本發(fā)明涉及一種生物藥用原料的制備方法，屬于生物工程領(lǐng)域，具體是一種肝素鈉純化方法。

背景技術(shù)：

粗品肝素中含有其它黏多糖，也含有一些殘余的蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)，從而使粗品肝素的效價過低。目前，在肝素提取純化方面，主要采用有機溶劑（如乙醇、丙酮等）分步沉淀法、氧化純化法、酶解輔助純化法、離子交換法、親和層析法等。這些方法各有特點，但也都有些不足之處，有的表現(xiàn)為產(chǎn)品在線時間長，有的表現(xiàn)為分離不完全，特別是粗品肝素中的硫酸皮膚素、硫酸軟骨素等有關(guān)物質(zhì)去除效果很難達到藥典要求。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于：提供一種肝素鈉純化方法，以共價結(jié)合的瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III為層析介質(zhì)，運用親和層析的原理純化肝素鈉粗品，去除硫酸皮膚素及硫酸軟骨素，得到效價大于180Uusp/mg的高純肝素鈉，其中硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關(guān)物質(zhì)含量遠小于藥典規(guī)定的含量要求。

本發(fā)明的技術(shù)解決方案是：以共價結(jié)合的瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III為層析介質(zhì)，用平衡液溶解粗品肝素，緩慢通過親和層析介質(zhì)，循環(huán)吸附3次；吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液洗滌；再用2個柱體積的洗脫液將肝素洗下；最后加入提取液乙醇，攪拌，沉淀，脫水，過濾，烘干，得效價大于180Uusp/mg的高純肝素鈉。

1)平衡液中含0.15MNaCl、20mM Tris-HCl，pH7.5。

2)洗滌液中含1.2-1.5MNaCl、20mM Tris-HCl，pH7.5。

3)洗脫液中含2MNaCl、20mM Tris-HCl，pH7.5。

4)提取液乙醇的質(zhì)量濃度是94%，其體積是洗脫液體積的1.0-1.5倍，沉淀8-10小時。

本發(fā)明的優(yōu)點在于：1、粗品肝素經(jīng)一步純化就將硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關(guān)物質(zhì)的含量降低到藥典的要求，極大地提高了生產(chǎn)效率；2、瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III層析介質(zhì)經(jīng)再生后，可重復(fù)使用。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例進一步說明本發(fā)明作進一步說明。

實施例1

1)取粗品肝素鈉（來源于豬）2克，用100ml（0.15MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）平衡液溶解，緩慢通過瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III親和層析介質(zhì)（2ml/min），循環(huán)吸附3次；

2)吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液（1.2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）洗滌；再用2個柱體積的洗脫液（2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）將肝素洗下；

3)按洗脫液的體積加入洗脫液體積1.5倍的質(zhì)量濃度94%的乙醇，攪拌，沉淀10小時，脫水，過濾，烘干，得效價大于180Uusp/mg的高純肝素鈉。硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關(guān)物質(zhì)的液相色譜峰面積僅為對照品的1/5，符合藥典要求。

實施例2

1)取粗品肝素鈉（來源于豬）1.8克，用100ml（0.15MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）平衡液溶解，緩慢通過瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III親和層析介質(zhì)（2ml/min），循環(huán)吸附3次；

2)吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液（1.35MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）洗滌；再用2個柱體積的洗脫液（2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）將肝素洗下；

3)按洗脫液的體積加入洗脫液體積1.25倍的質(zhì)量濃度94%的乙醇，攪拌，沉淀9小時，脫水，過濾，烘干，得效價大于185Uusp/mg的高純肝素鈉。硫酸皮膚素及硫酸軟骨素等相關(guān)物質(zhì)的液相色譜峰面積僅為對照品的1/6，符合藥典要求。

實施例3

1)取粗品肝素鈉（來源于牛）1.5克，用100ml（0.15MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）平衡液溶解，緩慢通過瓊脂糖凝膠-抗凝血酶III親和層析介質(zhì)（2ml/min），循環(huán)吸附3次；

2)吸附完成后，用2-3個柱體積的洗滌液（1.5MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）洗滌；再用2個柱體積的洗脫液（2MNaCl，20mM Tris-HCl，pH7.5）將肝素洗下；

3)按洗脫液的體積加入洗脫液體積1.0倍的質(zhì)量濃度94%的乙醇，攪拌，沉淀8小時，脫水，過濾，烘干，得效價大于180Uusp/mg的高純肝素鈉。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實施例而已，并非是對本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護范圍。