本發(fā)明涉及化妝品領(lǐng)域，具體涉及一種含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品。
背景技術(shù)：
：肉蓯蓉載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有補(bǔ)腎陽、益精血、潤腸通便等功效?！吨袊幍洹肥蛰d的肉蓯蓉為列當(dāng)科植物肉蓯蓉和管花肉蓯蓉干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖。肉蓯蓉主要含有苯乙醇苷、環(huán)烯醚萜苷、木脂素及甾醇等化學(xué)成分，其中苯乙醇總苷是肉蓯蓉中的主要活性成分，具有壯陽、抗氧化、抗衰老、提高免疫力、增強(qiáng)記憶力等多種功能。蛤蟆油(RanaeOviductus)為蛙科動物中國林蛙(RanatemporariachensinensisDavid)雌蛙的輸卵管，經(jīng)采制干燥而得。蛤蟆油又稱為林蛙油、田雞油、哈什蟆油、哈蟆油、蛤螞油、雪蛤油或雪蛤膏。墨龍江、吉林、遼寧為主要產(chǎn)地，其中以吉林為主。蛤蟆油味甘、咸，性平，具有補(bǔ)腎益精、健脾益胃、滋陰補(bǔ)腎、潤肺生津等功效。蛤蟆油作為一種扶正固本藥，對體弱氣虛、精力耗損、記憶力不佳、神經(jīng)衰弱等療效較好，富有滋補(bǔ)“軟黃金”的美譽(yù)，清代曾被列為皇室供品，也是我國東北特產(chǎn)、聞名中外的名貴食療性中藥。1996年高燕玲報道了蛤蟆油具有明顯的抗疲勞作用；陳曉平也報道了蛤蟆油可調(diào)節(jié)人體內(nèi)分泌，具有抗疲勞作用；另據(jù)1997年劉玉蘭等報道，哈士蟆油可延長小鼠爬桿、滾棒及游泳時間，即對正常健康動物有一定的抗疲勞作用?，F(xiàn)有技術(shù)多將肉蓯蓉、蛤蟆油、以及其他活性成分組合，用于不同的醫(yī)藥用途。例如CN201110123123公開了一種用于治療腎炎的中藥，其中除含有肉蓯蓉、蛤蟆油之外，還有無名精、糞箕篤、紅芪、白花蛇草、肉桂、一枝黃花等幾十種中藥材，該中藥可以快速、有效地治療各種急慢性腎炎。CN201210199964公開了一種補(bǔ)腎固元抗癌美顏的雪哈食品及其制備方法，采用雪哈配以靈芝、山藥、人參、鹿茸、熟地、枸杞、茱萸、蓯蓉、黑芝麻、香菇，營養(yǎng)更全面，更容易吸收，從而達(dá)到補(bǔ)腎固元抗癌美顏之功效。CN201510108792公開了一種具有消除運(yùn)動性肢體疲勞功效的中藥制劑，是由以下重量份的原料藥制成的：黃芪30～40份，肉蓯蓉30～40份，枸杞20～30份，益母草20～30份，懷牛膝20～30份，杜仲10～20份，山藥10～20份，麥冬10～20份，徐長卿5～15份，蛤蟆油5～15份，甘草20～30份；具有抗疲勞的作用，可消除/緩解運(yùn)動員的肢體疲勞，增強(qiáng)運(yùn)動員的體能，使運(yùn)動后的機(jī)體快速恢復(fù)體能，并能增加運(yùn)動員心臟儲備能力，適合運(yùn)動員飲用。王高學(xué)(西北農(nóng)林科技大學(xué))發(fā)表的碩士論文及在《中成藥》上發(fā)表的文章指出，蛤蟆油具有成分單一、功效不全等不足之處，遂以蛤蟆油為主要原料，按中醫(yī)理論輔以其他多味中藥，進(jìn)行抗疲勞作用的篩選；雖然研究過程中考察了蛤蟆油單獨(dú)配伍肉蓯蓉的效果，但得到的效果欠佳，最終優(yōu)選的蛤蟆油抗疲勞復(fù)方的配方為：蛤蟆油500mg，紅景天220mg，肉蓯蓉100mg，絞股 藍(lán)80mg，人參200mg。在其他現(xiàn)有技術(shù)中，CN99113085公開了一種滋補(bǔ)保健顆粒沖劑，其是以蛤蟆油、肉蓯蓉為原料，經(jīng)粉碎成粉再制成顆粒狀沖劑，并且提出二者相配伍，其作用可以互補(bǔ)，增強(qiáng)其滋補(bǔ)保健作用。皮膚的胞外基質(zhì)(ECM)在衰老過程中特別重要。ECM不僅提供了皮膚細(xì)胞附著和皮膚的正確定向需要的三維支架，而且ECM還作為對皮膚細(xì)胞的信號的傳遞管道發(fā)揮作用，所述信號刺激皮膚細(xì)胞實(shí)施關(guān)鍵功能，例如組織修復(fù)。