本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及通式(Ⅰ)所示的吡咯烷酮類化合物，及其在抑制TNKS靶標(biāo)過度表達(dá)的癌癥中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

Wnt信號通路屬于一條在進(jìn)化上十分保守的信號通路，在胚胎發(fā)育和中樞神經(jīng)系統(tǒng)形成過程中起關(guān)鍵作用，它調(diào)控著細(xì)胞的生長、遷移和分化。由于它在人類眾多腫瘤的發(fā)生發(fā)展中廣泛活化，與腫瘤的關(guān)系異常密切，因此Wnt信號通路與腫瘤關(guān)系成為近年腫瘤研究的熱點。Tankyrases(TNKS)是Wnt信號通道上關(guān)鍵的傳遞分子，它通過降低軸蛋白Axin的表達(dá)水平來使β-catenin增多，從而使Wnt信號上調(diào)，其在多數(shù)腫瘤中過表達(dá)。同時，TNKS也屬于二磷酸腺苷核糖多聚合酶(PARP)家族中的一員，對端粒長度有重要的影響。端粒酶和其他6種端粒蛋白組成的端粒蛋白復(fù)合物(shelterin)影響端粒的長度，當(dāng)TNKS過度表達(dá)時，它通過核糖基化端粒蛋白TRF1而使端粒長度增加，從而使細(xì)胞過度分裂而癌變。因此抑制TNKS的表達(dá)對于控制腫瘤的發(fā)生具有重要意義。

盡管TNKS已經(jīng)被證實是多種腫瘤的重要把標(biāo)，但是到目前為止一些很有希望的TNK S小分子抑制劑還處于理論研究階段，并且都局限于體外活性測試，比如一些有代表性具有結(jié)構(gòu)多樣性的TNKS有抑制劑：Jo Waaler報道的JW551，Howard Bregman報道的49，還有IWR13，IWR2，XAV939，G007-LK4，JW74，WIKI45，Olaparib6，LDW6437以及黃酮類8抑制劑等。但是目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的TNKS抑制劑的生物活性、透過血腦屏障的能力、成藥性等方面的性質(zhì)都有待提高。

近年來國內(nèi)、外開展了拮抗端粒酶活性以抑制腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡的多項研究,發(fā)現(xiàn)僅僅阻滯其活性并不能達(dá)到抗腫瘤的理想效果。因此在成功治愈腫瘤的方法性研究中,定向于端粒長度的維持機(jī)制日益受到研究人員的重視。TNKS抑制劑通過穩(wěn)定軸蛋白(Axin)和促進(jìn)β連環(huán)蛋白(β-catenin)的降解來對抗Wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而抑制腫瘤的生長。因此，抑制TNKS的活性在腫瘤治療的方法學(xué)研究中較有前景。TNKS的發(fā)現(xiàn)初步闡明了其在惡性腫瘤細(xì)胞中的調(diào)節(jié)機(jī)制,為控制端粒酶作用于端粒提供了新機(jī)遇,已代替端粒酶成為癌癥治療靶標(biāo)研究的新熱點。端粒酶陽性的腫瘤細(xì)胞核內(nèi)TNKS過表達(dá)可拮抗端粒酶抑制劑MST-312誘導(dǎo)端?？s短，TNKS的這種作用可被幾種已知的PARP抑制劑逆轉(zhuǎn)，如3AB、PJ-34、ABT-888及XAV939等。由此可見，TNKS抑制劑的研究在腫瘤臨床治療中尤為重要。

現(xiàn)有技術(shù)中，未見丙酰胺類化合物及其活性的相關(guān)報道。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供式(Ⅰ)中丙酰胺類化合物，以其為活性成分的藥物組合物，它們在制備端粒聚合酶(Tankyrases)抑制劑中的應(yīng)用，以及它們在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。

為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：

藥物組合物，含有通式(Ⅰ)所示的丙酰胺類化合物或其藥用鹽，以及藥學(xué)上可以接受的載體，

式(Ⅰ)中，R1為：

R₂為：

R₃為甲基；

以及，所述的丙酰胺類化合物為如下結(jié)構(gòu)式所示的丙酰胺類化合物1-3，

如所述的藥物組合物中的丙酰胺類化合物或其藥用鹽，其中所述的藥用鹽是指與有機(jī)酸或無機(jī)酸形成的藥學(xué)上可接受的鹽，所述的有機(jī)酸為酒石酸、檸檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸、丙酸、丁酸、草酸、馬來酸、己二酸、藻酸、檸檬酸、天冬氨酸、苯磺酸、樟腦酸、樟腦磺酸、二葡糖酸、環(huán)戊烷丙酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、葡庚糖酸、甘油磷酸、半硫酸、庚酸、己酸、延胡索酸、2-羥基乙磺酸、乳酸、甲磺酸、煙酸、2-萘磺酸、撲酸，果膠酯酸、3-苯基丙酸、苦味酸、新戊酸、琥珀酸，所述的無機(jī)酸為鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸或磷酸。

TNKS抑制劑，由丙酰胺類化合物和藥用常規(guī)輔劑組成。

所述的丙酰胺類化合物在制備端粒聚合酶抑制劑中的應(yīng)用。

所述的丙酰胺類化合物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。

所述的藥物組合物在制備端粒聚合酶抑制劑中的應(yīng)用。

所述的藥物組合物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明丙酰胺類化合物經(jīng)熒光素酶報告基因測定的wnt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制活性篩選，并測得相應(yīng)半數(shù)有效抑制濃度(IC₅₀)。丙酰胺類化合物用作為端粒聚合酶(Tankyrases)抑制劑的新用途。

