本發(fā)明涉及生物提取技術(shù),屬于魚副業(yè)深加工技術(shù)領(lǐng)域,特別是一種從魚鱗中同時提取和分離鳥嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白的方法。
背景技術(shù):
魚鱗(scale)是魚真皮層的膠原質(zhì)生成的骨質(zhì)鱗片,占魚體重量的1%~5%。魚鱗外表上像花瓣,且邊緣呈微小的卷曲,白色光澤,略帶有魚腥味,質(zhì)地堅且柔軟。已有研究表明,魚鱗中有機(jī)物占41%~55%,無機(jī)物占38%~46%,含水量為16.4%~17.8%。有機(jī)物含量最多的是蛋白質(zhì),其中又以膠原蛋白和魚鱗角蛋白為主,占魚鱗有機(jī)物的90%,也含有嘌呤類化合物。無機(jī)物以羥基磷灰石為主。
魚鱗在營養(yǎng)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域顯示出良好的作用。營養(yǎng)學(xué)家研究發(fā)現(xiàn),魚鱗含有較多的卵鱗脂,有增強(qiáng)大腦記憶力、緩延細(xì)胞衰老的作用;魚鱗中含有大量的膠原蛋白,可起多種生物學(xué)功能,如促進(jìn)傷口愈合、止血等,抗原性較低,可促進(jìn)骨骼的形成,增強(qiáng)皮膚代謝等。魚鱗膠原蛋白與其他膠原蛋白比,其蛋白質(zhì)易分解,容易被消化、吸收。魚鱗中所含的多種不飽和脂肪酸,可以在血液中以結(jié)合蛋白的形式幫助傳遞及乳化脂肪,減少膽固醇在血管壁上沉積,具有防止動脈硬化、預(yù)防高血壓及心臟病等多種作用。因此,魚鱗是特殊的保健食品。從魚鱗中提取的6-疏代鳥嘌吟,臨床治療急性白血癥,有效率為70%~75%;并對胃癌、淋巴腺瘤亦有奇效。
魚鱗中含有較多的鳥嘌呤,鳥嘌呤可以從鳥糞或魚鱗中提取。鳥嘌呤及其衍生物具有重要生物活性,如抗腫瘤、抗病毒[kima.,hongh.j.synthesisandanti-hivstudyofnovelacyclicguaninederivatives[j].nucleosidesnucleotidesnucleicacids,2008,27(2):121-130]等,也是主要的醫(yī)藥中間體,可用于合成一系列高效低毒的抗皰疹病藥物。
中國是世界上最大的淡水魚養(yǎng)殖國家。每年在水產(chǎn)品加工過程中產(chǎn)生的下腳料(如魚皮、魚骨、蟹殼、魚鱗等)達(dá)到250萬噸以上[張俊杰,曾慶孝.魚鱗的開發(fā)利用前景[j].加工技術(shù),2004,(5):74-75],其中魚鱗達(dá)35~45萬噸[何蘭.魚鱗膠原的制備與開發(fā)應(yīng)用前景[j].水產(chǎn)科技情報,2007,34(5):210-212]。如何利用魚鱗資源,使其變廢為寶,是近些年來從事漁業(yè)深加工產(chǎn)業(yè)研究的熱點(diǎn)。對這些魚鱗廢棄物的深加工利用,已有大量的研究報道。研究主要集中在用魚鱗提取膠原蛋白、抗氧化肽、降血壓肽[曾麗,李麗,王加斌,等.水產(chǎn)膠原蛋白肽功能活性及其制備工藝研究進(jìn)展[j].浙江海洋學(xué)院學(xué)報,2013,32(2):163-168],用魚鱗制各魚鱗羥基磷灰石等[郝俊杰超聲預(yù)處理酶膜耦合反應(yīng)制備魚鱗膠原蛋白肽的技術(shù)研究,江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文,2014]和提取鳥嘌呤或珍珠精或魚鱗精(fishsilver)[曾曉丹,張盈嬌,夏陳,王自鵬,曹陽草魚魚鱗提取鳥嘌呤的工藝和質(zhì)量研究[j],現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2012,1:15-16;cn1033827a一種從魚鱗中提取珍珠精的方法;cn201410730562.1一種從魚鱗中提取珍珠精的方法]等。
