一種抗腫瘤藥物及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗腫瘤藥物及其應(yīng)用。具體地，本發(fā)明公開了一種能夠降低環(huán)巴胺致畸風(fēng)險的藥物組合物，所述藥物組合物中含有環(huán)巴胺以及龍膽苦苷、落干酸和苦參堿中的一種或多種。本發(fā)明的藥物組合物具有顯著地抑制腫瘤細胞生長的活性，極大的減少了環(huán)巴胺的用量。
【專利說明】
-種抗腫瘤藥物及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種抗腫瘤藥物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 環(huán)己胺（切dopamine)又稱環(huán)把明、去氧芥芬胺，是從襲蘆屬植物內(nèi)分離得到 的一種異醬體類生物堿，主要存在百合科植物中北美山襲蘆（Veratrum cali化rni州m)、 印第安鹿食草（Cornlily)及毛葉襲蘆（Veratrum grandiflorum)、伊貝（Rritillaria pallidiflora Sc虹enk)四種植物中，能與Hedgehog信號通路中的Smoothened(Smo)蛋白 結(jié)合，從而抑制該蛋白活性。因其致崎作用而于20世紀60年代被發(fā)現(xiàn)，但九十年代W后 的研究表明，環(huán)己胺是一種hedgehog信號通路抑制劑，已經(jīng)在在果蛹體中得到證實，由于 hedgehog信號通路的突變與多種腫瘤的發(fā)病有關(guān)聯(lián)，最近研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)己胺在成體中具有 抗腫瘤作用，且在膜腺癌、膽管癌、卵巢癌、肝癌等的體內(nèi)或體外實驗中均得到證實。但是由 于環(huán)己胺存在致崎風(fēng)險，限制了其在藥學(xué)上的應(yīng)用，如何避免環(huán)己胺潛在的風(fēng)險是開發(fā)環(huán) 己胺類似藥物的所面臨的難題。
[0003] 龍膽苦巧秦巧中的主要活性成分，可W從秦巧等藥材提取得到，國內(nèi)外有關(guān)龍膽 苦巧藥效學(xué)方面研究較多，主要為保肝利膽方面報道，藥理毒理及臨床試驗研究表明龍膽 苦巧安全有效。龍膽苦巧能增加膽汁中膽固醇和膽紅素的排泄量，能提高化+、K+-ATP酶的 活性。能明顯降低ALT、AST和L畑，對肝組織病理損傷有一定改善作用。龍膽苦巧還可抑制 血清中TNF的產(chǎn)生，表明龍膽苦巧通過抑制TNF，而抑制肝炎。主要研究成果簡列如下：1、 龍膽苦巧對化學(xué)和免疫致小鼠肝損傷的抑制作用，龍膽苦巧對CCI4和脂多糖/芽抱桿菌致 小鼠鼠肝炎的影響。小鼠每天一次腹腔注射龍膽苦巧（30~60mg/Kg ·(!)，能抑制口服CCI4 及靜脈注射芽抱桿菌引起的轉(zhuǎn)氨酶的升高。2、龍膽苦巧對大鼠肝細胞實驗性保護作用的病 理觀察，龍膽苦巧在濃度為1. 4X 10 1~1. 4X 10 2mg/ml時，能抗CCI4致肝損傷，即保肝作 用，并呈良好的量效關(guān)系。3、增加大鼠膽汁分泌，促進膽囊收縮。4龍膽苦巧對化學(xué)和免疫 性誘導(dǎo)的肝損傷的抑制作用，采用兩種藥理模型，即CCI4和BCG/LI^誘導(dǎo)的肝炎。在造模 型之前，連續(xù)5天給予小鼠龍膽苦巧（30~60mg/kg. d)，明顯抑制出CCI4和誘導(dǎo)的血清中 轉(zhuǎn)氨酶的升高。在另一組實驗中，小鼠在灌注BCG7天給予LPS，血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn) 氨酶活力增強，在LI^給藥前，腹腔注射龍膽苦巧化Omg/kg. d)連續(xù)5天，血清中谷草轉(zhuǎn)氨 酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶水平在4~化期間明顯降低，給予龍膽苦巧后，明顯抑制血清中TNF的產(chǎn) 生，表明龍膽苦巧通過抑制TNF，而抑制肝炎。5龍膽苦巧保肝作用，動物試驗研究表明龍膽 苦巧能明顯促進豚鼠肝組織的修復(fù)，對豚鼠同種免疫性肝損傷具有明顯的保護作用。龍膽 苦巧給藥后，膽紅素分泌量顯著增高，表明具有明顯利膽作用。龍膽苦巧能明顯降低模型小 鼠的ALT、AST,且呈良好的量效關(guān)系，還能增加肝組織GSH-Px的活力；大鼠口服龍膽苦巧后 龍膽苦巧能增加膽汁中總膽紅素、游離膽紅素的濃度。秦巧藥材中的龍膽苦巧具有保肝利 膽抗炎的作用，幾乎無毒，具有非常巨大的藥用潛力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種能夠降低環(huán)己胺致崎風(fēng)險的藥物組合物。 陽〇化]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其中，所述藥物組合物中含有環(huán) 己胺。
