專利名稱:一種動(dòng)物細(xì)胞的分離方法及分離裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物制品生產(chǎn)過(guò)程中動(dòng)物細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)技術(shù)，尤其是貼壁生長(zhǎng)的動(dòng)
物細(xì)胞從微載體上分離出來(lái)的方法及其分離裝置。
技術(shù)背景
在生物制品生產(chǎn)過(guò)程中，特別是疫苗和蛋白藥物的生產(chǎn)，利用生物反應(yīng)器來(lái)培養(yǎng) 貼壁生長(zhǎng)的動(dòng)物細(xì)胞，并利用微載體來(lái)增加細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的表面積，才能實(shí)現(xiàn)規(guī)?；纳?產(chǎn)。為了能實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，必須要實(shí)現(xiàn)生物反應(yīng)器的逐級(jí)放大，而實(shí)現(xiàn)生物反應(yīng)器的逐級(jí) 放大的關(guān)鍵技術(shù)是如何把貼在微載體上面的動(dòng)物細(xì)胞分離出來(lái)。
傳統(tǒng)的分離方法是采用機(jī)械震蕩來(lái)實(shí)現(xiàn)，其方法是將表面上長(zhǎng)滿細(xì)胞的微載體 經(jīng)過(guò)胰酶處理后，利用震蕩原理，將放在容器中的微載體快速震蕩，將細(xì)胞從微載體表面分 離出來(lái)，再把細(xì)胞單獨(dú)取出接種到更大的反應(yīng)器或者將細(xì)胞與原來(lái)的微載體一起接種到更 大的反應(yīng)器中。這種方法可以實(shí)現(xiàn)把細(xì)胞從微載體上分離的目的，但是由于生物制品對(duì)容 器密封要求非常的高，不得有任何泄露而造成污染，而機(jī)械震蕩不可避免的對(duì)整個(gè)容器進(jìn) 行震蕩，會(huì)影響容器的密封性能；另外，利用這種方法將細(xì)胞從微載體上完全分離需要的時(shí) 間較長(zhǎng)，并且震蕩產(chǎn)生的剪切力非常的大，這樣，就會(huì)對(duì)細(xì)胞造成非常大的損傷，影響下一 步放大時(shí)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。
為了克服采用機(jī)械震蕩來(lái)分離細(xì)胞所存在的問(wèn)題，現(xiàn)在，人們使用得比較多的方 法是機(jī)械攪拌，即將表面上長(zhǎng)滿細(xì)胞的微載體經(jīng)過(guò)胰酶處理后，利用機(jī)械攪拌的剪切力，將 細(xì)胞從微載體表面分離出來(lái)。在公開(kāi)號(hào)為CN1483805A
公開(kāi)日為2004年3月24日的專利 文件中公開(kāi)了一種用于動(dòng)物細(xì)胞擴(kuò)大接種的消化反應(yīng)器，包括由一筒體構(gòu)成的消化區(qū)，該 消化區(qū)包括與筒體上端密封連接的蓋板，安裝于蓋板中央，與之可轉(zhuǎn)動(dòng)且密封連接的攪拌 裝置，與蓋板密封銜接且流體相通的至少一個(gè)進(jìn)料口 ，與蓋板密封銜接且流體相通的至少 一個(gè)出/入氣口 ；還包括由一底封頭構(gòu)成的與消化區(qū)下端周緣密封銜接的分離區(qū)，該分離 區(qū)包括固定于底封頭上端面的篩網(wǎng)，所述篩網(wǎng)的孔徑大于所述動(dòng)物細(xì)胞直徑且小于動(dòng)物 細(xì)胞所附著的載體直徑，與底封頭密封銜接且流體相通的至少一個(gè)進(jìn)/出料口 ，至少一個(gè) 洗滌液/消化液入口和至少一個(gè)洗滌液/消化液出口 。專利文件中公開(kāi)的攪拌裝置就是將 細(xì)胞從微載體中分離的裝置，其就是利用攪拌原理。這種方法雖然能夠?qū)崿F(xiàn)把細(xì)胞從微載 體上分離的目的，但是由于這種方法的攪拌速度只能低速進(jìn)行，否則細(xì)胞將會(huì)造成損傷，因 此，需要很長(zhǎng)的時(shí)間才能將細(xì)胞從微載體上完全分離，而過(guò)長(zhǎng)的時(shí)間將會(huì)造成細(xì)胞的生長(zhǎng) 狀態(tài)變差，影響下一步放大時(shí)細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了提供一種動(dòng)物細(xì)胞的分離方法，利用本發(fā)明的分離方法，貼 壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離時(shí)不容易損傷，貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載 體上完全分離所需要的時(shí)間短。[0006] 本發(fā)明的另一目的是為了提供一種動(dòng)物細(xì)胞分離的裝置，利用本發(fā)明的分離裝 置，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離時(shí)不容易損傷，貼壁動(dòng)物細(xì)胞從 微載體上完全分離所需要的時(shí)間短。
為達(dá)到上述目的，動(dòng)物細(xì)胞分離的方法為使具有流速的貼有動(dòng)物細(xì)胞的微載體與 容器壁產(chǎn)生撞擊，使動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離。
用撞擊容器壁的方法使貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離，不會(huì)產(chǎn)生大的剪切力，這 樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離時(shí)不容易損傷，完全 分離所需要的時(shí)間短；由于貼壁動(dòng)物細(xì)胞和微載體是通過(guò)撞擊力來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的目的，因此， 貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離。
