本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其涉及紫紅參提取物在制備治療輕度認(rèn)知能障礙藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

紫紅參(purpleredginseng)是人參通過(guò)另一種炮制方法而得到的加工品，由現(xiàn)代工藝與傳統(tǒng)蒸制相結(jié)合而制成，人參炮制加工成紫紅參的過(guò)程中，因其加入酸性氨基酸，例如天冬氨酸，加快了人參中大分子降解速度，部分化學(xué)成分會(huì)發(fā)生變化，減少了蒸煮次數(shù)，更加容易發(fā)生美拉德反應(yīng)及降解反應(yīng)等，外觀呈紫紅色，故得名。目前只見(jiàn)到有關(guān)紫紅參提取物抗腫瘤作用研究的報(bào)道(張強(qiáng)，等，紫紅參提取物抗腫瘤作用研究，浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，3(1)：9-12)以及紫紅參提取物具有促進(jìn)男性性功能作用(功能性人參及制備方法及其治療男性功能障礙的用途，zl201310231195.6)。

人參作為促進(jìn)學(xué)習(xí)記憶藥物的研究已有近200年歷史，據(jù)報(bào)道，人參作用于學(xué)習(xí)記憶的多種環(huán)節(jié)，對(duì)多種任務(wù)學(xué)習(xí)記憶獲得、鞏固和再現(xiàn)有明顯的易化作用，人參的促智作用已經(jīng)被世人公認(rèn)，關(guān)于人參的促智機(jī)理研究越來(lái)越多，主要包括人參對(duì)中樞神經(jīng)遞質(zhì)、腦核酸和蛋白質(zhì)的合成、谷氨酸能神經(jīng)系統(tǒng)以及腦第二信使系統(tǒng)、神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)鈣超負(fù)荷調(diào)節(jié)有關(guān)(李竹，郭月英，人參促智作用機(jī)理研究進(jìn)展，沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，15(1)：73-76)。單體人參皂苷的促智作用研究也不斷深入，據(jù)報(bào)道單體人參皂苷也通過(guò)不同的作用機(jī)制發(fā)揮促智作用(楊迎，等.人參皂甙rb1和rg1促智作用機(jī)制的探討-對(duì)小鼠腦神經(jīng)發(fā)育的影響.藥學(xué)學(xué)報(bào)，1994，29(4)：241-245；姜紅柳，等，人參皂苷re對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2008，24(10)：1999-40；朱建民.人參皂甙促智作用研究進(jìn)展，江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1995(增刊)：46-47；)。

中醫(yī)認(rèn)為人參可“強(qiáng)精補(bǔ)腎、大補(bǔ)元?dú)?、生津益血?王曉英.人參皂甙促智、壯陽(yáng)作用及其機(jī)制研究[d]，南京:中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué),2001)，而人參在“強(qiáng)精補(bǔ)腎”的同時(shí)，可行抗腫瘤﹑抗病毒﹑降血脂、免疫調(diào)節(jié)、改善微循環(huán)、增加心肌功能等多種提高生命質(zhì)量的功效，另有報(bào)道，黑參提取物中的人參皂苷rg3、rg5、rk1通過(guò)抑制膽堿酯酶，從而修復(fù)由乙醇引起的記憶損傷，起到神經(jīng)保護(hù)的作用(袁媛，等，hplc法測(cè)定19個(gè)人參新炮制品-黑參樣品中的人參皂苷含量[j].遼寧中醫(yī)雜志，2013，40(10)：1993-1995)，紫紅參含有更豐富的人參皂苷rg3、rg5、rk1、rh2、ppd、ppt等稀有人參皂苷有效成分，是作為保健食品、保健品的最佳原料，尤其含有人參皂苷rg3、rh2的組合物作為健腦的保健品也不斷涌現(xiàn)(丁輝，史大靜，一種提高免疫力的保健品，申請(qǐng)?zhí)枺?01310167345.1)。

近年來(lái)，我國(guó)社會(huì)老齡化人口規(guī)模迅速擴(kuò)大，國(guó)民物質(zhì)生活和精神文化生活水平不斷得到提高，人們也越來(lái)越注重養(yǎng)生保健和生活質(zhì)量，對(duì)這兩者有了越來(lái)越高的要求，性活動(dòng)也越來(lái)越受到人們的重視。

未見(jiàn)到有關(guān)利用紫紅參提取物在制備治療輕度認(rèn)知障礙藥物中的報(bào)道。紫紅參提取物可按常規(guī)方法獲得，經(jīng)水提取、過(guò)濾、濃縮后得到浸膏。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種紫紅參提取物在制備治療輕度認(rèn)知障礙藥物中的應(yīng)用，目的在于提供紫紅參提取物新的藥物用途。

本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：紫紅參提取物在制備治療輕度認(rèn)知障礙藥物中的應(yīng)用。

紫紅參水提取物在制備治療輕度認(rèn)知障礙保健品，食品添加劑或復(fù)方制劑中的用途。

所述的紫紅參水提取物是將生曬參浸泡于5％天冬氨酸溶液中10～12h，然后在90～100℃蒸制3～4h，取出室內(nèi)常溫放涼，同樣條件重復(fù)4次，50～80℃干燥12～15h，同樣條件重復(fù)4次。

所述紫紅參提取物應(yīng)用劑量范圍為20～200mg/人/天。

所述紫紅參提取物應(yīng)用劑量?jī)?yōu)選為30～150mg/人/天。

當(dāng)本發(fā)明用于制備治療輕度認(rèn)知障礙藥物中的藥物時(shí)，其口服或胃腸外給藥，均是安全的，在口服情況下，其可以任何常規(guī)形式給藥，如片劑、膠囊、注射劑、凍干粉針、注射用乳劑、粉劑、滴丸、顆粒劑、軟膠囊、糖漿、口嚼劑和貼劑。

本發(fā)明制備治療輕度認(rèn)知障礙藥物中的藥物是由紫紅參提取物或其藥物組合物與固體或液體的賦形劑一起構(gòu)成的，這里使用的固體或液體的賦形劑在本領(lǐng)域是眾所周知的，下面舉幾個(gè)具體例子，散劑是內(nèi)服的粉末劑，它的賦形劑有乳糖、淀粉、漿糊精、碳酸鈣、合成或天然硫酸鋁、氧化鎂、硬脂酸鎂，碳酸氫鈉、干燥酵母等；軟膏劑的賦形劑可以使用脂油，含水羊毛脂、凡士林、甘油、蜂臘、木臘、液體石臘、樹(shù)脂、高級(jí)臘等組合成的疏水劑或親水劑。

本發(fā)明的有益效果在于，紫紅參提取物或其藥物組合物作為治療輕度認(rèn)知障礙藥物中藥物，具有療效顯著、成本低廉、毒副作用小的顯著優(yōu)點(diǎn)，將紫紅參提取物用于治療輕度認(rèn)知障礙新的藥物用途屬首次發(fā)現(xiàn)，同時(shí)擴(kuò)大了紫紅參新的藥物用途。

附圖說(shuō)明

圖1是混合標(biāo)準(zhǔn)品的負(fù)離子檢測(cè)模式總離子流圖；

圖2是混合標(biāo)準(zhǔn)品的正離子檢測(cè)模式總離子流圖；

圖3是紫紅參的負(fù)離子檢測(cè)模式總離子流圖；

圖4是生曬參的負(fù)離子檢測(cè)模式總離子流圖；

圖5是紫紅參的正離子檢測(cè)模式總離子流圖；

圖6是生曬參的正離子檢測(cè)模式總離子流圖；

圖7是小鼠水迷宮訓(xùn)練采取的迷宮示意圖。

具體實(shí)施方式

紫紅參水提取物可按現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的方式獲得，也可按下列方式獲得：

實(shí)施例1

紫紅參水提取物是將生曬參浸泡于5％天冬氨酸溶液中10h，然后在90℃蒸制3h，取出室內(nèi)常溫放涼，同樣條件重復(fù)4次，50℃干燥12h，同樣條件重復(fù)4次。

實(shí)施例2

紫紅參水提取物是將生曬參浸泡于5％天冬氨酸溶液中11h，然后在95℃蒸制3.5h，取出室內(nèi)常溫放涼，同樣條件重復(fù)4次，65℃干燥13.5h，同樣條件重復(fù)4次。

實(shí)施例3

紫紅參水提取物是將生曬參浸泡于5％天冬氨酸溶液中12h，然后在100℃蒸制4h，取出室內(nèi)常溫放涼，同樣條件重復(fù)4次，80℃干燥15h，同樣條件重復(fù)4次。

下面通過(guò)實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的效果。

實(shí)驗(yàn)例1、紫紅參與生曬參化學(xué)成分的比較研究

1、實(shí)驗(yàn)儀器與試藥

1.1儀器

watersacquityuplc超高效液相色譜儀系統(tǒng)，包括二元超高壓泵系統(tǒng)、樣品管理系統(tǒng)、masslynx4.1色譜工作站；watersxevotq-s串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜儀(美國(guó)waters公司)；re-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；kq-250b型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；fa1104n型電子天平(上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司)；rct-3200型超純水儀(長(zhǎng)春博萊帕特科技發(fā)展有限公司)；離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.2試劑

