一種通過靶向prmt5抑制骨肉瘤生長的組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及骨肉瘤抑制研究及技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種通過祀向PRMT5抑制骨肉 瘤生長的組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 骨肉瘤是骨骼系統(tǒng)主要的惡性腫瘤之一，W浸潤性生長破壞周圍正常組織，W早 期即發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移為特點，其臨床預(yù)后差，給社會及家庭造成沉重的經(jīng)濟和精神負(fù)擔(dān)。目前 臨床上主要采用手術(shù)切除聯(lián)合新輔助化療方法進行綜合治療，使得骨肉瘤患者的5年生存 率從20%提高到了65-70%。然而，在過去的30年，骨肉瘤的復(fù)發(fā)率及轉(zhuǎn)移性骨肉瘤的生存 率并沒有明顯改變，尤其是對于那些初診時就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者，5年的生存率仍然只有 約20%。另外，臨床高劑量化療藥物如甲氨蝶嶺、阿霉素、順銷等使用具有較大的副作用[1、 2]。運些現(xiàn)象皆表示現(xiàn)階段骨肉瘤的治療已遇到瓶頸，傳統(tǒng)意義上對骨肉瘤發(fā)病機制的探 究也面臨著一定的挑戰(zhàn)。
[0003] 專利CN200610088827.8中公開了白血病患者骨髓細胞中PRms蛋白質(zhì)精氨酸甲基 轉(zhuǎn)移酶5的表達水平顯著高于正常骨髓細胞，因此可W將PRMT5作為白血病標(biāo)志物，還提供 了抑制PRMT5基因表達的小干擾RNA，通過小干擾RNA沉默PRMS基因，可W抑制PRMS基因缺 失細胞的增殖，表明PRMT5基因可W作為治療白血病及腫瘤的藥物祀標(biāo)。PRms即蛋白質(zhì)精 氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶5,屬于II型PRMTs,它是II型中最早被鑒定的成員，位于人類染色體 Hqll.2。最近的研究也表明，PRMT5在許多人類實體瘤如肺癌、卵巢癌、結(jié)腸直腸癌、乳腺 癌、黑色素瘤、白血病或淋己瘤及惡性膠質(zhì)瘤中呈高表達，且其高表達水平直接與腫瘤的進 程及預(yù)后差密切相關(guān)。然而，與W上腫瘤相比，骨肉瘤的發(fā)病率明顯較低，且存在臨床組織 樣品收集困難等問題，使得Piarrs是否參與骨肉瘤的發(fā)病過程目前尚未有研究報道。在骨肉 瘤細胞系U20S中，PRirrs被發(fā)現(xiàn)與SNAIL及AJUBA蛋白相互作用，進而影響其細胞定位[3 ];然 后PRirrs在骨肉瘤組織中的表達情況及其對骨肉瘤細胞生長的影響仍不清楚。近年來，表觀 遺傳調(diào)控酶在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用已受到廣泛關(guān)注，結(jié)合我們前期對PMT5蛋白的研究， 探討WPiarrs作為骨肉瘤的臨床預(yù)后生物標(biāo)志物甚至祀向治療具有重要意義。
[0004] 化p90(熱休克蛋白90)是真核細胞中最豐富、最活躍的伴侶蛋白之一，通過保證蛋 白質(zhì)的正確折疊W及防止蛋白的非特異性聚集，對維持細胞的正?；钚灾陵P(guān)重要。Hsp90的 祀蛋白中，超過50個祀蛋白廣泛參與細胞增殖、分化和調(diào)亡[4]，與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)。 Hsp90的抑制劑17-AAGQ7-丙締胺-17-去甲氧格爾德霉素)是一種苯釀安莎霉素類抗生素 的衍生物，通過結(jié)合改變化p90的分子伴侶功能，從而促進眾多腫瘤細胞增殖和存活相關(guān)的 蛋白發(fā)生泛素化降解，具有顯著的抗腫瘤活性，對正常細胞的毒性很小，在抗骨肉瘤的治療 已經(jīng)進臨床試驗階段[5、6、7L17-AAG抑制骨肉瘤細胞生長的IC40是0.4咖(藥物處理48小 時）[6]，1期臨床結(jié)果提示17-446的最大藥物耐受劑量是27〇111曰/111 2，增加藥物濃度增加了一 些副作用的出現(xiàn)，如肝臟天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶升高等，提示該藥與其他合適的藥物聯(lián)合使用可 能會一方面增加療效，一方面減少17-AAG的藥物用量，減少副作用[5]。
