽注射液5mg/kg，實施例1中的卡巴他賽磷脂組合物5mg/kg，和生理鹽水(對照組)，用卡尺測量各裸鼠腫瘤的長徑(a)及短徑(b)，按(a×b2)/2公式計算腫瘤體積。由圖3可以看出，卡巴他賽磷脂組合物及卡巴他賽注射液對裸鼠pc-3a前列腺癌均有較好的抑制作用，相同給藥方式，同劑量的磷脂組合物組較卡巴他賽注射液5mg/kg組有更好的抑瘤效果(p<0.05)，表明卡巴他賽磷脂組合物具有更好的抗腫瘤效果。實施例12卡巴他賽磷脂組合物的藥效學(xué)研究balb/c裸鼠(由中國科學(xué)院上海藥物研究所實驗動物中心提供)適應(yīng)環(huán)境5天，將對數(shù)生長期的a549/t細(xì)胞(購自上海博谷生物科技有限公司)消化后制成1×108/ml細(xì)胞懸液，在balb/c裸鼠右前肢皮下注射0.1ml細(xì)胞懸液，建立荷瘤模型。待小鼠腫瘤平均體積長至50-100mm3左右時，將裸鼠隨機(jī)分為3組，每組10只。各組分別于第1、4、7天通過尾靜脈注射給藥，給藥劑量為卡巴他賽注射液10mg/kg，實施例1中制備的卡巴他賽磷脂組合物10mg/kg，和生理鹽水(對照組)，用卡尺測量各裸鼠腫瘤的長徑(a)及短徑(b)，按(a×b2)/2公式計算腫瘤體積。由圖4可以看出,卡巴他賽注射液和卡巴他賽磷脂組合物對裸鼠耐藥性肺癌均有較好的抑制作用，兩組制劑腫瘤體積與對照組相比均顯著降低(p<0.05，0.01)，同劑量的磷脂組合物較卡巴他賽注射液組具有更好的抑瘤效果(p<0.05)，表明卡巴他賽磷脂組合物在一定程度上可逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥。以上，僅為本發(fā)明的示意性描述，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知道，在不偏離本發(fā)明的工作原理的基礎(chǔ)上，可以對本發(fā)明作出多種改進(jìn)，這均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁12