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檢測EGFR耐藥性突變的方法和組合物與流程

文檔序號:11126256閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,包括:

多個PCR引物;

所述PCR引物為:

(1)正向引物:5’-CGTTCGGCACGGTGTATAA-3’

反向引物:5’-GCCTCCTTCTGCATGGTATT-3’

或者

(2)正向引物:5’-GGATCCCAGAAGGTGAGAAAGTT-3’

反向引物:5’-ATAGTCCAGGAGGCAGCCGAA-3’。

2.根據(jù)權利要求1所述的檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,還包括:

試劑盒;

所述試劑盒包括Taq DNA Polymerase、dNTPs、反應緩沖液。

3.根據(jù)權利要求2所述的檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,所述試劑盒中Taq DNA Polymerase的濃度為2x。

4.根據(jù)權利要求2所述的檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,所述引物的終濃度為0.2uM,試劑盒中dNTPs終濃度為0.5uM,緩沖液10xTaq PCR Buffer的終濃度為1x。

5.根據(jù)權利要求4所述的檢測EGFR耐藥性突變的組合物,其特征在于,所述用于配置引物的終濃度溶液的引物濃度為10uM。

6.一種采用如權利要求2-5中任意一項所述的組合物進行檢測EGFR耐藥性突變的方法,其特征在于,包括步驟:

A.模板制備:石蠟包埋組織切片中提取DNA,使用紫外分光光度計對其進行濃度調整,作為PCR檢測的模板;

B.反應組分配制:分別配制檢測混合物和陰性對照品混合物;其中,檢測混合物按PCR混合液10.5uL、模板DNA溶液2uL,加ddH2O補至50ul配制一管;陰性對照品混合物按PCR混合液10.5uL,不加DNA模板,加ddH2O補至50ul配制一管;

C.擴增:分別將檢測混合物、陰性對照品混合物放入PCR儀擴增,按以下程度進行擴增:

(1)94℃,2-5min,1cycle;

(2)循環(huán)重復如下步驟30-35次:

94℃ 30S

50-60℃ 30S

72℃ 1-2kb/min;

(4)72℃, 5-10min;

D.結果判定:擴增產(chǎn)物直接點樣電泳,如果檢測物中擴增出片段和理論上設計引物時參照的目的片段大小一致,且陰性對照物無條帶,說明樣本DNA中含有該突變;如果檢測物中沒有擴增出片段,且陰性對照品無條帶,說明檢測物中不含該突變。

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