一種治療糖尿病的復(fù)方金鸛草藥物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種治療糖尿病的復(fù)方金鸛草藥物及其制備方法，屬于民族醫(yī)藥技術(shù) 領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是在全球范圍內(nèi)分布比較廣的流行病，患病人數(shù)呈逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)。糖尿病 已成為繼腫瘤、心血管病之后的第三大嚴(yán)重威脅人們健康的慢性疾病，糖尿病及其并發(fā)癥 給人類健康和社會(huì)發(fā)展帶來(lái)了嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。傳統(tǒng)藥物治療糖尿病具有"多成分、多途徑、多 靶點(diǎn)"等特點(diǎn)，而且副作用低，因此，從傳統(tǒng)藥物中尋找和開(kāi)發(fā)治療糖尿病的藥物具有廣闊 的前景。
[0003] II型糖尿病是我國(guó)中老年人的常見(jiàn)慢性病。我國(guó)肥胖者中有30%患有II型糖尿 病。由于II型糖尿病和肥胖均屬于與生活方式密切相關(guān)的多基因遺傳性疾病，其發(fā)病機(jī)制 尚不十分明確。近來(lái)的研究表明，蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶lB(protein tyrosine phosphatase 1B，PTP1B)可減弱胰島素（insulin)及瘦素（Ieptin)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，引起脂代謝異常，是導(dǎo)致胰 島素抵抗和肥胖的關(guān)鍵環(huán)節(jié)；同時(shí)，實(shí)驗(yàn)證明，敲除了蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB)基因 的小鼠即使在致肥胖飲食條件下也未出現(xiàn)胰島素抵抗和肥胖。由此引起人們對(duì)蛋白質(zhì)酪氨 酸磷酸酶IB(PTPlB)抑制劑的廣泛興趣，蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB)基因成為越來(lái)越引 人注目的靶基因之一。蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化是細(xì)胞代謝、信號(hào)傳導(dǎo)及細(xì)胞周期調(diào)控的重要 調(diào)節(jié)步驟。蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB)屬于蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶家族，該家族40余種磷 酸酶都具有一個(gè)約240個(gè)氨基酸組成的同源序列，位于酶催化活性部位，以跨膜受體樣蛋白 和胞內(nèi)酶形式存在，催化蛋白質(zhì)酪氨酸去磷酸化反應(yīng)。蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB)通過(guò) 對(duì)胰島素受體激酶（insulin receptor kinase，IRK)或其活性片段的磷酸化酪氨酸殘基去 磷酸化作用對(duì)胰島素信號(hào)傳導(dǎo)進(jìn)行負(fù)調(diào)節(jié)。國(guó)外正在篩選蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB) 抑制劑主要有兩類:一類是蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB)的底物類似物一一磷酸酪氨酸 多肽;另一類是芳基磷酸鹽類小分子物質(zhì)，但還正在研發(fā)中，還沒(méi)有用于II型糖尿病的臨床 治療。釩酸鈉雖為蛋白酪氨酸酶(PTP)的有效抑制劑，但其不具有選擇性，也只能用于體外 研究。因此，非肽類、非磷酸鹽類蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB)抑制劑的研究成為這一領(lǐng) 域的熱門。目前篩選蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPIB)抑制劑最有效的策略就是以蛋白質(zhì)酪 氨酸磷酸酶(PTP)的活性部位為靶點(diǎn)，該研究用蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB)的催化結(jié)構(gòu) 域進(jìn)行抑制劑的篩選，以期獲得可用于臨床的、有效的、特異性的抑制劑。本發(fā)明直接針對(duì) 蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB)靶點(diǎn)進(jìn)行復(fù)方藥物提取物的體外藥效篩選。
