用于制備避孕疫苗的自組裝多肽納米的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于免疫學(xué)領(lǐng)域，特別涉及避孕疫苗的研制技術(shù)，具體涉及Q11多肽與附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽聯(lián)合在制備針對(duì)附睪蛋白酶抑制蛋白抗體的免疫原中的應(yīng)用，所述Q11多肽的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示；還涉及利用自組裝多肽納米纖維試劑盒制備自組裝多肽納米纖維工作液的方法，將所述融合多肽溶于超純水中，得融合多肽的水溶液；將所述融合多肽的水溶液與所述PBS緩沖液充分混合，得自組裝多肽納米纖維工作液。其研究思路為避孕疫苗提供了新的思路，且避孕效果明顯。
【專利說(shuō)明】用于制備避孕疫苗的自組裝多肽納米
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于免疫學(xué)領(lǐng)域，特別涉及避孕疫苗的研制技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]源于自然界中廣泛存在的蛋白質(zhì)自組裝現(xiàn)象，近年來(lái)多肽的自組裝逐漸成為材料學(xué)和生物醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。通過(guò)合理調(diào)控多肽的分子結(jié)構(gòu)以及改變外界的環(huán)境，多肽分子可以利用氫鍵、疏水性作用、η-η堆積作用等非共價(jià)鍵力自發(fā)或觸發(fā)地自組裝形成形態(tài)與結(jié)構(gòu)特異的組裝體。由于多肽自身具有良好的生物相容性和可控的降解性能，利用多肽自組裝技術(shù)構(gòu)建的各種功能性材料在藥物控制釋放、組織工程支架材料以及生物礦化等領(lǐng)域內(nèi)有著巨大的應(yīng)用前景 。
[0003]避孕疫苗(contraceptive vaccine, CV)的研發(fā)思路起源于免疫性不孕患者體內(nèi)存在生育抑制相關(guān)的特異性抗體，免疫性避孕的作用原理是選擇與生殖過(guò)程密切相關(guān)關(guān)鍵抗原成分制成疫苗，誘導(dǎo)受者產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，通過(guò)高效、特異地抑制精或卵子發(fā)生、影響精子活力、頂體反應(yīng)或獲能、干擾精卵相互作用、結(jié)合或融合，及阻斷胚胎種植或發(fā)育的一個(gè)或多個(gè)環(huán)節(jié)，從而達(dá)到控制生育的目的。目前，避疫苗的研究主要集中在靶抗原的篩選，而在疫苗設(shè)計(jì)和免疫策略的研究方面落后于他治療性和預(yù)防性疫苗。截至目前，已有數(shù)量眾多的免疫避孕祀抗原被篩選出來(lái)，是僅有人絨毛膜促性腺激素(human chorionicgonadotropin, HCG)嵌合肽疫苗進(jìn)入臨試驗(yàn)，因而,有必要在現(xiàn)有免疫避孕祀抗原的基礎(chǔ)上，結(jié)合在其他治療性和預(yù)防性疫苗中成功應(yīng)用的疫苗設(shè)計(jì)和免疫策略，深入挖掘現(xiàn)有免疫避孕靶抗原的潛力，使得更多的避孕疫苗有望進(jìn)入臨床。
[0004]近年來(lái)，基于Eppin的避孕疫苗研究取得了一定的進(jìn)展，但仍存在以下問(wèn)題:(1)采用Eppin優(yōu)勢(shì)表位疫苗進(jìn)行免疫能減少不良反應(yīng)，但免疫原性差；(2)表位交聯(lián)載體蛋白的方法可以增強(qiáng)免疫原性，但所產(chǎn)生的抗體特異性差；(3)基于Eppin的避孕疫苗實(shí)驗(yàn)研究中通常聯(lián)合使用免疫佐劑如弗氏佐劑，其在人體中的應(yīng)用存在安全性問(wèn)題；因此，解決這一問(wèn)題的關(guān)鍵在于構(gòu)建更加安全、有效的避孕疫苗運(yùn)載體系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供Qll多肽與附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽的聯(lián)合應(yīng)用，該應(yīng)用可以提高附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽的免疫原性，為避孕疫苗的制備提供新的思路。本發(fā)明的目的之二在于提供一類融合多肽，其具有較高的免疫原性。本能發(fā)明的目的之三在于提供一段表位肽，用其制備避孕疫苗具有較好的免疫原性。本發(fā)明的目的之四在于提供自組裝多肽納米纖維試劑盒，其能用于制備自組裝多肽納米纖維工作液；另外，還提供了自組裝多肽納米纖維工作液的制備方法，其操作簡(jiǎn)單，工藝穩(wěn)定。
