一種治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療視網(wǎng)膜病變及弱視的維藥復(fù)方藥物及其制備方法，該復(fù)方制劑是由小茴香，蘆薈，蒺藜，玫瑰花瓣，訶子肉，薰魯香、盒果藤根7味藥材為原料及醫(yī)學(xué)上常用的輔料β環(huán)糊精、羥丙基纖維素、交聯(lián)聚維酮、淀粉、硬脂酸鎂和蜂蜜，采用溶劑提取、除雜、濃縮、干燥制成片劑、丸劑、膠囊劑。該復(fù)方制劑具有清除異常黏液質(zhì)，散氣、清腦明目，通滯，止痛。用于夜盲癥，視力減退，目澀多淚，頭痛。經(jīng)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明：本發(fā)明所述復(fù)方制劑可不同程度的提高氧化應(yīng)激損傷模型ARPE?19（視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞）細(xì)胞的存活力，緩解ARPE?19細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，保護(hù)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞，對(duì)視網(wǎng)膜病變及弱視具有保護(hù)作用。
【專利說明】
-種治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑及其制備方法，屬于維吾爾醫(yī) 藥及民族醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 視網(wǎng)膜色素變性是感受器細(xì)胞及色素上皮細(xì)胞功能喪失為主要特征的一組慢性 的，進(jìn)行性的，遺傳性視網(wǎng)膜變性疾病。屬國際公認(rèn)的眼科疑難病之一，多累及雙眼。目前國 內(nèi)患者約30萬，全世界約300萬人，是世界上最常見的致盲性眼病之一。視網(wǎng)膜色素變性的 發(fā)病率為1/3500~1/5000,國內(nèi)發(fā)病率為1/4016~1/3467,視網(wǎng)膜色素變性是發(fā)達(dá)國家主 要的致盲性眼病之一。據(jù)報(bào)道，在21-60歲的人群中，視網(wǎng)膜色素變性引起的視力損傷或盲 為25%-28%。視網(wǎng)膜色素變性在單基因致盲遺傳性眼病中的發(fā)病率占第一位。視網(wǎng)膜色素 變性可分為典型視網(wǎng)膜色素變性和非典型視網(wǎng)膜色素變性。典型視網(wǎng)膜色素變性臨床的病 例特征為夜盲癥，進(jìn)行性視野損害，視力下降，視網(wǎng)膜電圖異?；驘o波等，非典型視網(wǎng)膜色 素變性的病理特征為進(jìn)展性夜盲，視網(wǎng)膜后極部細(xì)小黃白色結(jié)晶，脈絡(luò)膜硬化，角膜周邊結(jié) 晶沉著。臨床上絕大多數(shù)為典型視網(wǎng)膜色素變性。其眼底圖表現(xiàn)有典型的Ξ聯(lián)征:骨細(xì)胞樣 色素沉著，視網(wǎng)膜血管細(xì)窄，視乳頭顏色蠟。非典型視網(wǎng)膜色素變性可分為:無色素性視網(wǎng) 膜色素變性，中屯、性視網(wǎng)膜色素變性，結(jié)晶樣視網(wǎng)膜色素變性，白點(diǎn)狀視網(wǎng)膜色素變性，扇 形視網(wǎng)膜色素變性等。視網(wǎng)膜色素變性還可分為雙眼原發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性，單眼視網(wǎng)膜 色素變性。還有，許多視網(wǎng)膜色素變性患者合并有眼部其他疾病或伴有眼部疾病之外的其 他疾病。屬于并發(fā)性視網(wǎng)膜色素變性。例如神經(jīng)性耳聾伴典型視網(wǎng)膜色素變性化her's綜合 癥，視網(wǎng)膜色素變性伴有白內(nèi)障，視網(wǎng)膜色素變性伴有青光眼等。
