本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及以錫葉藤(五椏果科錫葉藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland的根)為原料制備中藥制劑的方法，以及該中藥制劑的抑菌和消炎藥效學(xué)試驗結(jié)果。

背景技術(shù)：

細(xì)菌是在自然界分布最廣、個體數(shù)量最多的有機(jī)體，是大自然物質(zhì)循環(huán)的主要參與者，但是細(xì)菌大部分是有害的，所以它也是導(dǎo)致人類死亡的重要原因，細(xì)菌感染是危害人類健康的大敵。目前，治療細(xì)菌感染的藥物主要依賴于抗生素，然而，由于人類對抗菌藥物的濫用，使得許多細(xì)菌在抗菌藥物的強(qiáng)大壓力下逐漸進(jìn)化，產(chǎn)生對抗菌藥物極強(qiáng)的抗藥性，致使抗菌藥物對耐藥菌株的療效不斷減弱甚至無效，同時細(xì)菌的耐藥機(jī)制多種多樣，現(xiàn)在幾乎每種有效的抗生素都發(fā)現(xiàn)了其相應(yīng)的耐藥菌。這種情況下，在中藥領(lǐng)域中尋找新的抗菌藥物，已成為解決細(xì)菌耐藥性的一種重要途徑。

錫葉藤為五椏果科錫葉藤Tetracera asiatica(Lour.)Hoogland的根。其性涼，味苦，具有收斂止瀉，消腫止痛之功。常用于治療腹瀉、痢疾、脫肛等癥。其藥材中富含鞣質(zhì)、黃酮、萜類類物質(zhì)等多種生物活性成分，具有明顯的抑菌、抗炎、抗腫瘤等活性[國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會.中華本草[M].第3卷.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：510-511.]。錫葉藤藥材資源豐富，我國南部與西南各省均產(chǎn)，為民間常用的的中草藥之一。

利用錫葉藤的這些藥理作用，研究人員將錫葉藤作為藥品原料進(jìn)行了研究，但現(xiàn)有研究文獻(xiàn)報道的不多。主要有：治療子宮脫垂[秦芳，申請?zhí)?201510092468.2]、治療小兒腹瀉[萬家林，申請?zhí)朇N201410580600.X]和治療宮頸癌[李榮勤，CN201510495244.6]等。

至2016年9月8日，已公開的、與錫葉藤有關(guān)的專利文獻(xiàn)共計27條，其中發(fā)明專利27條，全部是復(fù)方中藥制劑。以錫葉藤為單方開發(fā)的中藥制劑，尚未見有專利文獻(xiàn)報道。

綜上所述，本發(fā)明具有充分的新穎性、創(chuàng)造性和實(shí)用性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明人從錫葉藤中制備一種具有抑菌作用的乙醇提取部位，并將這一有效部位制備成中藥制劑，這在國內(nèi)尚未見有文獻(xiàn)報道過。

本發(fā)明的技術(shù)方案述及了從錫葉藤中提取具有抑菌作用的有效部位的方法、將這一有效部位制備成中藥制劑的方法、以及對這一中藥制劑進(jìn)行抑菌試驗的方法和結(jié)果。

錫葉藤抑菌作用有效部位的提取方法，尚未見有文獻(xiàn)報道。發(fā)明人通過科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，錫葉藤抑菌作用的有效成分溶解于50％-70％的乙醇中，因此，發(fā)明中采用乙醇水溶液回流提取，乙酸乙酯萃取。為得到較為純凈的具有抑菌作用的黃酮類，本發(fā)明采用聚酰胺樹脂洗脫，提取得到的有效部位，可制備成供口服的中藥制劑，如片劑、口服液、顆粒劑等，其制法與文獻(xiàn)記載的相應(yīng)劑型的制法是通用的。有效部位與藥用輔料的重量比例范圍如下：制劑中含錫葉藤提取物0.5％～99.5％，余量為藥劑成型輔料。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步是：首次公開了從錫葉藤中提取抑菌作用有效部位的方法、將該有效部位制備成片劑、口服液、顆粒劑的方法、以及對該中藥制劑進(jìn)行保肝降酶動物試驗的方法和結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下列實(shí)施例子用于舉例說明本發(fā)明，并不是對本發(fā)明保護(hù)范圍的任何限制。

一、下面是提取抑菌有效部位的實(shí)施例子：

提取實(shí)施例一：錫葉藤根莖，曬干，打成最粗粉(過一號篩)，用8倍量50％乙醇水溶液回流提取3次，每次45min；合并醇提液，濃縮，乙酸乙酯萃??；濾液通過聚酰胺樹脂柱(樹脂用量為藥材重量的5倍)，收集流出液，減壓濃縮至稀膏。