從魚鱗中提取膠原蛋白的方法,通用的技術(shù)路線可歸結(jié)為:先將魚鱗除雜,洗凈晾干,再用除鈣劑除去鈣,再選擇合適的提取劑和設(shè)備提取膠原蛋白和分離。根據(jù)選擇的提取劑不同,得到的膠原蛋白不同[鉏曉艷,熊光權(quán),李新,耿勝榮,于巍,江洪有,廖濤草魚魚鱗膠原蛋白肽的制備及分析[j].食品研究與開發(fā),2014,35(7):36-39;張慧潔水解膠原蛋白分子量控制技術(shù)的研究,天津科技大學(xué)碩士論文,2014,2-3]。用熱水處理獲取的魚鱗膠被稱為熱法膠,用酸液處理獲取的魚鱗膠被稱為酸法膠,用堿液處理獲取的魚鱗膠則被稱為堿法膠,采取蛋白酶獲得的魚鱗膠被稱為酶法膠或膠原蛋白肽,cn103773828a從魚鱗中提取膠原蛋白的方法;cn104892750a一種酸溶性魚鱗膠原蛋白的制備方法;cn101418328a一種魚鱗膠原蛋白的制備方法;cn103773830b一種從魚鱗中提取膠原蛋白的方法;cn105063154a一種從魚鱗中提取膠原蛋白的方法;cn103773830b一種從魚鱗中提取膠原蛋白的方法;雷靜,李和生,張麗媛,孫楠楠,烏賊皮膠原蛋白的提取及結(jié)構(gòu)表征[j],天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2012,24:575-580]等。
從魚鱗中提取鳥嘌呤的方法,目前研究較少。僅見有曾曉丹等人從草魚魚鱗中提取鳥嘌呤[曾曉丹,張盈嬌,夏陳,王自鵬,曹陽草魚魚鱗提取鳥嘌呤的工藝和質(zhì)量研究[j],現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2012,1:15-16]、兩個中國發(fā)明專利[cn1033827a一種從魚鱗中提取珍珠精的方法;cn201410730562.1一種從魚鱗中提取珍珠精的方法]。前一文獻(xiàn)方法是將預(yù)先處理好的魚鱗,在溫度98℃下、加入表面活性劑和在濃度為5.0mol/l的鹽酸條件下將草魚魚鱗提取2.0h,得到濾液后靜止結(jié)晶,并將結(jié)晶用鹽酸溶液再次精制后即得鹽酸鳥嘌呤。后兩個專利方法均在后續(xù)處理中使用了表面活性劑和對人體和環(huán)境有很大影響的四氯化碳。
以上所公開的技術(shù)內(nèi)容僅是對魚鱗的膠原蛋白或膠原蛋白肽或鳥嘌呤所分別進(jìn)行的單獨(dú)提取。也就是說在提取膠原蛋白或膠原蛋白肽時,未對鳥嘌呤進(jìn)行提??;在提取鳥嘌呤時,未對膠原蛋白或膠原蛋白肽進(jìn)行提取,尤其是用酸做除鈣劑時,已有部分膠原蛋白溶解于酸而丟失。因而以上所述及的方法存在著對具有重要可用成分的丟失和資源的浪費(fèi)的問題,且業(yè)內(nèi)至今也未見就如何利用魚鱗同時提取出高附加值產(chǎn)品的膠原蛋白、膠原蛋白肽和鳥嘌呤而提出有效的技術(shù)方案。因此,研發(fā)一種從魚鱗中同時提取活性成分及其分離的方法,對提高生產(chǎn)效率、減少資源浪費(fèi)十分必要。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的是:提出一種從魚鱗中同時提取并分離活性成分的方法,從魚鱗中一步提取并分離出具有重要生理作用的膠原蛋白、膠原蛋白肽和鳥嘌呤產(chǎn)品,以實(shí)現(xiàn)魚鱗的高效利用。
本發(fā)明的技術(shù)解決方案是:以魚鱗為原料,將魚鱗中的鳥嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白同時進(jìn)行提取,再控制提取液的濃度和酸度及溫度,依次將膠原蛋白、鳥嘌呤和膠原蛋白肽進(jìn)行分離;具體步驟如下:對洗凈和除雜質(zhì)的魚鱗經(jīng)過冷凍干燥后,粉碎成絲狀魚鱗;將絲狀魚鱗按照一定的固液比與提取溶劑混合后,置于超聲裝置中,在設(shè)置的超聲功率、溫度和超聲時間下進(jìn)行提取,離心分離去不溶物,得含有鳥嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白的混合提取液;將混合提取液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)裝置中進(jìn)行濃縮得到濃縮液;濃縮液置于低溫下靜置至出現(xiàn)沉淀和清液后,過濾得到沉淀a和清液b;沉淀a用去離子水洗滌至無氯離子后冷凍干燥得白色物c;將清液b通過堿性溶液調(diào)節(jié)至一定ph值后,在低溫下靜置一定時間,