當(dāng)通過環(huán)境暴露或正常衰老過程而破壞ECM時，皮膚就發(fā)展了不想要的衰老外觀，例如皺紋。用于降低皮膚內(nèi)已存在的纖維狀蛋白質(zhì)的破壞，刺激產(chǎn)生更多的這類蛋白質(zhì)是化妝品領(lǐng)域的期望。例如，人白細(xì)胞彈性蛋白酶是由活化的白細(xì)胞釋放的絲氨酸蛋白酶，能夠在暴露于UV光或其它刺激性刺激物下的皮膚中，引起多種ECM蛋白質(zhì)組分的廣泛破壞。因此，具有對該蛋白酶的抑制作用，從而保護(hù)ECM免受破壞的化妝品是有利的。CN201510650282公開了將肉蓯蓉，特別是肉蓯蓉的提取物和/或肉蓯蓉的生物酵素用于化妝品組合物來改善皮膚條件和/或提供抗衰老效果?，F(xiàn)有技術(shù)還未有將肉蓯蓉與蛤蟆油配伍作為皮膚護(hù)理活性物在化妝品中使用的報道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：研究發(fā)現(xiàn)，將肉蓯蓉與蛤蟆油配伍作為皮膚護(hù)理活性物在化妝品中使用時，能協(xié)同發(fā)揮抗衰老、抗氧化的作用，通過抑制彈性蛋白酶和/或刺激膠原產(chǎn)生而顯著改善皮膚狀況，具有卓越的抗衰老效果。本發(fā)明提供一種含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品，其以肉蓯蓉與蛤蟆油作為皮膚護(hù)理活性物。進(jìn)一步地，本發(fā)明利用現(xiàn)代工藝，將肉蓯蓉提取物或發(fā)酵物進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取，能夠獲得高含量的有效成分。進(jìn)一步地，所述肉蓯蓉經(jīng)提取或發(fā)酵后，進(jìn)行超臨界二氧化碳萃取，獲得的肉蓯蓉萃取物與蛤蟆油混合，制備得到含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品。進(jìn)一步地，所述含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品中含肉蓯蓉或其萃取物1-98重量份，蛤蟆油2-99重量份。進(jìn)一步地，所述含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品中活性成分應(yīng)該是安全的和有效量的，而優(yōu)選的肉蓯蓉或其萃取物的含量是在1-98％之間，進(jìn)一步優(yōu)選5-85％，更進(jìn)一步優(yōu)選15-55％；或是1-98中任意整數(shù)的百分?jǐn)?shù)。優(yōu)選的蛤蟆油的含量是在2-99％之間，進(jìn)一步優(yōu)選5-85％，更進(jìn)一步優(yōu)選15-55％；或是2-99中任意整數(shù)的百分?jǐn)?shù)。進(jìn)一步地，所述含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品選自乳膏、霜劑、凝膠、洗劑、噴霧制劑、乳液、混懸液或液體制劑等形式。進(jìn)一步地，所述含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品中還含有魚肝油、維生素E和/或其它任意輔料。進(jìn)一步地，所述輔料選自可以是任意一種或多種化妝品領(lǐng)域使用的添加劑。CTFA化妝品成分手冊(CTFACosmeticIngredientHandbook)描述了大量本領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)使用的非限制性化妝品成分，它們適合在本發(fā)明的化妝品組合物中使用。這類成分類型的實(shí)例包括：研磨劑、乳化劑、吸收劑、膠凝劑、防泡劑、緩沖劑、著色劑、成膜材料、pH調(diào)節(jié)劑、濕潤劑、增稠劑和色素。