乙腈、甲酸(色譜純，德國(guó)fisher公司)；水為超純水；其它試劑均為分析純。

1.3試藥

生曬參(吉林省皇封參集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：110713)；紫紅參(吉林省皇封參集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)：110820)。

2、實(shí)驗(yàn)方法

2.1供試品溶液的制備

取生曬參和紫紅參粉末(過(guò)四號(hào)篩)各約0.5g，精密稱定，精密加入甲醇25ml，稱定重量，密塞，超聲處理(功率100w，頻率40khz)45分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)0.22μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.2標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱取人參皂苷rb2對(duì)照品、人參皂苷rb3對(duì)照品、人參皂苷rc對(duì)照品、人參皂苷rd對(duì)照品、人參皂苷re對(duì)照品、人參皂苷rf對(duì)照品、人參皂苷f(shuō)1對(duì)照品、20(s)-人參皂苷rg1對(duì)照品、20(s)-人參皂苷rg2對(duì)照品、20(s)-人參皂苷rg3對(duì)照品、20(r)-人參皂苷rg3對(duì)照品、20(s)-人參皂苷rh1對(duì)照品、20(s)-人參皂苷rh2對(duì)照品、原人參二醇對(duì)照品、原人參三醇對(duì)照品，加甲醇制成每1ml各含0.2mg的混合溶液，搖勻，再精密吸取10μl,加甲醇稀釋至5ml，搖勻，即得。

2.3色譜條件

watersacquityuplcbehc18(2.1mm×50mm，1.7μm)色譜柱；柱溫：30℃；樣品管理器溫度：15℃；流速：0.3ml·min-1；進(jìn)樣量：4μl；流動(dòng)相a(0.1％甲酸)-b(乙腈)，梯度洗脫，洗脫程序見(jiàn)表1。

表.1梯度洗脫程序

2.4.質(zhì)譜條件

電噴霧離子化源(esi)，正、負(fù)離子檢測(cè)模式。掃描范圍：m/z100～1500。毛細(xì)管電壓:3.0kv；錐孔電壓:40v；源溫度：150℃；脫溶劑氣溫度：400℃；錐孔氣流量：150l/h；脫溶劑氣流量：800l/h；氬氣流量：0.15ml/min。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1成分的鑒定

紫紅參共檢測(cè)出32個(gè)化學(xué)成分，根據(jù)uplc-esi-ms/ms結(jié)果結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，鑒定了其中22個(gè)化學(xué)成分。包括：電噴霧離子化源(esi)，負(fù)離子檢測(cè)模式下檢測(cè)出的28個(gè)成分(見(jiàn)表2)，根據(jù)uplc-esi-ms/ms結(jié)果結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，鑒定了其中18個(gè)化學(xué)成分；電噴霧離子化源(esi)，正離子檢測(cè)模式下檢測(cè)出4個(gè)成分(表2.)，根據(jù)uplc-esi-ms/ms結(jié)果結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，鑒定了這4個(gè)化學(xué)成分。

生曬參共檢測(cè)出31個(gè)化學(xué)成分，都為電噴霧離子化源(esi)，負(fù)離子檢測(cè)模式下檢測(cè)出來(lái)(見(jiàn)表3)，根據(jù)uplc-ms/ms結(jié)果結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道，鑒定了其中26個(gè)化學(xué)成分；電噴霧離子化源(esi)，正離子檢測(cè)模式下未檢測(cè)出皂苷元。