[0004] 本發(fā)明根據(jù)民間驗(yàn)方使用經(jīng)驗(yàn)，將丘陵老鶴草(Geranium collinum Steph.)和糙 枝金絲桃(Hypericum Scabrum Lnn.)兩種草藥的按特定比例混合使用，并開(kāi)展提取工藝、 純化工藝、成型工藝和體外藥效學(xué)研究，從而確定該復(fù)方藥物的制備方法及用途。
[0005] 這兩種植物主產(chǎn)于我國(guó)新疆，在中亞地區(qū)大量分布，醫(yī)藥用途在《中國(guó)藥典》、《阿 維森納醫(yī)典》均有記載。老鸛草為我國(guó)傳統(tǒng)中藥，中國(guó)藥典收載的品種有三種，主要化學(xué)成 分為鞣質(zhì)、黃酮、有機(jī)酸和揮發(fā)油類;具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、止瀉、抗氧化、抗紫外線 和鎮(zhèn)咳等藥理作用。臨床用于風(fēng)濕痹痛、麻木拘攣、筋骨酸痛、泄瀉痢疾等證。現(xiàn)代研究表 明，老鸛草還有抗腫瘤、降血糖等作用。關(guān)于老鸛草的化學(xué)成分和藥理作用的研究日益受到 國(guó)內(nèi)外科研工作者的重視。丘陵老鶴草(Geranium collinum Steph.ex Willd.)為樾牛兒 苗科(Geraniaceae)老鶴草屬(Geranium)植物，分布于中亞、西亞、中歐以及中國(guó)大陸的新 疆等地，生長(zhǎng)于海拔2200米至3500米的地區(qū)，常生于山地森林草甸、亞高山以及高山，目前 尚未由人工引種栽培。糙枝金絲桃(Hypericum scabrum L·)是藤黃科(Guttiferae)金絲桃 屬(Hypericum L.)植物，又名腺點(diǎn)金絲桃，國(guó)內(nèi)僅分布于新疆阿爾泰，收載于《哈薩克藥志》 (第一卷），全草入藥。據(jù)報(bào)道，糙枝金絲桃富含黃酮類化合物，提取物具有良好的抗氧化活 性，對(duì)1，1_二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基、羥基自由基、超氧自由基有著良好的清除 能力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于，提供一種治療糖尿病的復(fù)方金鸛草藥物及其制備方法，該方 法將丘陵老鸛草與糙枝金絲桃兩種藥材混合，采用乙醇提取、樹(shù)脂純化、濃縮、干燥獲得提 取物，再將提取物與藥用級(jí)輔料淀粉、糊精、甘露醇、羧甲基淀粉鈉混合，制成顆粒、膠囊或 片劑。通過(guò)本發(fā)明所述的方法獲得的復(fù)方金鸛草藥物在體外酶活水平能有效抑制蛋白酪氨 酸磷酸酶IB(PTPlB)，并具有良好抗氧化效果，可作為胰島素增敏劑用于糖尿病治療。該復(fù) 方金鸛草藥物是根據(jù)傳統(tǒng)醫(yī)藥理論，結(jié)合長(zhǎng)期的民間臨床實(shí)踐，采用現(xiàn)代提取分離技術(shù)富 集該復(fù)方藥物中有效成分，并證實(shí)了藥效，為患者提供了方便。
[0007] 本發(fā)明所述的一種治療糖尿病的復(fù)方金鸛草藥物，該藥物各組分按重量份丘陵老 鸛草根50-90份、糙枝金絲桃地上部分10-60份，輔料為淀粉、糊精、甘露醇或羧甲基淀粉鈉 10-50份，經(jīng)過(guò)提取、純化、干燥后獲得的提取物，再將提取物與輔料按常規(guī)方法制備制成顆 粒、膠囊或片劑。
[0008] 所述的治療糖尿病的復(fù)方金鸛草藥物的制備方法，按下列步驟進(jìn)行：
[0009] a、按重量份將干燥的丘陵老鸛草根50-90份和糙枝金絲桃地上部分10-60份粉碎， 用5-30倍體積濃度為30%-80%的乙醇回流提取1-3次，溫度30-90°C，每次提取1-3小時(shí)，合 并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，得到提取液；
