本發(fā)明涉及金黃色葡萄球菌，尤其是涉及一種二維編碼的金黃色葡萄球菌分子分型方法。
背景技術(shù)：
：金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，簡稱金葡)屬于革蘭氏陽性細(xì)菌，廣泛分布于自然界，可以引起人和動(dòng)物的感染。金葡在其進(jìn)化過程中具備了強(qiáng)大的遺傳適應(yīng)性，具有抗干燥、耐熱、耐低溫、耐高滲的特點(diǎn)，為金葡的大規(guī)模感染提供了必備條件。金葡是引起院內(nèi)感染和社區(qū)感染的主要病原菌之一[1-3]。據(jù)估計(jì)，超過20％的人類是金葡的攜帶者[4,5]。金葡是一種引起高死亡率的致病菌，主要原因之一是金葡的感染部位多樣，可造成皮膚和軟組織、呼吸系統(tǒng)、腸道、血液、泌尿系統(tǒng)等各種組織器官的感染，引起外科切口、創(chuàng)面的局部化膿性感染，骨髓炎、化膿性關(guān)節(jié)炎和深部膿腫等深組織感染及肺炎、食物中毒、敗血癥、心內(nèi)膜炎等全身感染疾病[6,7]。其次，金葡易感人群眾多，疾病患者及新生兒是其主要的易感人群[8,9]，在重癥加強(qiáng)護(hù)理病房(ICUs)，由于金葡導(dǎo)致的患者死亡率可達(dá)到50％，并且不斷成增長趨勢[10]。1961年，英國Jevons首次報(bào)道發(fā)現(xiàn)了耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA)，自此以后，逐漸發(fā)現(xiàn)金葡除對β-內(nèi)酰胺類抗生素藥物產(chǎn)生耐藥性，對紅霉素、克林霉素等多種抗生素也可形成耐藥性，并呈多重耐藥趨勢[11]。目前，針對金葡，臨床常檢的抗生素種類接近20種，MRSA也被廣大學(xué)者稱為“超級(jí)細(xì)菌”[12]。目前治療金葡的最有效抗生素是萬古霉素，但是，20世紀(jì)90年代后，世界各地也相繼發(fā)現(xiàn)了耐萬古霉素金黃色葡萄球菌(vancomycin-resistantStaphylococcusaureus，VRSA)菌株[13-16]，使臨床治療陷入困境。2009年1月，《NEngJMed》將MRSA列為耐藥菌中首位“臨床超級(jí)挑戰(zhàn)”[17]。MRSA在世界各大醫(yī)院均具有很高的流行性，據(jù)統(tǒng)計(jì)[18]馬俊英,劉健華,陳杖榴,etal.細(xì)菌分型的分子生物學(xué)技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)科學(xué),2007,37(10):914-918，北美、南美和馬耳他的MRSA分離率大于50％，而中國、澳大利亞、非洲和歐洲部分國家和地區(qū)的MRSA分離率達(dá)到了25％～50％(例如葡萄牙為49％，希臘40％，意大利為37％)，而僅荷蘭、斯堪的納維亞等少數(shù)歐洲國家的MRSA分離率較低。亞洲部分國家和地區(qū)院內(nèi)MRSA的分離率也遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過50％，尤其在斯里蘭卡(86.5％)、南韓(77.6％)、越南(74.1％)、中國臺(tái)灣(65.0％)、泰國(57.0％)和中國香港(56.8％)[19-22]。由金葡，尤其是MRSA導(dǎo)致的疾病暴發(fā)流行事件遍及全球，死亡率不斷攀升，已經(jīng)引起世界各地醫(yī)療工作人員和科學(xué)研究者的廣泛重視[23,24]。據(jù)2007年美國疾病控制和預(yù)防中心統(tǒng)計(jì)，世界每年約有100000人感染MRSA，與艾滋病、病毒性乙型肝炎并列成為世界三大感染性疾病，嚴(yán)重威脅著人類的健康[25]。根據(jù)日本衛(wèi)生部公布的數(shù)字，日本在20年間(1980～1999)由金葡引起的食物中毒共有2525起暴發(fā)事件，包括59964人，3人死亡。由金葡引起的食物中毒暴發(fā)事件，首推2000年“雪印奶粉”事件，超過14000人受感染。面對金葡感染如此嚴(yán)峻的形勢，減少社會(huì)損失的重要策略是防控為主，即控制金葡，尤其是MRSA的流行傳播，因此，需要利用病原微生物分型技術(shù)明確流行環(huán)節(jié)、切斷傳播途徑、中止耐藥菌株在人群中的傳播。金葡是MLST分型具有代表性的成功例子，自金葡的MLST方案提出以來[26]，MLST數(shù)據(jù)庫中的菌株數(shù)目已達(dá)到4246株，序列類型2151個(gè)(見http://saureus.mlst.net/，2012年3月5日)。其中從1961～2008年，世界各地主要報(bào)道了五大金葡克隆群(clonalcomplex，CC)，包括CC5、CC8、CC22、CC30和CC45[27-29]它們各包含了多種序列型，其中CC5和CC8是世界最主要流行克隆群，美國和歐洲國家的主要流行型為CC30-ST36和CC45[28-32]，而亞洲國家最要流行型為CC8-ST239，CC5-ST5和CC22-ST22[20,33-39]。病原微生物引起的傳染性疾病是全球公共衛(wèi)生領(lǐng)域面臨的嚴(yán)峻課題。通過病原微生物分型，可實(shí)現(xiàn)對病原微生物的流行病學(xué)調(diào)查、跟蹤和阻斷傳播途徑以遏制其暴發(fā)流行。理想的病原微生物分子分型技術(shù)，應(yīng)具有分型能力強(qiáng)、操作簡便、重復(fù)性好、準(zhǔn)確快速、高通量自動(dòng)化、成本低廉的特點(diǎn)。本發(fā)明以沙門氏菌和金黃色葡萄球菌為模型，建立了一種新型的數(shù)字化病原微生物分子分型技術(shù)-基于熔點(diǎn)編碼的分子分型(MLMT)。目前病原微生物的分型技術(shù)主要分為表型分型技術(shù)和核酸指紋分型技術(shù)。表型分型技術(shù)主要是通過觀察病原微生物的外部形態(tài)特征及生化特性對其進(jìn)行分型鑒定的方法，這種方法雖然具有簡單直觀的優(yōu)點(diǎn)，是獲得菌株基本信息和進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查不可缺少的手段，但表型特征數(shù)量有限且易受環(huán)境因素的影響，具有較強(qiáng)的主觀性，且分型方法一般耗時(shí)較長，延誤了疾病傳播控制的最佳時(shí)間。包括血清分型、噬菌體-生物分型、抗藥性分型、免疫印跡分型等。核酸指紋分型技術(shù)是以病原微生物的核苷酸序列差異作為分析對象的分子生物學(xué)檢測方法，主要分為基于電泳圖譜分析的分子分型技術(shù)和基于PCR的分子分型技術(shù)?；陔娪緢D譜的分子分型技術(shù)包括核糖體分型(ribotyping)[19]、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)[20]、限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)[21]、擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)[22]、脈沖場凝膠電泳(PFGE)[23]、可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)分析(VNTR)[24]、多位點(diǎn)可變數(shù)目串聯(lián)重復(fù)分析(MLVA)[25]等。這些方法在研究病原菌的流行病學(xué)特征、了解病原菌的傳播途徑、追溯傳染源及在臨床傳染性疾病的診斷中都發(fā)揮了重大作用，PFGE技術(shù)也已成為許多病原微生物分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”[26]。但是基于電泳圖譜的分型技術(shù)存在一些局限[27]，主要表現(xiàn)為：(1)通過電泳條帶的大小和有無進(jìn)行判斷分析，不排除存在片段大小相近的條帶，序列差異卻較大的可能。(2)不同實(shí)驗(yàn)室間的重復(fù)性較差，需要專業(yè)人員操作判讀，數(shù)據(jù)不具有共享性。(3)操作繁瑣，技術(shù)復(fù)雜，耗時(shí)較長，實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響因素較多等?；赑CR的分子分型技術(shù)主要包括多位點(diǎn)序列分型技術(shù)(MultilocusSequenceTyping，MLST)及其基于MLST技術(shù)的改進(jìn)方案(PCR/質(zhì)譜技術(shù)和PCR/HRM技術(shù))。(一)MLST技術(shù)MLST技術(shù)于1998年提出[28-31]，是一種建立在管家基因核苷酸序列基礎(chǔ)上的分型方法，目前已成為部分病原微生物的長期流行病學(xué)和遺傳分析的金標(biāo)準(zhǔn)。其原理是根據(jù)菌種的流行病學(xué)和分型的研究背景，選擇具有代表性的菌株，在此基礎(chǔ)上，篩選細(xì)菌基因組上相對保守又可允許局部堿基發(fā)生點(diǎn)突變的6～10個(gè)管家基因(一般是7個(gè))，設(shè)計(jì)特異性引物，并進(jìn)行PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物測序(長度一般為400～500bp)[32,33]。每個(gè)基因位點(diǎn)的突變對應(yīng)此管家基因的一種等位基因型別，將每個(gè)菌株在各管家基因的等位基因型按照順序串聯(lián)排列起來，就形成菌株的等位基因圖譜(alleleprofile)或稱序列類型(SequenceType，ST)，代表該菌株特有的核苷酸序列信息。由于ST包含多個(gè)基因位點(diǎn)的序列變異情況，對于某些細(xì)菌，可由此獲得十分精細(xì)的分型，并通過構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹圖用于各組群菌株間的基因組相關(guān)性分析[34,35]。MLST序列信息具有無歧義和可傳輸?shù)膬?yōu)點(diǎn)，目前主要致病菌都已建成了MLST數(shù)據(jù)庫(http://www.mlst.net/；http://pubmlst.org)，可以方便世界各地的實(shí)驗(yàn)室通過互聯(lián)網(wǎng)傳遞數(shù)據(jù)，形成某菌種詳盡的信息，使不同實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果具有可重復(fù)性和可比性[36]。