作為改進(jìn)，貼有動(dòng)物細(xì)胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為
(1)用泵將長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體從第一容器經(jīng)出料管抽出并通過(guò)輸出管使長(zhǎng)滿
動(dòng)物細(xì)胞的微載體撞擊第一容器的內(nèi)壁，使動(dòng)物細(xì)胞和微載體重新流入到第一容器內(nèi)；
(2)觀察動(dòng)物細(xì)胞與微載體的分離情況，如果動(dòng)物細(xì)胞與微載體已經(jīng)分離，則使泵
停止工作；如果動(dòng)物細(xì)胞與微載體沒(méi)有完全分離，則繼續(xù)上述的(1)步驟直到動(dòng)物細(xì)胞與
微載體完全分離為止。
上述分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離，不會(huì) 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離 時(shí)不容易損傷，完全分離所需要的時(shí)間短；由于貼壁動(dòng)物細(xì)胞和微載體是通過(guò)撞擊力來(lái)實(shí) 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對(duì)貼壁動(dòng)物細(xì) 胞從微載體上分離的情況進(jìn)行觀察一次，當(dāng)完全分離后，就停止撞擊過(guò)程，因此，能夠及時(shí) 跟蹤到貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況，避免因貼壁動(dòng)物細(xì)胞完全分離后繼續(xù)進(jìn)行撞擊而浪費(fèi)時(shí) 間。
作為改進(jìn)，貼有動(dòng)物細(xì)胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為
1、準(zhǔn)備兩個(gè)容器，即第二容器和第三容器，第二容器的容器口上安裝密封塞，在密
封塞上安裝一根出料管，并使出料管插入到第二容器的底部，在密封塞上還開(kāi)設(shè)一個(gè)進(jìn)料
口和進(jìn)氣口 ；第三容器內(nèi)插入一根出料管，出料管插入到第三容器的底部；
11、使第二容器處于密封狀態(tài)下；
ni、通過(guò)進(jìn)氣口向第二容器內(nèi)加壓使得第二容器內(nèi)長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第
二容器上的出料管和第三容器上的出料管進(jìn)入到第三容器內(nèi)，在進(jìn)入第三容器時(shí)，長(zhǎng)滿動(dòng) 物細(xì)胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊； IV、從第三容器中取樣；
V、觀察動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種 到生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，則將第二容器上的 密封塞拆卸下來(lái)安裝到第三容器的容器口上，通過(guò)第三容器密封塞上的進(jìn)氣口對(duì)第三容器 加壓，使得第三容器內(nèi)的長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第三容器上的出料管和第二容器上的出 料管返回到第二容器內(nèi)，在進(jìn)入第二容器時(shí)，動(dòng)物細(xì)胞和微載體與第二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞 擊；
VI、從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種到生物反應(yīng)器 中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，則重復(fù)上述的III、 IV、 V步驟直到動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離為止。
上述分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離，不會(huì)
產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離
時(shí)不容易損傷，完全分離所需要的時(shí)間短；由于貼壁動(dòng)物細(xì)胞和微載體是通過(guò)撞擊力來(lái)實(shí)
現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對(duì)貼壁動(dòng)物細(xì)
胞從微載體上分離的情況進(jìn)行觀察一次，當(dāng)完全分離后，就停止撞擊過(guò)程，因此，能夠及時(shí)
跟蹤到貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況，避免因貼壁動(dòng)物細(xì)胞完全分離后繼續(xù)進(jìn)行撞擊而浪費(fèi)時(shí)
間。在分離時(shí)，由于表面上有貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體是從一個(gè)容器進(jìn)入到另一個(gè)容器，經(jīng)前
撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體不會(huì)出現(xiàn)混合，因
此，分離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況。
作為改進(jìn)，貼有動(dòng)物細(xì)胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為
①、準(zhǔn)備兩個(gè)容器，即第二容器和第三容器，第二容器的容器口上安裝密封塞，在
