本發(fā)明涉及化妝品，具體涉及一種基于皮膚脂肪干細(xì)胞的美容美白修復(fù)液及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、隨著人們對(duì)美的追求不斷提高，美容美白產(chǎn)品的需求日益增長(zhǎng)。目前市場(chǎng)上的美容美白產(chǎn)品種類(lèi)繁多，但部分產(chǎn)品存在效果不佳、安全性差等問(wèn)題。例如，一些化學(xué)美白劑可能對(duì)皮膚產(chǎn)生刺激，長(zhǎng)期使用還可能引發(fā)皮膚過(guò)敏、色素沉著反彈等不良反應(yīng)。皮膚作為人體最大的器官，其健康和美觀至關(guān)重要。皮膚脂肪干細(xì)胞具有多向分化潛能和旁分泌功能，在皮膚修復(fù)和再生方面展現(xiàn)出巨大潛力，但目前將其應(yīng)用于美容美白產(chǎn)品的研究還相對(duì)較少。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明旨在提供一種基于皮膚脂肪干細(xì)胞的美容美白修復(fù)液及其制備方法，該修復(fù)液能夠有效促進(jìn)皮膚修復(fù)、實(shí)現(xiàn)美容美白和抗衰的功效，且具有良好的安全性和穩(wěn)定性，具體內(nèi)容如下：

2、本發(fā)明公開(kāi)了一種基于皮膚脂肪干細(xì)胞的美容美白修復(fù)液，包含皮膚脂肪干細(xì)胞外泌體、貽貝生物肽(mefp-5)、褐藻多酚-納米硒復(fù)合物、仿生珍珠蛋白修飾二氧化鈦、ph/uv雙響應(yīng)型納米脂質(zhì)體載體。

3、優(yōu)選地，所述mefp-5在肽鏈c端連接黑色素靶向肽，所述黑色素靶向肽的序列為yhknme。

4、優(yōu)選地，所述ph/uv雙響應(yīng)型納米脂質(zhì)體載體以大豆磷脂/膽固醇為脂質(zhì)材料，包封率>85％。

5、本發(fā)明還公開(kāi)了一種上述基于皮膚脂肪干細(xì)胞的美容美白修復(fù)液的制備方法，包括以下步驟：

6、s1、利用聚己內(nèi)酯支架模擬體內(nèi)脂肪微環(huán)境，在3d微流控培養(yǎng)體系中培養(yǎng)皮膚脂肪干細(xì)胞，控制培養(yǎng)溫度為37℃，二氧化碳濃度為5％，將干細(xì)胞密度擴(kuò)增至1×107cells/ml，采用超速離心-尺寸排阻色譜聯(lián)用技術(shù)分離純化外泌體，得到粒徑80-150nm、純度>98％的外泌體；

7、s2、將mefp-5基因插入畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)，在溫度為28℃、ph為6.0的發(fā)酵條件下進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵產(chǎn)率達(dá)2.8g/l，經(jīng)hplc純化至純度>99％，然后在肽鏈c端連接序列為yhknme的黑色素靶向肽；

8、s3、將s1得到的外泌體、mefp-5與褐藻多酚-納米硒按質(zhì)量比1:2:0.5混合，以溫敏型泊洛沙姆407為基材，加入光敏劑，采用薄膜分散法在40℃下包封于大豆磷脂/膽固醇脂質(zhì)體中，包封率>85％，制備成具有uv觸發(fā)釋放功能的響應(yīng)型凝膠基質(zhì)，其中，凝膠基質(zhì)中溫敏型泊洛沙姆407的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20％，光敏劑的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％；

9、s4、將仿生珍珠蛋白二氧化鈦與s3制備的凝膠基質(zhì)與在20-30℃均質(zhì)混合，使混合物中仿生珍珠蛋白二氧化鈦的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5％，調(diào)節(jié)ph至6.0，灌裝為無(wú)菌噴霧或凝膠制劑。

