本發(fā)明涉及化合物的新用途，具體地說(shuō)，涉及一組硫代苦參堿衍生物及其鹽類在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis,OP)是以骨量降低、骨組織顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，骨脆性增加、骨強(qiáng)度下降、易骨折為特征的一種骨病[Cosman,F.,et al.,Clinician's Guide to Prevention and Treatment of Osteoporosis,Osteoporos Int.2014,25(10),2359-81.]。骨質(zhì)疏松癥嚴(yán)重的會(huì)導(dǎo)致疼痛、骨折、殘疾，被稱為寂靜殺手。近年來(lái)研究表明，骨吸收與骨形成的失衡是骨質(zhì)疏松的病理生理學(xué)基礎(chǔ)，由促骨形成的成骨細(xì)胞和促骨吸收的破骨細(xì)胞調(diào)控[Del Puente,A.,et al.,Physiopathology of Osteoporosis:From Risk Factors Analysis to Treatment.J Biol Regul Homeost Agents,2015,29(3),527-31.]。

苦參堿類生物堿為中藥苦參的主要活性成分，是從豆科植物苦參、廣豆根等藥材根部提取得到的生物堿，主要包括苦參堿、槐果堿、氧化苦參堿、槐啶堿、槐胺堿等?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》有載，苦參味苦，性寒，歸心、肝經(jīng)。據(jù)記載，苦參作為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，已有一千多年歷史，主要用于清熱、祛濕、解毒、利尿以及鎮(zhèn)痛、抗炎等功效。

天然苦參堿的生物利用度差，限制了其應(yīng)用。申請(qǐng)人通過(guò)結(jié)構(gòu)修飾、活性測(cè)定構(gòu)效關(guān)系等手段進(jìn)一步優(yōu)化了其結(jié)構(gòu)，降低毒性、提高活性及生物利用度。申請(qǐng)人申請(qǐng)的中國(guó)專利CN201510206847.X，公開(kāi)日2015.07.29，公開(kāi)了一種苦參堿類化合物及其制備方法與應(yīng)用，所述的苦參堿類化合物結(jié)構(gòu)通式如圖2所示，其中R選自烷基取代基、烷氧基或吸電子基團(tuán)，還公開(kāi)了上述苦參堿類化合物的制備方法、藥學(xué)上可接受的鹽類及其用途，實(shí)驗(yàn)證實(shí)上述苦參堿類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽類對(duì)人肝癌細(xì)胞株Hun-7有顯著的抑制作用，在制備抗肝癌藥物方面具有重大潛力。然而，目前關(guān)于該苦參堿類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽類在抗骨質(zhì)疏松方面的作用未見(jiàn)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一組硫代苦參堿衍生物及其鹽類的新用途，技術(shù)方案如下：

一組硫代苦參堿衍生物及其鹽類在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用，所述的硫代苦參堿衍生物結(jié)構(gòu)通式如下所示：

其中X為硫原子；R基團(tuán)選自氫原子或i或ii或iii：

i.烷基，所述烷基選自甲基、乙基、正丙基和異丙基，取代位置為鄰位、對(duì)位或間位，取代基個(gè)數(shù)為單取代或多取代；

ii.鹵素，所述鹵素選自氟、氯、溴和碘，取代位置為鄰位、對(duì)位或間位，取代基個(gè)數(shù)為單取代或多取代；

iii.硝基或氰基。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的R基團(tuán)選自i或ii，取代位置為對(duì)位。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的R基團(tuán)選自i或ii，取代基個(gè)數(shù)為單取代。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的R基團(tuán)選自氫原子、氟原子或氰基。

作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選例，所述的鹽類優(yōu)選為藥學(xué)上可接受的鹽類，包括鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、氫溴酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、甲磺酸鹽等。

