本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及psoriasin抗體和ll-37抗體在制備防治銀屑病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

銀屑病是一種發(fā)病率高，易復(fù)發(fā)，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量的慢性炎癥性皮膚病。銀屑病的病理表現(xiàn)為表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocyte，kc)過度增殖，異常分化，真皮淺層血管迂曲增生擴(kuò)張，真表皮炎癥細(xì)胞浸潤，浸潤的主要細(xì)胞為中性粒細(xì)胞和t淋巴細(xì)胞，在急性期，可見中性粒細(xì)胞形成的munro微膿瘍，慢性期主要為t淋巴細(xì)胞浸潤。目前多采用維a酸類藥物進(jìn)行治療，但效果不佳且易復(fù)發(fā)，后期副作用也較大，小分子生物療法雖然效果較好，但費(fèi)用極高，患者難以承受，且遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)率并未降低，故目前銀屑病的治療成為研究的重點(diǎn)問題。

眾所周知，皮膚是外界微生物進(jìn)入機(jī)體的天然屏障，銀屑病雖然表皮屏障被破壞，卻很少發(fā)生皮損的局部感染，這一現(xiàn)象與銀屑病皮損中存在大量的抗菌蛋白相關(guān)，這些抗菌蛋白包括psoriasin、防御素和ll-37，其在炎癥或感染時(shí)由kc或浸潤的炎性細(xì)胞產(chǎn)生，其不僅有抗微生物的作用，且可趨化免疫細(xì)胞，刺激kc及浸潤的免疫細(xì)胞產(chǎn)生一系列的前炎性因子，從而調(diào)節(jié)靶細(xì)胞的增殖、凋亡和分化。研究表明，在銀屑病中，真皮變化早于表皮，發(fā)病最初是真皮淺層血管通透性增加導(dǎo)致一系列炎癥細(xì)胞的浸潤和血管的增生。研究表明，在銀屑病初始發(fā)病中，真皮血管通透性增加導(dǎo)致一系列炎癥細(xì)胞的游出和分化，這些炎癥細(xì)胞主要有中性粒細(xì)胞、th1細(xì)胞、th17細(xì)胞及漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmicdentriticcell，pdc)。受損細(xì)胞釋放自身的dna和rna，后兩者均可與抗菌肽ll-37結(jié)合形成復(fù)合物(銀屑病患者表皮角質(zhì)形成細(xì)胞可產(chǎn)生大量的ll-37)，這些復(fù)合物可活化pdc并使之產(chǎn)生干擾素α(interferon，ifn)；其也可產(chǎn)生il-1β、il-6和tnfα，這些均可促進(jìn)kc分泌infα。而后者可促進(jìn)dc的成熟并分泌il-12和23，從而使幼稚t細(xì)胞向th1和th17細(xì)胞分化，并通過淋巴管和血管，到達(dá)病灶區(qū)域。在此區(qū)域，th1細(xì)胞產(chǎn)生tnfα和ifnγ，th17細(xì)胞分泌il-17和il-22，從而促進(jìn)kc的增殖和血管新生。故th17細(xì)胞的成熟在銀屑病炎性因子的浸潤和血管新生及kc增殖中均有重要作用。

psoriasin最初是由madsen等于1991年從銀屑病患者異常增生的角質(zhì)細(xì)胞中分離得到。編碼該蛋白的基因位于人染色體1q21表皮分化復(fù)合物區(qū)的s100基因簇，因此它可能在表皮的生物學(xué)功能中起重要作用，其在銀屑病的kc中表達(dá)升高，其后，在膀胱鱗狀細(xì)胞癌，原位乳癌和侵襲性乳癌中均有較高表達(dá)，人腦和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞中也檢測到psoriasin的表達(dá)。psoriasin的分泌可由多種因素誘導(dǎo)，在紫外線、促炎癥性細(xì)胞活素(如il-1、il-17、tnf-α、制瘤素-m)和細(xì)菌鞭毛蛋白等條件的刺激下，psoriasin的分泌量也會相應(yīng)增加。psoriasin能夠通過上調(diào)炎性通路來促進(jìn)乳腺腫瘤的形成。psoriasin的滅菌作用得益于它與zn²⁺結(jié)合的特性。zn²⁺是細(xì)菌進(jìn)行正常新陳代謝的關(guān)鍵元素，而psoriasin可通過與zn²⁺螯合來抑制細(xì)菌的生長和繁殖。同時(shí)，在ph＜6的酸性條件下，psoriasin還可引起細(xì)菌生物膜結(jié)構(gòu)的穿孔。