10、優(yōu)選地，s4中，所述仿生珍珠蛋白修飾二氧化鈦的制備方法包括以下步驟：

11、將二氧化鈦納米顆粒加入仿生珍珠蛋白溶液中，超聲分散均勻，超聲時(shí)間為10-30min，置于20-30℃磁力攪拌12-24h，將混合溶液離心，轉(zhuǎn)速為5000-10000rpm，離心時(shí)間為10-20分鐘，用去離子水或緩沖溶液洗滌沉淀3-5次，放入烘箱中，在60-80℃下干燥至恒重，得到仿生珍珠蛋白修飾的二氧化鈦。

12、優(yōu)選地，s3中，所述褐藻多酚-納米硒的制備方法包括以下步驟：按1-3:1的質(zhì)量比混合褐藻多酚溶液和納米硒溶膠，攪拌時(shí)緩慢滴加0.1-0.5mol/l的氫氧化鈉溶液，把混合溶液ph值調(diào)到7-9，繼續(xù)攪拌反應(yīng)1-2小時(shí)，溶液變渾濁有沉淀生成，反應(yīng)結(jié)束離心分離，離心轉(zhuǎn)速為8000-10000r/min，離心時(shí)間為15-20分鐘，收集沉淀，用去離子水洗滌3-5次，冷凍干燥后得到褐藻多酚-納米硒復(fù)合物。

13、優(yōu)選地，s1中，所述超速離心的條件為100,000g離心120分鐘。

14、優(yōu)選地，s3中，所述薄膜分散法中，薄膜形成后在50℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑。

15、優(yōu)選地，所述褐藻多酚-納米硒復(fù)合物中褐藻多酚與納米硒的配比為1:0.2-1。

16、優(yōu)選地，所述光敏劑為對(duì)羥基偶氮苯。

17、本發(fā)明至少具備以下有益效果：

18、(1)褐藻多酚具備抗氧化性，能清除皮膚內(nèi)自由基，減輕氧化應(yīng)激損傷。它還可調(diào)節(jié)皮膚細(xì)胞的生理功能，促進(jìn)細(xì)胞新陳代謝；納米硒具有良好的生物活性和抗氧化能力，能參與人體多種生物化學(xué)反應(yīng)，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)。在皮膚護(hù)理方面，可保護(hù)皮膚細(xì)胞免受氧化損傷，促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)與再生；褐藻多酚-納米硒復(fù)合物整合了兩者優(yōu)勢(shì)，抗氧化能力顯著提升，自由基清除率超95％，并且能夠同步抑制mmp-1酶活性，減少皮膚中膠原蛋白的降解，維持皮膚的彈性和緊致度，延緩皮膚衰老。

19、(2)二氧化鈦本身就是一種常見(jiàn)且高效的物理防曬劑，它能夠通過(guò)反射、散射紫外線的方式，為皮膚提供防曬保護(hù)。其粒徑在10-20nm時(shí)，對(duì)紫外線的散射能力較強(qiáng)，可以有效阻擋uva和uvb對(duì)皮膚的傷害。仿生珍珠蛋白修飾在二氧化鈦表面后，一方面可以提升二氧化鈦在修復(fù)液中的分散性和穩(wěn)定性，使其更均勻地分布，從而更全面地覆蓋皮膚表面，增強(qiáng)防曬效果，另一方面，仿生珍珠蛋白可能與二氧化鈦協(xié)同作用，進(jìn)一步優(yōu)化對(duì)紫外線的反射和散射性能，為皮膚提供更可靠的防曬屏障，降低紫外線對(duì)皮膚造成的光老化、曬傷等風(fēng)險(xiǎn)；仿生珍珠蛋白含有天然光反射因子，這些因子能夠?qū)饩€進(jìn)行特殊的反射和折射，從而產(chǎn)生提亮膚色的效果。當(dāng)仿生珍珠蛋白修飾在二氧化鈦表面后，二者結(jié)合可以在皮膚表面形成一層具有特殊光學(xué)效果的薄膜。這層薄膜不僅能夠反射紫外線，還能對(duì)可見(jiàn)光進(jìn)行反射和散射，使皮膚看起來(lái)更加明亮、有光澤，改善皮膚暗沉的狀態(tài)，達(dá)到提亮膚色的目的。