本發(fā)明還提供了所述硫代苦參堿衍生物及其鹽類在制備試劑中的應(yīng)用，所述的試劑用于：

a)研究骨質(zhì)疏松病理機(jī)制；或

b)評(píng)價(jià)骨質(zhì)疏松藥物療效。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了所述硫代苦參堿衍生物及其鹽類在制備試劑中的應(yīng)用，所述的試劑用于抑制RAW264.7細(xì)胞或小鼠原代單核細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：

本發(fā)明提供了一組硫代苦參堿衍生物及其鹽類的新用途，經(jīng)生物活性測(cè)試，該類化合物能顯著減少去卵巢后小鼠骨量的丟失，表現(xiàn)為骨小梁數(shù)目、骨表面積和組織體積之比、相對(duì)骨體積或骨體積分?jǐn)?shù)和骨小梁連接數(shù)的增加。能夠顯著抑制RAW264.7細(xì)胞和小鼠原代單核細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化。該類化合物同時(shí)具備穩(wěn)定性好，適于成藥，生物利用度高的優(yōu)點(diǎn)，因此該類化合物可開(kāi)發(fā)為抗骨質(zhì)疏松藥物，或用于制備研究骨質(zhì)疏松病理機(jī)制以及評(píng)價(jià)骨質(zhì)疏松藥物療效的試劑。

附圖說(shuō)明

圖1.苦參堿，槐果堿及氧化槐果堿的結(jié)構(gòu)。

圖2.CN201510206847.X公開(kāi)的苦參堿類化合物結(jié)構(gòu)通式。

圖3.RAW264.7細(xì)胞破骨誘導(dǎo)后TRAP染色。

圖4.小鼠原代骨髓單核細(xì)胞破骨誘導(dǎo)后TRAP染色。

圖5.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說(shuō)明，但本發(fā)明的具體實(shí)施方式不限于以下實(shí)施例。其中M19的制備方法可參考課題組前期研究基礎(chǔ)[吳秋業(yè)等，苦參堿類化合物及其制備方法與應(yīng)用，CN101704817A，具體為實(shí)施例1-2]。

表1部分優(yōu)選化合物的結(jié)構(gòu)、產(chǎn)率、質(zhì)譜和分子式

注：C，H，N三種元素分析的測(cè)定之與理論計(jì)算值相差0.3％。

實(shí)施例1：15-硫代槐果堿的制備

將槐果堿10.0g(0.04mol)和勞森試劑20.0g(0.05mol，購(gòu)自Alfa公司)置于500ml反應(yīng)瓶中，加入200ml甲苯，加熱回流反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，減壓濃縮除去溶劑，粗品過(guò)硅膠柱，洗脫劑為二氯甲烷:甲醇(25:1)，得產(chǎn)物9.6g，收率91.2％。

實(shí)施例2：13-(N-甲基)-氨基-15-硫代苦參堿(M19)的制備

將18-硫代槐果堿10g(4mol)置于500ml反應(yīng)瓶中，加入200ml甲胺醇溶液和10ml三乙胺，攪拌反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)完畢，減壓濃縮除去溶劑，粗品過(guò)硅膠柱，洗脫劑為二氯甲烷:甲醇(20:1)，得產(chǎn)物9.8g，收率83.5％。

實(shí)施例3：13-(N-甲基,N-二硫代甲酸對(duì)氟芐酯)-氨基-18-硫代苦參堿(表中ZSM-1)的制備

將18-硫代苦參堿(M19)240mg(0.8mmol)和二硫化碳160mg(2mmol)置于25ml反應(yīng)瓶中，加入5ml乙腈，攪拌下加入374mg(2mmol)對(duì)氟溴芐，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)完畢后減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑，粗品過(guò)硅膠柱，洗脫劑為二氯甲烷:丙酮(10:1)，得白色固體354mg，收率92.5％。

產(chǎn)物的核磁氫譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)為：

¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.41–7.29(m,2H),7.09–6.90(m,2H),6.10(s,1H),5.37(dd,J＝12.0,3.8Hz,1H),4.49(d,J＝14.5Hz,3H),3.64–2.95(m,6H),2.84(s,2H),2.37–1.13(m,19H).

¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ163.87,160.60,131.39,131.34,131.09,130.98,115.67,115.38,77.47,77.25,77.05,76.62,63.82,57.51,56.94,51.58,41.42,35.92,29.69,29.32,27.54,26.74,22.69,21.10,20.49.

實(shí)施例4：13-(N-甲基,N-二硫代甲酸對(duì)氯芐酯)-氨基-18-硫代苦參堿(表中ZSM-2)的制備

將18-硫代苦參堿(M19)240mg(0.8mmol)和二硫化碳160mg(2mmol)置于25ml反應(yīng)瓶中，加入5ml乙腈，攪拌下加入400mg(2mmol)對(duì)氯溴芐，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)完畢后減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑，粗品過(guò)硅膠柱，洗脫劑為二氯甲烷:丙酮(10:1)，得白色固體371mg，收率93.5％。

產(chǎn)物的核磁氫譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)為：

¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.35–7.21(m,4H),6.09(s,1H),5.37(dd,J＝12.1,3.9Hz,1H),4.48(d,J＝17.2Hz,3H),3.61–2.95(m,6H),2.83(s,2H),2.33–1.16(m,18H).

¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ134.33,133.44,130.73,128.76,77.50,77.28,77.07,76.65,63.79,57.50,56.94,51.90,51.57,41.38,41.33,35.92,29.69,29.31,29.20,27.54,26.73,21.10,20.49.

實(shí)施例5：13-(N-甲基,N-二硫代甲酸對(duì)溴芐酯)-氨基-18-硫代苦參堿(表中ZSM-3)的制備

將18-硫代苦參堿(M19)240mg(0.8mmol)和二硫化碳160mg(2mmol)置于25ml反應(yīng)瓶中，加入5ml乙腈，攪拌下加入500mg(2mmol)對(duì)溴溴芐，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)完畢后減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑，粗品過(guò)硅膠柱，洗脫劑為二氯甲烷:丙酮(10:1)，得白色固體403mg，收率93.5％。

產(chǎn)物的核磁氫譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)為：

¹H NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.46–7.38(m,2H),7.29–7.20(m,2H),6.08(s,1H),5.36(dd,J＝11.9,3.9Hz,1H),4.56–4.35(m,3H),3.61–2.93(m,6H),2.82(t,J＝10.1Hz,2H),2.34–1.13(m,18H).

¹³C NMR(75MHz,CDCl₃)δ134.89,131.71,131.07,121.55,63.78,57.51,56.95,51.59,35.93,29.69,29.32,27.55,26.74,21.12,20.51.

實(shí)施例6：13-(N-甲基,N-二硫代甲酸對(duì)硝基芐酯)-氨基-18-硫代苦參堿(表中ZSM-4)的制備

將18-硫代苦參堿(M19)240mg(0.8mmol)和二硫化碳160mg(2mmol)置于25ml反應(yīng)瓶中，加入5ml乙腈，攪拌下加入432mg(2mmol)對(duì)硝基溴芐，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)完畢后減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑，粗品過(guò)硅膠柱，洗脫劑為二氯甲烷:丙酮(10:1)，得白色固體382mg，收率94.5％。

產(chǎn)物的核磁氫譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)為：

¹H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.13(d,J＝8.7Hz,2H),7.53(d,J＝8.7Hz,2H),6.01(s,1H),5.33(dd,J＝12.0,4.0Hz,1H),4.64(s,2H),4.43(d,J＝10.1Hz,1H),3.41(ddd,J＝74.3,42.9,34.3Hz,6H),2.80(t,J＝9.8Hz,2H),2.34–1.11(m,19H).

¹³C NMR(75MHz,CDCl3)δ147.16,144.28,130.16,129.73,123.68,77.62,77.40,77.19,76.77,63.73,57.47,56.91,51.55,41.40,40.63,35.92,27.54,27.16,26.72,21.09,20.47.

