本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的說，本發(fā)明涉及一種治療非酒精性脂肪肝的藥物組合物。

背景技術(shù)：

隨著人們飲食結(jié)構(gòu)、生活方式的改變，以高熱量飲食為代表的食物在日常飲食中的比例明顯增加，非酒精性脂肪肝(nafld)呈高患病率、低齡化趨勢。在nafld發(fā)展進(jìn)程中，表現(xiàn)為腸道菌群紊亂、腸道通透性增加，促使細(xì)菌及其代謝產(chǎn)物從腸道內(nèi)位移進(jìn)入血液循環(huán)到達(dá)肝臟，活化肝臟kupffer細(xì)胞，釋放細(xì)胞因子，促進(jìn)nafld發(fā)生發(fā)展。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種治療非酒精性脂肪肝的藥物組合物。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供一種治療非酒精性脂肪肝的藥物組合物，所述藥物組合物含有具有下式結(jié)構(gòu)的有效藥物成分：

優(yōu)選地，r1、r2、r3、r4可以在取代或未取代的直鏈或支鏈(c1-c6)烷基、烷氧基、鹵素、氫等基團(tuán)中任意選擇。

更優(yōu)選地，r1表示f，r2表示cl，r3和r4都表示ch3。

更優(yōu)選地，該藥物組合物還可以包括其它藥學(xué)上可接受的添加成分如矯味劑、填充劑、助流劑等。

本發(fā)明還提供化合物在制備治療非酒精性脂肪肝的藥物中的用途，所述化合物具有下列結(jié)構(gòu)：

優(yōu)選地，r1、r2、r3、r4可以在取代或未取代的直鏈或支鏈(c1-c6)烷基、烷氧基、鹵素、氫等基團(tuán)中任意選擇。

更優(yōu)選地，r1表示f，r2表示cl，r3和r4都表示ch3。

本發(fā)明藥物能夠明顯抑制非酒精性脂肪肝患者腸道內(nèi)擬桿菌數(shù)量增加，同時促進(jìn)有益菌乳酸桿菌增加，改善非酒精性脂肪肝患者腸道菌群紊亂，有效降低腸道通透性，顯著降低肝細(xì)胞損傷，減少炎癥細(xì)胞浸潤，從而抑制非酒精性脂肪肝的發(fā)生發(fā)展。

附圖說明

圖1是正常組與模型組的大鼠腸道菌群變化比較。

a.5周；b.7周。

圖2是給藥4周后各組大鼠腸道菌群變化。

圖3是本發(fā)明藥物對大鼠結(jié)腸黏液層厚度的影響。

圖4是各組大鼠結(jié)腸occludin和zo-1mrna表達(dá)。

圖5是造模過程中各組大鼠肝損傷指標(biāo)變化趨勢。

圖6是各組大鼠血清肝生化指標(biāo)。

圖7是各組大鼠肝臟病理評分。

圖8是各組大鼠肝臟病理形態(tài)(he染色，×200)。

a.正常組；b.模型組；c.本發(fā)明藥物低劑量組；d.本發(fā)明藥物中劑量組；e.本發(fā)明藥物高劑量組；f.羅格列酮組。

具體實(shí)施方式

下面通過實(shí)施例來詳細(xì)說明本發(fā)明藥物的治療效果。

實(shí)驗(yàn)例1本發(fā)明藥物的表征

¹hnmr(500mhz,meod)δ7.60(dd,j＝6.6hz,1.9hz,1h),7.35-7.13(m,6h),5.13(s,2h),3.70(s,3h),3.17(dt,j＝13.7hz,6.9hz,1h),2.14(s,3h),1.36(d,j＝6.8hz,6h)；