過濾及用去離子水洗滌至無氯離子后得到白色沉淀d和澄清溶液e,白色沉淀d被冷凍成白色粉末狀d;澄清溶液e繼續(xù)用堿性溶液調(diào)節(jié)至一定ph值后,濃縮,在低溫下靜置一定時間,過濾分離得沉淀f和濾液g,沉淀f經(jīng)洗滌、冷凍干燥后為無色物f,濾液g被濃縮后直接冷凍干燥得白色粉末g;白色物c、白色粉末狀d的紅外與標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白紅外圖完全一致,且不溶于水,易溶于鹽酸,證明兩種物為膠原蛋白;無色物f的紅外與標(biāo)準(zhǔn)鳥嘌呤基本一致,不溶于水,證明為不純的鳥嘌呤;白色粉末g極易溶于水,也極易溶于酸,紅外圖和標(biāo)準(zhǔn)牛血清膠原蛋白一致,標(biāo)明為含有鹽的水溶性膠原蛋白肽。
其中,所用的魚鱗為海魚、淡水魚的魚鱗或兩種魚鱗的混合物。
其中,所述的洗凈和去雜質(zhì)的魚鱗是指:將市場所購置的魚鱗,用水洗滌至無血色和洗滌水溶液無渾濁物,不做其他任何處理,直接進(jìn)行冷凍干燥,粉碎成絲狀魚鱗。
其中,提取溶劑的選擇是以兩種標(biāo)準(zhǔn)樣品鳥嘌呤和膠原蛋白在不同的溶劑,如去離子水、氨水、氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液分別進(jìn)行溶解試驗;其中鹽酸溶液均能溶解兩種標(biāo)準(zhǔn)樣品(鳥嘌呤和膠原蛋白);故鹽酸溶液為同時提取的優(yōu)選溶劑。
其中,混合提取液的提取過程是:將絲狀魚鱗按照質(zhì)量數(shù)與0.050~0.82mol/l濃度的鹽酸溶液體積按照1g:10~19ml比混合后,置于超聲裝置中,功率35~71%、時間20~40分鐘和溫度300c進(jìn)行提取;離心分離去不溶物,得含有鳥嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白的混合提取液。
其中,混合提取液是在利用均勻設(shè)計法設(shè)計的提取條件下獲得的;對膠原蛋白及膠原蛋白肽的提取率是通過光度法對混合提取液中代表膠原蛋白及膠原蛋白肽的羥脯氨酸進(jìn)行測定和計算的;對鳥嘌呤的提取率是通過高效液相色譜法對混合提取液中的鳥嘌呤進(jìn)行檢測和計算的;對提取條件和提取率的關(guān)系通過excel2003軟件進(jìn)行擬合,得出了回歸分析方程,用偏微分法解此方程,得到了優(yōu)化的提取條件為:絲狀魚鱗的質(zhì)量與鹽酸的體積比為1g:16.6ml,hcl濃度0.33mol/l,超聲功率57%,提取時間28min,提取溫度為300c。
其中,濃縮過程是:混合提取液6000r/min離心20min,得濾液,濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得濃縮液。
其中,膠原蛋白的分離是:濃縮液置于00c~100c靜置過夜后,過濾分離,得到沉淀a和清液b;沉淀a用去離子水洗滌至無氯離子后在凍干機(jī)中冷凍干燥得白色物c;清液b用0.5~1mol/l的氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為6.0~6.5后,同樣是在00c~100c低溫靜置過夜后,通過定量濾紙過濾及去離子水洗滌,得到白色沉淀d和澄清溶液e,白色沉淀d被冷凍成白色粉末狀d;白色物c、白色粉末狀d的紅外與標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白紅外圖完全一致,且不溶于水,易溶于鹽酸,證明兩種物為膠原蛋白。
其中,鳥嘌呤的分離是:通過定量濾紙過濾白色沉淀d后所得的澄清溶液e用0.05~0.2mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為7.0-7.5后,濃縮,在00c~100c低溫靜置過夜至有清液和沉淀,過濾分離得沉淀f和濾液g,沉淀f經(jīng)水洗滌,冷凍干燥后為無色物f;無色物f的紅外與標(biāo)準(zhǔn)鳥嘌呤基本一致,不溶于水,證明為不純的鳥嘌呤。
