1.一種檢測哺乳動物血液中微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特異性方法,其特征在于:包括以下步驟:
(1)微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)蛋白高特異性結(jié)合適配體AP的設(shè)計與合成;
(2)適配體AP成環(huán)反應(yīng)得到CAP;
(3)DNA納米器件PDN的制備;
(4)微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞所在的單核細(xì)胞層的分離;
(5)DNA納米器件PDN標(biāo)記單核細(xì)胞層中的目標(biāo)微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞;
(6)免疫磁珠法分離DNA納米器件PDN標(biāo)記的微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞;
(7)滾環(huán)擴(kuò)增法測定微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞細(xì)胞數(shù)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種檢測哺乳動物血液中微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特異性方法,其特征在于:所述步驟(1)的適配體AP是基于Cell-SELEX技術(shù),以微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞表面高表達(dá)的蛋白為模板而設(shè)計合成的。
3.如權(quán)利要求1所述的一種檢測哺乳動物血液中微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特異性方法,其特征在于:所述步驟(3)DNA納米器件PDN的制備方法是:依據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則,設(shè)計可與AP連接成多環(huán)的引物DNA1、DNA2,其中,DNA1和DNA2有兩段相同的序列片段①和②;環(huán)化DNA1和DNA2得到CDNA1和CDNA2,將CAP、CDNA1、CDNA2以1:1:1-1:5:5的摩爾比混和,雜交得DNA納米器件PDN。
4.如權(quán)利要求1所述的一種檢測哺乳動物血液中微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特異性方法,其特征在于:所述步驟(7)滾環(huán)擴(kuò)增所用的引物RCAprimer是依據(jù)DNA1和DNA2的相同序列片段①設(shè)計的。
5.如權(quán)利要求1所述的一種檢測哺乳動物血液中微量循環(huán)腫瘤細(xì)胞的特異性方法,其特征在于:所述滾環(huán)擴(kuò)增所用的分子信標(biāo)MB是依據(jù)DNA1和DNA2的相同序列片段②設(shè)計的。