MLST實(shí)驗(yàn)上僅需PCR擴(kuò)增和測序，無需電泳步驟，且對樣品來源要求低，可不經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)進(jìn)行分析。另外，高通量測序技術(shù)的發(fā)展，也為MLST的應(yīng)用提供了新的契機(jī)[37]。MLST技術(shù)擁有許多優(yōu)點(diǎn)，但其局限性也不容忽視。首先，MLST不適于管家基因變異程度低或者無變異的菌株。其次，MLST不適合多數(shù)一線實(shí)驗(yàn)室，測序技術(shù)本身操作復(fù)雜，難以在疾病暴發(fā)時(shí)由醫(yī)院本身完成，實(shí)效性較差。此外，測序儀價(jià)格高昂，MLST需要多個(gè)目標(biāo)片段的測序分析，對大量菌株進(jìn)行研究時(shí)，顯然存在成本問題和時(shí)間問題，這些都限制了MLST的推廣。目前，我國的MLST應(yīng)用尚處在初步階段，應(yīng)用不多。(二)PCR/質(zhì)譜技術(shù)2007年，Honisch等[38]提出用基質(zhì)輔助激光解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜(Matrix-assistedLaserDesorption/IonisationTime-of-flightMassSpectrometry，MALDI-TOFMS)代替測序，進(jìn)行MLST分析的思路。該方法結(jié)合特意性酶切(C和U堿基)技術(shù)和質(zhì)譜分析技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對菌株的分型和鑒定，結(jié)果可在2個(gè)工作日內(nèi)獲得。該方法使用384孔自動(dòng)加液器進(jìn)行PCR操作，在自動(dòng)化程度和檢測通量上具有優(yōu)勢，并取得了與MLST相當(dāng)?shù)闹噩F(xiàn)性和分辨力，與MLST方法的一致率為98％。2009年，Hall等[39]提出采用電噴霧離子化質(zhì)譜(ElectrosprayIonizationMassSpectrometry，ESI-MS)代替測序進(jìn)行MLST分析。通過計(jì)算堿基組成(A、G、C、T四種堿基的數(shù)目)，實(shí)現(xiàn)對菌株的分型和鑒定。該方法將PCR與ESI-MS相結(jié)合，1天內(nèi)可分析180份樣品。但該方法無法分辨堿基組成相同，但堿基排序差異較大的菌株，從這點(diǎn)上講，ESI-MS可能不如MALDI-TOFMS與MLST方法的符合程度高。上述兩種離子源質(zhì)譜，在檢測通量和自動(dòng)化程度上都有了顯著進(jìn)步，但共同缺點(diǎn)是儀器成本高。另一方面，無論是利用堿基酶切圖譜還是堿基組成，都無法達(dá)到測序的分辨能力。(二)PCR/HRM技術(shù)2011年，一個(gè)加拿大和美國聯(lián)合小組報(bào)道了另一種利用高分辨熔解分析技術(shù)(HighResolutionMeltingAnalysis，HRM)進(jìn)行多位點(diǎn)分型的策略[40]。他們以空腸彎曲菌為研究對象，直接將MLST方法中的各個(gè)片段分成若干小片段進(jìn)行HRM分析(7個(gè)MLST片段共分成17個(gè)HRM片段)，然后將這些小片段的HRM曲線組合起來與MLST的等位基因型相對照，結(jié)果表明絕大多數(shù)的等位基因(92％)都可被區(qū)分。該文章同時(shí)指出，利用HRM進(jìn)行MLST分型，費(fèi)用為測序的20％～30％。同年，來自澳大利亞的一個(gè)研究組連續(xù)發(fā)表3篇文章[41-43]報(bào)道了利用HRM進(jìn)行多位點(diǎn)分型的新模式，命名為“SNPnucleatedmini-MLSTtyping”，簡稱為“Minimtyping”。他們首先利用自主研發(fā)的MinimumSNPs軟件[44-48]，從MLST數(shù)據(jù)庫包含的7個(gè)管家基因片段中選取數(shù)個(gè)單核苷酸多態(tài)性(singlenucleotidepolymorphisms,SNPs)位點(diǎn)。這些SNPs位點(diǎn)在菌株中一旦發(fā)生變異，會(huì)引起相應(yīng)片段G+C百分比發(fā)生變化，繼而引起HRM曲線形狀的變化。通過獲得包含這些SNPs位點(diǎn)的HRM曲線類型，就可以獲得這些SNPs位點(diǎn)的基因型，進(jìn)而推算出其對應(yīng)的菌株的ST型。由于HRM曲線還具有檢測片段內(nèi)部其它變異位點(diǎn)(特別是能引起G+C含量變化的位點(diǎn))的能力，因此比單純的SNP分型具有更高的分辨力。兩個(gè)小組都認(rèn)為采用HRM的好處是操作簡便、成本低，分辨能力不低于質(zhì)譜法，且通過384孔實(shí)時(shí)PCR儀器的使用，能對大量菌株進(jìn)行高通量分析。