其中,膠原蛋白肽的分離是:過濾分離得沉淀f后的濾液g,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無水蒸出,再在低溫冰箱中結(jié)冰后在冷凍干燥機(jī)中凍干得白色粉末g;白色粉末g極易溶于水,也極易溶于酸,紅外圖和標(biāo)準(zhǔn)牛血清膠原蛋白一致,標(biāo)明為含有鹽的水溶性膠原蛋白肽。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
(一)本發(fā)明以魚鱗經(jīng)過簡單水洗除雜步驟,直接進(jìn)行同時魚鱗中活性成分的提取和分離,簡化了目前已有的專利技術(shù)或文獻(xiàn)用魚鱗作原料提取膠原蛋白或膠原蛋白肽需要加除鈣劑除去鈣的步驟,使得提取工藝簡便。
(二)使用一定濃度的鹽酸作為提取劑,同時起到了多種作用:可溶解膠原蛋白和鳥嘌呤,還可將部分膠原蛋白酸解成膠原蛋白肽,而且還在后續(xù)通過與氫氧化鈉作用生產(chǎn)鹽,起到了將膠原蛋白鹽析出的作用和除去魚鱗中鈣的作用。
(三)現(xiàn)有利用魚鱗提取膠原蛋白或膠原蛋白肽的發(fā)明或文獻(xiàn)技術(shù)中,在提取過程中僅提取了魚鱗單一活性成分,其他有用成分丟失;本發(fā)明與現(xiàn)有這些技術(shù)相比,魚鱗中的膠原蛋白、膠原蛋白肽和鳥嘌呤有效成分一步獲得了提取和基本的分離,充分利用了魚鱗自然資源,克服了單一提取的技術(shù)缺陷。
附圖說明
圖1為本發(fā)明的工藝流程圖;其中:(1)為提取優(yōu)化工藝流程圖;(2)為提取與分離工藝流程圖;
圖2為提取的白色物c與標(biāo)準(zhǔn)牛白蛋白紅外掃描圖;
圖3為提取的白色物d及標(biāo)準(zhǔn)牛白蛋白的紅外掃描圖;
圖4為提取的無色物f與鳥嘌呤標(biāo)樣紅外掃描圖;
圖5為提取的白色物g與標(biāo)準(zhǔn)牛白蛋白的紅外掃描圖。
具體實(shí)施方式
下面通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行具體的描述。必須指出的是給出的實(shí)施例,僅是對本發(fā)明的進(jìn)一步說明,不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制,該領(lǐng)域的專業(yè)人員可以根據(jù)本發(fā)明的內(nèi)容作出某些非本質(zhì)性的改進(jìn)和調(diào)整。
實(shí)施例1:依以下步驟提取并分離魚鱗中的活性成分
(1)魚鱗的預(yù)處理:將市場所購置的魚鱗,用水洗滌至無血色和洗滌水溶液無渾濁物,不做其他任何處理,直接進(jìn)行冷凍干燥,粉碎成絲狀魚鱗;
(2)混合提取液的獲得:將50.0g絲狀魚鱗按照質(zhì)量數(shù)與0.050mol/l濃度的鹽酸溶液體積按照1g:10ml比混合后,置于超聲裝置中,功率35%、時間20分鐘和溫度300c進(jìn)行提??;離心分離去不溶物,得含有鳥嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白的混合提取液;
(3)濃縮:混合提取液6000r/min離心20min,得濾液,濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得濃縮液;
(4)膠原蛋白的分離:濃縮液置于00c靜置過夜后,過濾分離,得到沉淀a和清液b;沉淀a用去離子水洗滌至無氯離子后在凍干機(jī)中冷凍干燥得白色物c6.8g;清液b用0.5mol/l的氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為6.0后,同樣是在00c低溫靜置過夜后,通過定量濾紙過濾及去離子水洗滌,得到白色沉淀d和澄清溶液e,白色沉淀d被冷凍成白色粉末狀d4.6g;白色物c、白色粉末狀d的紅外與標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白紅外圖完全一致,且不溶于水,易溶于鹽酸,證明兩種物為膠原蛋白;