抗菌肽ll-37是目前在人體中發(fā)現(xiàn)的cathelicidins家族的唯一成員。1995年cowland等報(bào)道從人骨髓中性粒細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了一種具有α-螺旋結(jié)構(gòu)的cathelicidincap-18(hcap-18)，其是ll-37的前體。hcap-18/ll-37編碼基因位于人染色體3p21.3，含有3個(gè)內(nèi)含子和4個(gè)外顯子，其中第4個(gè)外顯子編碼成熟肽ll-37[10]。ll-37存在于人體多種細(xì)胞中。除了在上皮組織中有表達(dá)外，ll-37在人中性粒細(xì)胞、nk細(xì)胞和肥大細(xì)胞中也會持續(xù)表達(dá)。目前已知天然免疫系統(tǒng)中表達(dá)ll-37的其它細(xì)胞有樹突狀細(xì)胞單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、在間充質(zhì)干細(xì)胞和骨髓基質(zhì)。在銀屑病皮損中，ll-37高表達(dá)于表皮全層的kc細(xì)胞質(zhì)和浸潤的中性粒細(xì)胞中，其可分泌游離出細(xì)胞存在于細(xì)胞間質(zhì)中。ll-37具有抗gram陽性、陰性菌，真菌及病毒的活性。除抗菌作用外，ll-37還可刺激肥大細(xì)胞脫顆粒并可趨化中性粒細(xì)胞，單核細(xì)胞，肥大細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。ll-37有促進(jìn)血管的形成和生長、促進(jìn)傷口愈合的功能。

目前，ll-37被公認(rèn)是一種上皮細(xì)胞生長因子。tokumaru等研究證明，ll-37可以誘導(dǎo)上皮細(xì)胞生長因子受體轉(zhuǎn)錄活化，促使角質(zhì)形成細(xì)胞遷移。ll-37具有促進(jìn)血管形成的功能。研究表明，在銀屑病的發(fā)病初始，外界應(yīng)激或微生物作用于皮膚后，不僅可產(chǎn)生以上所述的抗菌蛋白，也可刺激kc和浸潤的炎癥細(xì)胞產(chǎn)生一系列細(xì)胞因子趨化因子及酶類，如白介素(interleukin，il)-8，il-1β，腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor，tnf)α和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，mmp)等，這些因子均可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，vegf)的生成，最終導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生。研究還表明，活性氧自由基(reactiveoxygenspecies，ros)可以誘導(dǎo)psoriasin的生成，而后者又可以促進(jìn)il-8和vegf的產(chǎn)生。故氧化應(yīng)激所產(chǎn)生的ros在抗菌蛋白所致的t細(xì)胞分化和血管新生中有重要作用。ros可導(dǎo)致線粒體dna突變，而線粒體的功能障礙又可導(dǎo)致自由基產(chǎn)生增多，從而引起線粒體膜通透性的改變，進(jìn)而形成惡性循環(huán)，最終造成細(xì)胞的損傷。故線粒體是一種相對早期受到損傷的細(xì)胞器，細(xì)胞主要是通過自噬來清除損傷線粒體以維持細(xì)胞的穩(wěn)態(tài)。