但同時(shí)也都指出，無論是對基因?qū)嵭蟹侄螜z測還是采用優(yōu)選的SNPs，HRM方法都不能對擴(kuò)增片段中的突變位點(diǎn)進(jìn)行定位，而引起分辨能力下降。同時(shí)，HRM方法每PCR反應(yīng)只能檢測一個(gè)擴(kuò)增片段，不能實(shí)現(xiàn)真正意義上的高通量檢測[49]。綜上所述，最理想的分型技術(shù)應(yīng)具有以下特點(diǎn)[50-53]：(1)結(jié)果明晰，高重復(fù)性，可操作性；(2)不同實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果的可對比性；(3)病原菌暴發(fā)時(shí)，用于分型以用于控制疫情的實(shí)時(shí)階段是1.5～3天，因此，要求分型快速、高通量、自動(dòng)化；(4)操作簡便，便于儲(chǔ)存、傳遞和更新數(shù)據(jù)；(5)方法具有通用性，適用于多種病原微生物的分型；(6)成本低廉。因此，隨著基因組學(xué)及PCR技術(shù)的完善發(fā)展，以及高通量和低成本核酸測定的實(shí)現(xiàn)，一系列基于PCR的分子分型技術(shù)逐步取代了基于電泳圖譜的分子分型技術(shù)。參考文獻(xiàn)：[1]MadiganMT,MartinkoJM,ParkerJ,etal.Biologyofmicroorganisms:prenticehallUpperSaddleRiver,NJ,1997.[2]李維彬,郭辰虹,王玉炯.病原微生物快速檢測方法及研究進(jìn)展[J].生物技術(shù)通報(bào),2006,2.[3]PerryRD,FetherstonJD.Yersiniapestis--etiologicagentofplague[J].Clinicalmicrobiologyreviews,1997,10(1):35-66.[4]BaruaD.Historyofcholera.Cholera.Springer,1992:1-36.[5]FennerF,HendersonDA,AritaI,etal.Smallpoxanditseradication.][J].1988.[6]SwaminathanB,FengP.Rapiddetectionoffood-bornepathogenicbacteria[J].AnnualReviewsinMicrobiology,1994,48(1):401-426.[7]PanT-M,WangT-K,LeeC-L,etal.Food-bornediseaseoutbreaksduetobacteriainTaiwan,1986to1995[J].Journalofclinicalmicrobiology,1997,35(5):1260-1262.[8]BrennanP.Structure,function,andbiogenesisofthecellwallofMycobacteriumtuberculosis[J].Tuberculosis,2003,83(1):91-97.[9]ZijlstraE,El-HassanA,IsmaelA,etal.Endemickala-azarineasternSudan:alongitudinalstudyontheincidenceofclinicalandsubclinicalinfectionandpost-kala-azardermalleishmaniasis[J].TheAmericanjournaloftropicalmedicineandhygiene,1994,51(6):826.[10]烏正賚,曾光.病原微生物的耐藥性問題[J].中華流行病學(xué)雜志,1997,18(2):114-117.[11]SalaunL,SnyderLA,SaundersNJ.Adaptationbyphasevariationinpathogenicbacteria[J].Advancesinappliedmicrobiology,2003,52:263-302.[12]ConsortiumCSME.MolecularevolutionoftheSARScoronavirusduringthecourseoftheSARSepidemicinChina[J].Science,2004,303(5664):1666-1669.[13]羅成旺,盧金星.病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理工作進(jìn)展與對策[J].中華流行病學(xué)雜志,2007,27(12):1093-1094.[14]OrganizationWH.Pandemic(H1N1)2009-update56[J].2009.[15]Real-TimeR.EmergenceofanovelswineorigininfluenzaA(H1N1)virusinhumans[J].NEngljMed,2009,360:2605-2615.[16]謝學(xué)勤,高建華,楊曉英,etal.當(dāng)前新發(fā)傳染病的流行特點(diǎn)及防控建議[J].首都公共衛(wèi)生,2007,1(5):205-206.[17]李雪,金莉莉,王秋雨.病原微生物分子分型技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國公共衛(wèi)生,2007,23(3):373-374.[18]馬俊英,劉健華,陳杖榴,etal.細(xì)菌分型的分子生物學(xué)技術(shù)研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)科學(xué),2007,37(10):914-918.[19]AarestrupFM,WegenerHC,JensenN,etal.Astudyofphage-andribotypepatternsofStaphylococcusaureusisolatedfrombovinemastitisintheNordiccountries[J].ActaVeterinariaScandinavica,1996,38(3):243-252.[20]ChansiripornchaiN,RamasootaP,BangtrakulnonthA,etal.ApplicationofrandomlyamplifiedpolymorphicDNA(RAPD)analysisfortypingavianSalmonellaentericasubsp.enterica[J].FEMSImmunology&MedicalMicrobiology,2000,29(3):221-225.[21]GohS-H,ByrneS,ZhangJ,etal.MoleculartypingofStaphylococcusaureusonthebasisofcoagulasegenepolymorphisms[J].Journalofclinicalmicrobiology,1992,30(7):1642-1645.[22]vanBelkumA,MellesDC,PeetersJK,etal.Methicillin-resistantand-susceptibleStaphylococcusaureussequencetype398inpigsandhumans[J].Emerginginfectiousdiseases,2008,14(3):479.[23]BoschT,deNeelingA,SchoulsL,etal.PFGEdiversitywithinthemethicillin-resistantStaphylococcusaureusclonallineageST398[J].BMCmicrobiology,2010,10(1):40.[24]MellmannA,WenigerT,BerssenbrüggeC,etal.BasedUponRepeatPattern(BURP):analgorithmtocharacterizethelong-termevolutionofStaphylococcusaureuspopulationsbasedonspapolymorphisms[J].BMCmicrobiology,2007,7(1):98.[25]SobralD,SchwarzS,BergonierD,etal.Highthroughputmultiplelocusvariablenumberoftandemrepeatanalysis(MLVA)ofStaph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3>Staphylococcusaureus<400>2tataaccacgtcctgcatc19<210>3<211>26<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>3atcggaaatcctatttcacattcctg26<210>4<211>25<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>4atcctttaacataaccaataccatc25<210>5<211>20<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>5gcggtgtctttagctcttgc20<210>6<211>24<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>6atgccattgttccgataatatcac24<210>7<211>25<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>7aatgacaacacgtcaaatgcgttaa25<210>8<211>23<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>8tcatgaccttcgtccattgtatc23<210>9<211>26<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>9cagattatgttacaccaatcgtgtta26<210>10<211>25<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>10aatcataaagaagatacctgatgtc25<210>11<211>20<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