[0010] b、將步驟a得到的提取液濾過(guò)，濾液用樹(shù)脂柱為HP-600、AB-8、D101、HPD-300、 〇)601、01-130或1^-38純化，先用1-4倍柱體積的水洗脫，再用3-8倍柱體積的30-90%乙醇 洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮、干燥、粉碎，得到提取物；
[0011] c、將步驟b得到的提取物與醫(yī)用級(jí)輔料為淀粉、糊精、甘露醇或羧甲基淀粉鈉10-50份混勻，按常規(guī)制藥方法制成顆粒、膠囊或片劑。
[0012 ]本發(fā)明所述的一種治療糖尿病的復(fù)方金鸛草藥物及其制備方法，通過(guò)對(duì)丘陵老鸛 草(Geranium collinum Steph.)和糖枝金絲桃(Hypericum Scabrum Lnn.)按不同比例混 合，采用不同濃度乙醇提取、樹(shù)脂純化，最大程度提取和富集有效成分，并與藥用級(jí)輔料混 合，制成顆粒、片劑和膠囊。經(jīng)對(duì)復(fù)方金鸛草藥物進(jìn)行了抗糖尿病體外藥效學(xué)研究，其結(jié)果 表明：本發(fā)明提供的復(fù)方金鸛草藥物在體外酶活水平具有有效抑制蛋白酪氨酸磷酸酶IB (PTPlB)和良好抗氧化作用，可作為抗糖尿病藥物的用途。
[0013] 通過(guò)本發(fā)明所述的治療糖尿病的復(fù)方藥物及其制備方法獲得的提取物呈棕褐色 粉末，顏色均一，粘性低，吸濕性小，易于制成顆粒、膠囊或片劑。經(jīng)藥效學(xué)試驗(yàn)證明，該復(fù)方 金鸛草藥物能夠在體外酶活水平顯著有效的抑制蛋白酪氨酸磷酸酶IB(PTPlB)并具有良好 抗氧化效果。在細(xì)胞水平開(kāi)展糖代謝和蛋白水平檢測(cè)，具有顯著降糖效果，并且具有增強(qiáng)胰 島素的作用，其作用機(jī)理是激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)信號(hào)通路，經(jīng)調(diào)控胰島素信號(hào) 途徑的關(guān)鍵分子胰島素受體底物-l(IRS-l)、蛋白激酶B(AKT)來(lái)克服胰島素抗性，從而在胰 島素抗性細(xì)胞中增加葡萄糖攝取，達(dá)到降糖的目的。
【附圖說(shuō)明】
[0014] 圖1為本發(fā)明葡萄糖消耗實(shí)驗(yàn)(人肝癌細(xì)胞，HepG2)圖；
[0015] 圖2為本發(fā)明葡萄糖消耗實(shí)驗(yàn)(大鼠成肌細(xì)胞，L6)圖；
[0016] 圖3為本發(fā)明葡萄糖攝取實(shí)驗(yàn)(小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，3T3L1)圖；
[0017] 圖4為本發(fā)明金鸛草復(fù)方提取物作用人肝癌細(xì)胞(HepG2)細(xì)胞后腺嘌呤核苷三磷 酸(ATP)水平變化圖；
[0018] 圖5為本發(fā)明金鸛草復(fù)方提取物作用人肝癌細(xì)胞(HepG2)細(xì)胞后蛋白水平變化圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1(制備顆粒劑，以制備1000 g為基數(shù)）
[0020]取干燥的丘陵老鸛草根和糙枝金絲桃地上部分，粉碎，加入5倍體積的濃度為30 % 乙醇加熱回流提取2次，每次提取2小時(shí)，溫度30°C，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至無(wú)醇 味，得到提取液；
[0021] 將提取液濾過(guò)，濾液用HP-600樹(shù)脂柱純化，先用1倍柱體積的水洗脫，再用3倍柱體 積的濃度為30 %乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物；
[0022] 再將提取物與輔料充分混勻，按常規(guī)方法制成顆粒劑，其中各組分見(jiàn)表1;
[0023] 表 1
[0025] 實(shí)施例2(制備顆粒劑以制備1000 g為基數(shù)）
[0026] 取干燥的丘陵老鸛草根和糙枝金絲桃地上部分，粉碎，加入10倍體積的濃度為 50%乙醇加熱回流提取2次，每次提取2小時(shí)，提取溫度70°C，合并提取液，濾過(guò)，濾液減壓濃 縮至無(wú)醇味，得到提取液；
[0027]將提取液濾過(guò)，濾液用AB-8樹(shù)脂柱純化，先用1倍柱體積的水洗脫，再用3倍柱體積 的濃度為70 %乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物；
[0028] 再將提取