[0006]以本實(shí)驗(yàn)室篩選的Eppin優(yōu)勢(shì)抗原表位為基礎(chǔ)，與具有多價(jià)表達(dá)抗原表位特征的自組裝納米肽序列(QQKFQFQFEQQ，Qll)進(jìn)行偶聯(lián)，利用人工合成肽技術(shù)固相合成融合多肽E-QlI，通過(guò)調(diào)整自組裝條件制備E-QlI自組裝納米疫苗。結(jié)果表明，采用全化學(xué)合成方法獲得的融合多肽E-Qll純度大于90%，并能在PBS中完成自組裝，⑶分析E-Qll肽具有β折疊二級(jí)結(jié)構(gòu)，TEM觀察發(fā)現(xiàn)E-Qll肽能夠自組裝形成納米纖維結(jié)構(gòu)，E-Qll肽能與抗血清發(fā)生的結(jié)合反應(yīng)。
[0007]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0008]Qll多肽(簡(jiǎn)稱Qll)與附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽聯(lián)合在制備針對(duì)附睪蛋白酶抑制蛋白抗體的免疫原中的應(yīng)用，所述Qll多肽的氨基酸序列如SEQ ID Ν0:1所示。表1中羅列了部分附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽的氨基酸序列。表1中的表位肽可與Qll多肽聯(lián)合，制備針對(duì)附睪蛋白酶抑制蛋白抗體的免疫原。
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【權(quán)利要求】
1.Qll多肽與附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽聯(lián)合在制備針對(duì)附睪蛋白酶抑制蛋白抗體的免疫原中的應(yīng)用，所述Qll多肽的氨基酸序列如SEQ ID N0:1所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述表位肽的氨基酸序列如SEQID NO: 2所示。
3.Ql I多肽與附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽聯(lián)合在制備避孕疫苗中的應(yīng)用，所述Ql I多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述表位肽的氨基酸序列如SEQID NO: 2所示。
5.融合多肽，其特征在于:由附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽和Qll多肽組成，所述表位肽的C端與所述Qll多肽的N端串聯(lián)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的融合多肽，其特征在于:所述表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示，所述融合多肽的氨基酸序列如SEQ ID N0:3所示。
7.附睪蛋白酶抑制蛋白的表位肽，其特征在于:所述表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。
8.權(quán)利要求5所述的融合多肽的自組裝多肽納米纖維試劑盒，其特征在于:包括融合多肽、Qll多肽、超純水和PBS緩沖液。
9.利用權(quán)利要求8所述的自組裝多肽納米纖維試劑盒制備自組裝多肽納米纖維工作液的方法，其特征在于:將所述融合多肽溶于超純水中，得融合多肽的水溶液；將所述融合多肽的水溶液與所述PBS緩沖液充分混合，得自組裝多肽納米纖維工作液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于:所述融合多肽的水溶液中融合多肽的濃度為8mM，所述融合多肽的水溶液與所述PBS緩沖溶液的體積比為1:3~6。
【文檔編號(hào)】C07K16/38GK103539859SQ201310461036
【公開(kāi)日】2014年1月29日 申請(qǐng)日期:2013年9月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月23日
【發(fā)明者】唐帥, 梁志清, 何畏, 王延洲, 孫黎黎, 徐萍萍 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院