第二容器的密封塞安裝一根出料管，并使出料管插入到第二容器的底部，在第二容器的密
封塞上還開(kāi)設(shè)一個(gè)進(jìn)料口和進(jìn)氣口 ；在第三容器的容器口上安裝密封塞，在第三容器密封
塞安裝一根出料管，第三容器的出料管插入到第三容器的底部，在第三容器的密封塞上還
開(kāi)設(shè)一個(gè)進(jìn)料口和進(jìn)氣口；
②、使第二容器處于密封狀態(tài)下；
③、通過(guò)第二容器上的密封塞上的進(jìn)氣口向第二容器內(nèi)加壓使得第二容器內(nèi)的長(zhǎng) 滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第二容器上的出料管和第三容器上的出料管進(jìn)入到第三容器內(nèi)，在 進(jìn)入第三容器時(shí)，長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；
、從第三容器中取樣；
⑤、觀察動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種 到生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，通過(guò)第三容器密封 塞上的進(jìn)氣口對(duì)第三容器加壓，使得第三容器內(nèi)的長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第三容器上的 出料管和第二容器上的出料管返回到第二容器內(nèi)，在進(jìn)入第二容器時(shí)，動(dòng)物細(xì)胞和微載體 與第二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；
⑥、從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種到生物反應(yīng)器 中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，則重復(fù)上述的③、④、⑤步驟直到 動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離為止。
上述分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離，不會(huì) 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離 時(shí)不容易損傷，完全分離所需要的時(shí)間短；由于貼壁動(dòng)物細(xì)胞和微載體是通過(guò)撞擊力來(lái)實(shí) 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對(duì)貼壁動(dòng)物細(xì) 胞從微載體上分離的情況進(jìn)行觀察一次，當(dāng)完全分離后，就停止撞擊過(guò)程，因此，能夠及時(shí) 跟蹤到貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況，避免因貼壁動(dòng)物細(xì)胞完全分離后繼續(xù)進(jìn)行撞擊而浪費(fèi)時(shí) 間。在分離時(shí)，由于表面上有貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體是從一個(gè)容器進(jìn)入到另一個(gè)容器，經(jīng)前 撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體不會(huì)出現(xiàn)混合，因 此，分離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況。
為達(dá)到上述的另一目的，本發(fā)明分離裝置的第一技術(shù)方案為一種將貼壁動(dòng)物細(xì)
6胞從微載體上分離的裝置包括第一容器，所述第一容器上設(shè)有出料管，出料管的一端伸入 到第一容器的底部，另一端連接有泵；所述泵上連接有輸出管，輸出管的輸出端通過(guò)容器口 伸入到第一容器內(nèi)，且對(duì)著第一容器的容器壁。
這種分離裝置，由于附有貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體直接與第一容器壁發(fā)生撞擊，不 會(huì)產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分 離時(shí)不容易損傷，完全分離所需要的時(shí)間短，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離；并且這種 分離裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，制造容易，成本低。
本發(fā)明的分離裝置的第二技術(shù)方案為一種將貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的裝 置包括第二容器和第三容器，所述的第二容器的容器口上設(shè)有密封塞，第二容器上的密封 塞上設(shè)有出料管，出料管伸入到第二容器的底部，在第二容器的密封塞上還設(shè)有進(jìn)料口和 進(jìn)氣口 ；所述的第三容器內(nèi)設(shè)有出料管，所述第二容器上的出料管與第三容器上的出料管 相連通。
