本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及異喹啉類生物堿紫堇達(dá)明的醫(yī)藥用途，其可用于制備治療與成癮損傷相關(guān)的病癥的藥物，用于預(yù)防和治療人類新型毒品成癮及新型毒品引起的腦組織損傷，所述成癮損傷相關(guān)病癥包括濫用海洛因、鴉片、甲基苯丙胺(冰毒)、嗎啡、大麻、可卡因等毒品成癮以及尼古丁、酒精等物質(zhì)成癮相關(guān)疾病，尤其是興奮劑類新型毒品成癮及其引發(fā)的腦損傷。

背景技術(shù)：

日趨嚴(yán)重的毒品問題已成為全球性的災(zāi)難。直接危害人民的身心健康，并給經(jīng)濟(jì)發(fā)展和社會(huì)進(jìn)步帶來巨大的威脅。據(jù)聯(lián)合國的統(tǒng)計(jì)，全世界每年毒品交易額達(dá)5000億美元以上，毒品蔓延的范圍已擴(kuò)展到五大洲的200多個(gè)國家和地區(qū)，而且全世界吸食各種毒品的人數(shù)已高達(dá)2億多，其中17～35周歲的青壯年占78％，每年因吸毒而死亡的人數(shù)高達(dá)40余萬，一些非洲國家的新增艾滋病病毒感染者中，注射吸毒者占30％。

反復(fù)使用毒品使人形成癮癖，體內(nèi)發(fā)生適應(yīng)性改變，造成的強(qiáng)烈的身體依賴性。一旦停藥，出現(xiàn)焦慮不安、忽冷忽熱、起雞皮疙瘩、流淚、流涕、出汗、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉等戒斷反應(yīng)，吸毒者為避免這種痛苦而千方百計(jì)地維持吸毒狀態(tài)，并且因耐受而不斷加大劑量。毒品還具有精神依賴的特征，使成癮者難以抑制渴求用藥的欲望，不顧一切地尋覓和使用毒品。即使經(jīng)過脫毒治療，對毒品的心理依賴性也很難消除，導(dǎo)致復(fù)吸率居高不下，成為世界醫(yī)、藥學(xué)界尚待解決的課題.。

根據(jù)人大禁毒委員會(huì)《2015中國毒品形勢報(bào)告》公示，目前我國全國登記在冊的吸毒人員234.5萬名，毒品濫用呈現(xiàn)“一降一增“和“三個(gè)全覆蓋“的特點(diǎn)，濫用海洛因等阿片類毒品依賴人員比例有所下降，吸食合成毒品人員比例急劇上升，吸毒人群覆蓋各個(gè)年齡段、不同文化程度、各個(gè)社會(huì)職業(yè)群體。指出：在新發(fā)現(xiàn)的吸毒人員中，濫用阿片類毒品人員占17.4％，其中濫用海洛因人員占14.6％；濫用合成毒品人員占80.5％，其中濫用冰毒等苯丙胺類興奮劑人員占73.2％。

成癮物質(zhì)主要通過抑制多巴胺的代謝和攝取，促進(jìn)多巴胺合成，升高獎(jiǎng)賞相關(guān)腦區(qū)內(nèi)多巴胺水平，增強(qiáng)多巴胺系統(tǒng)的功能，產(chǎn)生獎(jiǎng)賞效應(yīng)和精神依賴。以甲基苯丙胺(MA，冰毒)和搖頭丸(MDMA)為代表的新型毒品在藥理作用上屬中樞興奮藥，，興奮中樞神經(jīng)，具有欣快、警覺及抑制食欲之作用，重復(fù)使用會(huì)成癮；中毒癥狀包括多話、頭痛、錯(cuò)亂、高燒、血壓上升、盜汗、瞳孔放大、食欲喪失。大劑量使用導(dǎo)致神經(jīng)中毒反應(yīng)、幻覺和精神分裂樣癥狀，引起精神錯(cuò)亂，思想障礙，類似妄想性精神分裂癥，多疑、幻聽、被害妄想等；長期濫用導(dǎo)致器官性腦癥候群。有高血壓及腦中風(fēng)之危險(xiǎn)。停用之戒斷癥狀包括精神呆滯、昏睡、易怒、憂慮，有自殺的傾向。