混合標(biāo)準(zhǔn)品的負(fù)離子檢測(cè)模式總離子流圖見(jiàn)圖1。

混合標(biāo)準(zhǔn)品的正離子檢測(cè)模式總離子流圖見(jiàn)圖2。

紫紅參和生曬參樣品uplc-esi-ms/ms總離子流色譜圖分別見(jiàn)圖3、圖4、圖5和圖6。

表2紫紅參中成分的鑒定

表3生曬參中成分的鑒定

3.2紫紅參與生曬參中皂苷類(lèi)成分的比較

對(duì)紫紅參與生曬參中皂苷類(lèi)成分的含量進(jìn)行了對(duì)比分析，結(jié)果分別見(jiàn)表4、表5及表6。

表4生曬參和紫紅參中共有皂苷類(lèi)成分及含量

表5生曬參中其它已知皂苷類(lèi)成分及含量

表6紫紅參中其它活性成分及含量

3.3生曬參和紫紅參中人參皂苷類(lèi)成分分析

生曬參中檢測(cè)出含量較高的人參皂苷有：rf、ro、re、rb1、rc、rb2、rk1、rg5、20(s)-人參皂苷rg3、三七皂苷r1和r2、乙酰化人參皂苷rb1、乙?；藚⒃碥誶c等。此外還檢測(cè)出含量較少的三七皂苷r3、人參皂苷rg1、20(s)-人參皂苷rh1、20(r)-人參皂苷rh1、姜狀三七苷r1、人參皂苷rb3、20(s)-人參皂苷rg2、人參皂苷rd、20(r)-人參皂苷rg3、稀有人參皂苷rg6/f4、乙?；藚⒃碥誶b2、乙?；藚⒃碥誶e、乙?；藚⒃碥誶d以及其它未知的化合物。

與生曬參不同，紫紅參中檢測(cè)出含量較高的人參皂苷為20(s)-人參皂苷rg3、20(r)-人參皂苷rg3、20(r)-人參皂苷rh1、20(r)-人參皂苷rg2、人參皂苷rk1、人參皂苷rg5、人參皂苷rd、人參皂苷ro、姜狀三七苷r1等稀有皂苷；含量較低的人參皂苷為三七皂苷r2、人參皂苷rf、20(s)-人參皂苷rh1、人參皂苷rg6/f4、20(s)-人參皂苷rg2、人參皂苷c、達(dá)瑪-3β-6α-12β,20,25-五醇、西洋參皂苷f(shuō)1等；而人參皂苷rg1、re、rb1、rb2、rb3、rc、三七皂苷r1、r3以及各乙?；藚⒃碥瘴幢粰z測(cè)出來(lái)。

4、討論

在紫紅參中，未檢測(cè)出二醇型人參皂苷rc、rb1、rb2和rb3等成分，是因?yàn)槠?0位糖鏈被水解，20位末端糖鏈水解產(chǎn)生人參皂苷rd,完全水解產(chǎn)生了含量較高的次級(jí)皂苷20(s)-人參皂苷rg3和20(r)-人參皂苷rg3一對(duì)差向異構(gòu)體以及人參皂苷rk1和rg5。與生曬參比較，20(r)-人參皂苷rg3含量明顯增多，可認(rèn)為是加工過(guò)程中發(fā)生構(gòu)型轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的紫紅參特異性成分。對(duì)于三醇型人參皂苷re、三七皂苷r1、r3未被檢出的原因是其糖鏈發(fā)生了降解，其降解產(chǎn)物rg2、rh1、rf、三七皂苷r2可檢出。對(duì)于齊墩果酸型皂苷ro的降解產(chǎn)物為姜狀三七苷r1，所以在紫紅參中姜狀三七苷r1含量有所增加。人參皂苷ro的含量有所增加，可能是紫紅參加工過(guò)程的特有成分，有待于進(jìn)一步研究。紫紅參中，出現(xiàn)了20(s)-原人參三醇、20(r)-原人參三醇、20(s)-原人參二醇和20(r)-原人參二醇，是由于糖苷鍵斷裂產(chǎn)生的。

根據(jù)以上結(jié)果可知在紫紅參的加工過(guò)程中，由于循環(huán)加熱蒸煮，皂苷類(lèi)成分發(fā)生了酯鍵和糖苷鍵的降解，人參皂苷的種類(lèi)和數(shù)量發(fā)生了改變，產(chǎn)生了20(s)-人參皂苷rg3、20(r)-人參皂苷rg3、20(r)-人參皂苷rh1、20(r)-人參皂苷rg2、rk1、rg5、rd、ro、姜狀三七苷r1、20(s)-原人參三醇、20(r)-原人參三醇、20(s)-原人參二醇和20(r)-原人參二醇等含量較高的活性成分。

實(shí)驗(yàn)例2紫紅參提取物促進(jìn)自然衰老的小鼠學(xué)習(xí)記憶作用的研究，

小鼠水迷宮法

目的：觀察紫紅參提取物在小鼠水迷宮中對(duì)抗自然衰老引起的記憶獲得障礙的作用

動(dòng)物和材料

動(dòng)物：spf昆明種老年雄性小鼠，體重45-55，由吉林大學(xué)動(dòng)物部提供，許可證：醫(yī)動(dòng)字第10-5107號(hào)實(shí)驗(yàn)前在本所動(dòng)物房籠養(yǎng)兩天。