第二技術(shù)方案的分離裝置，由于附有貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體直接與容器壁發(fā)生撞 擊，不會(huì)產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞 分離時(shí)不容易損傷，完全分離所需要的時(shí)間短，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離。在分離 時(shí)，由于表面上有貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體是從一個(gè)容器進(jìn)入到另一個(gè)容器，經(jīng)前撞擊的貼壁 動(dòng)物細(xì)胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體不會(huì)混合，因此，分離徹底，容易 觀察每次撞擊后的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況；由于在第二容器和第三容器之間進(jìn)行撞擊時(shí)， 采用同一個(gè)密封塞，因此，成本低；并且這種分離裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，制造容易，成本低。 作為改進(jìn)，所述第二容器上的出料管和第三容器上的出料管通過(guò)管道相連通。 本發(fā)明分離裝置的第三技術(shù)方案為一種將貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的裝置 包括第二容器和第三容器，所述的第二容器的容器口上設(shè)有密封塞，第二容器上的密封塞 上設(shè)有出料管，出料管伸入到第二容器的底部，在第二容器的密封塞上還設(shè)有進(jìn)料口和進(jìn) 氣口 ；所述的第三容器的容器口上設(shè)有密封塞，第三容器上的密封塞上設(shè)有出料管，第三容 器上的出料管伸入到第三容器的底部，在第三容器的密封塞上還設(shè)有進(jìn)料口和進(jìn)氣口 ；所 述第二容器上的出料管與第三容器上的出料管相連通。
第三技術(shù)方案的分離裝置，由于附有貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體直接與容器壁發(fā)生撞 擊，不會(huì)產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì) 胞分離時(shí)不容易損傷，完全分離所需要的時(shí)間短，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離。在分 離時(shí)，由于表面上有貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體是從一個(gè)容器進(jìn)入到另一個(gè)容器，經(jīng)前一次撞 擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體不會(huì)混合，因此，分 離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況；由于在第二容器和第三容器之 間進(jìn)行撞擊時(shí)，分別在第二容器和第三容器上設(shè)置了密封塞，這樣，在第二容器和第三容器 之間撞擊時(shí)，不需要反復(fù)調(diào)換密封塞，因此，分離的效率高；并且這種分離裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，制 造容易，成本低。
作為改進(jìn)，述第二容器上的出料管和第三容器上的出料管通過(guò)管道相連通。


圖1為本發(fā)明第一實(shí)施方式的結(jié)構(gòu)圖；[0038] 圖2為本發(fā)明第二實(shí)施方式的結(jié)構(gòu)圖；
圖3為本發(fā)明第三實(shí)施方式的結(jié)構(gòu)圖；
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。 第一實(shí)施方式
如圖1所示的將貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的裝置，包括第一容器l，第一容器 1的容器口上設(shè)有密封塞2，在密封塞2上插有出料管3和輸出管4，出料管3的下端插入到 第一容器1的底部，另一端連接有泵5，輸出管4的一端連接泵5，另一端對(duì)著第一容器1的 內(nèi)側(cè)壁上。
利用這種分離裝置的分離方法為
(1)用泵5將長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體從第一容器經(jīng)出料管4抽出并通過(guò)輸出管4 使長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體撞擊所述第一容器1的內(nèi)壁，動(dòng)物細(xì)胞和微載體重新流入到第一 容器l內(nèi)；
(2)觀察動(dòng)物細(xì)胞與微載體的分離情況，如果動(dòng)物細(xì)胞與微載體已經(jīng)分離，則使泵 5停止工作；如果動(dòng)物細(xì)胞與微載體沒(méi)有完全分離，則繼續(xù)上述的(1)步驟直到動(dòng)物細(xì)胞與 微載體完全分離為止。
這種分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離，不會(huì) 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離 時(shí)不容易損傷，完全分離所需要的時(shí)間短；由于貼壁動(dòng)物細(xì)胞和微載體是通過(guò)撞擊力來(lái)實(shí) 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對(duì)貼壁動(dòng)物細(xì) 胞從微載體上分離的情況進(jìn)行觀察一次，當(dāng)完全分離后，就停止撞擊過(guò)程，因此，能夠及時(shí) 跟蹤到貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況，避免因貼壁動(dòng)物細(xì)胞完全分離后繼續(xù)進(jìn)行撞擊而浪費(fèi)時(shí) 間。
這種結(jié)構(gòu)的分離裝置，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，成本低。 第二實(shí)施方式