[0006] 優(yōu)選地，所述組合物中還含有選自下組的一種或多種化合物：龍膽苦巧、落干酸和 苦參堿。
[0007] 進一步地，所述組合物中，至少含有環(huán)己胺和龍膽苦巧，并且所述環(huán)己胺和所述龍 膽苦巧的摩爾數(shù)比為1 : 0.3-0. 7。
[000引更優(yōu)選地，所述環(huán)己胺和龍膽苦巧的摩爾數(shù)比為1 : 0.4-0. 6。
[0009] 最優(yōu)選地，所述環(huán)己胺和龍膽苦巧的摩爾數(shù)比為1 : 0.5。
[0010] 進一步地，所述組合物中，至少含有環(huán)己胺、落干酸和苦參堿。
[0011] 優(yōu)選地，所述組合物中，所述環(huán)己胺、所述落干酸和所述苦參堿的摩爾數(shù)比為 1 : 0. 4-0. 6 : 0. 1-0. 3。
[0012] 更優(yōu)選地，所述環(huán)己胺、所述落干酸和所述苦參堿的摩爾數(shù)比為1 : 0.5 : 0.2。
[0013] 進一步地，所述組合物中，至少含有環(huán)己胺、龍膽苦巧、落干酸和苦參堿。
[0014] 優(yōu)選地，所述環(huán)己胺、所述龍膽苦巧、所述落干酸和所述苦參堿的摩爾數(shù)比為 1 : 0. 5 : 0. 5 : 0. 2。
[0015] 在本發(fā)明的另一較佳實施方式中，環(huán)己胺的結(jié)構(gòu)式如下式所示：
[0016]
[0017] 在本發(fā)明的另一較佳實施方式中，龍膽苦巧的結(jié)構(gòu)式如下式所示：
[0018]
[0019] 在本發(fā)明的另一較佳實施方式中，落干酸的結(jié)構(gòu)式如下式所示：
[0020]
[0021] 在本發(fā)明的另一較佳實施方式中，苦參堿的結(jié)構(gòu)式如下式所示：
[0022]
[002引技術(shù)效果
[0024] 本發(fā)明的藥物組合物具有顯著地抑制腫瘤細胞生長的活性，極大的減少了環(huán)己胺 的用量。
[00巧]W下對本發(fā)明的構(gòu)思及產(chǎn)生的技術(shù)效果作進一步說明，W充分地了解本發(fā)明的目 的、特征和效果。
【具體實施方式】
[0026] 實驗材料
[0027] 胃癌細胞株BCG-823、卵巢癌細胞株CA0V3,可W購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研 究院細胞資源中屯、，采用常規(guī)方法進行培養(yǎng)。
[0028] 化合物環(huán)己胺、龍膽苦巧、落干酸和苦參堿可W購自上海研域生物科技有限公 司。
[0029] 試劑：四甲基偶氮挫藍（MTT)購自美國Sigma公司；其他化學(xué)試劑購自國藥集團 化學(xué)試劑有限公司。
[0030] 統(tǒng)計方法
[0031] 檢驗濃度-抑制率曲線，采用Logistic曲線回歸法，F(xiàn)檢驗；檢驗藥物對細胞集落 形成率的作用，采用U檢驗。
[0032] 實施例1癌細胞生長抑制活性檢測
[0033] Μ?Τ顯微培養(yǎng)實驗：W兩倍稀釋法配制含待測藥物組合物的培養(yǎng)基，用含藥培養(yǎng) 基解育細胞，分別在培養(yǎng)24小時和48小時時進行MTT快速比色，在酶標儀上W 490nm的波 長測定吸光度（A)值。 W34] 抑制率=[(對照組A值-實驗組A值）/對照組A值]X 100 %。
[0035] W濃度-抑制率曲線求出回歸方程，得出50%抑制濃度（IC50)、10%抑制濃度 (IC10)、最大抑制率或最大抑制濃度。
[0036] 用MTT比色法檢測各組藥物組合物對BCG-823XA0V3的作用，對BCG-823和CA0V3 作用時間均為24小時，從濃度-抑制率曲線發(fā)現(xiàn)，實驗發(fā)現(xiàn)各組合物對癌細胞的抑制率均 呈明顯的劑量依賴性，藥物的濃度-抑制率曲線呈"S"型，符合Logistic曲線，相關(guān)指數(shù) (R2)大于0. 8, IC50值見表1，IC50 W組合物中所含的環(huán)己胺的量計。
[0037] 表1藥物組合物對BCG-823和CA0V3作用的IC50 ( μ M/L)
[0038]
陽〇3引 注:Α組組合物，環(huán)己胺：龍膽苦巧摩爾比為1 : 0. 5 ; W40] Β組組合物，環(huán)己胺：落干酸：苦參堿摩爾比為1 : 0. 5 : 0. 2 ; 陽〇W C組組合物，環(huán)己胺：落干酸摩爾比為1 : 0. 5 ; 陽0創(chuàng) D組組合物，環(huán)己胺：苦參堿摩爾比為1 : 0. 5 ; 陽0創(chuàng) E組組合物，環(huán)己胺：龍膽苦巧摩爾比為1 : 0. 2。
