本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，具體地，本申請?zhí)峁┝艘环N基于u6啟動子的cdc6shrna在制備治療實體瘤的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、實體瘤是指除血液腫瘤以外的所有惡性腫瘤，其發(fā)生與發(fā)展與多種基因的異常表達(dá)密切相關(guān)。其中，cdc6(細(xì)胞分裂周期蛋白6)作為dna復(fù)制的重要因子，在癌細(xì)胞的無限制增殖中起關(guān)鍵作用。通過抑制cdc6的表達(dá)，可以有效阻斷癌細(xì)胞的增殖周期，從而達(dá)到治療腫瘤的目的。

2、基因干擾技術(shù)，特別是rna干擾(rnai)技術(shù)，已成為基因治療領(lǐng)域的重要工具。u6啟動子作為rna聚合酶iii啟動子，因其轉(zhuǎn)錄效率高、表達(dá)穩(wěn)定且特異性強(qiáng)，常被用于構(gòu)建shrna(短發(fā)卡rna)表達(dá)載體，以實現(xiàn)目標(biāo)基因的特異性沉默。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、基于上述情況，本申請?zhí)峁┮环N基于u6啟動子的cdc6shrna基因干擾治療實體瘤的方法，通過構(gòu)建u6-cdc6shrna表達(dá)載體，搖菌獲得u6-cdc6shrna表達(dá)質(zhì)粒，包裝得到u6-cdc6shrna慢病毒，直接作用于實體瘤能夠特異性沉默cdc6基因，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，達(dá)到治療實體瘤的效果。

2、一方面，本申請?zhí)峁┝嘶趗6啟動子的cdc6shrna在制備治療實體瘤的藥物中的應(yīng)用。

3、進(jìn)一步地，所述藥物為包含所述基于u6啟動子的cdc6shrna的病毒載體。

4、進(jìn)一步地，所述病毒載體為慢病毒。

5、進(jìn)一步地，所述u6啟動子的核苷酸序列為seq?id?no.2。

6、進(jìn)一步地，所述cdc6shrna的核苷酸序列為seq?id?no.3。

7、進(jìn)一步地，所述基于u6啟動子的cdc6shrna的核苷酸序列為seq?id?no.1。

8、進(jìn)一步地，所述實體瘤為乳頭狀甲狀腺癌、肝癌、肺癌。

9、進(jìn)一步地，所述實體瘤為乳頭狀甲狀腺癌、肝癌。

10、進(jìn)一步地，所述實體瘤為乳頭狀甲狀腺癌。

11、另一方面，本申請?zhí)峁┝艘环N治療實體瘤的藥物，所述藥物包含病毒載體，所述病毒載體包含基于u6啟動子的cdc6shrna。

12、進(jìn)一步地，所述病毒載體為慢病毒。

13、進(jìn)一步地，所述u6啟動子的核苷酸序列為seq?id?no.2。

14、進(jìn)一步地，所述cdc6shrna的核苷酸序列為seq?id?no.3。

15、進(jìn)一步地，所述基于u6啟動子的cdc6shrna的核苷酸序列為seq?id?no.1。

16、進(jìn)一步地，所述實體瘤為乳頭狀甲狀腺癌、肝癌、肺癌。

17、進(jìn)一步地，所述實體瘤為乳頭狀甲狀腺癌、肝癌。

18、進(jìn)一步地，所述實體瘤為乳頭狀甲狀腺癌。

19、進(jìn)一步地，所述藥物還包含藥學(xué)上可接受的載體。

20、進(jìn)一步地，所述藥物為注射劑劑型。

21、另一方面，本申請?zhí)峁┝酥苽渖鲜鏊幬锏姆椒ǎ?/p>

22、(1)在載體的酶切位點后插入u6啟動子、cdc6shrna基因獲得質(zhì)粒；

23、(2)將步驟(1)得到的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入表達(dá)菌株，培養(yǎng)篩選成功轉(zhuǎn)入的菌株；

24、(3)對步驟(2)所得的成功轉(zhuǎn)入的菌株進(jìn)行搖菌，得到u6-cdc6shrna表達(dá)質(zhì)粒；

25、(4)對步驟(3)所述表達(dá)質(zhì)粒進(jìn)行包裝，得到u6-cdc6shrna慢病毒。

26、本申請的技術(shù)方案實現(xiàn)了以下有益效果：

27、特異性高：利用u6啟動子驅(qū)動的shrna技術(shù)，實現(xiàn)了對cdc6基因的特異性沉默，減少了脫靶效應(yīng)。

28、療效顯著：通過抑制cdc6的表達(dá)，有效阻斷了腫瘤細(xì)胞的增殖周期，對實體瘤具有顯著的治療效果。

29、安全性好：基于rna干擾技術(shù)的治療方法，無毒性和無副作用，提高了治療的安全性。

技術(shù)特征：

1.基于u6啟動子的cdc6shrna在制備治療實體瘤的藥物中的應(yīng)用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，所述藥物為包含所述基于u6啟動子的cdc6shrna的病毒載體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，所述病毒載體為慢病毒。

4.一種治療實體瘤的藥物，其特征在于，所述藥物包含病毒載體，所述病毒載體包含基于u6啟動子的cdc6shrna。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的應(yīng)用或者根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，所述u6啟動子的核苷酸序列為seq?id?no.2。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的應(yīng)用或者根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，所述cdc6shrna的核苷酸序列為seq?id?no.3。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的應(yīng)用或者根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，所述基于u6啟動子的cdc6shrna的核苷酸序列為seq?id?no.1。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的應(yīng)用或者根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，所述實體瘤為乳頭狀甲狀腺癌、肝癌、肺癌。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用或藥物，所述實體瘤為乳頭狀甲狀腺癌、肝癌。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用或藥物，所述實體瘤為乳頭狀甲狀腺癌。

11.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的應(yīng)用或者根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，所述藥物還包含藥學(xué)上可接受的載體。

12.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的應(yīng)用或者根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，所述藥物為注射劑劑型。

13.制備根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物的方法，其特征在于，所述方法包括：

技術(shù)總結(jié)
本申請?zhí)峁┝艘环N基于U6啟動子的CDC6shRNA在制備治療實體瘤的藥物中的應(yīng)用。本申請的技術(shù)方案通過抑制CDC6的表達(dá)，有效阻斷了腫瘤細(xì)胞的增殖周期；同時通過U6啟動子驅(qū)動，實現(xiàn)了特異性沉默，減少了脫靶效應(yīng)；實現(xiàn)了顯著的治療效果。

技術(shù)研發(fā)人員：張力輝,荊淑清
受保護(hù)的技術(shù)使用者：青島阿爾泰基因工程有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15