目前，國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的戒毒藥物美沙酮、丁丙諾啡是阿片受體激動(dòng)劑、，主要用于替代阿片類的藥理作用，控制對藥物的渴望并減少戒斷癥狀,但是這些藥物本身也具有依賴性，一旦停用，仍會(huì)出現(xiàn)戒斷癥狀。阿片受體拮抗劑納洛酮、納屈酮等可抑制吸毒產(chǎn)生的欣快感和身體依賴，但它自身的不良反應(yīng)與稽延性戒斷癥狀交織在一起，相互影響，制約了它的接受率和堅(jiān)持率。非阿片類藥物可樂定及洛非西丁能激動(dòng)腎上腺素能α₂受體和作用于咪唑啉受體，降低大腦去甲腎上腺素的活性，減輕包括流淚、流涕、出汗、腹瀉、寒戰(zhàn)、肌肉疼痛、胃痙攣等大部分阿片類戒斷癥狀。

目前，國內(nèi)外均沒有針對新型毒品的藥物，臨床僅采用苯二氮卓類鎮(zhèn)靜藥物和氯氮平、利培酮或喹硫平等抗精神病藥物對癥治療。

四氫原小檗堿同類化合物(tetrahychroprotoberberines,THPBs)是從中藥延胡索中分離出的異喹啉類生物堿。左旋四氫帕馬丁(l-tetrahydropalmatine，l-THP)，又稱羅通定，是中藥延胡索中的有效生物堿成分之一，主要有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、安定作用。l-THP是一種新型腦內(nèi)多巴胺受體阻滯劑，近年來研究顯示l-THP在治療成癮方面具有良好的前景。但是l-THP具有明顯的鎮(zhèn)靜作用，臨床應(yīng)用受到限制。因此我們合成系列四氫原小檗堿同類化合物，從中篩選出生物活性比l-THP更強(qiáng)而鎮(zhèn)靜作用更弱的先導(dǎo)化合物紫堇達(dá)明(l-corydalmine,l-CDL)，發(fā)現(xiàn)它在治療各類成癮性障礙，尤其用于治療人類新型毒品成癮及所導(dǎo)致的腦組織損傷方面的優(yōu)勢。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明人發(fā)現(xiàn)異喹啉化合物紫堇達(dá)明在治療成癮相關(guān)病癥的獨(dú)特作用，所述的異喹啉類化合物紫堇達(dá)明均包括其藥學(xué)上可接受的鹽。

本發(fā)明的一個(gè)方面涉及下式的異喹啉類化合物紫堇達(dá)明在制備用于治療成癮相關(guān)病癥的藥物中的用途：

紫堇達(dá)明(R,S)：R₁＝R₂＝OCH₃，R₃＝OCH₃，R₄＝OH。

所述異喹啉類化合物紫堇達(dá)明包括其手性拆分對映異構(gòu)體及其藥學(xué)上可接受的鹽。

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述成癮相關(guān)病癥為與成癮損傷相關(guān)的疾病、新型毒品成癮和新型毒品引起的腦組織損傷。

本發(fā)明的另一方面涉及一種用于治療成癮相關(guān)病癥的藥物組合物，所述的藥物組合物由異喹啉類先導(dǎo)化合物紫堇達(dá)明及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑制備而成。本發(fā)明的藥物組合物中還含有一種或多種用于治療同類疾病的其他活性成分。