試劑及配制

紫紅參提取物(zhs)：紫紅參經(jīng)粉碎(過(guò)四號(hào)篩)，75％乙醇回流提取三次，每次3h，合并提取液，回收乙醇，蒸干，即得。批號(hào)：061018。

先用少量dmso助溶，再用蒸餾水稀釋為12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg灌胃給藥。

腦復(fù)康：東北制藥總廠，劑量為500mg/kg體重，用蒸餾水配成50mg/ml；0.2ml/20g體重。

儀器：smg-2小鼠水迷宮，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所研制。

方法：spf昆明種老年雄性小鼠64只，隨機(jī)分5組，正常老年對(duì)照組，紫紅參提取物組(12.5mg/kg、25mg/kg和50mg/kg)，腦復(fù)康組(500mg/kg)，并加—spf昆明種小鼠正常年青對(duì)照組。正常老年和年青對(duì)照組灌服水。其余經(jīng)口灌服給藥，給藥第11天到第15天進(jìn)行小鼠水迷宮訓(xùn)練。

水迷宮由一黑色有機(jī)玻璃長(zhǎng)方體水槽(73cm×42cm×20cm)組成，其中有若干隔板組成迷宮，如圖7所示，其中1、2、3、4為盲端，迷宮的一角有一組臺(tái)階為終點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)前，迷宮中灌水，水深10cm，水溫24±1℃。

訓(xùn)練第一天用隔板將a點(diǎn)與b點(diǎn)的通道阻斷，小鼠首先被置于臺(tái)階上10秒，使其了解此安全區(qū)域的存在，然后將小鼠放于起點(diǎn)a，讓其自由游泳，記錄其進(jìn)入盲端1的次數(shù)(即錯(cuò)誤次數(shù))以及爬上安全臺(tái)階的時(shí)間(即潛伏期)，如果在訓(xùn)練時(shí)間2分鐘內(nèi)尚未找到臺(tái)階者，將會(huì)被引導(dǎo)到安全臺(tái)階處，其潛伏期被記為2分鐘。第一次訓(xùn)練后休息片刻按同樣方法訓(xùn)練第二次；依次訓(xùn)練其它小鼠。

在訓(xùn)練的第二天，將隔板置于b點(diǎn)，小鼠的游泳起點(diǎn)為b點(diǎn)，分別記錄2分鐘內(nèi)小鼠進(jìn)入盲端1、2、3的錯(cuò)誤次數(shù)，爬上安全臺(tái)階的潛伏期，每只小鼠連續(xù)訓(xùn)練2次。如果在2分鐘內(nèi)找不到臺(tái)階者，將被引導(dǎo)到終點(diǎn)，其潛伏期被記為2分鐘。

訓(xùn)練第三到第五天小鼠的游泳起點(diǎn)為c點(diǎn)，記錄2分鐘內(nèi)小鼠進(jìn)入盲端1、2、3、4的錯(cuò)誤次數(shù)和找到安全臺(tái)階的潛伏期每只小鼠連續(xù)訓(xùn)練二次。

結(jié)果：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并比較各組小鼠找到安全臺(tái)階的潛伏期及進(jìn)入盲端的次數(shù)即錯(cuò)誤次數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7紫紅參提取物在小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)中對(duì)抗自然衰老引起的記憶獲得障礙的作用(n＝12)

與自然衰老組比較*p〈0.05，**p〈0.01

從以上結(jié)果可以看出與自然衰老組相比，在小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)中，紫紅參提取物低劑量(12.5mg/kg)組在實(shí)驗(yàn)的第二天，中劑量(25mg/kg)組在實(shí)驗(yàn)的第一，三，四天以及高劑量(50mg/kg)組在實(shí)驗(yàn)的第一，三天均能顯著性減少尋找安全臺(tái)階的潛伏期，說(shuō)明紫紅參提取物在小鼠水迷宮中有一定的對(duì)抗自然衰老所引起的記憶獲得障礙的作用。

制備藥劑的實(shí)施例1：

紫紅參水提取物250.0g,加入淀粉50g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.3g。

制備藥劑的實(shí)施例2：

紫紅參水提取物150.0g,加入淀粉50g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.2g。

制備藥劑的實(shí)施例3：

紫紅參總皂苷150.0g,加入淀粉150g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.3g。

制備藥劑的實(shí)施例4：

紫紅參總皂苷200.0g,加入淀粉100g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.3g。

制備藥劑的實(shí)施例5：

紫紅參水提取物150.0g,紫紅參總皂苷100.0g,加入淀粉50g，混勻后裝入硬囊殼，制成1000粒，每粒0.3g。