(5)鳥嘌呤的分離:通過定量濾紙過濾白色沉淀d后所得的澄清溶液e用0.05mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為7.0后,濃縮,在00c低溫靜置過夜至有清液和沉淀,過濾分離得沉淀f和濾液g,沉淀f經(jīng)水洗滌,冷凍干燥后為無色物f0.24g;無色物f的紅外與標(biāo)準(zhǔn)鳥嘌呤紅外基本一致,不溶于水,證明為不純的鳥嘌呤;
(6)膠原蛋白肽的分離:過濾分離得沉淀f后的濾液g,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無水蒸出,再在低溫冰箱中結(jié)冰后在冷凍干燥機(jī)中凍干得白色粉末g5.2g;白色粉末g極易溶于水,也極易溶于酸,白色粉末g的紅外圖和標(biāo)準(zhǔn)牛血清膠原蛋白紅外圖一致,標(biāo)明為含有鹽的水溶性膠原蛋白肽。
實(shí)施例2:依以下步驟提取并分離魚鱗中的活性成分
(1)魚鱗的預(yù)處理:將市場所購置的魚鱗,用水洗滌至無血色和洗滌水溶液無渾濁物,不做其他任何處理,直接進(jìn)行冷凍干燥,粉碎成絲狀魚鱗;
(2)混合提取液的獲得:將50.0g絲狀魚鱗按質(zhì)量數(shù)與0.45mol/l濃度的鹽酸溶液體積按照1g:14.5ml比混合后,置于超聲裝置中,功率53%、時間30分鐘和溫度300c進(jìn)行提??;離心分離去不溶物,得含有鳥嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白的混合提取液;
(3)濃縮:混合提取液6000r/min離心20min,得濾液,濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得濃縮液;
(4)膠原蛋白的分離:濃縮液置于50c靜置過夜后,過濾分離,得到沉淀a和清液b;沉淀a用去離子水洗滌至無氯離子后在凍干機(jī)中冷凍干燥得白色物c13.8g;清液b用0.75mol/l的氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為6.3后,同樣是在50c低溫靜置過夜后,通過定量濾紙過濾及去離子水洗滌,得到白色沉淀d和澄清溶液e,白色沉淀d被冷凍成白色粉末狀d11.1g;白色物c、白色粉末狀d的紅外與標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白紅外圖完全一致,且不溶于水,易溶于鹽酸,證明兩種物為膠原蛋白;
(5)鳥嘌呤的分離:通過定量濾紙過濾白色沉淀d后所得的澄清溶液e用0.13mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為7.5后,濃縮,在50c低溫靜置過夜至有清液和沉淀,過濾分離得沉淀f和濾液g,沉淀f經(jīng)水洗滌,冷凍干燥后為無色物f0.28g;無色物f的紅外與標(biāo)準(zhǔn)鳥嘌呤基本一致,不溶于水,證明為不純的鳥嘌呤;
(6)膠原蛋白肽的分離:過濾分離得沉淀f后的濾液g,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無水蒸出,再在低溫冰箱中結(jié)冰后在冷凍干燥機(jī)中凍干得白色粉末g8.6g;白色粉末g極易溶于水,也極易溶于酸,紅外圖和標(biāo)準(zhǔn)牛血清膠原蛋白一致,標(biāo)明為含有鹽的水溶性膠原蛋白肽。
實(shí)施例3:依以下步驟提取并分離魚鱗中的活性成分
(1)魚鱗的預(yù)處理:將市場所購置的魚鱗,用水洗滌至無血色和洗滌水溶液無渾濁物,不做其他任何處理,直接進(jìn)行冷凍干燥,粉碎成絲狀魚鱗;
(2)混合提取液的獲得:將50.0g絲狀魚鱗按質(zhì)量數(shù)與0.82mol/l濃度的鹽酸溶液體積按照1g:19ml比混合后,置于超聲裝置中,功率71%、時間40分鐘和溫度300c進(jìn)行提??;離心分離去不溶物,得含有鳥嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白的混合提取液;
(3)濃縮:混合提取液6000r/min離心20min,得濾液,濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得濃縮液;
(4)膠原蛋白的分離:濃縮液置于100c靜置過夜后,過濾分離,得到沉淀a和清液b;沉淀a用去離子水洗滌至無氯離子后在凍干機(jī)中冷凍干燥得白色物c15.6g;清液b用1mol/l的氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為6.5后,同樣是在100c低溫靜置過夜后,通過定量濾紙過濾及去離子水洗滌,得到白色沉淀d和澄清溶液e,白色沉淀d被冷凍成白色粉末狀d12.1g;白色物c、白色粉末狀d的紅外圖與標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白紅外圖完全一致,且不溶于水,易溶于鹽酸,證明兩種物為膠原蛋白;
(5)鳥嘌呤的分離:通過定量濾紙過濾白色沉淀d后所得的澄清溶液e用0.2mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為7.5后,濃縮,在100c低溫靜置過夜至有清液和沉淀,過濾分離得沉淀f和濾液g,沉淀f經(jīng)水洗滌,冷凍干燥后為無色物f0.33g;無色物f的紅外圖與標(biāo)準(zhǔn)鳥嘌呤紅外圖基本一致,不溶于水,證明為不純的鳥嘌呤;
(6)膠原蛋白肽的分離:過濾分離得沉淀f后的濾液g,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無水蒸出,再在低溫冰箱中結(jié)冰后在冷凍干燥機(jī)中凍干得白色粉末g9.2g;白色粉末g極易溶于水,也極易溶于酸,白色粉末g紅外圖和標(biāo)準(zhǔn)牛血清膠原蛋白紅外圖一致,標(biāo)明為含有鹽的水溶性膠原蛋白肽。
實(shí)施例4:依以下步驟提取并分離魚鱗中的活性成分
(1)魚鱗的預(yù)處理:將市場所購置的魚鱗,用水洗滌至無血色和洗滌水溶液無渾濁物,不做其他任何處理,直接進(jìn)行冷凍干燥,粉碎成絲狀魚鱗;
(2)混合提取液的獲得:將50.0g絲狀魚鱗按質(zhì)量數(shù)與0.33mol/l濃度的鹽酸溶液體積按照1g:16.6ml比混合后,置于超聲裝置中,功率57%、時間28分鐘和溫度300c進(jìn)行提??;離心分離去不溶物,得含有鳥嘌呤、膠原蛋白肽和膠原蛋白的混合提取液;
(3)濃縮:混合提取液6000r/min離心20min,得濾液,濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮得濃縮液;
(4)膠原蛋白的分離:濃縮液置于50c靜置過夜后,過濾分離,得到沉淀a和清液b;沉淀a用去離子水洗滌至無氯離子后在凍干機(jī)中冷凍干燥得白色物c17.1g;清液b用1mol/l的氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為6.0后,同樣是在50c低溫靜置過夜后,通過定量濾紙過濾及去離子水洗滌,得到白色沉淀d和澄清溶液e,白色沉淀d被冷凍成白色粉末狀d12.5g;白色物c、白色粉末狀d的紅外與標(biāo)準(zhǔn)牛血清蛋白紅外圖完全一致,且不溶于水,易溶于鹽酸,證明兩種物為膠原蛋白;
(5)鳥嘌呤的分離:通過定量濾紙過濾白色沉淀d后所得的澄清溶液e用0.05mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph值為7.5后,濃縮,在100c低溫靜置過夜至有清液和沉淀,過濾分離得沉淀f和濾液g,沉淀f經(jīng)水洗滌,冷凍干燥后為無色物f0.42g;無色物f的紅外與標(biāo)準(zhǔn)鳥嘌呤基本一致,不溶于水,證明為不純的鳥嘌呤;
(6)膠原蛋白肽的分離:過濾分離得沉淀f后的濾液g,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至無水蒸出,再在低溫冰箱中結(jié)冰后在冷凍干燥機(jī)中凍干得白色粉末g10.5g;白色粉末g極易溶于水,也極易溶于酸,紅外圖和標(biāo)準(zhǔn)牛血清膠原蛋白一致,標(biāo)明為含有鹽的水溶性膠原蛋白肽。
綜上,根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)解決方案和所給出的具體實(shí)施例及相關(guān)的檢測數(shù)據(jù)證實(shí),本發(fā)明達(dá)到預(yù)期的發(fā)明目的。