本發(fā)明屬于食用菌發(fā)酵培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種灰樹花液體發(fā)酵培養(yǎng)基及其制備方法。

技術(shù)背景

灰樹花是一種藥食兩用的食用菌，屬擔(dān)子菌亞門，層菌綱，無隔擔(dān)子菌亞綱，非褶菌目，多孔菌科，樹花（亦稱奇果菌）屬?；覙浠ㄓ卸喾N名稱，如貝葉多孔菌、千佛菌、栗子蘑、蓮花菌、奇果菌、舞茸等。野生灰樹花分布于日本、歐洲、北美和我國許多地區(qū)，如黑龍江、吉林、河北、四川、云南、廣西、福建等省區(qū)。近年來，國內(nèi)灰樹花已在一些省份如河北、浙江、福建等省獲得栽培，用于鮮食或提取功能成分。

灰樹花野生量極少，幾乎不能形成商品。1974年日本進行人工栽培獲得成功，在1981年日本主要利用空調(diào)設(shè)備在室內(nèi)進行周年栽培，生物學(xué)效率最高可達40%左右。我國最早是浙江慶元縣在1983年從日本引進菌種進行栽培，生物學(xué)效率未突破40%。據(jù)記載在80-90年代國內(nèi)許多單位和個人多次組織研究探索灰樹花的人工馴化栽培，獲得了純菌種，但子實體分化不好，產(chǎn)量低，沒有成功。90年代初國內(nèi)一些單位利用固體菌種進行仿野生栽培法，雖然生物學(xué)效率達到80%，但普遍存在著生產(chǎn)周期長、污染機會多、轉(zhuǎn)代次數(shù)多，菌種易退化等問題，這種生產(chǎn)技術(shù)遠遠不能適應(yīng)激烈的市場競爭，無法同國際的同行業(yè)競爭。國內(nèi)外多年研究證實，從灰樹花深層發(fā)酵液和菌絲體中提取的多糖與子實體中提取的多糖具有同樣的作用，因此，研究灰樹花液體深層發(fā)酵培養(yǎng)，對于促進食品、醫(yī)藥工業(yè)的發(fā)展具有一定的現(xiàn)實意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種灰樹花液體培養(yǎng)基，具有轉(zhuǎn)化效率高、培養(yǎng)周期短、不易感染雜菌等特點。

本發(fā)明的另一目的是提供一種灰樹花液體培養(yǎng)基的制備方法，該方法操作簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

一種灰樹花液體發(fā)酵培養(yǎng)基，每升所述培養(yǎng)基中含有麥麩10-15g、葡萄糖10-15g、KH₂PO₄1.8-2.5g、MgSO₄·7H₂O1.8-2.2g、玉米粉4.8-5.5g、蛋白胨2.5-3.5g、CaCl₂0.8-1.2g、V_B10.08-0.12、玉米須汁40-55mL，余量為蒸餾水；

其中玉米須汁是按照下述方法制備的：取干燥玉米須20-25g加入100ml蒸餾水煮沸30-45min，過濾，濾液定容至100ml即得。

優(yōu)選地，每升所述培養(yǎng)基中含有麥麩12g、葡萄糖13g、KH₂PO₄2g、MgSO₄·7H₂O2g、玉米粉5g、蛋白胨3g、CaCl₂1g、V_B10.1g、玉米須汁50mL。

所述的灰樹花液體發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法采用以下步驟：

（1）將麥麩和玉米粉加入800mL蒸餾水中，煮沸20-30min,過濾，得濾液；

（2）在步驟（1）所述的濾液中加入葡萄糖、KH₂PO₄、MgSO₄·7H₂O、

蛋白胨、CaCl₂、V_B1、玉米須汁攪拌均勻，加蒸餾水至1000mL，121℃條件下滅菌20-40min，冷卻，得灰樹花液體發(fā)酵培養(yǎng)基。

玉米須為禾本科玉蜀植物玉米的花柱和柱頭，含有多種化學(xué)成分，如黃酮及苷類、甾醇、生物堿、糖類、有機酸、礦物質(zhì)、揮發(fā)油、微量元素及多種維生素等。大量研究表明，玉米須含有多種對人體有益的化學(xué)成分、成分復(fù)雜、藥理及食療兼?zhèn)?。玉米是我國各地廣泛栽培的農(nóng)作物，我國玉米種植面積為2350萬公頃,玉米產(chǎn)量居世界第二位,估計玉米須得產(chǎn)量可達750萬噸以上,作為玉米副產(chǎn)物的玉米須資源十分豐富，進行工業(yè)化開發(fā)利用前景相當(dāng)可觀。

本發(fā)明所述的灰樹花菌種可以使用市場上能夠購買得到的任何具有活性的菌種。

有益效果

本發(fā)明在灰樹花液體培養(yǎng)基中加入了玉米須提取液，使培養(yǎng)基能夠滿足灰樹花液體發(fā)酵的需求，而且原料來源豐富、價格低廉，采用本發(fā)明培養(yǎng)出的灰樹花菌絲體生長快、活力強、菌絲含量高，接種后的菌種萌發(fā)率好、發(fā)酵周期短、成品率高、不易感染雜菌。本發(fā)明提供的培養(yǎng)基制備方法操作簡單，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明內(nèi)容進一步地描述。