本發(fā)明提供的藥物組合物可為臨床上可接受的任何劑型形式，包括口服及消化道外給藥形式的各種劑型。用于口服時(shí)，可以是片劑、膠囊、軟膠囊、液體膠囊、顆粒劑、滴丸劑、糖漿劑、干混懸劑、口服溶液、口服混懸液、口腔崩解片、口腔速溶膜、緩釋片、控釋片、緩釋膠囊、控釋膠囊、腸溶片、腸溶膠囊；用于消化道外給藥形式時(shí)，可以是水針劑、凍干粉針劑、無菌粉針劑、輸液、滴眼劑、滴鼻劑、噴鼻劑、肺吸入劑、經(jīng)皮貼劑、搽劑、軟膏劑、乳膏劑、栓劑、皮下植入劑、長效注射劑、微針制劑。本發(fā)明藥物組合物優(yōu)選片劑、緩釋片、緩釋膠囊、水針劑、皮下植入劑和長效注射劑。

所述藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑可選自適合于口服制劑的藥用賦形劑，包括填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、助溶劑、表面活性劑、吸附載體、空白丸芯載體、致孔劑、成膜劑。

所述藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑可選自適合于消化道外給藥形式制劑的藥用賦形劑，包括溶劑、抗氧劑、吸附劑、助溶劑、pH調(diào)節(jié)劑、滲透壓調(diào)節(jié)劑、吸收促進(jìn)劑、生物可降解基質(zhì)、立體保護(hù)劑

在一個(gè)實(shí)施方式中，所述成癮相關(guān)病癥為與成癮損傷相關(guān)的疾病、新型毒品成癮和新型毒品引起的腦組織損傷。

附圖簡要說明

圖1 l-CDL對MA誘導(dǎo)小鼠高活動(dòng)性的影響(n＝48)

小鼠單次ipMA2mg·kg^-1后，其活動(dòng)性明顯增高。在ipMA前igl-CD組小鼠的自主活動(dòng)計(jì)數(shù)呈劑量依賴性降低，l-CDL2.5、5、10mg·kg^-1/可以顯著性地降低MA對小鼠自主活動(dòng)的增強(qiáng)效應(yīng)(P<0.01)。

圖2 l-CDL對MA行為敏化的影響(n＝48)

2.5，5和10mg/kgl-CDL劑量依賴地抑制MA誘發(fā)的行為敏化的獲得。

圖3 l-CDL抑制甲基苯丙胺自身給藥(n＝24)

l-CDL2.5，5、10mg·kg^-1劑量依賴地抑制甲基苯丙胺自身給藥行為。

圖4A、4B l-CDL抑制尼古丁自身給藥

l-CDL(3mg·kg^-1)單次給藥能夠抑制大鼠的尼古丁自身給藥(P<0.01)。圖

圖5 l-CDL抑制可卡因自身給藥(n＝24)

l-CDL(10、30、60mg·kg^-1能夠減少大鼠的自身給藥，**p<0.01。

圖6 l-CDL對嗎啡自身給藥的影響(n＝24)

l-CDL(10、30、60mg·kg^-1)能夠減少嗎啡成癮大鼠的自身給藥，**p<0.01。

圖7 l-CDL抑制甲基苯丙胺引起的腦小膠質(zhì)細(xì)胞損傷

甲基苯丙胺與LPS激活小膠質(zhì)細(xì)胞，促進(jìn)一氧化氮(NO)釋放，l-CDL可抑制甲基苯丙胺引起的NO釋放，以LPS作為小膠質(zhì)細(xì)胞活化的陽性對照。抑制小膠質(zhì)細(xì)胞激活。且作用效果優(yōu)于羅通定(l-THP)**p<0.01,***p<0.001vs對照組；^#p<0.05,^##p<0.01,^###p<0.001vs甲基苯丙胺給藥組。

發(fā)明詳述

現(xiàn)在將詳細(xì)地依據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案進(jìn)行說明。雖然本發(fā)明將結(jié)合所列舉的實(shí)施方案進(jìn)行描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，它們并不意圖將本發(fā)明限制于那些實(shí)施方案。相反，本發(fā)明意圖涵蓋可被包括在由權(quán)利要求所限定的本發(fā)明范圍之內(nèi)的所有替代、修改和等同。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到類似或等同于本文中描述的那些的許多方法和材料可用于本發(fā)明的實(shí)施中。本發(fā)明決不限于這里所描述的方法和材料。