還認(rèn)識到，基于意在通過組合物產(chǎn)生的想要的整體效果，本發(fā)明的化妝品組合物還可以使用其他的化妝品活性成分，例如：抗-痤瘡活性物(例如：水楊酸或過氧化苯甲酰)，抗皺活性物(例如：類視黃醇或β-羥酸)，抗氧化劑(例如：抗壞血酸及其衍生物，或茶葉提取物)，螯合劑(例如：糠偶酰二肟)，抗炎劑(例如：皮質(zhì)類固醇)，減肥劑(例如：咖啡因)，皮膚增光劑(例如：桑椹提取物或曲酸)，或防曬劑(例如：名為PARSOL的可商購產(chǎn)品)。進(jìn)一步地，所述含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員以常規(guī)方法處理，并適合化妝品用途。特別地，組合物優(yōu)選適合用于有皺紋的、有線紋的、粗糙的、干燥的、易起屑的、衰老的和/或UV-損傷的皮膚，從而改善皮膚的外觀和觸感，以及用于健康的皮膚，從而預(yù)防或延緩皮膚的退化。一般通過本領(lǐng)域已知的制備化妝品組合物的常規(guī)方法來制備本發(fā)明的含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品。此類方法一般涉及在一個或多個步驟中混合成分，成為相對均一的狀態(tài)，其中有或沒有加熱、冷卻、使用真空等。所述含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝品可以是任何常規(guī)的形態(tài)，例如乳膏、霜劑、凝膠、洗劑、噴霧制劑、乳液、混懸液或液體制劑。進(jìn)一步地，所述肉蓯蓉是指新鮮的肉蓯蓉、干燥的肉蓯蓉或經(jīng)過各種炮制方法炮制的肉蓯蓉飲片，所述肉蓯蓉選自肉蓯蓉、管花肉蓯蓉、鹽生肉蓯蓉、沙蓯蓉和/或草蓯蓉。其中新鮮的肉蓯蓉在凈選后切成適宜大小的片狀、條狀或粒狀用于提取或發(fā)酵處理，或打磨成漿液用于提取或發(fā)酵處理。對于干燥肉蓯蓉或肉蓯蓉飲片可經(jīng)浸泡后制備成適宜大小的片狀、條狀或粒狀用于提取或發(fā)酵處理，或打磨成漿液用于提取或發(fā)酵處理，或不經(jīng)浸泡直接磨成粉末進(jìn)行提取或發(fā)酵處理。進(jìn)一步地，所述提取是采用乙醇進(jìn)行回流提取或超聲加熱提取。進(jìn)一步地，所述乙醇溶液濃度為20-70％。進(jìn)一步地，所述乙醇溶液與所述肉蓯蓉的重量比為6-12∶1；優(yōu)選8-10∶1。進(jìn)一步地，所述提取包括以下步驟：肉蓯蓉粉碎后過篩或打磨成漿液，使用乙醇溶液回流提取1-4h，過濾，濾渣再用乙醇溶液回流提取1-3次，合并提取液，離心后將上清液減壓濃縮、烘干，即得肉蓯蓉提取物。進(jìn)一步地，所述發(fā)酵是液體發(fā)酵方法或固體發(fā)酵。所述發(fā)酵菌種包括但不限于酵母菌、乳酸菌、嗜酸乳桿菌、保加利亞乳桿菌、植物乳桿菌、枯草芽孢桿菌、雙岐桿菌、米曲霉、蜜環(huán)菌、蟲草菌、靈芝菌、朱紅菌等一種或多種能夠用于食物或藥物發(fā)酵的菌種。作為優(yōu)選，所述菌種的添加量為發(fā)酵基質(zhì)3-12％ (w/w)，或5-10％(w/w)、或8％(w/w)。作為優(yōu)選，所述發(fā)酵中肉蓯蓉原料的加入量為培養(yǎng)基的0.5-5％(w/v)或0.5-5％(v/v)。進(jìn)一步地，所述發(fā)酵包括固體斜面培養(yǎng)、搖瓶培養(yǎng)和/或種子罐培養(yǎng)。所述發(fā)酵的培養(yǎng)基包括糖類、氮源和無機(jī)鹽。更進(jìn)一步地，所述糖類選自白糖、紅糖、蔗糖、葡萄糖、果糖、糖醇類、冰糖、蜂蜜中的一種或幾種。作為優(yōu)選，所述糖類的加入量為原料總重量的0-10％。所述氮源選自酵母粉、蛋白胨、黃豆粉、玉米漿、魚粉、蛹粉、麥麩中的一種或幾種。作為優(yōu)選，所述氮源的加入量為原料總重量的0-12％。所述無機(jī)鹽選自硫酸銨、氯化錳、硫酸鎂、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀中的一種或幾種。作為優(yōu)選，所述無機(jī)鹽的加入量為原料總重量的0-5％。