[0003] 因此，尋找防視網(wǎng)膜病變及弱視的有效方法和有效藥物，是當(dāng)前的迫切要求，具有 深遠(yuǎn)的意義和重大的社會(huì)價(jià)值。目前，針對(duì)多個(gè)途徑及環(huán)節(jié)所開發(fā)的治療藥物，在臨床上已 取得一定療效。如針對(duì)慢性肝炎的藥物有a-干擾素、P-干擾素、強(qiáng)力新、熊去氧膽酸及病 毒哇等;針對(duì)肝纖維化的藥物則有皮質(zhì)類固醇、腫瘤壞死因子Q、Y-干擾素、白細(xì)胞介質(zhì)素 一2、秋水仙堿等。但是，盡管已有藥物已在臨床上被廣泛應(yīng)用，但其效果仍然未能達(dá)到理 想，而且其毒副作用一般大，因此在臨床應(yīng)用的受到極大限制。
[0004] 維吾爾醫(yī)藥對(duì)眼病的認(rèn)識(shí)有著幾千年的歷史，因此，利用維醫(yī)維藥防治視網(wǎng)膜病 變、弱視的研究正不斷進(jìn)行當(dāng)中。目前，不管在單味藥，還是復(fù)方藥物及有效成分的研究方 面均已取得令人矚目的成果。其作用機(jī)理不像西藥，只是單一，片面的，而是通過多祀點(diǎn)、多 環(huán)節(jié)、多途徑調(diào)節(jié)來實(shí)現(xiàn)的，具有復(fù)合和全面的治療特點(diǎn)。因開發(fā)"安全、有效、價(jià)廉"的新型 抗視網(wǎng)膜病變及弱視的藥物，對(duì)疾病的控制及疾病的惡化具有極其重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì) 價(jià)值，已成為我國視網(wǎng)膜病變及弱視中藥發(fā)展的必然趨勢。
[0005] 視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞(retinal pigment epitheliu，RPE)是位于視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞 和脈絡(luò)膜之間含有色素的上皮細(xì)胞層。主要功能是:控制視網(wǎng)膜下間隙的液體和營養(yǎng)，維持 光感受器細(xì)胞的營養(yǎng)，更新，再生，吞隧和消化光感受器細(xì)胞的分泌物，起到血一視網(wǎng)膜屏 障的功能，維持視網(wǎng)膜的附著，損傷后的再生和修復(fù)。R陽是維持光感受器功能的重要組織。 視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞參與視網(wǎng)膜色素變性，糖尿病視網(wǎng)膜病變，年齡相關(guān)性黃斑變形等疾 病的發(fā)生和發(fā)展。
[0006] ARPE-19細(xì)胞是來源于人原代視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)過程中自發(fā)永生化的一組 細(xì)胞。目前研究視網(wǎng)膜病變的應(yīng)用最為廣泛的模式細(xì)胞。具有WE的主要形態(tài)及屬性特征， 可謂研究WE的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系。予W外源出化處理細(xì)胞則是研究R陽氧化損傷的簡單而易行的 細(xì)胞模型建立方法，可有效的模擬R陽的氧化損傷過程，此部分研究通過予W不同濃度此化 來誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞的氧化應(yīng)激，導(dǎo)致細(xì)胞存活力下降，予W復(fù)方藥處理則可改善、緩解出化 對(duì)ARPE-19細(xì)胞的氧化損傷，探討一種復(fù)方維藥全提取物對(duì)此化誘導(dǎo)ARPE-19氧化應(yīng)激的保 護(hù)作用及機(jī)制，檢測細(xì)胞內(nèi)丙二醒(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(super oxide dismu1:ase, SOD)、谷脫甘膚過氧物酶(glutathione peroxidase ,G甜-Px)，在復(fù)方維藥全提 取物干預(yù)前后此化誘導(dǎo)ARPE-19中水平的變化，并用western的方法論細(xì)胞調(diào)亡有關(guān)Bax, Bcl-2，Caspase-3等蛋白在此抗氧化機(jī)制中變化。