術(shù)語“治療”是指治療性處理和預(yù)防性或防范性措施，其中其目的是預(yù)防或減緩(減輕)不期望的病理變化或紊亂。對于本發(fā)明的目的，有益或期望的臨床結(jié)果包括但不限于：癥狀的減輕、疾病程度的降低、疾病的穩(wěn)定(即不惡化)的狀態(tài)、疾病進(jìn)展的延緩或減慢、疾病狀態(tài)的改善或緩和以及緩解(無論是部分還是完全)，無論是可檢測的還是不可檢測的?！爸委煛边€可以指與未接受治療的情況下所預(yù)期的相比延長的存活。需要治療的那些對象包括已有所述病癥或紊亂的那些以及傾向于患上所述病癥或紊亂的那些，或要預(yù)防所述病癥或紊亂的那些。

術(shù)語“手性”是指具有與鏡像伴體不可重疊的特性的分子，而術(shù)語“對映體”是指作為互不重疊的鏡像的化合物的兩個(gè)立體異構(gòu)體。

本文所用的立體化學(xué)定義和慣例一般遵循S.P.Parker,Ed.,McRaw-Hiff Dictionary of Chemical Terms(1984),McGraw-Hill Book Company,New York；及Eliel,E.和Wilen,S.,"Stereochemistry of Organic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。本發(fā)明的化合物可含有手性中心，并且因此存在不同的立體異構(gòu)形式。意圖是，本發(fā)明化合物的所有立體異構(gòu)形式構(gòu)成本發(fā)明的部分。對于給定的化學(xué)結(jié)構(gòu)，這些立體異構(gòu)體除了它們是彼此的鏡像外是相同的。特定的立體異構(gòu)體還可被稱為對映異構(gòu)體，且此類異構(gòu)體的混合物通常稱為對映體混合物。對映異構(gòu)體的50:50混合物稱為外消旋混合物或外消旋體。

如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的有機(jī)或無機(jī)鹽。示例性的鹽包括但不限于：硫酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽、泛酸鹽、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、龍膽酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、糖酸鹽、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽，甲烷磺酸鹽(甲磺酸鹽)、乙烷磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、和雙羥萘酸鹽。藥學(xué)上可接受的鹽可涉及包含另一種分子，如乙酸根離子、琥珀酸根離子或其它抗衡離子?？购怆x子可以是穩(wěn)定母體化合物電荷的任何有機(jī)或無機(jī)部分。此外，藥學(xué)上可接受的鹽可在其結(jié)構(gòu)中具有多于一個(gè)帶電原子。其中多個(gè)帶電原子是藥學(xué)上可接受的鹽的部分的情況可具有多個(gè)抗衡離子。因此，藥學(xué)上可接受的鹽可具有一個(gè)或多個(gè)帶電原子和/或一個(gè)或多個(gè)抗衡離子。

如果本發(fā)明的化合物是堿，那么期望的藥學(xué)上可接受的鹽可以通過本領(lǐng)域可用的任何合適方法來制備，例如，用無機(jī)酸或有機(jī)酸處理游離堿，無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸，甲烷磺酸、磷酸等，有機(jī)酸如乙酸、三氟乙酸、馬來酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、乙醇酸、水楊酸、吡喃糖苷酸如葡糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羥酸如檸檬酸或酒石酸、氨基酸如天冬氨酸或谷氨酸、芳族酸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸如對甲苯磺酸或乙烷磺酸等。

如果本發(fā)明的化合物是酸，則期望的藥學(xué)上可接受的鹽可通過任何合適的方法制備，例如，用無機(jī)或有機(jī)堿處理游離酸，如胺、堿金屬氫氧化物或堿土金屬氫氧化物等。適合的鹽的示例包括但不限于：衍生自氨基酸如甘氨酸和精氨酸、氨、伯胺、仲胺、叔胺、環(huán)胺如哌啶、嗎啉和哌嗪的有機(jī)鹽，衍生自鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁和鋰的無機(jī)鹽。