提取實(shí)施例二：錫葉藤根莖，曬干，打成最粗粉(過一號篩)，用10倍量60％乙醇水溶液回流提取3次，每次45min；合并醇提液，濃縮，乙酸乙酯萃??；濾液通過聚酰胺樹脂柱(樹脂用量為藥材重量的5倍)，收集流出液，減壓濃縮至稠膏，稠膏烘干，打成細(xì)粉(過五號篩)。

提取實(shí)施例三：錫葉藤根莖，曬干，打成最粗粉(過一號篩)，用12倍量70％乙醇水溶液回流提取3次，每次45min；合并醇提液，濃縮，乙酸乙酯萃?。粸V液通過聚酰胺樹脂柱(樹脂用量為藥材重量的5倍)，收集流出液，減壓濃縮至稠膏，稠膏烘干，打成細(xì)粉(過五號篩)。

二、下面是將有效部位制備成藥物的實(shí)施例子：

藥物制劑實(shí)施例一：按有效部位的得率計算，取相當(dāng)于1000g錫葉藤生藥的有效部位干膏細(xì)粉，約重17g，加淀粉至總量100g，制粒，壓成片劑，素片重0.2g，每片含錫葉藤生藥2g。

藥物制劑實(shí)施例二：按有效部位的得率計算，取相當(dāng)于1000g錫葉藤生藥的有效部位稀膏，體積約500ml，加白砂糖1200g，加熱溶解，最后加水到2000ml，過濾，得口服液，分裝，每支10ml，每支含錫葉藤生藥5g。

藥物制劑實(shí)施例三：按有效部位的得率計算，取相當(dāng)于1000g錫葉藤生藥的有效部位干膏細(xì)粉，約重23g，加糖粉至總量500g，制粒，得顆粒劑，分裝， 每小包5g，每小包含錫葉藤生藥10g。

三、下面是藥理作用試驗方法及結(jié)果：

供試菌株的制備：將相應(yīng)供試菌種移接到相對應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上，每種菌種接多支重復(fù)，置于37℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，每種菌種取3支供試驗用，其余冷藏備用。

菌懸液的制備：挑取各種細(xì)菌菌落接種于平面培養(yǎng)基上，于37℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，用無菌生理鹽水洗脫，振蕩15s后用血細(xì)胞計數(shù)板調(diào)整其濃度，分別制成含菌約105cfu·mL^-1的菌懸液。具體制備方法：分別挑取少量細(xì)菌至無菌生理鹽水中洗出-玻璃珠打散-制成菌懸液-調(diào)菌懸液濃度為105cfu·mL^-1，備用。

藥理實(shí)驗一

通過體外抑菌試驗比較錫葉藤冷浸、回流、超聲提取三種提取方法的抑菌活性：

取錫葉藤樣品粉末各3份，每份約2g，精密稱定，分別置于錐形瓶中，加入10倍量50％乙醇，分別進(jìn)行超聲提取45min、冷浸24h、水浴回流45min，提取3次，分別合并各次提取液，過濾，濃縮至每1ml提取液中含有1g錫葉藤。陰性對照就是空白對照，陽性對照為青霉素溶液。

試驗結(jié)果表明本發(fā)明回流提取可獲得更好的體外抑菌效果，見表1：

表1 錫葉藤提取方法抑菌效果

(++表示有抑菌較強(qiáng)，+表示有抑菌圈，-表示沒有抑菌圈)

藥理實(shí)驗二

通過體外抑菌試驗比較錫葉藤石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物的抑菌活性：

取粉碎后的錫葉藤根藥粉，加10倍量的50％乙醇溶劑，進(jìn)行減壓熱回流提取3次，每次45min，過濾后的提取液以3000r/min離心20min，濾液濃縮得錫葉藤乙醇提取物浸膏，取約乙醇浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，減壓濃縮后得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇三個部分浸膏，用無菌水溶解稀釋成含各提物1g·mL^-1的藥液。

試驗結(jié)果表明本發(fā)明乙酸乙酯萃取物可獲得更好的體外抑菌效果，見表2：

表2 錫葉藤萃取物抑菌效果

(++表示有抑菌較強(qiáng)，+表示有抑菌圈，-表示沒有抑菌圈)

錫葉藤乙酸乙酯萃取物對賀氏痢疾桿菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和傷寒桿菌具有抑菌活性作用。可作為天然抗菌劑用于食品、藥品等行業(yè)，代替有毒副作用的合成抗菌劑。