一種快速從連翹葉中制備連翹苷的方法
【專利摘要】本發(fā)明針對從連翹葉中制備連翹苷的現(xiàn)有技術(shù)中存在的連翹苷易分解、步驟繁瑣、耗時長等問題，提供了一種快速從連翹葉中制備連翹苷的方法。該方法步驟包括：取連翹葉粉末，先用無水乙醇回餾提取2-3次，濾液濃縮至糊狀，再用蒸餾水溶解過濾，所得濾液濃縮、冷藏、過濾得沉淀，沉淀用乙醇溶液溶解，加入石油醚萃取，下層溶液經(jīng)濃縮、干燥、重結(jié)晶2-4次即可。用HPLC測其純度，純度達98%以上。本方法可大大減少雜質(zhì)，給后續(xù)純化工作帶來極大便利；使用石油醚萃取，排除了葉綠素干擾，大大提高了連翹苷的純度；分離時不使用柱層析，從而耗時大大減少，可為生產(chǎn)節(jié)省大量人力和時間。
【專利說明】一種快速從連翹葉中制備連翹苷的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及從連翹葉中提取連翹苷的方法，具體是一種快速從連翹葉中制備連翹苷的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]連翅(Forsythia suspensa(Thunb.) Vahl)為木犀科連翅屬植物，是臨床常用傳統(tǒng)中藥之一?！吨袊幍?010》第一部第159頁描述:連翹具有清熱解毒，消腫散結(jié)，疏散風熱。用于癰疽，瘰疬,乳癰,丹毒,風熱感冒，溫病初起,溫熱入營，高熱煩渴，神昏發(fā)斑，熱淋澀痛等作用。現(xiàn)代藥理研究表明:連翹具有抗菌(李仲興等.天津中醫(yī)藥.2007，24 (4):328 - 331 ;劉世旺等.安徽農(nóng)業(yè)科學.2007, 35 (24):7383 - 7384+7387 ;牛新華等.時珍國醫(yī)國藥.2002，13 (6):342 - 343)、抗炎(J.Y.Hu, et al.Pharmacol.Clin.Chin.Mater.Med.2007.23:51 - 52 ；S.J.Dai, et al.Planta Medica, 2009, 75:375 - 377)、 抗病毒、抗氧化、抗內(nèi)毒素、抑制彈性蛋白酶活力、抑制磷酸二酯酶、強心利尿、解熱、抗肝損傷及治療肝炎等作用(T.Lu, et al.Food Chem.Toxicol.2010,48:764 - 770 ；X.L.Piao, etal.Phytother.Res.2009, 23:938 - 942 ；Y.Z.Wang, et al.Chin.Chem.Lett.2008,19:1234-1236 ；T.1izuka, et al.J.Pharm.Soc.Jpn.2005，125:219 - 224 ;楊建雄等.營養(yǎng)學報.2004,26(1):65-67)。
[0003]連翹化學成分較多，據(jù)目前報道，主要含有木脂素類、萜類、揮發(fā)油類、黃酮類、香豆精、苯乙醇及其甙類等(郭素華.中國藥學雜志.2003，38 (4):295-297)。其中:連翹苷是其最主要的質(zhì)量控制指標，連翹藥材中連翹苷含量不少于0.15% (《中國藥典2010》第一部第159頁)。連翹苷為木脂素苷類化合物，其化學式為C27H34O11,分子量為534，熔點為181°C，難溶于水，易溶于乙醇、甲醇等有機溶劑(姚新生主編，天然藥物化學，第三版，北京，人民衛(wèi)生出版社，2003)。
[0004]大量的研究結(jié)果證明，連翹葉中的化學成分與連翹果實中的化學成分有非常好的一致性(丁R等.中藥材.1994，17(10):42-44)，而且連翹葉中有許多化學成分的含量遠遠高于連翹果實，如:連翹葉中連翹苷約占5%，連翹果實中連翹苷約占0.2%，含量差別超過20倍(楊建雄等.營養(yǎng)學報.2004，26 (I):65— 67)。由于連翹葉中有許多化學成分的含量遠遠高于連翹果實，所以，連翹葉雖不能入藥，但在制備單體化合物如連翹苷等方面具有較大的優(yōu)勢，同時也大大節(jié)省了連翹果實在制備單體化合物中的浪費現(xiàn)象，充分利用了秋季連翹葉落葉的價值。