本發(fā)明丙酰胺類化合物可以以組合物的形式通過口服、鼻吸入、直腸或腸胃外給藥的方式施用于需要這種治療的患者。用于口服時，可將其制成常規(guī)的固體制劑如片劑、粉劑、粒劑、膠囊等，制成液體制劑如水或油懸浮劑或其他液體制劑如糖漿、酏劑等；用于腸胃外給藥時，可將其制成注射用的溶液、水或油性懸浮劑等。本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備。例如使活性成分與一種或多種載體混合，然后將其制成所需的劑型。

本發(fā)明的藥物組合物優(yōu)選含有重量比為0.1％～99.5％的活性成分，最優(yōu)選含有重量比為0.5％～95％的活性成分。

本發(fā)明化合物的施用量可根據(jù)用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類型和嚴(yán)重程度等變化，其日劑量可以是0.01～10mg/kg體重，優(yōu)選0.1～5mg/kg體重?？梢砸淮位蚨啻问┯谩?/p>

附圖說明

圖1為本發(fā)明丙酰胺類化合物1-3對端粒聚合酶(Tankyrases)的抑制圖。

具體實施方式：

下面結(jié)合附圖，用本發(fā)明的實施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此來限定本發(fā)明。

實施例1：

本發(fā)明丙酰胺類化合物對端粒聚合酶(Tankyrases)的抑制作用：

1、實驗原理及步驟

HEK293T細(xì)胞接種于96孔板中，培養(yǎng)過夜，共轉(zhuǎn)染80ng SuperTopflash，8ng Renilla和64ng Wnt1質(zhì)粒，3小時后，加藥處理。藥物處理24小時，裂解細(xì)胞，參照Dual-Luciferase Reporter Assay試劑盒操作說明檢測熒光素酶活性，結(jié)果用Topflash與Renilla的比值(RLA,相對熒光素酶活性)表示。

2、試劑儀器

試劑：DMEM(HyClone),胎牛血清(HyClone),DualReporter Assay System(Promega)。

儀器：CO₂培養(yǎng)箱(Thermo),超凈工作臺(Thermo),化學(xué)發(fā)光酶標(biāo)儀(Thermo)。

3、實驗結(jié)果

1)抑制率：抑制率＝(NC-化合物吸光值平均值)/NC*100％

2)Tankyrases IC₅₀結(jié)果：

選自式(Ⅰ)的3個丙酰胺類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式及相應(yīng)活性如下所示，其中百分?jǐn)?shù)表示化合物反應(yīng)終濃度為50μM時對Tankyrase的抑制率。

實施例2：

本發(fā)明化合物對端粒聚合酶(Tankyrases)抑制活性IC₅₀的測定：

通過實施例1，篩選出對Tankyrases抑制活性大于或等于60％的化合物，進(jìn)一步測定其抑制活性IC₅₀值。

1、實驗原理(同實施例1)。

2、試劑儀器(同實施例1)。

3、實驗結(jié)果：

1)抑制率：抑制率＝(NC-化合物吸光值平均值)/NC*100％

2)Tankyrases IC₅₀結(jié)果見實施例1。

實施例3：

化合物1-3，加入4％的硫酸乙醇溶液，pH＝4，過濾，干燥，制成硫酸鹽化合物1-3。

實施例4：

化合物1-3，加入4％的鹽酸溶液，pH＝4，過濾，干燥，制成鹽酸鹽化合物1-4。

實施例5：

化合物1-3，加入4％的酒石酸溶液，pH＝4，過濾，干燥，制成酒石酸鹽化合物1-4。

實施例6：

化合物1-3，加入4％的檸檬酸溶液，pH＝4，過濾，干燥，制成檸檬酸鹽化合物1-4。

實施例7：

片劑：化合物1-3或?qū)嵤├?-6所得的鹽10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸鎂5mg。

制備方法：將化合物或其鹽、乳糖和淀粉混和，用水均勻濕潤、把濕潤后的混合物過篩并干燥，再過篩，加入硬脂酸鎂，然后將混合物壓片，每片重250mg，化合物含量為10mg。

實施例8：

安瓿劑：化合物1-3或?qū)嵤├?-6所得的鹽2mg，氯化鈉10mg。

制備方法：將化合物或其鹽和氯化鈉溶解于適量的注射用水中，過濾所得溶液，在無菌條件下裝入安瓿瓶中。

實施例9：

注射用凍干劑：化合物1-3或?qū)嵤├?-6所得的鹽10mg，碳酸氫鈉2mg，甘露醇252mg。

制備方法：將碳酸氫鈉、甘露醇，加注射用水溶解，加活性碳吸附30min除熱原，過濾除去活性碳，在濾液中加入化合物或其鹽，超聲處理使溶解，用1N鹽酸調(diào)節(jié)pH為5.0-7.0，微孔濾膜濾過，加注射用水，分裝，冷凍干燥，上塞，軋蓋，即得。

實施例10：

膠囊劑：化合物1-3或?qū)嵤├?-6所得的鹽10mg，乳糖187mg，硬脂酸鎂3mg。

制備方法：將化合物或其鹽與助溶劑混和，過篩，均勻混合，把得到的混合物裝入硬明膠膠囊，每個膠囊重200mg，活性成分含量為10mg。