從抗氧化角度對(duì)復(fù)方維藥全提取物作用 及保護(hù)機(jī)制進(jìn)行闡述，為視網(wǎng)膜色素變性的的治療提供新的想法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明目的在于，提供一種治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑及其制備方法，該 復(fù)方藥物是由小茵香，蘆苔，裝襲，玫瑰花瓣，河子肉，薰魯香、盒果藤根7味藥材為原料及醫(yī) 學(xué)上常用的輔料β環(huán)糊精、徑丙基纖維素、交聯(lián)聚維酬、淀粉、硬脂酸儀和蜂蜜，采用溶劑提 取、除雜、濃縮、干燥制成片劑、丸劑、膠囊劑。該復(fù)方制劑具有清除異常黏液質(zhì)，散氣、清腦 明目，通滯，止痛。用于夜盲癥，視力減退，目澀多淚，頭痛。該復(fù)方制劑根據(jù)維吾爾醫(yī)藥理 論，結(jié)合民族醫(yī)藥用藥特點(diǎn)，依據(jù)維吾爾族在長期的民間臨床實(shí)踐，采用合理提取方法溶出 制劑中的有效成分，增強(qiáng)藥效，提高了生物利用度。經(jīng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明：該復(fù)方制劑保護(hù)視網(wǎng) 膜色素上皮細(xì)胞，對(duì)視網(wǎng)膜病變及弱視具有保護(hù)作用。
[0008] 本發(fā)明所述的一種治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑，該制劑是由原料藥小茵香 3-30份，蘆苔9-90份，裝襲5-45份，玫瑰花瓣7-60份，河子肉6-50份，薰魯香3-30份、盒果藤 根3-30份，輔料為β環(huán)糊精4-10份、徑丙基纖維素26份、交聯(lián)聚維酬6份、淀粉5份、硬脂酸儀1 份和蜂蜜10-50份制成。
[0009] 所述的治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑，該制劑是由原料藥小茵香3-20份，蘆 苔9-60份，裝襲5-30份，玫瑰花瓣7-40份，河子肉6-35份，薰魯香3-20份、盒果藤根3-20份， 輔料為β環(huán)糊精4-10份、徑丙基纖維素26份、交聯(lián)聚維酬6份、淀粉5份、硬脂酸儀1份和蜂蜜 10-40份制成。
[0010] 所述治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑的制備方法，按下列步驟進(jìn)行：
[0011] a、將經(jīng)篩選好的取蘆苔、盒果藤根、薰魯香Ξ味混合粉碎成40-200目，得到生藥 粉，備用；
[0012] b、小茵香加6-12倍量水，浸泡5-24小時(shí)，蒸饋法提取揮發(fā)油，時(shí)間5-10小時(shí)，蒸饋 后的水溶液另器收集，將每〇.6ml-2ml揮發(fā)油用β環(huán)糊精4份-10份包合，溫度30°C-6(rC，攬 拌時(shí)間30min，溫度4°C冷藏10小時(shí)，過濾，溫度40°C-6(rC干燥，過40-100目篩，得到揮發(fā)油 包合物，備用；
[0013] c、將小茵香藥渣與裝襲、玫瑰花瓣、河子肉用6-20倍量的水提取1-4次，每次提取 時(shí)間為1-4小時(shí)，得到提取液；
[0014] d、將提取液過濾分離藥渣與藥液，將藥液減壓濃縮成相對(duì)密度1.10-1.40的浸膏， 濾過，得到浸膏，備用；
[001引e、將步驟d得到的浸膏，用溫度30-80°C真空干燥，時(shí)間24-4化，得至巧浸膏，再將 浸膏粉碎后與步驟a中的生藥粉、步驟b中的揮發(fā)油包合物，再將交聯(lián)聚維酬乙醇溶液為粘 合劑，與輔料徑丙基纖維素、淀粉、硬脂酸儀充分混勻，按常規(guī)制藥方法壓成片劑；