如圖2所示的將貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的裝置，包括第二容器11和第三容 器12，在第二容器11的容器口上設(shè)有密封塞13，在密封塞13上設(shè)有出料管14，出料管14 的下端插入到第二容器的底部；在密封塞13上還開(kāi)設(shè)有進(jìn)料口和進(jìn)氣口，在進(jìn)料口上設(shè)有 進(jìn)料管15，在進(jìn)氣口上設(shè)有進(jìn)氣管16。在第三容器12內(nèi)設(shè)有出料管17，出料管14和出料 管17之間連接有管道18，在本實(shí)施方式中，管道18為硅膠管。 這種結(jié)構(gòu)的分離裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，成本低。
利用這種分離裝置的分離方法為 1)、密封第二容器11;
2)、通過(guò)進(jìn)氣管16向第二容器11內(nèi)加壓使得第二容器11內(nèi)的長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微 載體經(jīng)第二容器上的出料管13、硅膠管和第三容器上的出料管17進(jìn)入到第三容器12內(nèi)，在 進(jìn)入第三容器時(shí)，長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊； 3)、從第三容器中取樣；
4)、觀察動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種
8到生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，則將第二容器11上 的密封塞拆卸下來(lái)安裝到第三容器12的容器口上，通過(guò)第三容器密封塞上的進(jìn)氣管對(duì)第 三容器加壓，使得第三容器內(nèi)的長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第三容器上的出料管和第二容器 上的出料管返回到第二容器ll內(nèi)，在進(jìn)入第二容器ll時(shí)，動(dòng)物細(xì)胞和微載體與第二容器的 內(nèi)壁發(fā)生撞擊；
5)、從第二容器11中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種到生物反 應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，則重復(fù)上述的2) 、3) 、4)步驟 直到動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離為止。
這種分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離，不會(huì) 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離 時(shí)不容易損傷，完全分離所需要的時(shí)間短；由于貼壁動(dòng)物細(xì)胞和微載體是通過(guò)撞擊力來(lái)實(shí) 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對(duì)貼壁動(dòng)物細(xì) 胞從微載體上分離的情況進(jìn)行觀察一次，當(dāng)完全分離后，就停止撞擊過(guò)程，因此，能夠及時(shí) 跟蹤到貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況，避免因貼壁動(dòng)物細(xì)胞完全分離后繼續(xù)進(jìn)行撞擊而浪費(fèi)時(shí) 間。在分離時(shí)，由于表面上有貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體是從一個(gè)容器進(jìn)入到另一個(gè)容器，經(jīng)前 撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體不會(huì)出現(xiàn)混合，因 此，分離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況。 第三實(shí)施方式
如圖3所示的將貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的裝置，包括第二容器11和第三容 器12，在第二容器11的容器口上設(shè)有密封塞13，在密封塞13上設(shè)有出料管14，出料管14 的下端插入到第二容器的底部；在密封塞13上還開(kāi)設(shè)有進(jìn)料口和進(jìn)氣口，在進(jìn)料口上設(shè)有 進(jìn)料管15，在進(jìn)氣口上設(shè)有進(jìn)氣管16。在第三容器12的容器口上設(shè)有密封塞20，在密封塞 20上設(shè)有出料管17，出料管17的下端插入到第三容器的底部；在密封塞20上還開(kāi)設(shè)有進(jìn) 料口和進(jìn)氣口 ，在進(jìn)料口上設(shè)有進(jìn)料管21 ，在進(jìn)氣口上設(shè)有進(jìn)氣管22，出料管13和出料管 17之間連接有管道18，在本實(shí)施方式中，管道18為硅膠管。 這種結(jié)構(gòu)的分離裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，成本低。
利用這種分離裝置分離的方法為
①、使第二容器11處于密封狀態(tài)下；
②、通過(guò)第二容器11上的密封塞上的進(jìn)氣管16向第二容器11內(nèi)加壓使得第二容 器11內(nèi)的長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第二容器11上的出料管14和第三容器上的出料管17 進(jìn)入到第三容器12內(nèi)，在進(jìn)入第三容器時(shí)，長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生 撞擊；
③、從第三容器12中取樣；
、觀察動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種 到生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，通過(guò)第三容器密封 塞上的進(jìn)氣口對(duì)第三容器加壓，使得第三容器內(nèi)的長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第三容器上的 出料管和第二容器上的出料管返回到第二容器內(nèi)，在進(jìn)入第二容器時(shí)，動(dòng)物細(xì)胞和微載體 與第二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；