進(jìn)一步地，所述固體斜面培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成包括葡萄糖2-4％、蛋白胨2-3％、豆粉1-4％、瓊脂3-8％、硫酸鎂0.05-0.08％、磷酸二氫鉀0.2-0.3％、氯化鈉0.1-0.3％。進(jìn)一步地，所述搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括葡萄糖2-4％，蛋白胨2-3％，豆粉1-4％，麩皮0.5-2％，硫酸鎂0.01-0.1％，磷酸二氫鉀0.1-0.4％、磷酸氫二鉀0.1-0.2％。作為優(yōu)選，所述搖瓶的轉(zhuǎn)速為200轉(zhuǎn)/min。進(jìn)一步地，所述種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基為牛肉膏1-2％、蛋白胨2-3％、玉米漿0.5-1％、磷酸二氫鉀0.03-0.05％、硫酸鋅0.02-0.07％、氯化鎂0.04-0.08％，其余為水。進(jìn)一步地，所述發(fā)酵溫度為20-37℃，所述發(fā)酵時間為7-40天。進(jìn)一步地，所述超臨界二氧化碳萃取的壓力是20-40MPa。更進(jìn)一步地，所述壓力為20-35MPa、或28-32MPa、或30MPa。進(jìn)一步地，所述超臨界二氧化碳萃取的溫度為15-50℃。更進(jìn)一步地，所述溫度為20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、或45℃；或是20℃-50℃中的其他任意整數(shù)溫度或非整數(shù)溫度。進(jìn)一步地，所述超臨界二氧化碳萃取的時間是0.5-5h。更進(jìn)一步地，所述時間是1.5h、或2.0h、或2.5h、或3.0h、或3.5h、或4.0h、或4.5h。進(jìn)一步地，所述超臨界二氧化碳萃取的二氧化碳的流量為5-30L/h。更進(jìn)一步地，所述流量為10L/h、或15L/h、或20L/h、或25L/h。進(jìn)一步地，所述超臨界二氧化碳萃取的夾帶劑為乙醇。技術(shù)術(shù)語的解釋除非另外指出，本文中使用的所有百分比和比例都是占總組合物的重量。除非另外指出，所有溫度都是攝氏度。本文中使用的術(shù)語“安全和有效量”是指足以誘導(dǎo)本文中描述的正向益處的化合物或組合物的量，但根據(jù)技術(shù)人員的判斷低至足以避免嚴(yán)重的副作用。本文中使用的，改善皮膚狀況包括消除、最小化和/或預(yù)防皮膚的瑕疵，所述瑕疵可以視覺上或通過觸覺檢測到，例如不整(irregularity)，包括但不限于皺紋、不均勻或粗糙、喪失皮膚彈性、松垂、膠原分解、喪失從變型的皮膚回復(fù)力(rccoil)，和暗黃。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：(1)本發(fā)明利用肉蓯蓉與蛤蟆油配伍協(xié)同作用，將其作為皮膚護(hù)理活性物在化妝品中使用時，發(fā)揮了更加顯著的抗衰老、抗氧化的作用，通過抑制彈性蛋白酶和/或刺激膠原產(chǎn)生而顯著改善皮膚狀況，具有卓越的抗衰老效果；(2)采用本發(fā)明的工藝，可以充分發(fā)掘和利用肉蓯蓉、蛤蟆油的功效，避免中藥材及其有效成分的浪費(fèi)。具體實(shí)施方式以下所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照下述實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)施例1肉蓯蓉提取物將新鮮的肉蓯蓉在凈選后打磨成漿液，添加10倍重量份的50％乙醇溶液，回流提取2h，過濾，濾渣再用60％乙醇溶液回流提取3次，合并提取液，離心后將上清液減壓濃縮、烘干，即得肉蓯蓉提取物。實(shí)施例2肉蓯蓉發(fā)酵物(1)取干燥的肉蓯蓉切成薄片、粉碎，低溫殺菌處理；(2)制備發(fā)酵基質(zhì)：在瓊脂固體培養(yǎng)基中，加入步驟(1)所得的肉蓯蓉原料，所述肉蓯蓉原料的加入量為培養(yǎng)基的1％(w/w)；(3)菌種植入并發(fā)酵：選擇枯草芽孢桿菌為發(fā)酵菌種，經(jīng)固體斜面培養(yǎng)、搖瓶培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)后，植入所述發(fā)酵基質(zhì)中進(jìn)行發(fā)酵；所述固體斜面培養(yǎng)的培養(yǎng)基組成包括葡萄糖2％、蛋白胨2％、豆粉2％、瓊脂5％、硫酸鎂0.06％、磷酸二氫鉀0.2％、氯化鈉0.1％；所述搖瓶培養(yǎng)的培養(yǎng)基包括葡萄糖2％，蛋白胨2％，豆粉2％，麩皮1％，硫酸鎂0.04％，磷酸二氫鉀0.3％、磷酸氫二鉀0.1％；所述種子罐培養(yǎng)的培養(yǎng)基為牛肉膏1％、蛋白胨2％、玉米漿1％、磷酸二氫鉀0.05％、硫酸鋅0.02％、氯化鎂0.08％，其余 為水。所述枯草芽孢桿菌的植入量為發(fā)酵基質(zhì)6％(w/w)。所述發(fā)酵是在通氣條件下于28℃發(fā)酵21天，所通氣體為無菌空氣，通氣量為5.0L/min。(4)抽取發(fā)酵后的液體，經(jīng)過濾后得到肉蓯蓉發(fā)酵物。實(shí)施例3肉蓯蓉超臨界二氧化碳萃取物取實(shí)施例1制備的肉蓯蓉提取物或?qū)嵤├?制備的肉蓯蓉發(fā)酵物，干燥后經(jīng)超臨界二氧化碳萃取，以乙醇為夾帶劑，萃取壓力是30MPa，萃取溫度為30℃，萃取時間是2h，二氧化碳的流量為15L/h，制得肉蓯蓉超臨界二氧化碳萃取物。實(shí)施例4含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝乳膏成分相含量(w/w％)實(shí)施例3肉蓯蓉萃取物A12.5蛤蟆油A8.5硬脂酸A20.0Myrj59A5Span60A5對羥基苯甲酸丙酯A0.5BHTA0.1二甲聚硅氧烷A0.5水B*適量EDTAB0.2對羥基苯甲酸甲酯B0.1*適量＝加至100％按照以下方式制備含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝乳膏：將所有A相成分混合加熱至65℃；在另一容器中將所有B相成分混合加熱到65℃；之后停止加熱，攪拌下緩慢混合A、B兩相；將所得混合物冷卻至室溫，然后包裝即得。實(shí)施例5含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝霜成分相含量(w/w％)實(shí)施例3肉蓯蓉萃取物A12.5蛤蟆油A22聚甘油-2二聚羥基硬脂酸酯B10聚甘油-3二異硬脂酸酯B15維生素EB1丙二醇C5甘油C20水C*適量EDTAC0.2對羥基苯甲酸甲酯C0.1*適量＝加至100％按照以下方式制備含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝霜：將所有B、C相分別加熱至70℃；先將A相抽入乳化鍋，再將B相慢慢抽入乳化鍋，均質(zhì)20分鐘，恒溫70℃攪拌30分鐘；將A相加入乳化鍋，攪拌均勻；將所得混合物冷卻至室溫，然后包裝即得。實(shí)施例6含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝凝膠成分相含量(w/w％)實(shí)施例3肉蓯蓉萃取物A10.5蛤蟆油B32EDTA二鈉A0.5丁二醇A3鯨蠟醇B5辛酸/癸酸甘油三酯B15香料B0.1丁化羥基甲苯B0.3水A*適量*適量＝加至100％按照以下方式制備含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝凝膠：將所有A、B相分別加熱至60℃；之后60℃恒溫攪拌下緩慢混合A、B兩相；繼續(xù)攪拌直至粘稠，將所得混合物冷卻至室溫，然后包裝即得。實(shí)施例7含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝乳液成分含量(w/w％)實(shí)施例3肉蓯蓉萃取物23蛤蟆油9.5魚肝油5EDTA二鈉0.5PEG40010丙二醇5礦物油3水*適量*適量＝加至100％采用本領(lǐng)域的常規(guī)方式制備含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝乳液。實(shí)施例8含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝混懸液成分含量(w/w％)肉蓯蓉8蛤蟆油5維生素E1PEG15005透明質(zhì)酸2Avicel9513水*適量*適量＝加至100％采用本領(lǐng)域的常規(guī)方式制備含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝混懸液。對比例1僅含有肉蓯蓉的化妝乳膏成分相含量(w/w％)實(shí)施例3肉蓯蓉萃取物A20硬脂酸A20.0Myrj59A5Span60A5對羥基苯甲酸丙酯A0.5BHTA0.1二甲聚硅氧烷A0.5水B*適量EDTAB0.2對羥基苯甲酸甲酯B0.1*適量＝加至100％制備方法同實(shí)施例4。對比例2僅含有肉蓯蓉的化妝混懸液成分含量(w/w％)肉蓯蓉15維生素E1PEG15005透明質(zhì)酸2Avicel9513水*適量*適量＝加至100％采用本領(lǐng)域的常規(guī)方式制備含有肉蓯蓉蛤蟆油的化妝混懸液。試驗例1抗氧化測試?yán)肁BTS總抗氧化能力測試(ABTSTotalAntioxidantCapacityTest)檢測實(shí)施例4、實(shí)施例8和對比例1-2，所述測試測量給定量的測試樣品清除過量的ABTS(2，2′-連氮二-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))自由基正離子的程度。在測試前，通過過濾(0.2μm孔徑)和/或離心從樣品中去除任何不溶性物質(zhì)。在完成測試后，進(jìn)行計算并以等價量的標(biāo)準(zhǔn)抗氧化劑Trolox(α-生育酚的水溶性類似物)來表示所述能力。該檢測是確定測試樣品的“總抗氧化能力”的標(biāo)準(zhǔn)方法。通過將等分的測試物按不同濃度與含有固定量的ABTS0+的反應(yīng)混合物混合，來實(shí)施檢測。在20分鐘反應(yīng)期的結(jié)束時，通過測量ABTS0+在734nm的吸光值，確定剩余的未清除的ABTS0+。在每個檢測中都包括了Trolox作為樣品，作為為了以“Trolox當(dāng)量”表示測試樣品的抗氧化能力的標(biāo)準(zhǔn)。特別地，每種未知樣品的抗氧化能力用與20μMTrolox等價的濃度(％v/v)表示。下表顯示了各樣品的Trolox等價。樣品等價濃度(％v/v)實(shí)施例41.04±0.05**實(shí)施例81.21±0.04**對比例11.98±0.07對比例22.15±0.10由上述結(jié)果可知，分別與對比例1-2相比，實(shí)施例4、8極顯著提高了抗氧化活性(**P＜0.01)。試驗例2：抗衰老測試彈性蛋白酶抑制和膠原產(chǎn)生的刺激。利用Whatman1微米濾紙過濾樣品，并利用0.8和0.2微米過濾進(jìn)一步澄清。測試中的陽性活性證實(shí)測試物的抗衰老活性，根據(jù)人白細(xì)胞彈性蛋白酶對顯色肽底物的切割速率而實(shí)施測試，以每個樣品的IC50值表示，其表示抑制人白細(xì)胞彈性蛋白酶達(dá)50％的測試樣品的濃度，較低的IC50值表示具有更高的彈性蛋白酶抑制作用。在多孔板中生長人真皮成纖維細(xì)胞，然后用不同的測試物干預(yù)刺激，在孵育3天后，通過ELISA測量分泌到生長培養(yǎng)基中的I型膠原的量，用相對于來自未刺激細(xì)胞的培養(yǎng)基中檢測的百分比來表示每種測試條件下存在的膠原的量。根據(jù)上述測試方法，濾出物的彈性蛋白酶抑制作用和膠原刺激作用如下兩表。樣品IC50值實(shí)施例41.1±0.1**實(shí)施例81.0±0.1**對比例13.1±0.4對比例22.8±0.6由上述結(jié)果可知，分別與對比例1-2相比，實(shí)施例4、8極顯著提高了抗衰老活性(**P＜0.01)，這體現(xiàn)在彈性蛋白酶的抑制活性和膠原刺激活性非常明顯變化。當(dāng)前第1頁1 2 3