>11tccaacaagctaaatcgaac20<210>12<211>22<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>12tataaccacgtcctgcatcttc22<210>13<211>25<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>13tgaagctttaaatattccaattgag25<210>14<211>22<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>14aatacctttacttgcaccacct22<210>15<211>24<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>15agtacaatcatttgttgaacgacg24<210>16<211>26<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>16tacacctggtttcgttttgatgattg26<210>17<211>25<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>17gcagatttaggcgttaaatacgttg25<210>18<211>25<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>18agctttcttaacttgctcacctaca25<210>19<211>26<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>19ttgattaaatacatctattaaaccca26<210>20<211>35<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>20tgtcggagcaacgattgtatggttaatgtacttgc35<210>21<211>25<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>21acaattcctcataaagagcgtatca25<210>22<211>33<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>22cgtgtggaagtagacaaaaatgatccacgattt33<210>23<211>32<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>23tggtgcaatgtcacaaggtatgataggctatt32<210>24<211>26<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>24ttgaagctttaatcaaagatgaccaa26<210>25<211>30<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>25ctgtgcaatccttttacataaccaatacca30<210>26<211>20<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>26tagcccaaaaacttaacttg20<210>27<211>25<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>27ggaccaattggtttggttgggttat25<210>28<211>21<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>28acttgcaccacctgcgcccaa21<210>29<211>24<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>29tgtttccccaacacatataattgg24<210>30<211>32<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>30tgtcccatttgaaaaccgaagcgactgttgtt32<210>31<211>27<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>31ccacatactttattgaccgtaaatgca27<210>32<211>27<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>32atccatgtttgaaaatagcatgcgctt27<210>33<211>30<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>33cgcacagtgtctcctgttgaatgtgctgca30<210>34<211>30<212>DNA<213>Staphylococcusaureus<400>34gttttgataacagatgacaagtggataggg30當(dāng)前第1頁1 2 3