m/z＝440.9(m+1)。

實(shí)驗(yàn)例2本發(fā)明藥物治療非酒精性脂肪肝的效果

nafld(非酒精性脂肪肝)大鼠模型建立

60只sd大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、羅格列酮組、本發(fā)明藥物低、中、高劑量組，每組10只。除正常組外，其余各組從第1周開始灌胃給予高脂乳劑造模，1次/d，第7周開始灌胃給予ccl4橄欖油溶液，3d/次，ccl4橄欖油溶液由橄欖油-ccl41:1調(diào)整為橄欖油-ccl419:1，灌胃體積為2ml/kg。造模過程中動態(tài)監(jiān)測肝損傷指標(biāo)以及血脂指標(biāo)的變化。模型組的大鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alt)，天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶(ast)，堿性磷酸酶(alp)，總膽固醇(tc)，低密度脂蛋白-膽固醇(ldl-c)指標(biāo)較正常組明顯升高，即為造模成功。造模成功后開始給藥，模型組和正常組給予0.5％羧甲基纖維素鈉水溶液，給藥體積為0.01ml/g；羅格列酮組灌胃給藥羅格列酮3mg/kg；本發(fā)明藥物低、中、高劑量組分別灌胃給藥實(shí)施例1藥物1.5、3、6mg/kg。給藥1次/d，連續(xù)4周。

腸道菌群組成檢測

糞便樣品的收集及提取糞便菌體分離，取2-3粒新鮮糞便置于離心管中，然后加入0.01mol/l磷酸鹽緩沖液(pbs)混勻，靜置后轉(zhuǎn)移上清。200×g低速離心10min，取上清。200×g離心5min，收集菌體，加入pbs1ml溶解，混勻后200g離心5min。上層菌體懸液12000r/min離心1min，收集菌體。

提取dna提取

用te緩沖液0.6ml及溶菌酶20μl溶解菌體，37℃孵育3h后加入10％sds70μl，蛋白酶k15μl于55℃過夜，加入等體積三氯甲烷-異戊醇(25:24:1)，12000r/min離心5min，收集上清。加入等體積三氯甲烷-異戊醇(24:1)，12000r/min離心5min，收集上清。加入醋酸鈉和異丙醇，4℃沉淀30min。12000r/min離心10min，沉淀用70％預(yù)冷乙醇洗滌，12000r/min離心1min，棄上清。待乙醇揮發(fā)完全后，用te200μl溶解dna分子，-80℃保存。

實(shí)時熒光定量pcr檢測大鼠腸道菌群變化

檢測腸道內(nèi)乳酸桿菌，擬桿菌1，梭桿菌，厚壁菌，擬桿菌2變化。pcr擴(kuò)增反應(yīng)條件:95℃30s，95℃5s，60℃20s，40個循環(huán)，72℃30s。以2^-δδct表示mrna相對表達(dá)量。

結(jié)腸黏液層厚度及結(jié)腸通透性檢測

第11周實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取結(jié)腸組織通過ab-pas染色，考察結(jié)腸黏液層厚度。液氮研磨結(jié)腸組織提取rna，反轉(zhuǎn)錄成cdna通過real-timepcr檢測結(jié)腸組織occludin及zo-1mrna的表達(dá)，pcr擴(kuò)增反應(yīng)條件及檢測上。

大鼠血清指標(biāo)檢測

血液生化分析儀檢測大鼠血清中alt、ast、alp、tc、ldl-c指標(biāo)變化。

肝臟病理學(xué)形態(tài)檢測

第11周末處死大鼠，肝臟固定于10％多聚甲醛中，制作石蠟切片，通過蘇木素伊紅(he)染色觀察肝臟病理情況。根據(jù)文獻(xiàn)(王俊杰，方會龍，李純偉，等.非酒精性脂肪肝模型小鼠的建立[j].中國組織工程研究與臨床康復(fù)，2011,15(24):4395-4399)，對肝臟病理進(jìn)行評分。肝臟病理評分標(biāo)準(zhǔn)，肝小葉結(jié)構(gòu)，肝小葉結(jié)構(gòu)正常為0分，出現(xiàn)大小不等的假小葉為1分，出現(xiàn)大量假小葉為2分，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞或消失為3分。肝臟內(nèi)脂滴大小，細(xì)胞胞漿內(nèi)無脂肪滴為0分，胞漿內(nèi)出現(xiàn)少量脂肪滴為1分，胞漿內(nèi)出現(xiàn)大量脂肪滴為2分。肝臟炎癥細(xì)胞浸潤，肝臟匯管區(qū)無炎性細(xì)胞浸潤為0分，匯管區(qū)出現(xiàn)少量的炎性細(xì)胞浸潤為1分，計(jì)算總分得出肝臟病理嚴(yán)重程度。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用graphprism5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以表示，兩組獨(dú)立樣本之間比較采用t檢驗(yàn)；兩組以上多組間比較用單因素方差分析；方差不齊時用秩和檢驗(yàn)或非參數(shù)檢驗(yàn)。p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

