小檗堿在制備克服慢性粒細胞白血病耐藥性藥物或抗慢性粒細胞白血病藥物增敏劑中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種小檗堿在制備克服慢性粒細胞白血病耐 藥性藥物或抗慢性粒細胞白血病藥物增敏劑中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 慢性粒細胞白血病(Chronic Myeloid Leukemia,CML)是造血干細胞異常轉(zhuǎn)化的 髓系惡性克隆性疾病。其典型的遺傳學(xué)特征為t (9; 22) (q34; ql 1)易位，并由此產(chǎn)生BCR/ABL 融合基因。全球CML占所有成人白血病的15~20 %，發(fā)病率在我國列于白血病的第三位。
[0003] 在過去的20多年中，CML的疾病進展率和死亡率居高不下。近年來隨著分子靶向治 療藥物酪氨酸激酶抑制劑(Tyrosine kinase inhibitor，TKI)伊馬替尼的問世，使得CML的 治療發(fā)生了革命性的進步，5年無事件生存率(EFS)和總生存率(0S)分別為83%和89%。然 而，酪氨酸激酶抑制劑的耐藥性成為了慢性粒細胞白血病治療面臨的主要問題。為了解決 這一問題，先后研發(fā)出幾個新的ΤΚΙ，如〇8831：；[11；[13、附101：；[11；[13和031111861'1：；[13，但都有一定的 缺陷。
[0004] CML對伊馬替尼的耐藥現(xiàn)象于2000年首次報道，由于bcr-abl融合蛋白中abl的 TKIs結(jié)合區(qū)域發(fā)生突變，T315I是第一個被檢測到的abl突變類型。此外還有bcr-abl基因擴 增導(dǎo)致bcr-abl融合蛋白過表達，這兩者屬于bcr-abl依賴的耐藥(bcr-ab-dependent)。還 有一類屬于bcr-abl非依賴的耐藥(bcr-abl-independent )，如藥物外流栗的上調(diào)及藥物內(nèi) 流栗的下調(diào)，過表達Lyn (-個Sr c激酶)等。在CML耐藥病例中，20 %是bcr-abl非依賴性的耐 藥，由于它通常與bcr-abl下游信號通路上的癌基因有關(guān)，因此近年來日益收到關(guān)注。
[0005] BCR-ABL突變賦予了BCR-ABL對酪氨酸激酶抑制劑較高的抵抗性，還可以促進CML 從CP越過加速期(Accelerated Phase，AP)到BC的發(fā)展。突變改變了BCR-ABL蛋白的序列，阻 止了 BCR-ABL激酶抑制劑結(jié)合，進而降低了對激酶抑制劑的敏感性。有報道顯示，40~90 % 的伊馬替尼耐藥的病人出現(xiàn)了BCR-ABL的突變。大多數(shù)的BCR-ABL的突變出現(xiàn)在急變期。目 前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)超過55種類型的BCR-ABL突變影響伊馬替尼的結(jié)合。在這些BCR-ABL中ABL激酶 區(qū)域突變中，T315I突變占具首位。
[0006] 純天然植物中潛在著豐富的抗腫瘤資源寶庫，例如小檗堿。小檗堿(Berberine， BB)又名黃連素，來源于毛莨科植物黃連的根狀莖、小檗堿科植物日本小檗堿Berbergii DC 根莖、蕓香科植物黃柏樹皮和果實等。小檗堿屬于季銨型異喹啉生物堿，中藥黃連素中的主 要生物堿，是中國傳統(tǒng)中廣泛使用的處方藥用植物。在過去3000多年，小檗堿主要作為中藥 治療消化道疾病，最新的研究進展表明，小檗堿可通過體外和體內(nèi)不同的機制來發(fā)揮其抗 腫瘤的活性。小檗堿在腫瘤細胞、微生物和病毒的增殖和繁殖過程中能夠顯示一定的抑制 作用，例如在肝癌、食管癌、heliobacter螺旋桿菌、乙肝病毒等。同時也能調(diào)控某些癌基因 和腫瘤相關(guān)基因的表達以及DNA或RNA的轉(zhuǎn)錄。此外，小檗堿是一種廣譜酶抑制劑，它影響N-乙酰轉(zhuǎn)移酶，環(huán)氧合酶-2,拓撲異構(gòu)酶的活性，及其基因或蛋白的表達。更重要的是，對于腫 瘤的增殖和轉(zhuǎn)移，聯(lián)合用藥更有利于藥物發(fā)揮其抑制作用。
[0007] 隨著對小檗堿及其衍生物的深入研究發(fā)現(xiàn)，小檗堿對多種實體瘤均有治療作用， 其中包括肝癌、結(jié)腸癌、肺癌、食管癌、腦腫瘤、膀胱癌等等。也有研究報道小檗堿能抑制血 液病中白血病細胞的生長和增殖，如通過下調(diào)白血病人早幼粒細胞HL-60的核仁磷酸蛋白 B23和端粒酶活性誘導(dǎo)其凋亡。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，本發(fā)明的目的在于提供一種小檗堿在制備 克服慢性粒細胞白血病耐藥性藥物或抗慢性粒細胞白血病藥物增敏劑中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明的目的通過下述方案實現(xiàn)：
[0010] -種小檗堿在制備克服慢性粒細胞白血病耐藥性藥物或抗慢性粒細胞白血病藥 物增敏劑中的應(yīng)用；
[0011] 所述的小檗堿通過促進BCR-ABL融合蛋白泛素化降解進而克服慢性粒細胞白血病 耐藥性或增加抗慢性粒細胞白血病藥物對慢性粒細胞白血病的敏感性；
[0012]所述的慢性粒細胞白血病耐藥性優(yōu)選為慢性粒細胞白血病細胞對伊馬替尼的耐 藥性；
[0013]所述的克服慢性粒細胞白血病耐藥性藥物優(yōu)選為慢性粒細胞白血病耐藥性逆轉(zhuǎn) 劑；
[0014] 一種克服慢性粒細胞白血病耐藥性藥物或抗慢性粒細胞白血病藥物增敏劑，包含 小檗堿或其藥學(xué)上可接受的鹽，以及小檗堿或其藥學(xué)上可接受的鹽的溶劑化合物、對映異 構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或其任意比例的混合物，包括外消旋混合物；
[0015] 所述的克服慢性粒細胞白血病耐藥性藥物或抗慢性粒細胞白血病藥物增敏劑還 可以含有一種或者是至少兩種藥學(xué)上可以接受的載體；
[0016] 所述的載體優(yōu)選為緩釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、 吸附載體、表面活性劑或潤滑劑等；
[0017] 所述的克服慢性粒細胞白血病耐藥性藥物或抗慢性粒細胞白血病藥物增敏劑可 以進一步制成注射劑、片劑、粒劑或膠囊等多種形式，各種劑型的藥物可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的 常規(guī)方法制備；
[0018] 上述小檗堿在制備促進BCR-ABL融合蛋白泛素化降解產(chǎn)品中的應(yīng)用；
[0019] 本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點及效果：
[0020] 本發(fā)明是通過對慢性粒細胞白血病bcr-abl融合蛋白的泛素化降解機制而產(chǎn)生抗 白血病作用，對耐藥和非耐藥的慢性粒細胞白血病均有效。為慢性粒細胞白血病耐藥治療 需找了一種可能的治療方案。為治療和克服慢性粒細胞白血病耐藥，找到新的視角。同時， 也為傳統(tǒng)的中藥小檗堿找到了新的靶點。
【附圖說明】
[0021] 圖1是小檗堿和/或伊馬替尼對BaF3-P210細胞相對活力影響的結(jié)果分析圖；其中， A:小檗堿處理BaF3-P210細胞48h;B:小檗堿處理BaF3-P210細胞72h;C:伊馬替尼單獨處理 與小檗堿+伊馬替尼聯(lián)合處理BaF3-P210細胞48h。
[0022] 圖2是小檗堿和/或伊馬替尼對BaF3-P210-T315I細胞相對活力影響的結(jié)果分析 圖；其中，A:小檗堿或伊馬替尼處理BaF3-P210-T315I細胞48h;B:小檗堿或伊馬替尼處理 BaF3-P210-T315I細胞72h;C:小檗堿和伊馬替尼聯(lián)合處理BaF3-P210-T315I 48h。
[0023] 圖3是小檗堿或伊馬替尼處理SF02細胞48h后對SF02細胞相對活力影響的結(jié)果分 析圖。
[0024]圖4是小檗堿對K562細胞相對活力影響的結(jié)果分析圖；其中，A:小檗堿處理K562細 胞48h; B:小檗堿處理K562細胞72h; C:小檗堿和伊馬替尼聯(lián)合處理K562細胞48h。
[0025] 圖5是細胞集落形成法檢測小檗堿對BaF3-P210-T315I細胞惡性程度影響的結(jié)果 分析圖；其中，A:集落數(shù)統(tǒng)計分析(Mean土SD.n = 3) 集落形態(tài);與對照相比，P〈0.05。
[0026] 圖6是細胞集落形成法檢測小檗堿對BaF3_P210細胞惡性程度影響的結(jié)果分析圖； 其中，A:集落數(shù)統(tǒng)計分析(Mean土SD.n = 3) 集落形態(tài);與對照相比，P〈0.05。
[0027] 圖7是Real time PCR檢測小檗堿處理后的細胞中BCR-ABL mRNA表達水平的結(jié)果 分析圖；其中，A: BaF3-P210-T3151細胞BCR-ABL mRNA表達水平；B: BaF3-P210細胞BCR-ABL mRNA表達水平;C: K562細胞BCR-ABL mRNA表達水平。
[0028] 圖8是小檗堿處理BaF3-P210-T3151細胞后，BCR-ABL蛋白表達水平變化的結(jié)果分 析圖。
[0029]圖9是小檗堿處理BaF3-P210細胞后，BCR-ABL蛋白表達水平變化的結(jié)果分析圖。 [0030]圖10是小檗堿處理細胞后BCR-ABL泛素化水平的結(jié)果分析圖；其中，A:小檗堿處理 BaF3-P210細胞后的蛋白泛素化水平;B: K562細胞經(jīng)過小檗堿處理后BCR-ABL蛋白泛素化水 平;C: BaF3-P210細胞經(jīng)過小檗堿處理后的BCR-ABL蛋白泛素化水平;D: BaF3-P210-T315I細 胞經(jīng)過小檗堿處理后的