短語“藥學(xué)上可接受的”表示該物質(zhì)或組合物必須與構(gòu)成制劑的其他成分和/或用其進(jìn)行處理的哺乳動(dòng)物化學(xué)和/或毒理學(xué)上相容。

用于制備治療與成癮損傷相關(guān)的病癥的藥物，用于預(yù)防和治療所述成癮損傷相關(guān)病癥尤其是新型毒品成癮及其引發(fā)的腦損傷。

“成癮損傷相關(guān)的病癥”主要是指但不限于，由于濫用海洛因、嗎啡、甲基苯丙胺(冰毒)、可卡因、大麻等毒品成癮以及尼古丁、酒精等成癮性物質(zhì)導(dǎo)致的軀體和心理依賴癥狀群。

“新型毒品成癮”主要是指但不局限于苯丙胺類興奮性毒品成癮，新型毒品引起的腦組織損傷主要是指甲基苯丙胺引起的腦白質(zhì)病變和神經(jīng)元損傷。

實(shí)施例

紫堇達(dá)明(l-CDL)最初是從中藥延胡索中分離出的異喹啉類生物堿^[1-2]。通過對l-THP的代謝研究發(fā)現(xiàn)，人血漿中含量最高的產(chǎn)物是10-去甲基的硫酸結(jié)合物，即紫堇達(dá)明的硫酸結(jié)合物，濃度與羅通定相當(dāng)或更高。其它產(chǎn)物是3-去甲基硫酸結(jié)合物。人尿中，含量最高的產(chǎn)物也是10-去甲基的硫酸結(jié)合物，其次是3-去甲基硫酸結(jié)合物。說明羅通定在體內(nèi)主要通過代謝成紫堇達(dá)明起作用。我們打通并優(yōu)化了化學(xué)合成路線，臨床前研究證實(shí)l-CDL具有多巴胺受體D₁、D₂、D₃拮抗作用和5羥色胺受體(5-HT_1A)激動(dòng)作用。

材料和方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，體重20-26g，SD大鼠，體重250-300g，由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供。Long Evans大鼠，雄性，(體重規(guī)格)

l-CDL，自行合成，純度98％，溶于蒸餾水中，配制成所需濃度的溶液。

甲基苯丙胺(MA)，由北京大學(xué)中國藥物依賴性研究所提供,溶于生理氯化鈉溶液(NS)，給藥體積10ml/kg。

小動(dòng)物自主活動(dòng)檢測儀(JZZ98-CM),中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院制造。

大鼠自身給藥裝置(Med Associates公司，Saint Albans,VT,USA)：包括電腦主機(jī)、刺激器、大鼠操作箱、輸液管(外包保護(hù)管)、恒速輸液泵。(型號)

實(shí)施例

1、l-CDL對甲基苯丙胺(MA)誘導(dǎo)小鼠高活動(dòng)性的影響

行為敏化是動(dòng)物成癮的主要行為特征之一，作為評價(jià)藥物精神依賴潛力的模型，目前已得到廣泛的應(yīng)用。反復(fù)間斷給予成癮性藥物后，能增加實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的自主活動(dòng)，這種隨著反復(fù)給藥而出現(xiàn)的行為反應(yīng)增強(qiáng)稱為行為敏化。行為敏化與藥物成癮有著重要的關(guān)系，目前已證明成癮藥物誘導(dǎo)的行為敏化對覓藥行為和復(fù)吸行為的發(fā)生和維持有著重要的影響。

動(dòng)物：昆明種小鼠,由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供。雌雄各半,動(dòng)物隨機(jī)分組,每組10—14只,入組時(shí)體重(18—22)g,室溫(22士1)℃,光照時(shí)間8:00—20:00,飲水及進(jìn)食自由。