[0005]目前關(guān)于從連翹葉中提取連翹苷的方法有多種，主要有:水煎法、滲漉法、水煮-醇沉提取法等。這些方法具有耗時長、耗能大、產(chǎn)率低、生產(chǎn)成本高等缺陷。
[0006]中國專利(申請?zhí)?00610027331.X)“一種連翹提取物的制備方法”，該發(fā)明不足之處一是水提雜質(zhì)較多，后續(xù)純化困難，二是只得到了浸膏，未進一步說明分離提純過程。
[0007]中國專利(申請?zhí)?00810176773.X)，“從連翹葉中提取連翹苷的新方法”，該發(fā)明不足在于乙醇溶液提取連翹苷，會使雜質(zhì)含量大大增多，對后續(xù)分離純化連翹苷帶來較大困難，同時加入表面活性劑，也增加了連翹苷的純化步驟。
[0008]中國專利(申請?zhí)?01010235729.9)，“一種從連翹葉中提取連翹苷的方法”，缺陷在于使用堿性溶液，使得連翹苷容易分解，同時進行大孔樹脂、氧化鋁柱層析，耗時大大增加。
[0009]中國專利(申請?zhí)?01110058486.0)，“用連翹葉制備連翹苷提取物的方法”，不足之處在于用85%乙醇提取，雜質(zhì)會大大提高，給后續(xù)純化帶來較大困難，同時需離心，不利于大量生產(chǎn)，還有就是具體產(chǎn)率不明確，未進一步說明純化過程。
[0010]王婭麗等(王婭麗等.西北藥學雜志，2006，21 (1):9-10)，該方法不足之處是得到僅是粗提物，且由于用乙醇濃度85%提取，雜質(zhì)較多，雖初始得率為5.781 %，但最終純化后會較低。
[0011]胡光等(胡光等.黑龍江醫(yī)藥.2005,18 (2):41-42)，該方法不足之處同樣在于80%乙醇提取，雜質(zhì)較多，給后續(xù)純化工作帶來較大困難，且最終純化后反而得率降低。
[0012]于春波等(于春波等.黑龍江醫(yī)藥.2004，17 (2): 104-106)，該方法不足之處在于70%乙醇提取，雜質(zhì)較多，給后續(xù)純化工作帶來較大困難，同時需要大孔樹脂層析，耗時較長。
[0013]張杲2006年碩士學位論文連翅(Forsythia suspense)葉藥用價值及其藥用活性組分的初步研究”，是用無水乙醇提取，但未能去除葉綠素。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014]本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的耗時長、方法繁瑣、純度低等問題，提供一種方法簡單、純度高、快速從連翹葉中制備連翹苷的方法。
[0015]本發(fā)明提供的一種快速從連翹葉中制備連翹苷的方法，包括步驟:
[0016]I)取連翹葉，粉碎，過10-20目篩，得粉末；
[0017]2)稱連翹葉粉末，加無水乙醇回餾提取，料液比1: 5-20，提取2-4次，三層紗布過濾，得濾液；
[0018]3)濾液濃縮至糊狀，加入5-10倍體積的蒸餾水，濾紙減壓抽濾，得濾液；
[0019]4)將步驟3)所得濾液濃縮為原體積60%_20%，4°C冷藏2_12小時，濾紙減壓抽濾，得沉淀；
[0020]5)沉淀加乙醇溶液溶解，加入石油醚，石油醚與乙醇體積比為0.5-2: 1，混勻，靜置萃取2-12小時，得上、下兩層溶液；
[0021]6)將下層溶液濃縮，真空冷凍干燥，得粗提物；
[0022]7)將粗提物中加入4-10倍體積的無水乙醇，溶解，4°C冷藏2 — 12小時，減壓抽濾，得晶體，真空冷凍干燥，重結(jié)晶2-4次即可。用HPLC測其純度，純度達98%以上。
[0023]所述步驟2)中加無水乙醇回餾提取，料液比1: 8-15，提取2-3次。
[0024]所述步驟5)中石油醚與乙醇體積比為0.5-1.5: I。