[0016] 或?qū)⒉襟Ed中的浸膏，用溫度30-80°C真空干燥，時(shí)間24-4化，得到干浸膏，再將浸 膏粉碎后與步驟a中的生藥粉、步驟b中的揮發(fā)油包合物，再將交聯(lián)聚維酬乙醇溶液為粘合 劑，與輔料徑丙基纖維素、淀粉、硬脂酸儀充分混勻，按常規(guī)制藥方法制成膠囊劑；
[0017] 或?qū)⒉襟Ed中的浸膏，用溫度30-80°C真空干燥，時(shí)間24-4化，得到干浸膏，再將浸 膏粉碎后與步驟a中的生藥粉、步驟b中的揮發(fā)油包合物，再將水或蜂蜜為粘合劑，充分混 勻，按常規(guī)制藥方法制成丸劑。
[0018] 本發(fā)明所述的治療視網(wǎng)膜病變及弱視復(fù)方制劑具有清除異常黏液質(zhì)，散氣、清腦 明目，止痛，通滯;用于夜盲癥，視力減退，目澀多淚，頭痛等藥物中用途。
[0019] 本發(fā)明所述的一種治療視網(wǎng)膜病變及弱視復(fù)方制劑中各組分的藥理特性為：
[0020] 蘆苔為百合科植物庫拉素蘆苔Aloe barbadensis Miller.好望角蘆苔Aloe ferox Miller或其他同屬近緣植物葉的汁液濃縮干燥物。前者習(xí)稱"老蘆苔"后者習(xí)稱"新 蘆苔"。維吾爾醫(yī)具有生干生熱，軟便清瀉，消炎退腫，桂風(fēng)清瘡，桂寒止痛，利尿通經(jīng)，養(yǎng)肝 明目，殺蟲。主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病如，腸胃虛弱，大便秘結(jié)，各種瘡傷，關(guān)節(jié)疼痛，夜盲 視弱，月經(jīng)不調(diào)，小便不利，腸寄生蟲，內(nèi)服2-6g。
[0021] 裝襲為裝襲科植物裝襲化化ulus terrestris L.的干燥成熟果實(shí)。秋季果實(shí)成熟 時(shí)采割植株，曬干，打下果實(shí)，除去雜質(zhì)。維吾爾醫(yī)具有生干生熱，利尿通經(jīng)，明目，化石排 石，止咳平喘，增強(qiáng)色素。主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病，如小便不通、月經(jīng)不調(diào)、腎臟結(jié)石、膀 光結(jié)石、淋病、咳嗽、哮喘、白齋風(fēng)，頭痛眩暈，目赤繫障（障礙物)等。現(xiàn)代研究表明，其主要 活性成分為皂巧和黃酬類成分，其中皂巧類成分對(duì)屯、血管系統(tǒng)具有良好的作用，且其黃酬 類成分有促進(jìn)混合培養(yǎng)的鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞存活的作用，故裝襲有可能被開發(fā)成為保護(hù)視 力、治療青光眼的一種新藥，內(nèi)服5-7g。
[0022] 玫瑰花瓣為菩薇科植物突厥菩薇Rosa damascena Mill.或玫瑰Rosa rugusa 化unb.的干燥花瓣。春、季初花期采收，陰干，除去花托，花專，枯朽花瓣等雜質(zhì)。維吾爾醫(yī)具 有滋補(bǔ)腸胃，改善消化，芳香開資，安神止痛，散風(fēng)消炎，軟腸通便，潤膚生輝等。主治胃納不 佳，消化不良，各種結(jié)核引起消耗性疾病，神經(jīng)衰弱，屯、惇，失眠，頭暈?zāi)X脹，風(fēng)濕疼痛，屯、肌 炎，肝炎，便秘，面目蒼白。玫瑰花中含有揮發(fā)油、多酪類、黃酬類等多種化學(xué)成分，具有減少 和消除自由基、抗氧化活性、抗血栓、抗癌、抗炎、抗菌、免疫調(diào)節(jié)作用，降血脂和預(yù)防屯、臟病 等多種生理活性。文獻(xiàn)報(bào)道玫瑰花水煎劑對(duì)金黃色葡萄球菌、傷寒桿菌及結(jié)核桿菌均有抑 制作用，內(nèi)服5-7g。