自噬是指細(xì)胞內(nèi)的溶酶體降解自身細(xì)胞器和其他大分子的過程，能夠?qū)е鲁绦蛐约?xì)胞死亡。研究證明，自噬可能通過清除受損的線粒體和過氧化物酶體而抑制ros的產(chǎn)生。同時(shí)線粒體自噬調(diào)控了線粒體的質(zhì)量，減少受損的線粒體數(shù)目，從而防止了ros誘導(dǎo)的炎癥小體活化，進(jìn)一步證明了自噬通過保護(hù)線粒體功能來降低ros的產(chǎn)生，從而起到抑制炎癥的作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的問題在于提供psoriasin抗體和ll-37抗體在制備防治銀屑病的藥物中的應(yīng)用，達(dá)到抑制銀屑病發(fā)展以及促進(jìn)皮損恢復(fù)正常的目的。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)：

psoriasin抗體與ll-37抗體相組合在制備防治銀屑病的藥物中的應(yīng)用。

所述的藥物為外用藥物。

以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～10)∶(10～1)。

以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～5)∶(5～1)。

所述的藥物為抑制th細(xì)胞分化、促進(jìn)活化t細(xì)胞凋亡的藥物。

所述的藥物為抑制過度免疫和自身免疫的藥物。

psoriasin、ll-37作為靶點(diǎn)在制備防治銀屑病的藥物中的應(yīng)用。

所述的藥物包含針對psoriasin的抗體和針對ll-37的抗體。

一種防治銀屑病的藥物，其活性組分包括psoriasin抗體與ll-37抗體。

其活性組分包括psoriasin抗體與ll-37抗體；以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～5)∶(5～1)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益的技術(shù)效果：

鑒于ll-37和psoriasin不僅在銀屑病中表達(dá)升高，且在銀屑病的病理表現(xiàn)中發(fā)揮重要作用，在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中處于起始位臵；本發(fā)明采用兩者的抗體可阻止包括血管通透性的升高，炎癥細(xì)胞的趨化、增多和聚集、炎癥因子的釋放、kc的增殖和血管的增生，使銀屑病不再向前發(fā)展；同時(shí)所采用的抗體可對活化t細(xì)胞的凋亡及保持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定性有重要作用，其可抑制過度免疫和自身免疫。

相比于當(dāng)前多注重于抑制th細(xì)胞分化過程中所必需的細(xì)胞因子和趨化因子來抑制炎癥反應(yīng)，本發(fā)明不僅重視抑制th細(xì)胞的分化，也重視促進(jìn)活化t細(xì)胞的凋亡；進(jìn)一步，通過外用治療咪喹莫特小鼠模型比較并探索兩個(gè)抗體的最佳比率，結(jié)果表明ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml的治療效果較為顯著，具有較高的pasi評分。

與其它治療銀屑病藥物相比，本發(fā)明的干預(yù)靶點(diǎn)更加明確，針對銀屑病發(fā)病的炎癥因子ll-37和psoriasin來進(jìn)行藥物的制備或者藥物靶點(diǎn)。本發(fā)明采用適當(dāng)濃度適當(dāng)比率的ll-37抗體和psoriasin抗體治療咪喹莫特小鼠銀屑病模型，能夠改善紅斑、鱗屑和皮損厚度，達(dá)到抑制銀屑病發(fā)展以及促進(jìn)皮損恢復(fù)正常的目的；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明療效明顯。

附圖說明

圖1為ll37抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖2為ll37抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖3為psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖4為psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖5為ll37抗體1ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖6為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖7為ll37抗體1ug/ml&psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖8為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖9為0.1％疊氮鈉外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片；

圖10為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖11為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖12為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖13為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖14為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體1ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖15為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖16為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與ll37抗體1ug/ml&psoriasin抗體5ug/ml外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比；

圖17為ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml與0.1％疊氮鈉外用治療咪喹莫特小鼠的pasi評分對比。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，所述是對本發(fā)明的解釋而不是限定。

ll-37和psoriasin不僅在銀屑病中表達(dá)升高，且在銀屑病的病理表現(xiàn)中發(fā)揮重要作用，在銀屑病的發(fā)病機(jī)制中處于起始位臵，用其抗體可阻止包括血管通透性的升高，炎癥細(xì)胞的趨化、增多和聚集、炎癥因子的釋放、kc的增殖和血管的增生，使銀屑病不再向前發(fā)展，這些抗體可對活化t細(xì)胞的凋亡及保持免疫系統(tǒng)的穩(wěn)定性有重要作用，其可抑制過度免疫和自身免疫。因此，采用適當(dāng)濃度的的最佳比率ll-37抗體和psoriasin抗體治療咪喹莫特小鼠銀屑病模型，改善紅斑、鱗屑和皮損厚度，來達(dá)到抑制銀屑病發(fā)展以及促進(jìn)皮損恢復(fù)正常的目的。