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，我們首次發(fā)現(xiàn)，表觀遺傳酶PRMT5在骨肉瘤組織及細胞的表 達水平特異升高，通過細胞實驗證實PRMT5和化的0在分子水平上協(xié)同發(fā)揮作用，通過泛素 化降解PRMT5來實現(xiàn)靴向PRMT5抑制骨肉瘤Saos-2細胞的生長，并結(jié)合Hsp90的抑制劑共同 發(fā)揮抑制骨肉瘤細胞生長的作用，因此提出一種通過靴向PRMT5抑制骨肉瘤生長的組合物 及其制備方法；該組合物通過PRMT5的抑制劑EPZ015666結(jié)合Hsp90的抑制劑17-AAG協(xié)同抑 制骨肉瘤細胞的生長，同時在分子水平掲示這兩種抑制劑協(xié)同作用的機理，為骨肉瘤的防 治提供新思路。
[0014] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
[00巧]一種通過靴向PRMT5抑制骨肉瘤生長的組合物，包括PRMT5抑制劑和Hsp90抑制劑： [0016] 所述PRMT5抑制劑為EPZ015666;所述Hsp90抑制劑為17-AAG。
[0017]作為本發(fā)明的一種優(yōu)選的方案:所述EPZ015666的結(jié)構(gòu)式為：
所述EPZ015666的分子量為383.44; >
[0019] 所述EPZO15666采用美國Se 1 Ieck品牌，產(chǎn)品貨號：S7748的產(chǎn)品，產(chǎn)品規(guī)格:5mg，- 20°C低溫保存。
[0020]作為本發(fā)明的一種優(yōu)選的方案:所述17-AAG的結(jié)構(gòu)式為：
所述17-AAG的分子量為585.69;
[0022] 所述化p90采用美國Se 11 eCk品牌，產(chǎn)品貨號：S1141的產(chǎn)品，產(chǎn)品規(guī)格:25mg，-20°C 低溫保存。
[0023] 作為本發(fā)明的一種優(yōu)選的方案:按摩爾質(zhì)量比計算，EPZ015666:17-AAG為0.5~2: 1;優(yōu)選地，EPZO15666:17-AAG為2:1。
[0024] 一種通過祀向PM^抑制骨肉瘤生長的組合物的制備方法，包括W下步驟：
[0025] 1)將EPZ015666溶解到溶劑中，得到EPZ015666儲備液；
[0026] 2)將17-AAG溶解到溶劑中，得到17-AAG儲備液；
[0027] 3)將步驟1)得到的EPZ015666儲備液和步驟2)得到的17-AAG儲備液混合，得到通 過祀向Piarrs抑制骨肉瘤生長的組合物。
[0028] 優(yōu)選地，所述溶劑為DMSO。
[00巧]優(yōu)選地，步驟1)中，所述lmLEPZ015666儲備液中含EPZ015666的質(zhì)量為1.7~4mg。
[0030] 優(yōu)選地，步驟2)中，所述ImLlT-AAG儲備液中含17-AAG的質(zhì)量為2.7~6mg。
[0031] 優(yōu)選地，得到的通過祀向PRM^抑制骨肉瘤生長的組合物中，EPZ015666與17-AAG 的摩爾質(zhì)量比為0.5~2:1;優(yōu)選地，應(yīng)用前，將組合物用溶劑稀釋至17-AAG的工作濃度為 IOnM~50nM。
[0032] 優(yōu)選地，該組合物可W W溶液的形式使用，也可W將溶劑揮發(fā)后制作成為粉末、W 及納米緩釋組合物添加劑添加到相應(yīng)的載體上。
[0033] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0034] 1、本發(fā)