[0023] 河子肉為使君子科植物河子Terminalia chebula Retz.或絨毛何子Terminalia chebula Retz . var. tomentella Kurt.的干燥成熟果實(shí)。秋、冬二季果實(shí)成熟時(shí)采收，除去 雜質(zhì)，曬干。維吾爾醫(yī)具有生干生寒，清除異常膽液質(zhì)和調(diào)節(jié)異常血液質(zhì)，清熱補(bǔ)腦、補(bǔ)胃， 增強(qiáng)記憶，提高視力，消熱除郁，燥濕養(yǎng)筋，涼血烏發(fā)。主治熱性和膽質(zhì)性或血液質(zhì)性疾病， 如熱性腦虛、胃虛，記憶力減退，視力降低，熱性憂郁癥，濕性面擁，血熱白發(fā)。果實(shí)所含成分 為河子酸、河黎勒酸、沒食子酸、1，3,6-Ξ沒食子酷葡萄糖、1，2,3,4,6-五沒食子酷葡萄糖、 較云實(shí)精、原河子酸、葡萄糖沒食子較武、并沒食子酸等，內(nèi)服5-7g。
[0024]薰魯香為漆樹科植物粘膠乳香樹Pistacia lentiscus L.的樹脂，將樹皮縱長割 傷，樹脂流出凝固，收集，除凈雜志。維吾爾醫(yī)具有生干生熱，桂寒燥濕，滋補(bǔ)支配器官，補(bǔ)胃 消食，散氣除脹，增強(qiáng)消化，芳香除臭等。主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病，如胃腕寒虛、消化不 良、腹瀉腹脹、牙病口臭等，內(nèi)服5-7g。
[00巧]盒果藤根為旋花科植物盒果藤化erculina化巧ethum(L. )S.Manso干燥根。維吾 爾醫(yī)具有生干生熱，清除異常黏液質(zhì)，燥濕退腫，桂寒止痛，桂風(fēng)養(yǎng)筋，止咳平喘，除寒解郁， 軟堅(jiān)消持，開通耳巧等。主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病，如水腫、關(guān)節(jié)疼痛、小關(guān)節(jié)疼痛、坐骨 神經(jīng)痛，面擁，咳嗽，哮喘，憂郁癥，持瘡，耳鳴，耳聾等。其化學(xué)成分研究未見報(bào)道，性質(zhì)為二 級(jí)干熱，具有除濕、驅(qū)膽液功效，用于水腫、持瘡、關(guān)節(jié)炎、坐骨神經(jīng)痛、小便不利等疾病，多 用于打粉后用溫開水沖服，內(nèi)服5-7g。
【附圖說明】
[0026] 圖1為本發(fā)明不同濃度對(duì)細(xì)胞生長的影響圖；
[0027] 圖2為本發(fā)明不同濃度對(duì)細(xì)胞活力的影響(p<0.01vs control)圖；
[002引圖3為本發(fā)明不同濃度對(duì)出化誘導(dǎo)細(xì)胞存活力的影響(p<0.01vs control圖，其中a 為無出化正常組細(xì)胞b為WlOOymol/L出化誘導(dǎo)細(xì)胞；
[0029] 圖4為本發(fā)明對(duì)出〇2誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞抗氧化水平的影響圖；
[0030] 圖5為本發(fā)明〇日3口日36-3,8別-2,8別-義1^蛋白的表達(dá)。<0.05 =圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031 ]實(shí)施例1 (W制備1000片為基數(shù)，制備片劑）
[0032] a、將經(jīng)篩選好的取蘆苔、盒果藤根、薰魯香3味混合粉碎成100目，備用；
[0033] b、將小茵香加12倍量水，浸泡24小時(shí)，蒸饋法提取揮發(fā)油10小時(shí)，蒸饋后的水溶液 另器收集;每0.6ml揮發(fā)油用倍他環(huán)糊精4份包合，溫度30°C，攬拌時(shí)間30min，溫度4 °C冷藏 10小時(shí)，過濾，溫度40°C干燥，過80目篩，備用；
[0034] C、將小茵香藥渣與裝襲、玫瑰花瓣、河子肉用20倍量的水提取2次，每次提取時(shí)間 為2小時(shí)，得到提取液；
[0035] d、將提取液，過濾分離藥渣與藥液，將藥液減壓濃縮成相對(duì)密度1.30的浸膏，濾 過，得到浸膏，備用；
[0036] e、將浸膏，用溫度60°C真空干燥，時(shí)間24-4化，得到干浸膏，再將浸膏粉碎后與步 驟a中的生藥粉，步驟b中的揮發(fā)油包合物，再將交聯(lián)聚維酬乙醇溶液為粘合劑，與輔料徑丙 基纖維素、淀粉、硬脂酸儀充分混勻，按常規(guī)制藥方法制成每片〇.3肖、0.4肖、0.45肖或0.5邑的 片劑(表1)。