實(shí)施例7：13-(N-甲基,N-二硫代甲酸對(duì)甲基芐酯)-氨基-18-硫代苦參堿(表中ZSM-7)的制備

將18-硫代苦參堿(M19)240mg(0.8mmol)和二硫化碳160mg(2mmol)置于25ml反應(yīng)瓶中，加入5ml乙腈，攪拌下加入370mg(1mmol)對(duì)甲基溴芐，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)完畢后減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑，粗品過(guò)硅膠柱，洗脫劑為二氯甲烷:丙酮(10:1)，得白色固體334mg，收率88.1％。

產(chǎn)物的核磁氫譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)為：

¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.26(d,J＝7.5Hz,2H),7.12(d,J＝7.9Hz,2H),6.12(s,1H),5.36(dd,J＝11.9,3.6Hz,1H),4.56–4.37(m,3H),3.61–3.31(m,3H),3.14(s,3H),2.83(t,J＝9.1Hz,2H),2.33(s,3H),2.28–1.36(m,17H).

¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ194.16,137.45,132.16,129.36,129.35,77.52,77.30,77.10,76.67,63.80,57.55,56.99,56.95,51.59,42.24,41.37,35.92,27.56,26.74,21.17,21.13,20.51.

實(shí)施例8：13-[N-甲基,N-二硫代甲酸(2,6-二氯)-芐酯]-氨基-18-硫代苦參堿(表中ZSM-8)的制備

將18-硫代苦參堿(M19)240mg(0.8mmol)和二硫化碳160mg(2mmol)置于25ml反應(yīng)瓶中，加入5ml乙腈，攪拌下加入480mg(2mmol)溴芐，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)完畢后減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑，粗品過(guò)硅膠柱，洗脫劑為二氯甲烷:丙酮(10:1)，得白色固體390mg，收率92.1％。

產(chǎn)物的核磁氫譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)為：

¹H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.29(t,J＝7.6Hz,2H),7.17(dd,J＝8.7,7.4Hz,1H),6.08(s,1H),5.42–5.29(m,1H),4.70(s,2H),4.42(dd,J＝9.9,4.0Hz,1H),3.60–2.95(m,6H),2.80(t,J＝10.2Hz,2H),2.29–1.12(m,16H).

¹³C NMR(75MHz,CDCl3)δ194.15,136.53,130.91,129.60,128.39,63.76,57.53,56.99,56.95,51.64,51.58,41.39,38.84,35.91,27.57,26.73,21.14,20.53.

實(shí)施例9：13-(N-甲基,N-二硫代甲酸苯甲酯)-氨基-18-硫代苦參堿(表中ZSM-10)的制備

將18-硫代苦參堿(M19)240mg(0.8mmol)和二硫化碳160mg(2mmol)置于25ml反應(yīng)瓶中，加入5ml乙腈，攪拌下加入342mg(2mmol)溴芐，室溫下反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)完畢后減壓蒸餾除去有機(jī)溶劑，粗品過(guò)硅膠柱，洗脫劑為二氯甲烷:丙酮(10:1)，得白色固體341mg，收率92.5％。

產(chǎn)物的核磁氫譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)為：

¹H-NMR(300MHz,CDCl₃)δ7.46–7.22(m,5H),6.13(s,1H),5.37(dd,J＝11.9,3.8Hz,1H),4.49(d,J＝22.2Hz,3H),3.63–2.95(m,6H),2.83(s,2H),2.30–1.15(m,17H).

¹³C-NMR(75MHz,CDCl₃)δ135.41,129.43,128.65,127.66,77.49,77.27,77.07,76.65,63.80,57.54,56.96,51.59,43.66,42.40,41.38,35.92,29.69,27.56,26.74,21.12,20.51.s.

實(shí)施例10：生物活性測(cè)試

一、實(shí)驗(yàn)材料

RAW264.7細(xì)胞和小鼠骨髓原代骨髓單核細(xì)胞購(gòu)自中科院細(xì)胞所，實(shí)驗(yàn)用6-8周雌性C57小鼠全部購(gòu)自第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)1

實(shí)驗(yàn)分為5組。第一組為RW264.7細(xì)胞對(duì)照組；第二組為RW264.7細(xì)胞且使用M-CSF和RANKL誘導(dǎo)組；第三組為1μM ZSM-10處理且使用M-CSF和RANKL誘導(dǎo)組；第四組為2μM ZSM-10處理且使用M-CSF和RANKL誘導(dǎo)組；第五組為4μM ZSM-10處理且使用M-CSF和RANKL誘導(dǎo)組。處理時(shí)間為細(xì)胞誘導(dǎo)后第三天，然后細(xì)胞再經(jīng)4天誘導(dǎo)。細(xì)胞完成總計(jì)7天的誘導(dǎo)后，進(jìn)行TRAP染色，觀察破骨細(xì)胞誘導(dǎo)的數(shù)量并計(jì)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。注：其余化合物測(cè)試方法同ZSM-10。

2、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)2

實(shí)驗(yàn)分為5組。第一組為小鼠骨髓原代骨髓單核細(xì)胞；第二組為誘導(dǎo)組；第三組為1μM ZSM-10處理且使用M-CSF和RANKL誘導(dǎo)組；第四組為2μM ZSM-10處理且使用M-CSF和RANKL誘導(dǎo)組；第五組為4μM ZSM-10處理且使用M-CSF和RANKL誘導(dǎo)組。處理時(shí)間為細(xì)胞誘導(dǎo)后第三天，細(xì)胞再經(jīng)4天誘導(dǎo)。細(xì)胞完成總計(jì)7天的誘導(dǎo)后，進(jìn)行TRAP染色，觀察破骨細(xì)胞誘導(dǎo)的數(shù)量并計(jì)數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。注：其余化合物測(cè)試方法同ZSM-10。

3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

3.1分組情況

將24只C57小鼠隨機(jī)分為3組，每組為8只，分別為假手術(shù)組、去卵巢組、ZSM-10干預(yù)組：

去卵巢組：采用外科手術(shù)摘除小鼠雙側(cè)卵巢；

假手術(shù)組：除不切除小鼠卵巢外其余操作與去卵巢組相同；

ZSM-10干預(yù)組：切除小鼠雙側(cè)卵巢后每日一次腹腔注射給予小鼠2mg/10g的ZSM-10。

3.2試驗(yàn)處理

飼養(yǎng)6周后處死小鼠，取小鼠的雙側(cè)股骨及血清。

(1)小鼠股骨使用多聚甲醛溶液進(jìn)行固定、EDTA脫鈣后，石蠟包埋切片(4mm)，進(jìn)行蘇木精-伊紅(HE staining)染色，顯微鏡下觀察小鼠股骨遠(yuǎn)端干骺端并拍照。

(2)將固定的小鼠股骨行Micro-CT檢查，采用SKYSCAN 1176微型CT機(jī)對(duì)小鼠股骨遠(yuǎn)端行Micro-CT掃描，構(gòu)建小鼠股骨遠(yuǎn)端干骺端二維及三維圖像，并使用CT機(jī)自帶軟件對(duì)股骨骨小梁數(shù)量，骨表面積和組織體積之比進(jìn)行分析，對(duì)相對(duì)骨體積，骨礦物質(zhì)密度，骨小梁連接數(shù)進(jìn)行分析，獲得定量結(jié)果。