小鼠隨機(jī)分為5組，Veh，MA組和MA+l-CDL三個(gè)劑量組。Veh和MA組動(dòng)物分別給予Veh，l-CDL組給予不同劑量藥物25min后，Veh組小鼠腹腔注射(ip)NS，其余組動(dòng)物ipMA 2mg/kg。然后，放入檢測儀中，立即測定小鼠自主活動(dòng)，記錄1h的自主活動(dòng)數(shù)。

結(jié)果表明(參見圖1)，小鼠單次ipMA2mg·kg后，其活動(dòng)性明顯增高。在ipMA前igl-CDL組小鼠的自主活動(dòng)計(jì)數(shù)呈劑量依賴性降低，l-CDL2.5,5,10mg/kg可以顯著性地降低MA對小鼠自主活動(dòng)的增強(qiáng)效應(yīng)(P<0.01)。**P<0.01，與對照組比較；##p<0.01與MA組比較。

實(shí)施例2、l-CDL對小鼠甲基苯丙胺(MA)誘發(fā)行為敏化獲得的影響

昆明種小鼠，連續(xù)7d給予溶劑或l-CDL25min后腹腔注射MA。第12天，腹腔注射2mg/kg MA激發(fā)后測定各組動(dòng)物的活動(dòng)性。MA組動(dòng)物1h的活動(dòng)計(jì)數(shù)明顯高于溶劑組(P<0.01)，表明實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)慢性MA處理后，可建立對l-CDL的行為敏化。而l-CDL可抑制MA敏化的獲得，2.5，5和10mg/kg l-CDL劑量依賴地抑制MA誘發(fā)的行為敏化的獲得。結(jié)果見圖2

實(shí)施例3、l-CDL對甲基苯丙胺自身給藥的影響

自身給藥試驗(yàn)(self-administration SA)，是一種操作式行為實(shí)驗(yàn)，它是利用藥物強(qiáng)化效應(yīng)改變動(dòng)物接觸藥物前后的行為，模擬人類藥物成癮的用藥期、戒斷期和復(fù)吸的過程。是研究藥物成癮機(jī)理和評價(jià)藥物抗成癮效能的最直接方法。是目前成癮研究領(lǐng)域最為理想的動(dòng)物行為學(xué)模型。

材料與方法

Long Evans大鼠，雄性，體重250-300g。室溫(22士1)℃,光照時(shí)間8:00—20:00,飲水及進(jìn)食自由。

①靜脈插管：用戊巴比妥納40mg/kg麻醉，結(jié)扎遠(yuǎn)心端，在近心端處做V型切口，將硅膠管從切口處緩緩插入右側(cè)頸內(nèi)靜脈,右心房入口處見回血順利后，固定硅膠管，縫合切口。將硅膠管從頸部皮膚下穿過，從頭頂穿出，硅膠管的另一端與接頭相連固定于頭頂，蓋上保護(hù)帽，送回動(dòng)物房。

②自身給藥行為訓(xùn)練：大鼠自身給藥裝置(Med Associates公司，Saint Albans,VT,USA)：包括電腦主機(jī)、刺激器、大鼠操作箱、輸液管(外包保護(hù)管)、恒速輸液泵。大鼠恢復(fù)一周后放入自身給藥操作箱，接頭與輸液管(外包保護(hù)管)、恒速輸液泵相連接。操作箱前壁兩側(cè)裝有兩個(gè)壓桿可供動(dòng)物選擇。按下有效壓桿動(dòng)物可獲得可卡因注射。由計(jì)算機(jī)按設(shè)置的程序自動(dòng)控制進(jìn)行。每天訓(xùn)練3小時(shí)。用甲基苯丙胺訓(xùn)練動(dòng)物獲得自身給藥行為(0.05mg/kg/每次壓桿)固定比率FR1(壓桿一次獲得一次藥物注射)程序訓(xùn)練7天，壓桿同時(shí)燈光與聲音啟動(dòng)。為避免甲基苯丙胺過量，最大藥物輸入次數(shù)(infusion)設(shè)定為50次。在3小時(shí)內(nèi)藥物輸入40-50次，且在連續(xù)3天內(nèi)藥物輸入次數(shù)變異小于10％的動(dòng)物認(rèn)為合格。這時(shí)可以將合格的動(dòng)物隨機(jī)分組，大鼠腹腔給予溶劑對照或受試藥l-CDL 10,30,60mg/kg，30分鐘后放入操作箱測定3小時(shí)。測定完后送回動(dòng)物房。以后每天同樣進(jìn)行自身給藥測定，直到藥物代謝完畢及動(dòng)物自身給藥行為又恢復(fù)正常，動(dòng)物可以再次分組進(jìn)行下一次藥物測定。每只動(dòng)物給藥不超過3次。

結(jié)果表明l-CDL劑量依賴地抑制甲基苯丙胺自身給藥行為(參見圖3)。

實(shí)施例4、l-CDL對尼古丁自身給藥的影響

具體實(shí)驗(yàn)步驟同實(shí)施例3，每天訓(xùn)練3小時(shí)。用尼古丁訓(xùn)練動(dòng)物獲得自身給藥行為(20μg/kg/每次壓桿)固定比率FR1(壓桿一次獲得一次藥物注射)程序訓(xùn)練10天，在3小時(shí)內(nèi)輸入尼古丁40-50次，且在連續(xù)3天內(nèi)藥物輸入次數(shù)變異小于10％的動(dòng)物認(rèn)為合格。將合格動(dòng)物隨機(jī)分為幾組，腹腔注射給予l-CDL 3mg/kg，30分鐘后放入自身給藥操作箱，如圖4A和B所示，l-CDL(3mg·kg-1)能夠減少大鼠的尼古丁自身給藥。提示l-CDL具有抑制尼古丁成癮的效應(yīng)。

實(shí)施例5、l-CDL對可卡因自身給藥的影響

大鼠靜脈插管手術(shù)步驟同上。大鼠手術(shù)恢復(fù)一周后放入自身給藥操作箱，先用高劑量可卡因(1mg/kg/每次壓桿)固定比率FR1程序訓(xùn)練3天，5天后改為可卡因(0.5mg/kg/每次壓桿),利用FR2方法訓(xùn)練2周左右。在3小時(shí)內(nèi)可卡因輸入40-50次，且在連續(xù)3天內(nèi)藥物輸入次數(shù)變異小于10％的動(dòng)物認(rèn)為合格。將合格動(dòng)物隨機(jī)分為幾組，腹腔注射給予l-CDL 10，30，60mg/kg，30分鐘后放入自身給藥操作箱，測定3小時(shí)內(nèi)動(dòng)物自動(dòng)壓桿次數(shù)，代表可卡因的注射次數(shù)(Infusions)。如圖5所示，l-CDL(10,30,60mg·kg-1)能夠減少大鼠的自身給藥。提示l-CDL具有抑制可卡因成癮的效應(yīng)。

實(shí)施例6、l-CDL對嗎啡自身給藥的影響

大鼠靜脈插管手術(shù)步驟與訓(xùn)練同上。大鼠手術(shù)恢復(fù)一周后放入自身給藥操作箱，先用嗎啡利用FR2方法訓(xùn)練2周左右。在3小時(shí)內(nèi)輸入嗎啡40-50次，且在連續(xù)3天內(nèi)藥物輸入次數(shù)變異小于10％的動(dòng)物認(rèn)為合格。將合格動(dòng)物隨機(jī)分為幾組，腹腔注射給予l-CDL 10，30，60mg/kg，30分鐘后放入自身給藥操作箱，測定3小時(shí)內(nèi)動(dòng)物自動(dòng)壓桿次數(shù)，代表嗎啡的注射次數(shù)(Infusions)。如圖5所示，l-CDL(10、30、60mg·kg-1)能夠減少大鼠的自身給藥，提示l-CDL具有抑制嗎啡成癮的效應(yīng)。

實(shí)施例7、l-CDL對甲基苯丙胺引起的神經(jīng)細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用