[0044] F組組合物，環(huán)己胺：龍膽苦巧：落干酸：苦參堿摩爾比為1 : 05 : 05 : 02。
[0045] 對照組中分別使用單一組分的環(huán)己胺、龍膽苦巧、落干酸、苦參堿進行檢測，測得 環(huán)己胺對BCG-823的IC50為52. 7 μM/^、對 CA0V3的IC50為74. 3 μΜ/L。龍膽苦巧、落干 酸、苦參堿對BCG-823和CA0V3的IC50均大于100 μΜ/L。
[0046] 實施例2集落形成實驗
[0047] 向25cm2培養(yǎng)瓶中分別加入約200個BCG-823或CA0V3的細胞懸液，顯微鏡計數(shù) 后，再分別加入不同的含藥培養(yǎng)基各5ml，培養(yǎng)基中環(huán)己胺終濃度為10 μΜ/1，培養(yǎng)一周后， 計數(shù)集落的個數(shù)。 柳4引集落形成率R =(集落數(shù)/種入的細胞數(shù)）X 100%。 W例檢測結(jié)果如表2所示。
[0050] 表2藥物組合物對BCG-823和CA0V3集落形成的影響
[0051]
[0052] 不加任何藥物的對照組，BCG-823細胞的R值為84. 6 % ;CA0V3細胞的R值為 62. 8%。
[0053] 從上述結(jié)果可W看出，本發(fā)明的藥物組合物，能夠顯著抑制腫瘤細胞的集落形成。
[0054] W上詳細描述了本發(fā)明的較佳具體實施例。應(yīng)當理解，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員無 需創(chuàng)造性勞動就可W根據(jù)本發(fā)明的構(gòu)思作出諸多修改和變化。因此，凡本技術(shù)領(lǐng)域中技術(shù) 人員依本發(fā)明的構(gòu)思在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上通過邏輯分析、推理或者有限的實驗可W得到的 技術(shù)方案，皆應(yīng)在由權(quán)利要求書所確定的保護范圍內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物中含有環(huán)巴胺。2. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物中還含有選自下組的一 種或多種化合物：龍膽苦苷、落干酸和苦參堿。3. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物中，至少含有環(huán)巴胺和龍 膽苦苷，并且所述環(huán)巴胺和所述龍膽苦苷的摩爾數(shù)比為1 : 0.3-0. 7。4. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述環(huán)巴胺和龍膽苦苷的摩爾數(shù)比 為 1 : 0· 4-0. 6。5. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述環(huán)巴胺和龍膽苦苷的摩爾數(shù)比 為 1 : 0· 5〇6. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物中，至少含有環(huán)巴胺、落 干酸和苦參堿。7. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物中，所述環(huán)巴胺、所述落 干酸和所述苦參堿的摩爾數(shù)比為1 : 0.4-0. 6 : 0.1-0. 3。8. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述環(huán)巴胺、所述落干酸和所述苦參 堿的摩爾數(shù)比為1 : 〇. 5 : 0. 2。9. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物中，至少含有環(huán)巴胺、龍 膽苦苷、落干酸和苦參堿。10. 如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述環(huán)巴胺、所述龍膽苦苷、所述落 干酸和所述苦參堿的摩爾數(shù)比為1 : 0.5 : 0.5 : 0.2。
【文檔編號】A61K31/7048GK105878254SQ201410489454
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年9月13日
【發(fā)明人】楊鐘華
【申請人】瑞安市普羅生物科技有限公司