實施例1

灰樹花液體培養(yǎng)基，每升培養(yǎng)基中含有麥麩15g、葡萄糖10g、KH₂PO₄2.5g、MgSO₄·7H₂O1.8g、玉米粉5.5g、蛋白胨3.5g、CaCl₂0.8g、V_B10.12g、玉米須汁40mL，余量為蒸餾水；

灰樹花液體培養(yǎng)基的制備方法為：

（1）將15g麥麩和5.5g玉米粉加入800mL蒸餾水中，煮沸20-30min，過濾，得濾液；

（2）在濾液中加入葡萄糖10g、KH₂PO₄2.5g、MgSO₄·7H₂O1.8g、蛋白胨3.5g、CaCl₂0.8g、V_B10.12g、玉米須汁40ml攪拌均勻，使加入原料完全溶解，加蒸餾水至1000mL，121℃條件下滅菌20min，冷卻，得灰樹花液體發(fā)酵培養(yǎng)基。

其中玉米須汁的制備方法為：取干燥玉米須20g加入100ml蒸餾水煮沸30min，過濾，濾液定容至100ml即得。

實施例2

灰樹花液體培養(yǎng)基：每升培養(yǎng)基中含有麥麩10g、葡萄糖15g、KH₂PO₄1.8g、MgSO₄·7H₂O2.2g、玉米粉4.8g、蛋白胨2.5g、CaCl₂1.2g、V_B10.08g、玉米須汁55mL，余量為蒸餾水；

（1）灰樹花液體培養(yǎng)基的制備：將10g麥麩和4.8g玉米粉加入800mL蒸餾水中，煮沸20-30min,過濾，得濾液；

（2）在濾液中加入葡萄糖15g、KH₂PO₄1.8g、MgSO₄·7H₂O 2.2g、蛋白胨2.5g、CaCl₂1.2g、V_B10.08g、玉米須汁55ml攪拌均勻，使原料完全溶解，加蒸餾水至1000mL，121℃條件下滅菌30min，冷卻，得灰樹花液體發(fā)酵培養(yǎng)基。

其中玉米須汁的制備方法為：取干燥玉米須25g加入100ml蒸餾水煮沸30min，過濾，濾液定容至100ml即得；

實施例3

灰樹花液體培養(yǎng)基：每升培養(yǎng)基中含有麥麩12g、葡萄糖13g、KH₂PO₄2g、MgSO₄·7H₂O 2g、玉米粉5g、蛋白胨3g、CaCl₂1g、V_B10.1g、玉米須汁50mL，余量為蒸餾水；

（1）灰樹花液體培養(yǎng)基的制備：將12g麥麩和5g玉米粉加入800mL蒸餾水中，煮沸30min,過濾，得濾液；

（2）在濾液中加入葡萄糖13g、KH₂PO₄2g、MgSO₄·7H₂O 2g、蛋白胨3g、CaCl₂1g、V_B10.1g、玉米須汁50ml攪拌均勻，使原料完全溶解，加蒸餾水至1000mL，121℃條件下滅菌30min，冷卻，得灰樹花液體發(fā)酵培養(yǎng)基。

其中玉米須汁的制備方法為：取干燥玉米須25g加入100ml蒸餾水煮沸30min，過濾，濾液定容至100ml即得；

對比例

灰樹花灰樹花液體培養(yǎng)基：每升培養(yǎng)基中含有麥麩12g、葡萄糖13g、KH₂PO₄2g、MgSO₄·7H₂O 2g、玉米粉5g、蛋白胨3g、CaCl₂1g、V_B10.1g、余量為蒸餾水；

（1）灰樹花液體培養(yǎng)基的制備：將12g麥麩和5g玉米粉加入800mL蒸餾水中，煮沸30min,過濾，得濾液；

（2）在濾液中加入葡萄糖13g、KH₂PO₄2g、MgSO₄·7H₂O 2g、蛋白胨3g、CaCl₂1g、V_B10.1g，使原料完全溶解，加蒸餾水至1000mL，121℃條件下滅菌30min，冷卻，得灰樹花液體發(fā)酵培養(yǎng)基。

將上述實施例1-3和對比例制備的灰樹花發(fā)酵培養(yǎng)基進行灰樹花液體發(fā)酵：按照7v/v%接種量在裝有100mL液體培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶中接種灰樹花菌種，溫度26℃，轉(zhuǎn)速120r/min，恒溫搖床培養(yǎng)6，得到灰樹花菌絲球，用8層紗布過濾收集灰樹花菌絲球，盡量去除其中培養(yǎng)液，裝入冷凍收集管，-18℃冷凍結(jié)冰后置-70℃冷凍抽干，得灰樹花菌絲干粉，-18℃密閉保存。上述實施例和對比例各培養(yǎng)三只搖瓶，液體發(fā)酵得到的灰樹花菌絲體干質(zhì)量為三只搖瓶的平均值，其數(shù)據(jù)見表1：

表1