[0025]我們通過連翹葉一無水乙醇提取一石油醚萃取一重結(jié)晶、連翹葉一無水乙醇提取一大孔樹脂柱層析一重結(jié)晶、連翹葉一 85%乙醇提取一石油醚萃取一重結(jié)晶以及連翹葉一 85%乙醇提取一大孔樹脂柱層析一重結(jié)晶四種方法進行連翹苷的制備和比較，結(jié)果表明:連翹葉一無水乙醇提取一石油醚萃取一重結(jié)晶所得連翹苷含量和純度最高，效果最好。分析其原因:一是無水乙醇回流提取可大大減少雜質(zhì)，給后續(xù)純化工作帶來極大便利，雖提取時連翹苷提取率較低，但由于純度較高，經(jīng)后續(xù)純化后連翹苷最終含量和純度反而比乙醇水溶液提取得到的要高。二是用石油醚萃取，排除了葉綠素干擾，大大提高了連翹苷的純度。三是分離時并未使用柱層析，從而耗時大大減少，為科研與企業(yè)生產(chǎn)節(jié)省了大量人力和時間。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0026]圖1:連翹葉無水乙醇粗提物的HPLC圖
[0027]圖2:連翹葉無水乙醇提取物石油醚萃取后的上層溶液紫外可見光掃描圖
[0028]圖3:連翹葉無水乙醇提取物石油醚萃取后的下層溶液紫外可見光掃描圖
[0029]圖4:連翹葉無水乙醇粗提物石油醚萃取后的下層溶液第3次結(jié)晶后HPLC圖
【具體實施方式】
[0030]實施例1 [0031]I)取連翹葉，粉碎，過10-20目篩，得粉末；
[0032]2)稱連翹葉粉末200g，加入2000mL無水乙醇回餾提取，提取2次，三層紗布過濾，
得濾液；
[0033]3)濾液濃縮至糊狀。部分糊狀物干燥，HPLC檢測如圖1所示。其余糊狀物加入8倍體積的蒸餾水，濾紙減壓抽濾，得濾液；
[0034]4)將步驟3)所得濾液濃縮為原體積40%，4°C冷藏8小時，濾紙減壓抽濾，得沉淀；
[0035]5)沉淀加乙醇溶液溶解，加入石油醚，石油醚與乙醇體積比為1:1，混勻，靜置萃取8小時，得上、下兩層溶液；圖2為萃取溶液上層吸光度曲線，說明石油醚已把葉綠素A和葉綠素B萃取干凈；圖3為萃取溶液下層吸光度曲線，波長200nm到SOOnm之間，說明下層乙醇溶液中已沒有葉綠素A和葉綠素B雜質(zhì)。
[0036]6)將下層溶液濃縮，真空冷凍干燥，得粗提物；
[0037]7)將粗提物中加入8倍體積的無水乙醇，溶解，4°C冷藏8小時，減壓抽濾，得晶體，真空冷凍干燥，得到連翹苷重結(jié)晶粗品2.88g，純度為66.93% ;再重結(jié)晶2次，得連翹苷1.94g，純度98.7%，如圖4所示。
[0038]實施例2
[0039]步驟2)中，無水乙醇回餾提取3次，其它同實施例1。得連翹苷2.0lg，用HPLC測其純度，純度達98.4%。
[0040]實施例3
[0041]步驟5)中，加入石油醚進行萃取，石油醚與乙醇體積比為0.5:1，其它同實施例1。得連翹苷1.97g，用HPLC測其純度，純度達98.2%。
[0042]實施例4
[0043]步驟7)中，重結(jié)晶共2次，其它步驟同實施例1。得連翹苷1.98g，純度達96.8%。
【權(quán)利要求】
1.一種快速從連翹葉中制備連翹苷的方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)取連翹葉，粉碎，過10-20目篩，得粉末； 2)稱連翹葉粉末，加無水乙醇回餾提取，料液比1: 5-20，提取2-4次，三層紗布過濾，得濾液； 3)濾液濃縮至糊狀，加入5-10倍體積的蒸餾水，濾紙減壓抽濾，得濾液； 4)將步驟3)所得濾液濃縮為原體積60%-20%，4°C冷藏2-12小時，濾紙減壓抽濾，得沉淀； 5)沉淀加乙醇溶液溶解，加入石油醚，石油醚與乙醇體積比為0.5-2: 1，混勻，靜置萃取2_12小時，得上、下兩層溶液； 6)將下層溶液濃縮，真空冷凍干燥，得粗提物； 7)將粗提物中 加入4-10倍體積的無水乙醇，溶解，4°C冷藏2— 12小時，減壓抽濾，得晶體，真空冷凍干燥，重結(jié)晶2-4次即可。用HPLC測其純度，純度達98%以上。
2.如權(quán)利要求1所述的一種快速從連翹葉中制備連翹苷的方法，其特征在于，所述步驟2)中加無水乙醇回餾提取，料液比1: 8-15，提取2-3次。
3.如權(quán)利要求1所述的一種快速從連翹葉中制備連翹苷的方法，其特征在于，所述步驟5)中石油醚與乙醇體積比為0.5-1.5: I。
【文檔編號】C07H15/26GK103450296SQ201310385121
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月29日
【發(fā)明者】陳廷貴, 杜杰, 李飛鶴, 栗亞云, 張立偉 申請人:山西大學