多巴胺能神經(jīng)元毒性與膠質(zhì)細(xì)胞活化有關(guān)，小膠質(zhì)細(xì)胞激活后產(chǎn)生氧自由基、TNF-α和IL-β等產(chǎn)物損傷多巴胺能神經(jīng)元。氧化產(chǎn)物及IL-6，和TNF-α等細(xì)胞因子的生成是MA持續(xù)對多巴胺能神經(jīng)毒性的重要因素，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果異喹啉類化合物對甲基苯丙胺誘發(fā)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活產(chǎn)生的一氧化氮生成有抑制作用，且在相同劑量下作用紫堇達(dá)明效果優(yōu)于羅通定(l-THP)。提示異喹啉類化合物紫堇達(dá)明對甲基苯丙胺等毒品誘發(fā)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活有抑制作用，對興奮性毒品誘發(fā)的腦損傷具有保護(hù)作用。

如圖5所示l-CDL能夠顯著降低甲基苯丙胺引起的小膠質(zhì)細(xì)胞活化時(shí)釋放的一氧化氮，并且作用比羅通定l-THP更強(qiáng)。

實(shí)施例8、l-CDL在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)研究

建立l-CDL在SD大鼠血漿中的LC-MS/MS檢測方法，研究其在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征，并進(jìn)行生物利用度研究。

SD大鼠10只，隨機(jī)分成兩組，每組5只，一組尾靜脈注射給藥l-CDL 3mg·kg-1，于給藥前和給藥后2、5、15、30min和1、2、4、8、12、24h采血，血漿樣品處理后使用LC-MS/MS測其濃度；另一組經(jīng)口服灌胃給藥10mg·kg-1，于給藥前和給藥后5、15、30min和1、2、4、8、12、24h采血，血漿樣品處理后使用LC-MS/MS測其濃度。

l-CDL靜注后的消除半衰期為(4.14±1.66)h，AUC值為(1390.34±253.93)ng·mL-1·h?？诜湛?，消除緩慢，消除半衰期為(7.04±3.93)h，AUC為(2408.01±630.49)ng·mL-1·h，生物利用度達(dá)到了55.8％。

綜上所述，從上述實(shí)施例結(jié)果來看：

1、紫堇達(dá)明口服生物利用度高：已建立的l-CDL血漿LC-MS/MS方法簡單、快速、靈敏度高、精確度好、基質(zhì)干擾小，結(jié)果顯示l-CDL吸收快速，消除緩慢，口服生物利用度高于l-THP。

2、紫堇達(dá)明抗新型毒品成癮的效應(yīng)明確：l-CDL對急性給予甲基苯丙胺誘發(fā)的高活動(dòng)性有抑制作用，對慢性給予甲基苯丙胺誘發(fā)的小鼠行為敏化也有抑制作用

3、紫堇達(dá)明抑制大鼠甲基苯丙胺自身給藥，說明紫堇達(dá)明具有開發(fā)成為抗新型毒品成癮的潛能，而且對海洛因、嗎啡、尼古丁、大麻可卡因等精神活性物質(zhì)成癮也有戒毒治療作用

4、紫堇達(dá)明對甲基苯丙胺引起的腦損傷具有保護(hù)作用：l-CDL可抑制甲基苯丙胺等毒品誘發(fā)的小膠質(zhì)細(xì)胞激活和對腦神經(jīng)系統(tǒng)的損傷且作用優(yōu)于l-THP，證明l-CDL對甲基苯丙胺引起的腦損傷具有保護(hù)作用。

5、紫堇達(dá)明具有多靶點(diǎn)藥理機(jī)制：紫堇達(dá)明是異喹啉類生物堿的先導(dǎo)化合物，同時(shí)也是l-THP體內(nèi)代謝產(chǎn)物，具有多巴胺D₁、D₂、D₃受體拮抗作用和5-HT_1A激動(dòng)雙重作用，不僅對新型毒品成癮的戒斷癥狀有效，而且對甲基苯丙胺類精神依賴和腦損傷有治療作用。