20、(3)采用超速離心-尺寸排阻色譜聯(lián)用技術(shù)分離純化外泌體，尤其是100,000g離心120分鐘的超速離心條件，能夠有效地去除雜質(zhì)，得到粒徑80-150nm、純度大于98％的高純度外泌體。這些外泌體富含mirna-21、tgf-β等再生因子，它們可以直接激活成纖維細(xì)胞的膠原合成，修復(fù)光老化損傷。外泌體作為細(xì)胞間通訊的重要介質(zhì)，能夠?qū)⑵渲械纳锘钚苑肿觽鬟f給皮膚細(xì)胞，促進(jìn)細(xì)胞的修復(fù)和再生過(guò)程，恢復(fù)皮膚的彈性和光澤。高純度的外泌體保證了其生物活性和功能的有效發(fā)揮，為美容美白修復(fù)液提供了關(guān)鍵的修復(fù)成分。

21、(4)將mefp-5基因插入畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行發(fā)酵，利用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)、易于調(diào)控的優(yōu)點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了mefp-5的大量生產(chǎn)，發(fā)酵產(chǎn)率達(dá)2.8g/l，并且經(jīng)hplc純化至純度大于99％，保證了mefp-5的質(zhì)量和純度；在肽鏈c端連接序列為yhknme的黑色素靶向肽后，mefp-5能夠憑借該靶向肽與黑色素細(xì)胞膜受體(mc1r)特異性結(jié)合，增強(qiáng)對(duì)黑色素細(xì)胞的親和力，其結(jié)合常數(shù)kd＝1.2nm。這種靶向作用使得mefp-5能夠精準(zhǔn)地作用于黑色素細(xì)胞，抑制酪氨酸酶活性，從而阻斷黑色素的合成和傳遞通路，減少黑色素的產(chǎn)生，實(shí)現(xiàn)美白效果。與未修飾的mefp-5相比，連接黑色素靶向肽后的mefp-5美白功效更顯著，且能夠減少對(duì)其他細(xì)胞的不必要影響，提高了美白作用的特異性和有效性。

22、(5)外泌體促進(jìn)表皮更新，mefp-5抑制黑色素生成，褐藻多酚-納米硒復(fù)合物抗氧化并減少膠原降解，共同實(shí)現(xiàn)“修復(fù)+美白”的雙重靶向功能；以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20％的溫敏型泊洛沙姆407為基材，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的對(duì)羥基偶氮苯，采用薄膜分散法在40℃下包封于大豆磷脂/膽固醇脂質(zhì)體中，包封率大于85％，制備出具有uv觸發(fā)釋放功能的響應(yīng)型凝膠基質(zhì)。溫敏型泊洛沙姆407可以使凝膠基質(zhì)在不同溫度下具有不同的物理狀態(tài)，有助于活性成分的包裹和釋放調(diào)控；對(duì)羥基偶氮苯作為光敏劑，在uv照射下發(fā)生結(jié)構(gòu)變化，從而觸發(fā)脂質(zhì)體釋放活性成分。大豆磷脂/膽固醇脂質(zhì)體具有良好的生物相容性，能夠有效地包裹活性成分，提高其穩(wěn)定性和靶向性。

23、(6)本發(fā)明采用酵母表達(dá)系統(tǒng)替代海洋生物提取，降低成本，符合可持續(xù)發(fā)展，通過(guò)基因修飾肽與智能載體實(shí)現(xiàn)“細(xì)胞級(jí)”美白，避免傳統(tǒng)成分的泛用性副作用，可用于日?？构饫稀⑨t(yī)美術(shù)后修復(fù)、色素沉著疾病輔助治療，適用范圍廣。

24、(7)經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，本發(fā)明的美容美白修復(fù)液在各項(xiàng)性能檢測(cè)中展現(xiàn)出了卓越的功效。

25、綜上所述，本發(fā)明的美容美白修復(fù)液在美白、抗衰修復(fù)方面表現(xiàn)優(yōu)異，通過(guò)獨(dú)特配方和成分協(xié)同作用，能切實(shí)滿(mǎn)足人們對(duì)皮膚美容和修復(fù)的需求，在化妝品市場(chǎng)具有極大的應(yīng)用價(jià)值和廣闊的發(fā)展前景。由此，解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在效果不佳、安全性差等問(wèn)題。