(3)取得的血清在4度條件下冷藏1小時(shí)后2500rpm 10min進(jìn)行離心，取上清液。對(duì)血清中IL-6，TNF-α和TRAP-5b進(jìn)行檢測(cè)。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖3為RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)7天后進(jìn)行TRAP染色的結(jié)果，圖4為BMMCs細(xì)胞培養(yǎng)7天后進(jìn)行TRAP染色的結(jié)果。結(jié)果顯示，當(dāng)使用M-CSF和RANKL誘導(dǎo)后破骨細(xì)胞數(shù)量明顯增加，而當(dāng)使用ZSM-10進(jìn)行干預(yù)后破骨細(xì)胞數(shù)量明顯減少，并且有劑量依賴性，ZSM-10的濃度為4μM時(shí)破骨細(xì)胞數(shù)量最少。結(jié)果表明ZSM-10能抑制破骨細(xì)胞生成。其余優(yōu)選化合物也表現(xiàn)出對(duì)破骨細(xì)胞生成的抑制作用，各優(yōu)選化合物4μM測(cè)試組的破骨細(xì)胞數(shù)量統(tǒng)計(jì)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2各優(yōu)選化合物測(cè)試組(4μM)的破骨細(xì)胞數(shù)量

2、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖5A為6周后小鼠股骨遠(yuǎn)端干骺端切片HE染色。圖片顯示去卵巢組小鼠骨小梁數(shù)目較正常組明顯減少，骨小梁間距增大，表現(xiàn)為骨質(zhì)疏松；給予ZSM-10后小鼠股骨遠(yuǎn)端干骺端骨小梁數(shù)目明顯多于卵巢切除組。骨小梁面積統(tǒng)計(jì)結(jié)果也顯示去卵巢后骨質(zhì)流失，給予ZSM-10后骨質(zhì)流失緩解。圖5B為6周后小鼠股骨遠(yuǎn)端Micro-CT二維和三維結(jié)構(gòu)。圖片顯示去卵巢組小鼠骨小梁數(shù)目較正常組明顯減少，給予ZSM-10后小鼠股骨遠(yuǎn)端干骺端骨小梁數(shù)目明顯多于卵巢切除組。圖5C為對(duì)股骨遠(yuǎn)端使用計(jì)算機(jī)軟件分析，統(tǒng)計(jì)骨小梁數(shù)量(Tb.N)、骨表面積和組織體積之比(BS/TV)、相對(duì)骨體積或骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)、骨小梁連接數(shù)(Tb.Pf)和骨密度(BMD)后發(fā)現(xiàn)ZSM-10組小鼠顯著優(yōu)于去卵巢組小鼠，但不及假手術(shù)組，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。圖5D為血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果。圖片中顯示，IL-6，TNF-α和TRAP等破骨指標(biāo)在去卵巢組中明顯多于假手術(shù)組，給予ZSM-10干預(yù)后，其水平降低，說(shuō)明ZSM-10干預(yù)的小鼠體內(nèi)破骨活性低于去卵巢組，表示ZSM-10干預(yù)后其骨質(zhì)流失減少。

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥屬于原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥，與雌激素水平降低后破骨細(xì)胞分化增多、成骨減少有關(guān)。去卵巢組小鼠模型模擬人類絕經(jīng)，在去卵巢6周后表現(xiàn)出顯著的骨質(zhì)疏松表現(xiàn)，主要表現(xiàn)為骨小梁數(shù)量明顯減少、骨皮質(zhì)變薄等。ZSM-10顯著減少了去卵巢后小鼠骨量的丟失，表現(xiàn)為骨小梁數(shù)目、骨表面積和組織體積之比、相對(duì)骨體積或骨體積分?jǐn)?shù)和骨小梁連接數(shù)的增加。本發(fā)明的硫代苦參堿衍生物能夠顯著抑制RAW264.7細(xì)胞株和小鼠原代單核細(xì)胞向破骨細(xì)胞分化。且本發(fā)明的該組硫代苦參堿衍生物具備穩(wěn)定性好，適于成藥，生物利用度高的優(yōu)點(diǎn)，因此可用于制備抗骨質(zhì)疏松的藥物。

以上已對(duì)本發(fā)明創(chuàng)造的較佳實(shí)施例進(jìn)行了具體說(shuō)明，但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所述實(shí)施例，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不違背本發(fā)明創(chuàng)造精神的前提下還可做出種種的等同的變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請(qǐng)權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。