下面給出具體的實(shí)施例。

購買6-7周balb/c小鼠，2％水合氯醛麻醉后，剃去背部毛約2*2cm大小，外用咪喹莫特乳膏62.5mg，每天早上八點(diǎn)一次，外用不同濃度的不同比率的ll-37抗體和psoriasin抗體(均購自于北京博奧森生物技術(shù)有限公司，效價(jià)均為1mg/1ml，總計(jì)40ul)；具體的濃度分組為：

ll371ug/ml；

ll375ug/ml；psoriasin1ug/ml；psoriasin5ug/ml；

；ll371ug/ml&psoriasin1ug/ml；

ll375ug/ml&psoriasin5ug/ml；

ll371ug/ml&psoriasin5ug/ml；

ll375ug/ml&psoriasin1ug/ml；

同時(shí)，設(shè)0.1％疊氮鈉外用治療作為對照；

每天下午六點(diǎn)一次，每天早上拍照并pasi評分，分紅斑、鱗屑、皮損肥厚三部分，每部分按照：無記為0分，輕度記為1分，中度記為2分，重度記為3分，極重度記為4分，計(jì)算合計(jì)分?jǐn)?shù)即為pasi評分，共7天。把pasi評分應(yīng)用graphpadprism5作圖軟件作圖并統(tǒng)計(jì)比較。第8天脫頸椎處死小鼠后，取皮損，一部分做免疫組化。

不同濃度的ll-37抗體和psoriasin抗體外用治療咪喹莫特小鼠的臨床照片如圖1～圖8所示，可以看到不同濃度的治療組有不同的治療效果；

pasi評分結(jié)果如圖10～圖17所示，結(jié)果表明就不同的濃度的ll-37抗體和psoriasin抗體治療效果來說，ll37抗體5ug/ml&psoriasin抗體1ug/ml濃度組具有最佳治療效果(pasi評分最低，且與其他組合相比p＜0.05)。

相比于當(dāng)前多注重于抑制th細(xì)胞分化過程中所必需的細(xì)胞因子和趨化因子來抑制炎癥反應(yīng)，本發(fā)明不僅重視抑制th細(xì)胞的分化，也重視促進(jìn)活化t細(xì)胞的凋亡；本發(fā)明ll-37抗體和psoriasin抗體治療咪喹莫特小鼠銀屑病模型，能夠改善紅斑、鱗屑和皮損厚度，達(dá)到抑制銀屑病發(fā)展以及促進(jìn)皮損恢復(fù)正常。

因此本發(fā)明提出以下應(yīng)用：

psoriasin抗體與ll-37抗體相組合在制備防治銀屑病的藥物中的應(yīng)用。

具體的，所述的藥物為外用藥物。

以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～10)∶(10～1)。

以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～5)∶(5～1)。

所述的藥物為抑制th細(xì)胞分化、促進(jìn)活化t細(xì)胞凋亡的藥物。

所述的藥物為抑制過度免疫和自身免疫的藥物。

psoriasin、ll-37作為靶點(diǎn)在制備防治銀屑病的藥物中的應(yīng)用。

所述的藥物包含針對psoriasin的抗體和針對ll-37的抗體。

基于上述應(yīng)用，提出一種防治銀屑病的藥物，其活性組分包括psoriasin抗體與ll-37抗體。

具體的，其活性組分包括psoriasin抗體與ll-37抗體；以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計(jì)，psoriasin抗體∶ll-37抗體＝(1～5)∶(5～1)。

以上給出的實(shí)施例是實(shí)現(xiàn)本發(fā)明較優(yōu)的例子，本發(fā)明不限于上述實(shí)施例。本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明技術(shù)方案的技術(shù)特征所做出的任何非本質(zhì)的添加、替換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。