⑤、從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種到生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，則重復(fù)上述的②、③、④步驟直到 動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離為止。
這種分離方法，由于用撞擊容器壁的方法使貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離，不會(huì) 產(chǎn)生大的剪切力，這樣，不需要將分離控制在較低的速度下進(jìn)行，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離 時(shí)不容易損傷，完全分離所需要的時(shí)間短；由于貼壁動(dòng)物細(xì)胞和微載體是通過(guò)撞擊力來(lái)實(shí) 現(xiàn)分離的目的，因此，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離。由于每撞擊一次就對(duì)貼壁動(dòng)物細(xì) 胞從微載體上分離的情況進(jìn)行觀察一次，當(dāng)完全分離后，就停止撞擊過(guò)程，因此，能夠及時(shí) 跟蹤到貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況，避免因貼壁動(dòng)物細(xì)胞完全分離后繼續(xù)進(jìn)行撞擊而浪費(fèi)時(shí) 間。在分離時(shí)，由于表面上有貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體是從一個(gè)容器進(jìn)入到另一個(gè)容器，經(jīng)前 撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體和經(jīng)后一次撞擊的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的微載體不會(huì)出現(xiàn)混合，因 此，分離徹底，容易觀察每次撞擊后的貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離情況。
權(quán)利要求
一種動(dòng)物細(xì)胞的分離方法，其特征在于使具有流速的貼有動(dòng)物細(xì)胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊，使動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離。
2. 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的動(dòng)物細(xì)胞的分離方法，其特征在于貼有動(dòng)物細(xì)胞的微載體 與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為(1) 用泵將長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體從第一容器經(jīng)出料管抽出并通過(guò)輸出管使長(zhǎng)滿動(dòng)物 細(xì)胞的微載體撞擊第一容器的內(nèi)壁，使動(dòng)物細(xì)胞和微載體重新流入到第一容器內(nèi)；(2) 觀察動(dòng)物細(xì)胞與微載體的分離情況，如果動(dòng)物細(xì)胞與微載體已經(jīng)分離，則使泵停止 工作；如果動(dòng)物細(xì)胞與微載體沒(méi)有完全分離，則繼續(xù)上述的(1)步驟直到動(dòng)物細(xì)胞與微載 體完全分離為止。
3. 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的動(dòng)物細(xì)胞的分離方法，其特征在于貼有動(dòng)物細(xì)胞的微載體 與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為1、準(zhǔn)備兩個(gè)容器，即第二容器和第三容器，第二容器的容器口上安裝密封塞，在密封塞 上安裝一根出料管，并使出料管插入到第二容器的底部，在密封塞上還開(kāi)設(shè)一個(gè)進(jìn)料口和 進(jìn)氣口 ；第三容器內(nèi)插入一根出料管，出料管插入到第三容器的底部；n、使第二容器處于密封狀態(tài)下；ni、通過(guò)進(jìn)氣口向第二容器內(nèi)加壓使得第二容器內(nèi)長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第二容器上的出料管和第三容器上的出料管進(jìn)入到第三容器內(nèi)，在進(jìn)入第三容器時(shí)，長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì) 胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；IV、 從第三容器中取樣；V、 觀察動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種到生 物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，則將第二容器上的密封 塞拆卸下來(lái)安裝到第三容器的容器口上，通過(guò)第三容器密封塞上的進(jìn)氣口對(duì)第三容器加 壓，使得第三容器內(nèi)的長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第三容器上的出料管和第二容器上的出 料管返回到第二容器內(nèi)，在進(jìn)入第二容器時(shí)，動(dòng)物細(xì)胞和微載體與第二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞 擊；VI、 從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種到生物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，則重復(fù)上述的ni、iv、v步驟直到動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離為止。