[0037] 表 1
[00；3 引
[0039 ]實(shí)施例2 (制備1000粒為基數(shù)，制備膠囊劑）
[0040] a、將經(jīng)篩選好的取蘆苔、盒果藤根、薰魯香Ξ味混合粉碎成120目，備用；
[0041] b、將小茵香加10倍量水，浸泡6小時(shí)，蒸饋法提取揮發(fā)油6小時(shí)，蒸饋后的水溶液另 器收集;每0.6ml揮發(fā)油用倍他環(huán)糊精5份包合，溫度40°C，攬拌時(shí)間20min，冷藏4°C12小時(shí)， 過濾，50°C干燥，過100目篩，備用；
[0042] C、小茵香藥渣與裝襲、玫瑰花瓣、河子肉用16倍量的水提取3次，每次提取時(shí)間為 1.5小時(shí)，得到提取液；
[0043] d、將水提液，過濾分離藥渣與藥液，將藥液減壓濃縮成相對(duì)密度1.35的浸膏，濾 過，得到浸膏，備用；
[0044] e、將浸膏，用溫度55°C真空干燥，時(shí)間24-4化，得到干浸膏，再將浸膏粉碎后與步 驟a中的生藥粉，步驟b中的揮發(fā)油包合物，再將交聯(lián)聚維酬乙醇溶液為粘合劑，與輔料徑丙 基纖維素、淀粉、硬脂酸儀充分混勻，按常規(guī)制藥方法制成每粒〇.25肖、0.3肖、0.35肖或0.4邑的 硬膠囊(表2)。
[0045] 表 2
[0046]
[0047] 實(shí)施例3( W制備1000為基數(shù)，制備丸劑）
[004引a、將經(jīng)篩選好的W上屯味，取蘆苔、盒果藤根、薰魯香Ξ味混合粉碎成80目，備用；
[0049] b、將小茵香加8倍量水，浸泡4小時(shí)，蒸饋法提取揮發(fā)油4小時(shí)，蒸饋后的水溶液另 器收集，每0.6ml揮發(fā)油用倍他環(huán)糊精6份包合，溫度40°C，攬拌時(shí)間40min，溫度4°C冷藏8小 時(shí)，過濾，溫度45 °C干燥，過80目篩，備用；
[0050] C、將小茵香藥渣與裝襲、玫瑰花瓣、河子肉用18倍量的水提取2次，每次提取時(shí)間 為2小時(shí)，得到提取液；
[0051] d、將水提液，過濾分離藥渣與藥液，將藥液減壓濃縮成相對(duì)密度1.25的浸膏，濾 過，得到浸膏，備用；
[0052] e、將浸膏，用溫度54°C真空干燥，時(shí)間24-4化，得到干浸膏，再將浸膏粉碎后與步 驟a中的生藥粉，步驟b中的揮發(fā)油包合物，再將蜂蜜充分混勻，按常規(guī)制藥方法制成每粒 0.1邑、0.15邑、0.2邑、0.3邑或2邑的丸劑(表3)。
[0化3] 表3
[0化4]
[0055]實(shí)施例4(復(fù)方制劑細(xì)胞存活力的影響）
[0056] 將AR陽-19細(xì)胞W2X 10*Vwell接種于6孔板，溫度37Γ，5%C02培養(yǎng)箱培養(yǎng)化至近 融合狀態(tài)，加入最終濃度為Oyg/mL、1 Oyg/mL、20yg/mL、40yg/mL、80yg/mL復(fù)方制劑的氨基酸 和葡萄糖的培養(yǎng)基(DMEMVF12培養(yǎng)基，溫度37°C，5%二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)化，棄掉培養(yǎng)基， 再用1 ΟΟμL?ο 1 /L此〇2誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞1她，收集各孔AR陽-19細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液，4 °C低 溫離屯、機(jī)120(K)rpm離屯、5分鐘，將上清轉(zhuǎn)移至潔凈離屯、管中，溫度-80°C保存，進(jìn)行丙二醒 (MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)，谷脫甘膚過氧化物酶(GSH-Px)的濃度測定，每種處理?xiàng)l件均 設(shè)3個(gè)復(fù)孔，每次測量均重復(fù)3次，胖6316111-131〇1:的方法測定13(31-2，13(31-義1^0日39日36-3蛋白 的變化情況。
[0化7] 實(shí)施例5
[0058] 從細(xì)胞的水平觀察該復(fù)方制劑的療效：
[0059] 不同濃度藥物對(duì)ARPE-19細(xì)胞存活力的影響：
[0060] 將ARPE-19細(xì)胞W2X lO^well接種于96孔板，溫度37°C ,5%二氧化碳培箱培養(yǎng)化 至近融合狀態(tài)，分別加入最終濃度為Oyg/mL、1 Oyg/mL、20yg/mL、40yg/mL、80yg/mL維藥復(fù)方 藥物的DMEM/F12培養(yǎng)基，在37 °C 5 %二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。18個(gè)小時(shí)候，WMTΤ比色法測 0〇49日，與對(duì)照組比較，結(jié)果見圖1。
[0061 ]用ΜΤΤ法測定OD490算出來細(xì)胞存活力：
[0062] 與對(duì)照組ARPE-19相比：4化g/mL濃度藥處理的ARPE-19的細(xì)胞存活力較大，比對(duì)照 組增值了2.38倍，有顯著性差異(P<0.01VS control)見圖2。
[0063] 復(fù)方制劑對(duì)出化誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞存活力的影響：
[0064] 予W不同濃度藥預(yù)培養(yǎng)化的ARPE-19再次暴露于100皿ol/L此化后細(xì)胞存活力較 未經(jīng)藥預(yù)處理者明顯改善，而未經(jīng)藥處理的AR陽19在100ymol/L此化誘導(dǎo)下，細(xì)胞存活力較 既無藥亦無出化誘導(dǎo)氧化應(yīng)激者明顯下降(P<〇.001)。見圖3:
[0065] 結(jié)果：W20yg/mL，40yg/mL，80yg/mL的復(fù)方制劑預(yù)處理化則可緩解外源性出化誘導(dǎo) 的ARPE-19細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷，改善外源出化引起的MDA、S0D、GSh-Px及細(xì)胞存活力的改 變。因此，莎畢無具有緩解出化誘導(dǎo)ARPE-19氧化應(yīng)激損傷的作用，見圖4。
[0066] Western blot結(jié)果顯示Bd-2,Bd-xL蛋白表達(dá)水平此化建模組低于正常對(duì)照組而 維藥復(fù)方藥物保護(hù)組高于此化建模組(P<〇. 05，化spase-3蛋白表達(dá)水平出化建模組高于正 常對(duì)照組而維藥復(fù)方藥物保護(hù)組低于此化建模組P<〇. 05;說明出化能夠下調(diào)Bcl-2，Bcl-xL 蛋白的表達(dá)，上調(diào)化spase-3蛋白的表達(dá);而維藥復(fù)方藥物保護(hù)過氧化氨誘導(dǎo)的ARPE-19人 視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷時(shí)上調(diào)8(31-2,8(：1-義1^蛋白的表達(dá)，下調(diào)化39日3日-3蛋 白的表達(dá)，見圖5。
[0067] 總結(jié)：用復(fù)方制劑預(yù)處理細(xì)胞化還可緩解外源100皿ol/L此化培養(yǎng)1她所誘導(dǎo)的 ARPE-19細(xì)胞內(nèi)MDA的升高及SOD、GSH-Px活力的下降。
[0068] 低中濃度的莎畢無對(duì)出化誘導(dǎo)ARPE-19氧化應(yīng)激損傷具有保護(hù)作用，其可能通過線 粒體途徑，經(jīng)控制細(xì)胞色素 C的釋放，抑制化spase-3蛋白增強(qiáng)和8別-2,8別-義1^蛋白下降，對(duì) ARPE-19細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用。
[0069] 不同濃度復(fù)方制劑影響細(xì)胞存活力的實(shí)驗(yàn)中表明，隨著藥物濃度提高，細(xì)胞存活 力逐漸提高，40yg/mL濃度藥處理的ARPE-19的細(xì)胞存活力最好。不同濃度藥物干預(yù)化的 ARPE-19細(xì)胞再次暴露于100ymol/L出化后細(xì)胞存活力較未經(jīng)藥預(yù)處理者明顯改善。不同濃 度的維藥復(fù)方預(yù)處理ARPE-19細(xì)胞化則可緩解外源性出化誘導(dǎo)的ARPE-19細(xì)胞的氧化應(yīng)激損 傷，改善外源出化引起的MDA、S0D、G化-Px改變。Western-blot實(shí)驗(yàn)表明，通過線粒體途徑，經(jīng) 控制細(xì)胞色素 C的釋放，抑制化spase-3蛋白增強(qiáng)和Bcl-2，Bd-xl蛋白下降，對(duì)ARPE-19細(xì)胞 發(fā)揮保護(hù)作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑，其特征在于該制劑是由原料藥小茴香3-30 份，蘆薈9-90份，蒺藜5-45份，玫瑰花瓣7-60份，訶子肉6-50份，薰魯香3-30份、盒果藤根3-30份，輔料為β環(huán)糊精4-10份、羥丙基纖維素26份、交聯(lián)聚維酮6份、淀粉5份、硬脂酸鎂1份和 蜂蜜10-50份制成。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑，其特征在于該制劑是由 原料藥小茴香3-20份，蘆薈9-60份，蒺藜5-30份，玫瑰花瓣7-40份，訶子肉6-35份，薰魯香3-20份、盒果藤根3-20份，輔料為環(huán)糊精4-10份、羥丙基纖維素26份、交聯(lián)聚維酮6份、淀粉5 份、硬脂酸鎂1份和蜂蜜10-40份制成。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的治療視網(wǎng)膜病變及弱視的復(fù)方制劑的制備方法，其特征在 于按下列步驟進(jìn)行： a、 將經(jīng)篩選好的取蘆薈、盒果藤根、薰魯香三味混合粉碎成40-200目，得到生藥粉，備 用； b、 小茴香加6-12倍量水，浸泡5-24小時(shí)，蒸餾法提取揮發(fā)油，時(shí)間5-10小時(shí)，蒸餾后的 水溶液另器收集，將每〇.6ml-2ml揮發(fā)油用環(huán)糊精4份-10份包合，溫度30°C_60°C，攪拌時(shí) 間30min，溫度4°C冷藏10小時(shí)，過濾，溫度40°C-60°C干燥，過40-100目篩，得到揮發(fā)油包合 物，備用； c、 將小茴香藥渣與蒺藜、玫瑰花瓣、訶子肉用6-20倍量的水提取1-4次，每次提取時(shí)間 為1_4小時(shí)，得到提取液； d、 將提取液過濾分離藥渣與藥液，將藥液減壓濃縮成相對(duì)密度1.10-1.40的浸膏，濾 過，得到浸膏，備用； e、 將步驟d得到的浸膏，用溫度30-80°C真空干燥，時(shí)間24-48h，得到干浸膏，再將浸膏 粉碎后與步驟a中的生藥粉、步驟b中的揮發(fā)油包合物，再將交聯(lián)聚維酮乙醇溶液為粘合劑， 與輔料羥丙基纖維素、淀粉、硬脂酸鎂充分混勻，按常規(guī)制藥方法壓成片劑； 或?qū)⒉襟Ed中的浸膏，用溫度30-80°C真空干燥，時(shí)間24-48h，得到干浸膏，再將浸膏粉 碎后與步驟a中的生藥粉、步驟b中的揮發(fā)油包合物，再將交聯(lián)聚維酮乙醇溶液為粘合劑，與 輔料羥丙基纖維素、淀粉、硬脂酸鎂充分混勻，按常規(guī)制藥方法制成膠囊劑； 或?qū)⒉襟Ed中的浸膏，用溫度30-80°C真空干燥，時(shí)間24-48h，得到干浸膏，再將浸膏粉 碎后與步驟a中的生藥粉、步驟b中的揮發(fā)油包合物，再將水或蜂蜜為粘合劑，充分混勻，按 常規(guī)制藥方法制成丸劑。
【文檔編號(hào)】A61K36/886GK105920280SQ201610428899
【公開日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年6月16日
【發(fā)明人】阿吉艾克拜爾·艾薩, 塔吉古麗·阿不里克木, 希爾艾力·吐爾遜
【申請(qǐng)人】中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所