對nafld模型大鼠腸道菌群失調(diào)的影響

模型組的大鼠在連續(xù)灌胃高脂乳劑5周后，與正常組比較，擬桿菌數(shù)量明顯增加(p<0.05)，梭桿菌(fus)數(shù)量有增加趨勢，乳酸桿菌(lac)數(shù)量有減少趨勢。模型組的大鼠在連續(xù)灌胃高脂乳劑7周后，擬桿菌1(bte)、擬桿菌2(bde)、梭桿菌數(shù)量明顯增加(p<0.05)，厚壁菌門(fir)和乳酸桿菌數(shù)量有減少趨勢。見圖1。

給予本發(fā)明藥物4周后，與正常組比較，模型組大鼠的擬桿菌1、擬桿菌2、梭桿菌數(shù)量明顯增加(p<0.05)，乳酸桿菌數(shù)量明顯下降(p<0.05)；與模型組比較，本發(fā)明藥物3個劑量組均能明顯降低擬桿菌1、2數(shù)量(p<0.05)本發(fā)明藥物低劑量組明顯降低擬桿菌1、2數(shù)量(p<0.05)，同時有效增加乳酸桿菌數(shù)量(p<0.05)；羅格列酮組對模型大鼠腸道菌群失調(diào)無明顯改善作用。見圖2。

本發(fā)明藥物對nafld模型大鼠菌群失調(diào)誘導(dǎo)的結(jié)腸通透性的影響

與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸黏液層厚度明顯降低(p<0.05)。而本發(fā)明藥物低、高劑量均對黏液層厚度無明顯影響。見圖3。

進(jìn)一步考察本發(fā)明藥物調(diào)節(jié)腸道菌群失調(diào)的作用，與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸組織occludinmrna表達(dá)明顯降低(p<0.05)，zo-1mrna表達(dá)有降低趨勢。與模型組比較，本發(fā)明藥物低劑量組occludinmrna表達(dá)明顯增加(p<0.05)同時zo-1mrna表達(dá)有升高趨勢。羅格列酮對結(jié)腸occludin和zo-1mrna表達(dá)均無明顯影響。見圖4。

本發(fā)明藥物對nafld模型大鼠肝生化指標(biāo)的影響

與正常組比較，灌胃6周后，模型組肝損傷大鼠血清alt、ast、alp無差異。給予50％cc14溶液灌胃，與正常組比較，模型組alt、ast和alp水平顯著升高(p<0.01)，造模成功。由于灌胃50％cc14溶液后血清肝生化指標(biāo)過高，故降低cc14溶液濃度，減輕肝損傷水平，調(diào)整20％cc14為5％cc14，肝損傷程度減弱。與正常組比較，模型組alt、ast和alp水平升高(p<0.05)。見圖5。

給藥4周后，與正常組比較，模型組alt、ast、alp指標(biāo)顯著升高(p<0.01)；與模型組比較，本發(fā)明藥物低、高劑量組及羅格列酮組能夠顯著降低alt水平(p<0.01)，本發(fā)明藥物3個劑量組均能顯著降低ast水平(p<0.01)，本發(fā)明藥物低劑量組能有效降低alp水平(p<0.05)。與正常組比較，模型組大鼠tc和ldl-c均有顯著升高(p<0.01)，本發(fā)明藥物各劑量組及羅格列酮組對血脂指標(biāo)無明顯影響。見圖6。

本發(fā)明藥物對nafld模型大鼠肝臟形態(tài)的影響

模型組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)消失，大量假小葉被纖維間隔包裹分隔，出現(xiàn)大量炎癥細(xì)胞浸潤。與模型組比較，羅格列酮組及本發(fā)明藥物低劑量組大鼠肝臟纖維化程度降低，炎癥細(xì)胞浸潤得到改善。病理評分結(jié)果顯示，模型組病理評分顯著高于正常組(p<0.01)，與模型組比較，本發(fā)明藥物低劑量組及羅格列酮組病理評分均明顯降低(p<0.05)。見圖7、圖8。