4. 根據(jù)權(quán)利要求
1所述的動(dòng)物細(xì)胞的分離方法，其特征在于貼有動(dòng)物細(xì)胞的微載體 與容器壁產(chǎn)生撞擊的步驟為① 、準(zhǔn)備兩個(gè)容器，即第二容器和第三容器，第二容器的容器口上安裝密封塞，在第二 容器的密封塞安裝一根出料管，并使出料管插入到第二容器的底部，在第二容器的密封塞 上還開(kāi)設(shè)一個(gè)進(jìn)料口和進(jìn)氣口 ；在第三容器的容器口上安裝密封塞，在第三容器密封塞安 裝一根出料管，第三容器的出料管插入到第三容器的底部，在第三容器的密封塞上還開(kāi)設(shè) 一個(gè)進(jìn)料口和進(jìn)氣口；② 、使第二容器處于密封狀態(tài)下；③ 、通過(guò)第二容器上的密封塞上的進(jìn)氣口向第二容器內(nèi)加壓使得第二容器內(nèi)的長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第二容器上的出料管和第三容器上的出料管進(jìn)入到第三容器內(nèi)，在進(jìn)入 第三容器時(shí)，長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體與第三容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；④ 、從第三容器中取樣；⑤ 、觀察動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離的情況，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種到生 物反應(yīng)器中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)；如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，通過(guò)第三容器密封塞上 的進(jìn)氣口對(duì)第三容器加壓，使得第三容器內(nèi)的長(zhǎng)滿動(dòng)物細(xì)胞的微載體經(jīng)第三容器上的出料 管和第二容器上的出料管返回到第二容器內(nèi)，在進(jìn)入第二容器時(shí)，動(dòng)物細(xì)胞和微載體與第 二容器的內(nèi)壁發(fā)生撞擊；⑥ 、從第二容器中取樣觀察，如果已經(jīng)分離，則將這些動(dòng)物細(xì)胞接種到生物反應(yīng)器中進(jìn) 行細(xì)胞培養(yǎng)，如果動(dòng)物細(xì)胞和微載體沒(méi)有完全分離，則重復(fù)上述的③、④、⑤步驟直到動(dòng)物 細(xì)胞從微載體上分離為止。
5. —種實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求
1分離方法的分離裝置，其特征在于包括第一容器，所述第一容 器上設(shè)有出料管，出料管的一端伸入到第一容器的底部，另一端連接有泵；所述泵上連接有 輸出管，輸出管的輸出端通過(guò)容器口伸入到第一容器內(nèi)，且對(duì)著第一容器的容器壁。
6. —種實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求
1分離方法的分離裝置，其特征在于包括第二容器和第三容器， 所述的第二容器的容器口上設(shè)有密封塞，第二容器上的密封塞上設(shè)有出料管，出料管伸入 到第二容器的底部，在第二容器的密封塞上還設(shè)有進(jìn)料口和進(jìn)氣口 ；所述的第三容器內(nèi)設(shè) 有出料管，所述第二容器上的出料管與第三容器上的出料管相連通。
7. 根據(jù)權(quán)利要求
6所述的分離裝置，其特征在于所述第二容器上的出料管和第三容 器上的出料管通過(guò)管道相連通。
8. —種實(shí)現(xiàn)權(quán)利要求
l分離方法的分離裝置，其特征在于包括第二容器和第三容器， 所述的第二容器的容器口上設(shè)有密封塞，第二容器上的密封塞上設(shè)有出料管，出料管伸入 到第二容器的底部，在第二容器的密封塞上還設(shè)有進(jìn)料口和進(jìn)氣口 ；所述的第三容器的容 器口上設(shè)有密封塞，第三容器上的密封塞上設(shè)有出料管，第三容器上的出料管伸入到第三 容器的底部，在第三容器的密封塞上還設(shè)有進(jìn)料口和進(jìn)氣口 ；所述第二容器上的出料管與 第三容器上的出料管相連通。
9. 根據(jù)權(quán)利要求
8所述的分離裝置，其特征在于所述第二容器上的出料管和第三容 器上的出料管通過(guò)管道相連通。
專利摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種動(dòng)物細(xì)胞的分離方法及其分離裝置，涉及到貼壁動(dòng)物細(xì)胞的分離，本發(fā)明的分離方法為使具有流速的貼有細(xì)胞的微載體與容器壁產(chǎn)生撞擊，使得動(dòng)物細(xì)胞從微載體上分離。利用本發(fā)明的分離方法和分離裝置，貼壁動(dòng)物細(xì)胞容易從微載體上分離，貼壁動(dòng)物細(xì)胞分離時(shí)不容易損傷，貼壁動(dòng)物細(xì)胞從微載體上完全分離所需要的時(shí)間短。
文檔編號(hào)C12N5/07GKCN101775364SQ201010121423
公開(kāi)日2010年7月14日 申請(qǐng)日期2010年3月5日
發(fā)明者伍活鐮, 尹順義 申請(qǐng)人:廣州齊志生物工程設(shè)備有限公司導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan